CN116249765A - 天然内酯和羟基脂肪酸及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

从非水解植物油的混合培养物发酵中提取含有天然内酯和羟基脂肪酸的发酵提取物。

Description

天然内酯和羟基脂肪酸及其制备方法
技术领域
发酵提取物，其包括天然内酯和羟基脂肪酸，以及制造天然内酯和羟基脂肪酸的发酵方法。
发明背景
今天的食品消费者对天然成分越来越感兴趣，但他们不愿意损害这些食品的口味品质。他们期望天然食品和这些食品中的天然成分具有丰富且令人满意的口味谱。有助于提供如此丰富和令人满意的口味谱的呈味化合物包括内酯和羟基脂肪酸。例如，在杏、桃、菠萝和切达干酪中发现了γ-十二内酯，可以提供多脂肪、果味、奶般和桃样风味。γ-十二碳烯-6-内酯具有强烈的乳制品特征，带有甜味、多脂肪、柔滑、光滑和果味。迄今为止，这些呈味化合物已经被合成地生产或已经使用复杂的多步发酵工艺或涉及病原微生物的发酵工艺生产。
在EP 0578388 B1中，美国国际香精香料公司(International Flavors&Fragrances Inc.)描述了一种发酵工艺，使用假单胞菌细菌作用于甘油三酯生成羟基羧酸，然后用酵母发酵生成内酯。
在JP 2003250594中，Ogawa和Co描述了从亚油酸微生物生产顺式-6-十二碳烯-4-内酯，其中微生物包括乳酸菌和β-氧化酵母。微生物发酵开始之前的必要第一步是水解脂肪生成亚油酸。这个准备步骤增加了过程的复杂性。
因此，需要使用更简单的发酵过程从食品级微生物生产天然内酯和羟基脂肪酸。
发明内容
我们的发明包括从非水解植物油的混合培养物发酵中提取的发酵提取物。混合培养物发酵可以包括至少一种细菌和至少一种酵母。有利地，至少一种细菌包括乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillus planatarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或其组合。此外，至少一种酵母可包括解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)、嗜油假丝酵母(Candidapetrophilum)或其组合。在优选的实施例中，发酵提取物包含约10％至约50％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约25％w/w的γ-十二内酯。
我们的发明还包括制作呈味化合物的方法，包括以下步骤：
a.共培养至少一种非致病性乳酸细菌和至少一种酵母以产生混合培养物；
b.在所述混合培养物中发酵非水解植物油以产生混合培养物发酵培养基；
c.通过在发酵步骤之后混合酸来酸化所述混合培养物发酵培养基以产生酸化的混合培养物发酵培养基；以及
d.通过加热所述酸化的混合培养物发酵培养基使所述酸化的混合培养物发酵培养基内酯化；其中所述方法产生γ内酯、羟基脂肪酸或其组合中的至少一种。
这些方法还可以包括准备步骤，例如制备至少一种非致病性乳酸细菌、酵母或两者的种子培养物。共培养步骤还可以包括通过以下来首先培养至少一种非致病性乳酸细菌：将细菌种子培养物添加到细菌发酵培养基中，然后添加至少一种酵母种子培养物以产生混合培养物。在这些发明方法的一些实施例中，非水解植物油包括向日葵油、红花油或这些油的组合。
除了准备步骤之外，本发明的方法还可以包括下游加工步骤，例如内酯化之后的溶剂提取和溶剂提取步骤之后的蒸馏步骤，可以产生精制内酯产物。该方法的输出可以包括γ-十二碳烯-6-内酯、γ-十二内酯或这些γ内酯的组合。输出还可包括羟基脂肪酸，例如硬脂酸、油酸、亚油酸或这些羟基脂肪酸的组合。
此外，我们的发明包括包含发酵提取物和产品基料的产品，其中发酵提取物是从非水解植物油的混合培养物发酵中提取的。对于这些发明，可以包含嗅觉有效量的发酵提取物。在这些发明的一些中，嗅觉有效量是约10ppb至约1000ppm。
概述
1.一种发酵培养基，其包含至少一种细菌、至少一种酵母和至少一种非水解植物油。
2.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种细菌能够产生18-碳10-羟基脂肪酸。
3.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种细菌包括非致病性乳酸细菌。
4.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种细菌包括乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或其组合。
5.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种酵母能够氧化18-碳10-羟基脂肪酸以产生12-碳4-羟基脂肪酸。
6.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种酵母包括耶氏酵母属(Yarrowia)、酵母属(Saccharomyces)、假丝酵母属(Saccharomyces)或其组合。
7.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
8.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。
9.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述非水解植物油含有至少70％的不饱和脂肪酸。
10.如权利要求1所述的发酵培养基，其中所述非水解植物油具有至少75％的亚油酸。
11.一种发酵提取物，其包含约50％至约95％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约10％至约50％w/w的γ-十二内酯。
12.如权利要求11所述的发酵提取物，其进一步包含至少一种羟基脂肪酸。
13.如权利要求11所述的发酵提取物，其进一步包含至少一种游离脂肪酸。
14.如权利要求11所述的发酵提取物，其中所述发酵提取物具有约2:1至约4:1的γ-十二碳烯-6-内酯比γ-十二内酯的比率。
15.一种发酵提取物，其从非水解植物油的混合培养物发酵中提取。
16.如权利要求15所述的组合物，其中所述混合培养物发酵包含至少一种细菌和至少一种酵母。
17.如权利要求15所述的组合物，其中所述至少一种细菌能够产生18-碳10-羟基脂肪酸。
18.如权利要求16所述的组合物，其中所述至少一种细菌包括非致病性乳酸细菌。
19.如权利要求16所述的组合物，其中所述至少一种细菌包括乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌或其组合。
20.如权利要求15所述的组合物，其中所述至少一种酵母能够氧化18-碳10-羟基脂肪酸以产生12-碳4-羟基脂肪酸。
21.如权利要求15所述的组合物，其中所述至少一种酵母包括耶氏酵母属(Yarrowia)、酵母属(Saccharomyces)、假丝酵母属(Saccharomyces)或其组合。
22.如权利要求16所述的组合物，其中所述至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
23.如权利要求15所述的组合物，其中所述非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。
24.如权利要求15所述的组合物，其中所述非水解植物油含有至少70％的不饱和脂肪酸。
25.如权利要求15所述的组合物，其中所述非水解植物油具有至少75％的亚油酸。
26.如权利要求15所述的组合物，其进一步包含至少一种18-碳10-羟基脂肪酸、至少一种12-碳γ-内酯，或其组合。
27.如权利要求15所述的组合物，其中所述发酵提取物包含约10％至约50％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约25％w/w的γ-十二内酯。
28.如权利要求27所述的组合物，其中所述发酵提取物具有约2:1至约4:1的γ-十二碳烯-6-内酯比γ-十二内酯的比率。
29.一种制作呈味化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
a.共培养至少一种非致病性乳酸细菌和至少一种酵母以产生混合培养物；
b.在所述混合培养物中发酵非水解植物油以产生混合培养物发酵培养基；
c.通过在发酵步骤之后混合酸来酸化所述混合培养物发酵培养基以产生酸化的混合培养物发酵培养基；以及
d.通过加热所述酸化的混合培养物发酵培养基使所述酸化的混合培养物发酵培养基内酯化；其中所述方法产生γ内酯、羟基脂肪酸或其组合中的至少一种。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述内酯化步骤具有约90℃至约130℃的内酯化温度。
31.如权利要求29所述的方法，其中所述内酯化步骤具有约10分钟至约60分钟的内酯化时间。
32.如权利要求29所述的方法，其进一步包括以下至少一个步骤：在所述共培养步骤之前制备所述至少一种非致病性乳酸细菌的种子培养物，制备所述至少一种酵母的种子培养物，或其组合。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述共培养步骤进一步包括通过以下来首先培养所述至少一种非致病性乳酸细菌：将所述至少一种非致病性乳酸细菌种子培养物添加到细菌发酵培养基中，以产生至少一种非致病性乳酸细菌培养物。
34.如权利要求33所述的方法，其进一步包括将所述至少一种酵母种子培养物添加到所述至少一种非致病性乳酸细菌培养物中以产生所述混合培养物。
35.如权利要求29所述的方法，其中所述非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。
36.如权利要求29所述的方法，其中所述非水解植物油含有至少70％的不饱和脂肪酸。
37.如权利要求29所述的方法，其中所述非水解植物油具有至少75％的亚油酸。
38.如权利要求29所述的方法，其中所述非水解植物油具有低于2％的游离脂肪酸。
39.如权利要求29所述的方法，其中所述发酵步骤具有约30小时至约200小时的发酵时间。
40.如权利要求29所述的方法，其中所述发酵步骤具有约20℃至约37℃的发酵温度。
41.如权利要求29所述的方法，其中所述发酵步骤具有约4至约8的发酵pH。
42.如权利要求29所述的方法，其中所述发酵步骤具有小于约35％的发酵溶解氧含量。
43.如权利要求29所述的方法，其中所述酸化的混合培养物发酵培养基具有约3至约4的酸化pH。
44.如权利要求29所述的方法，其中所述酸包括盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、柠檬酸或其组合。
45.如权利要求29所述的方法，其进一步包括内酯化后的溶剂提取步骤，以产生发酵提取物。
46.如权利要求45所述的方法，其进一步包括所述溶剂提取后的蒸馏步骤，以产生精制内酯产物。
47.如权利要求45所述的方法，其中所述溶剂提取步骤涉及包括乙醇、乙酸乙酯或其组合的溶剂。
48.如权利要求46所述的方法，其中所述精制内酯产物包括至少70％的γ-十二碳烯-6-内酯。
49.如权利要求46所述的方法，其中所述精制内酯产物具有按精制内酯产物的重量计约5％至约30％w/w的γ-十二内酯。
50.如权利要求29所述的方法，其中所述至少一种γ内酯包括γ-十二碳烯-6-内酯、γ-十二内酯或其组合。
51.如权利要求29所述的方法，其中所述至少一种羟基脂肪酸包括硬脂酸、油酸、亚油酸或其组合。
52.如权利要求29所述的方法，其中所述至少一种非致病性乳酸细菌包括乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌或其组合。
53.如权利要求29所述的方法，其中所述至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
54.一种由如权利要求29所述的方法制备的呈味化合物。
55.一种改良产品基料的方法，所述方法包括以下步骤：将嗅觉有效量的从非水解植物油的混合培养物发酵中提取的发酵提取物添加到产品基料中以产生改良产品。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述产品基料包括人类食品、动物食品、膳食补充剂、药物、盖仑制剂组合物、化妆品组合物、香料组合物、加香制品、药物组合物或其组合中的至少一种。
57.如权利要求55所述的方法，其中所述产品基料包括乳制品、肉类产品、基于植物的蛋白质产品或其组合中的至少一种。
58.如权利要求55所述的方法，其中所述嗅觉有效量为从约10ppb至约200ppm。
59.如权利要求55所述的方法，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述改良产品具有降低的异常特征感觉。
60.如权利要求55所述的方法，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述改良产品具有增加的乳制品特征感觉。
61.如权利要求55所述的方法，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述改良产品具有增加的对至少一种感官属性的感觉。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述至少一种感官属性包括柔滑、奶般、多脂肪、光滑、浓郁、甜味、桃色、多内酯、果味或组合。
63.一种产品，其包含发酵提取物和产品基料，其中从非水解植物油的混合培养物发酵中提取所述发酵提取物。
64.如权利要求63所述的产品，其中所述产品基料包括人类食品、动物食品、膳食补充剂、药物、盖仑制剂组合物、化妆品组合物、香料组合物、加香制品、药物组合物或其组合中的至少一种。
65.如权利要求63所述的产品，其中所述产品基料包括乳制品、肉类产品、基于植物的蛋白质产品或其组合中的至少一种。
66.如权利要求63所述的产品，其中所述发酵提取物包含约10％至约50％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约25％w/w的γ-十二内酯。
67.如权利要求63所述的产品，其中所述发酵提取物是精制内酯产物，其包含约50％至约95％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约50％w/w的γ-十二内酯。
68.如权利要求67所述的产品，其中所述精制内酯产物具有约2:1至约4:1的γ-十二碳烯-6-内酯比γ-十二内酯的比率。
69.如权利要求67所述的产品，其中所述精制内酯产物以嗅觉有效量存在。
70.如权利要求67所述的产品，其中所述精制内酯产物以约10ppb至约200ppm的量存在。
71.如权利要求63所述的产品，其中所述发酵提取物以嗅觉有效量存在。
72.如权利要求63所述的产品，其中所述发酵提取物以约10ppb至约1000ppm的量存在。
73.如权利要求63所述的产品，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述产品具有降低的异常特征感觉。
74.如权利要求63所述的产品，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述产品具有增加的乳制品特征感觉。
75.如权利要求63所述的产品，其中如通过感官测试测量，与所述产品基料相比时所述产品具有增加的对至少一种感官属性的感觉。
76.如权利要求75所述的产品，其中所述至少一种感官属性包括柔滑、多脂肪、浓郁、甜味、奶般、光滑、多内酯、桃色、果味或其组合。
具体实施方式
为了满足在简单的发酵过程中通过使用食品级微生物产生天然内酯和羟基脂肪酸的需求，这些发明人已经开发了发酵培养基、发酵提取物和使用作用于非水解植物油的食品级非致病性乳酸细菌和酵母的混合培养物的发酵方法。已发现这些组合物和方法中的天然内酯和羟基脂肪酸有益于赋予各种消费品嗅觉效果、口味增强和/或体感效果。
在一些实施例中，制作呈味化合物的方法包括以下步骤：
i.共培养至少一种非致病性乳酸细菌和至少一种酵母以产生混合培养物；
ii.在所述混合培养物中发酵非水解植物油以产生混合培养物发酵培养基；
iii.通过在发酵步骤之后混合酸来酸化所述混合培养物发酵培养基以产生酸化的混合培养物发酵培养基，以及
iv.所述酸化的混合培养物发酵培养基的内酯化；其中所述方法产生至少一种γ内酯、至少一种羟基脂肪酸或其组合。
如本文所用，“共培养”被理解为是指其中发酵培养基包含两种或更多种生物体的发酵过程。这种混合培养物发酵培养基也可称为联合培养，其过程可称为联合发酵。
下面显示的化学反应说明了整个过程，并显示了非水解植物油如何通过联合发酵进行生物转化以产生期望的呈味化合物。
Figure BDA0004130957940000081
联合发酵涉及能够产生18-碳10-羟基脂肪酸的非致病性乳酸细菌和能够通过β-氧化途径将18-碳羟基脂肪酸氧化为12-碳羟基脂肪酸的酵母。
如本文所用，“非致病性乳酸细菌”是不参与引起疾病的乳酸细菌。非致病性乳酸细菌的非限制性实例可包括来自以下属的物种：乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)、乳球菌属(Lactococcus)、和链球菌属(Streptococcus)、以及一些肉杆菌属(Carnobacterium)、肠球菌属(Enterococcus)、酒球菌属(Oenococcus)、四联球菌属(Tetragenococcus)、漫游球菌属(Vagococcus)、和魏斯氏菌属(Weisella)物种。不希望受任何理论的束缚，在一些实施例中，非致病性乳酸细菌具有可将不饱和脂肪酸转化为10-羟基脂肪酸的膜相关10-水合酶。在一些实施例中，非致病性乳酸细菌可包括嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonii)、及其组合。在一些优选实施例中，非致病性乳酸细菌可包括乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或其组合。
在一些实施例中，能够将18-碳羟基脂肪酸氧化成12-碳的酵母可以包括耶氏酵母属酵母、酵母属酵母、假丝酵母酵母，或其组合。在其他实施例中，酵母可包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。不希望受任何理论的束缚，在一些实施例中，酵母可以产生脂肪酶以水解甘油三酯并且还可以利用过氧化物酶体β-氧化通过氧化分解代谢长链脂肪酸例如18-碳10-羟基脂肪酸以产生12-碳4-羟基脂肪酸。
设计和控制细菌和酵母的混合培养物是出了名的困难，但这些发明人出人意料地开发了一种平衡的微生物混合物，其可以产生有用的呈味化合物。在一些实施例中，在将细菌和酵母在一起共培养的步骤之前制备非致病性乳酸细菌和/或酵母的种子培养物。在一些实施例中，通过从平板中选择细菌菌落并将它们接种到MRS液体培养基中并在30℃的温度下以每分钟250转(rpm)的搅拌孵育6-24小时来产生非致病性乳酸细菌种子培养物。MRS培养基以适合培养乳酸细菌而著称，但也可以使用任何其他合适的培养基。
在一些实施例中，通过从平板中选择菌落并将它们接种到酵母提取物蛋白胨葡萄糖(YPD或YEPD)液体培养基中并在30℃的温度下以250rpm的搅拌孵育6-24小时来产生酵母种子培养物。YPD培养基以适合培养酵母而著称，但也可以使用任何其他合适的培养基。
对于共培养步骤，在一些实施例中，将非致病性乳酸细菌种子培养物添加到含有MRS液体培养基的发酵罐中以产生非致病性乳酸细菌培养物作为发酵的初始步骤。常规发酵罐适用于该步骤并且为本领域技术人员所熟悉。这些发酵罐允许控制参数，包括但不限于pH、搅拌、温度、时间、通气等。本发明方法的众多优点之一是能够仅使用一件发酵设备(即一锅法)。这些简化的过程速度更快，并能产生期望的结果。在一些实施例中，非致病性乳酸细菌培养物初始发酵步骤具有约4至约8的pH和约25℃至约40℃的温度持续约5小时至约8小时。通过添加碱如氢氧化钠来维持pH。此外，通过改变搅拌和使用约0.1至约1.5vvm(每分钟每单位液体体积的气体体积流量)的空气喷射速率，溶解氧(DO)含量可以保持在低于约35％饱和度的饱和度水平。
在一些实施例中，一旦不再需要碱来维持非致病性乳酸细菌培养物的pH，则添加酵母种子培养物以产生混合培养物。在一些实施例中，营养物原料可以与酵母起子培养物一起添加。只要添加速率不会导致产生过多的酸，这种营养物原料就可以帮助发酵有效进行。因此，精确的添加速率将取决于发酵罐的大小等。在一些实施例中，营养物原料可以包括碳源如25％-50％w/w蔗糖、有机氮源如5％-15％w/w酵母提取物，以及无机氮源如7％-12％柠檬酸三铵。在其他实施例中，可以以约4至约12毫升/小时/升发酵培养基的速率添加营养物原料。在一些实施例中，在添加酵母起子培养物之前，非致病性乳酸细菌培养物的温度可降低至约37℃至约30℃。
在一些实施例中，混合培养物在发酵罐中保持约15至约25小时，然后添加非水解植物油并开始发酵步骤，该发酵步骤涉及将非水解植物油生物转化为呈味化合物。如本文所用，“非水解植物油”被理解为是指具有最少量游离脂肪酸的甘油三酯材料。在一些实施例中，非水解植物油具有少于2％w/w的游离脂肪酸。在一些实施例中，非水解植物油具有至少75％w/w的亚油酸。在一些实施例中，非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。在其他实施例中，非水解植物油包括具有至少70％不饱和脂肪酸例如油酸、亚油酸和亚麻酸的油。这种具有高水平不饱和脂肪酸的非水解植物油的非限制性实例包括大豆油、低芥酸菜籽油、鳄梨油等。
在一些实施例中，非水解植物油发酵具有约30小时至约200小时的发酵时间(当非水解植物油被添加至混合培养物时开始)。在一些实施例中，发酵时间为约30、35、40、45、48、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190或195至约40、45、48、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195或200小时。在一些实施例中，可在发酵过程中的任何时间加入另外的非水解植物油。在一些实施例中，在发酵时间5、8、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190或195小时时添加另外的非水解植物油。
在一些实施例中，非水解植物油发酵具有约20℃至约37℃的发酵温度。在一些实施例中，发酵温度为约20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃或36℃至约21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃或37℃。
在一些实施例中，非水解植物油发酵具有约4至约8的发酵pH。在一些实施例中，发酵pH为约4.0、4.5、5.0、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、7.0或7.5至约4.5、5.0、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、7.0、7.5或8.0。本领域技术人员将熟悉用于pH控制的常规手段，包括添加碱如氢氧化钠等。
在一些实施例中，非水解植物油发酵具有小于35％的发酵DO含量。在一些实施例中，可以通过调节搅拌和空气流速来管理DO含量。在一些实施例中，搅拌速率可为约300rpm至约1000rpm，并且在一些实施例中，空气流速可为约0.1至约1vvm。
关于制备呈味化合物的方法中的酸化步骤，在一些实施例中，混合酸可以减缓或终止发酵。在一些实施例中，与酸混合的步骤导致混合培养物发酵培养基具有约3至约4的酸化pH。在其他实施例中，酸化pH是从约3、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、或3.9至约3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、或4。常规的混合手段可用于与酸混合的步骤并且将是本领域技术人员熟悉的。这些常规手段可包括计量泵、搅拌桨等。
在一些实施例中，酸化步骤中使用的酸可包括盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、柠檬酸或其组合。
至于内酯化步骤，酸化发酵培养基的这种加热可以通过高压灭菌来完成。常规手段和设备可用于内酯化/高压灭菌/加热步骤并且本领域技术人员将熟悉这些手段和设备。不希望受任何理论的束缚，由于所涉及的温度和时间，该高压灭菌步骤可以促进内酯化反应。
在一些实施例中，内酯化步骤具有约90℃至约130℃的内酯化温度。在其他实施例中，高压灭菌步骤具有约90℃、95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、116℃、117℃、118℃、119℃、120℃、121℃、122℃、123℃、124℃、125℃、126℃、127℃、128℃或129℃至约95℃、100℃、105℃、110℃、115℃、116℃、117℃、118℃、119℃、120℃、121℃、122℃、123℃、124℃、125℃、126℃、127℃、128℃、129℃或130℃的温度。
在一些实施例中，内酯化步骤具有约10分钟至约60分钟的内酯化时间。在其他实施例中，高压灭菌时间为约10、12、15、17、20、22、25、27、30、35、40、45、50或55分钟至约12、15、17、20、25、27、30、35、40、45、50、55或60分钟。
在一些实施例中，制备呈味化合物的方法进一步包括在高压灭菌步骤之后的溶剂提取步骤以产生发酵提取物。常规手段可用于该溶剂提取步骤并且为本领域技术人员所熟知。在一些实施例中，溶剂提取步骤涉及溶剂例如乙酸乙酯、乙醇、己烷、环己烷或其组合。
在一些实施例中，制备呈味化合物的方法进一步包括在溶剂提取步骤之后的蒸馏步骤以产生精制内酯产物。在一些实施例中，精制内酯产物包括至少70％的γ-十二碳烯-6-内酯。在其他实施例中，精制内酯产物按精制内酯产物的重量计约5％至约30％w/w的γ-十二内酯。
在一些实施例中，通过制备呈味化合物的方法产生的至少一种γ内酯包括γ-十二碳烯-6-内酯、γ-十二内酯或其组合。在一些实施例中，至少一种羟基脂肪酸包括10-羟基十八烷酸、10-羟基-12-十八碳烯酸或其组合。
除了本发明的制备呈味化合物的方法外，这些发明人还发明了发酵提取物。在一些实施例中，本发明包括一种从非水解植物油的混合培养物发酵中提取的发酵提取物。在一些实施例中，混合培养物发酵包含至少一种细菌和至少一种酵母。
在一些实施例中，至少一种细菌能够产生18-碳10-羟基脂肪酸，并且在一些实施例中，至少一种细菌包括非致病性乳酸细菌。在一些实施例中，至少一种细菌可包括乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌或其组合。
在一些实施例中，至少一种酵母能够氧化18-碳10-羟基脂肪酸以产生12-碳4-羟基脂肪酸。在一些实施例中，至少一种酵母可包括耶氏酵母属(Yarrowia)、酵母属(Saccharomyces)、假丝酵母属(Saccharomyces)或其组合。在其他实施例中，至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
在一些实施例中，从混合培养物发酵中提取的发酵提取物的非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。在一些实施例中，非水解植物油具有至少75％的亚油酸。在仍其他实施例中，非水解植物油具有至少80％、85％、90％或95％的亚油酸。在一些实施例中，非水解植物油具有至少70％的不饱和脂肪酸。
在一些实施例中，发酵提取物进一步包含至少一种18-碳10-羟基脂肪酸、至少一种12-碳γ-内酯，或其组合。在一些实施例中，发酵提取物进一步包含约10％至约50％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约25％w/w的γ-十二内酯。在仍其他实施例中，发酵提取物具有约2:1至约4:1的γ-十二碳烯-6-内酯比γ-十二内酯的比率。
在一些实施例中，发酵提取物进一步包含溶剂。溶剂可包括乙醇、乙酸乙酯或其组合。
这些发明人开发的另一组发明包括一种产品，其包含发酵提取物和产品基料，其中从非水解植物油的混合培养物发酵中提取所述发酵提取物。产品基料可以包括全范围的液体和固体产品，包括但不限于人类食品、动物食品、膳食补充剂、药物、盖仑制剂组合物、化妆品组合物、香料组合物、加香制品、药物组合物或其组合。在一些实施例中，产品基料可以包括饮料，例如牛奶和/或非牛奶；含酒精的饮料；冷冻甜点，例如冰淇淋、冰奶、冰、果子露等；以及奶酪；奶酪酱；咸味零食；格兰诺拉麦片和格兰诺拉麦片棒；或即食谷物。在一些实施例中，产品基料包括乳制品、肉类产品或基于植物的蛋白质产品。
在一些实施例中，发酵提取物以嗅觉有效量存在。如本文所用，“嗅觉有效量”被理解为是指将有助于特定嗅觉特征的量，但是对整个食品的风味、口味和香气效果将是用于制造该产品的成分的效果的总和。赋予嗅觉效果的具体量将取决于许多因素而变化，包括产品成分的相对量和发酵提取物的期望效果。在一些实施例中，发酵提取物以约10ppb至约1000ppm的量存在。在一些实施例中，发酵提取物以约10ppb、20ppb、30ppb、40ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb、100ppb、110ppb、120ppb、130ppb、140ppb、150ppb、160ppb、170ppb、180ppb、190ppb、200ppb、210ppb、220ppb、230ppb、240ppb、250ppb、260ppb、270ppb、280ppb、290ppb、300ppb、310ppb、320ppb、330ppb、340ppb、350ppb、360ppb、370ppb、380ppb390ppb、400ppb、410ppb、420ppb、430ppb、440ppb、450ppb、460ppb、470ppb、480ppb或490ppb至约20ppb、30ppb、40ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb、100ppb、110ppb、120ppb、130ppb、140ppb、150ppb、160ppb、170ppb、180ppb、190ppb、200ppb、210ppb、220ppb、230ppb、240ppb、250ppb、260ppb、270ppb、280ppb、290ppb、300ppb、310ppb、320ppb、330ppb、340ppb、350ppb、360ppb、370ppb、380ppb 390ppb、400ppb、410ppb、420ppb、430ppb、440ppb、450ppb、460ppb、470ppb、480ppb、490ppb或500ppb的量存在。在其他实施例中，发酵提取物以约0.5ppm、1ppm、1.5ppm、2ppm、2.5ppm、3ppm、3.5ppm、4ppm、4.5ppm、5ppm、5.5ppm、6ppm、6.5ppm、7ppm、7.5ppm、8ppm、8.5ppm、9ppm或9.5ppm至约1ppm、1.5ppm、2ppm、2.5ppm、3ppm、3.5ppm、4ppm、4.5ppm、5ppm、5.5ppm、6ppm、6.5ppm、7ppm、7.5ppm、8ppm、8.5ppm、9ppm、9.5ppm或10ppm的量存在。在其他实施例中，发酵提取物以约10ppm、20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、60ppm、70ppm、80ppm、90ppm、100ppm、110ppm、120ppm、130ppm、140ppm、150ppm、160ppm、170ppm、180ppm或190ppm至约20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、60ppm、70ppm、80ppm、90ppm、100ppm、110ppm、120ppm、130ppm、140ppm、150ppm、160ppm、170ppm、180ppm、190ppm或200ppm的量存在。在一些实施例中，发酵提取物以约100ppm、200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm或900ppm至约200ppm、300ppm、400ppm、500ppm、600ppm、700ppm、800ppm、900ppm或1000ppm的量存在。
在一些实施例中，发酵提取物是精制内酯产物，其包含约50％至约95％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约50％w/w的γ-十二内酯。在一些实施例中，精制内酯产物具有约2:1至约4:1的γ-十二碳烯-6-内酯比γ-十二内酯的比率。
在一些实施例中，精制内酯产物以嗅觉有效量存在。在一些实施例中，精制内酯产物以约10ppb至约200ppm的量存在。在一些实施例中，精制内酯产物以约10ppb、20ppb、30ppb、40ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb、100ppb、110ppb、120ppb、130ppb、140ppb、150ppb、160ppb、170ppb、180ppb、190ppb、200ppb、210ppb、220ppb、230ppb、240ppb、250ppb、260ppb、270ppb、280ppb、290ppb、300ppb、310ppb、320ppb、330ppb、340ppb、350ppb、360ppb、370ppb、380ppb390ppb、400ppb、410ppb、420ppb、430ppb、440ppb、450ppb、460ppb、470ppb、480ppb或490ppb至约20ppb、30ppb、40ppb、50ppb、60ppb、70ppb、80ppb、90ppb、100ppb、110ppb、120ppb、130ppb、140ppb、150ppb、160ppb、170ppb、180ppb、190ppb、200ppb、210ppb、220ppb、230ppb、240ppb、250ppb、260ppb、270ppb、280ppb、290ppb、300ppb、310ppb、320ppb、330ppb、340ppb、350ppb、360ppb、370ppb、380ppb 390ppb、400ppb、410ppb、420ppb、430ppb、440ppb、450ppb、460ppb、470ppb、480ppb、490ppb或500ppb的量存在。在其他实施例中，精制内酯产物以约0.5ppm、1ppm、1.5ppm、2ppm、2.5ppm、3ppm、3.5ppm、4ppm、4.5ppm、5ppm、5.5ppm、6ppm、6.5ppm、7ppm、7.5ppm、8ppm、8.5ppm、9ppm或9.5ppm至约1ppm、1.5ppm、2ppm、2.5ppm、3ppm、3.5ppm、4ppm、4.5ppm、5ppm、5.5ppm、6ppm、6.5ppm、7ppm、7.5ppm、8ppm、8.5ppm、9ppm、9.5ppm或10ppm的量存在。在其他实施例中，精制内酯产物以约10ppm、20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、60ppm、70ppm、80ppm、90ppm、100ppm、110ppm、120ppm、130ppm、140ppm、150ppm、160ppm、170ppm、180ppm或190ppm至约20ppm、30ppm、40ppm、50ppm、60ppm、70ppm、80ppm、90ppm、100ppm、110ppm、120ppm、130ppm、140ppm、150ppm、160ppm、170ppm、180ppm、190ppm或200ppm的量存在。
对嗅觉特征的贡献可包括减少不太期望的特征、添加期望的特征、增强期望的特征或其组合。这些嗅觉特征贡献可以通过感官测试来测量。本领域技术人员将熟悉各种感官测试方法，并且任何常规方法都可用于测量本文所述的本发明组合物。例如，训练有素的专家小组可以使用零到五或零到十或零到十五的数字线得分来指示嗅觉特征的感知水平。可替代地，可以使用各种定量方法，例如定量描述性分析。在一些实施例中，添加发酵提取物和/或精制内酯产物可以掩盖或减少/限制产品基料中异味或变味的感觉。例如，许多基于植物的食品(奶类饮料和肉类产品)可能有异味，被描述为“豆腥味”等。在一些实施例中，当通过感官测试测量时，与不含发酵提取物的产品基料相比，发酵提取物和/或精制内酯产物可以减少异常特征感觉。
在发酵提取物有助于或增强所期望特征的实施例中，如通过感官测试测量，与不含发酵提取物的产品基料相比，产品具有增加的对至少一种感官属性的感觉。
在一些实施例中，发酵提取物可以为产品提供乳品样特征。在那些实施例中的一些中，当通过感官测试测量时，与没有发酵提取物的产品基料相比，产品具有增加的乳制品特征感觉。
在一些实施例中，产品具有增加的对感官属性的感觉，例如柔滑、奶般、多脂肪、光滑、浓郁、甜味、桃色、多内酯、果味或其组合。
这些发明人还发明了发酵培养基。在一些实施例中，发酵培养基包含至少一种细菌、至少一种酵母和至少一种非氢化植物油。在一些实施例中，至少一种细菌可以能够产生18-碳10-羟基脂肪酸，并且在一些实施例中，至少一种细菌可以是非致病性乳酸细菌。在一些实施例中，合适的细菌可以包括乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或其组合。
在一些实施例中，发酵培养基的至少一种酵母能够氧化18-碳10-羟基脂肪酸以产生12-碳4-羟基脂肪酸。在一些实施例中，至少一种酵母包括耶氏酵母属(Yarrowia)、酵母属(Saccharomyces)、假丝酵母属(Saccharomyces)或其组合。在其他实施例中，至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
在一些实施例中，发酵培养基的非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。在其他实施例中，非水解植物油包含至少70％的不饱和脂肪酸。并且在其他实施例中，非水解植物油具有至少75％的亚油酸。
除了这里描述的其他发明之外，发明人还发明了一种改良产品基料的方法。在一些实施例中，改良产品基料的方法包括以下步骤：将嗅觉有效量的从非水解植物油的混合培养物发酵中提取的发酵提取物添加到产品基料中以产生改良产品。产品基料的非限制性实例可包括人类食品、动物食品、膳食补充剂、药物、盖伦制剂组合物、化妆品组合物、香料组合物、加香制品或药物组合物。在一些实施例中，产品基料包括乳制品、肉类产品、基于植物的产品或其组合。可以使用常规手段来添加发酵提取物，并且本领域技术人员将熟悉典型的过程，例如计量加药装置、掺合器、桨式混合器等。
在一些实施例中，发酵提取物的嗅觉有效量为10ppb至约200ppm。类似于以上关于产品的描述，经改良的产品的改良可包括减少不太期望的特征、添加期望的特征、增强期望的特征或其组合。并且这些改良可以通过感官测试来测量。在一些实施例中，如通过感官测试测量，与产品基料相比时改良产品具有降低的异常特征感觉。在其他实施例中，如通过感官测试测量，与产品基料相比时改良产品具有增加的乳制品特征感觉。并且在仍其他实施例中，如通过感官测试测量，当与产品基料相比时，改良产品具有增加的对至少一种感官属性的感觉，其中所述感官属性可以包括柔滑、奶般、多脂肪、光滑、浓郁、甜味、桃色、多内酯、果味或其组合。
作为本发明的具体实施例提供以下内容。本发明的其他修改对本领域技术人员将是显而易见的。此类修改应理解为在本发明的范围内。除非另行说明，否则如本文所使用的所有百分比是重量百分比，ppm应理解为代表份数/百万份，L或l应理解为升，mL应解为毫升，g应理解为克，Kg应理解为千克，mol应理解为摩尔，mmol应理解为毫摩尔，psig应理解为磅力/平方英寸的表压，并且mmHg应理解为汞(Hg)的毫米数(mm)。如实例中使用的IFF应理解为意指美国纽约州纽约市的美国国际香精香料公司(International Flavors&Fragrances Inc.)。
实例1：生物转化时间为48小时的γ-十二碳烯-6-内酯(FEMA#3780)和γ-十二内 酯(FEMA#2400)的生产
为了使用食品级非致病微生物的混合培养物生产呈味化合物，采取了以下措施：
1.接种物(种子培养物)制备
(1)将MRS培养基组合物与以下成分掺合在一起：
Figure BDA0004130957940000171
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Figure BDA0004130957940000181
(2)将相应的YPD培养基组合物与以下成分掺合在一起：
10g/L酵母提取物、20g/L蛋白胨和20g/L葡萄糖
为了制备植物乳杆菌的种子培养物，从平板中选择纯菌落并将其接种到包含在500mL烧瓶中的以上100mL MRS培养基中，并将烧瓶以250rpm的速度振荡并30℃过夜。第二天，植物乳杆菌种子培养物的OD600值为12-13，然后准备好进行接种。
为了制备解脂耶氏酵母的种子培养物，从平板中选择纯菌落并将其接种到包含在500mL烧瓶中的以上所示的100mLYPD培养基中，并将烧瓶以250rpm的速度振荡并30℃过夜。第二天早上，解脂耶氏酵母种子培养物的OD600值为35-40，然后准备好进行接种。
2.生产过程
(1)乳酸细菌的培养
将1L MRS培养基装入2-L发酵罐，并在121℃灭菌20分钟。向2-L发酵罐中加入40ml(4％)植物乳杆菌种子培养物，并使用如下所示的初始培养参数：
温度：37℃
pH：6.2，通过添加5N NaOH进行控制
DO：30％的饱和度，由级联控制维持，初级控制采用不同的搅拌速度，次级控制采用0.2至0.6vvm的不同空气流速。
当细菌培养物完全消耗葡萄糖时(通常为6-7小时)，如不再添加NaOH所示，将温度设置降低至30℃。向发酵罐中加入2mL 1M MgSO4、2mL 0.1M MnSO4和3mL油酸。
(2)酵母的共培养
通过将40mL(4％)解脂耶氏酵母种子培养物添加到发酵罐中开始酵母的共培养。将含有35％蔗糖、3％酵母提取物和10％柠檬酸三铵的营养物原料以6mL/h的速率添加到发酵罐中24小时。创造混合或联合培养物。
(3)生物转化
在将混合酵母与细菌培养物共培养约16至18小时(过夜)后，添加25mL高亚油酸红花油(80％)。这被称为生物转化的时间0。搅拌速度设置为500rpm，空气流速设置为0.3vvm。通过添加5N NaOH或5N H2SO4将pH维持在6.2。在生物转化8小时时，添加另外的25mL高亚油酸红花油。通过使用5N H2SO4将培养基酸化至pH 3至4，在48小时时终止生物转化。
(4)内酯化、提取和纯化
将酸化培养基在121℃下高压灭菌20分钟，这有助于内酯化反应。通过用合适的有机溶剂(例如，乙酸乙酯)提取回收内酯。然后倾析有机相并蒸发除去乙酸乙酯溶剂。将所得风味油在部分真空(1毫巴)下蒸馏，收集在95-100℃之间蒸馏的级分，得到包含约78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯的精制产品。
3.结果
表1显示了经48小时的生物转化时间，植物乳杆菌和解脂耶氏酵母的联合培养物从红花油生产两种主要γ-内酯。
表1-随着时间的推移从红花油中联合培养生产γ-十二碳烯-6-内酯和γ-十二内 酯
Figure BDA0004130957940000191
表2显示了经48小时生物转化时间，由于来自耶氏酵母属的脂肪酶作用以及乳杆菌属和耶氏酵母属的联合培养物的消耗导致的游离脂肪酸变化。
表2-随着时间推移联合培养物从红花油生产脂肪酸
Figure BDA0004130957940000201
实例2：生物转化时间为96小时的γ-十二碳烯-6-内酯(FEMA#3780)和γ-十二内 酯(FEMA#2400)的生产
γ-十二碳烯-6-内酯和γ-十二内酯的生产程序与实例1中描述的相同，除了生物转化时间延长至96小时，空气流速为0.5vvm，红花油的添加量在时间0和8小时时各为50mL，而不是25mL。
表3显示了经96小时的生物转化时间，植物乳杆菌和解脂耶氏酵母的联合培养物从红花油生产两种主要γ-内酯。
表3-经96小时植物乳杆菌和解脂耶氏酵母的联合培养物从红花油生产γ-十二碳烯-6-内酯和γ-十二内酯
Figure BDA0004130957940000202
如实例1所述，通过用乙酸乙酯提取从高压灭菌的发酵培养基中回收内酯。倾析有机相，然后通过蒸发除去乙酸乙酯溶剂，得到风味油，其包含：
·γ-十二碳烯-6-内酯(乳制品内酯)20.5％
·γ-十二内酯5.2％
·10-羟基-12-十八碳烯酸2.3％
·10-羟基十八烷酸1.0％
·棕榈酸5.0％
·硬脂酸2.8％
·油酸8.7％
·亚油酸41.9％
实例3：在奶油苏打水中的应用
将从实例1获得的精制的含内酯发酵提取物(78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯)以十亿分之50(ppb)添加到奶油苏打水中。由经过认证的调味师和风味科学家组成的10名评委的组都认为测试苏打水更柔滑、更浓郁。
实例4：在植物奶中的应用
在商业杏仁奶中评估根据实例1获得的精制的含内酯发酵提取物(78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯)。通过在杏仁奶中添加0.01％的IFF奶香料来制备对照样品。通过在对照样品中添加300ppb的精制的含内酯产物来制备测试样品。由经过认证的调味师组成的技术组将测试样品评为更柔滑、自然的口味、更乳制品的口感、余味绵长和口感饱满。
实例5：对植物蛋白的掩盖作用
在豌豆蛋白溶液中评估根据实例1获得的精制的含内酯发酵提取物(78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯)。通过将豌豆分离蛋白粉末(1％)分散在水中来制备基料样品。通过在基料样品中添加25ppb的精制的含内酯产物来制备测试样品。对预先选择的属性进行描述性感官测试。将样品对以盲目且随机的顺序呈现给感官小组。组成员被指示通过在线刻度上进行标记来对属性强度进行评分。如表4中所示，精制内酯产物显著降低了豆腥香气和豆腥风味。
表4–发酵提取物对豌豆蛋白掩味作用的描述性分析结果
Figure BDA0004130957940000211
Figure BDA0004130957940000221
*表示p＝0.05时的显著差异
实例6：植物奶中检测阈值的确定
商业杏仁奶用作基料。将根据实例1制备的精制的含内酯发酵提取物(78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯)以10ppb至120ppb范围内的各种浓度添加到基料中。感官组成员以盲目和随机的顺序收到了三个编码样品。两个样本相同，一个不同。组成员被要求鉴定奇数样品。表5显示了组成员的作为杏仁奶中剂量浓度的函数的正确响应百分比。当检测阈值定义为50％的时间检测发生时的浓度时，检测阈值估计在杏仁奶中约为50ppb。
表5-用于杏仁奶中确定检测阈值的剂量响应图
浓度(ppb) ％正确响应
10 28
55 52
100 85
120 100
实例7：植物奶中使用的上限的确定
在杏仁奶基料中制备一系列含有不同量的根据实例1获得的含内酯精制发酵提取物(78％γ-十二碳烯-6-内酯和22％γ-十二内酯)的测试样品，范围为0.2ppm、10ppm、50ppm、100ppm、150ppm和200ppm。八名评委的技术小组从最低至最高品尝样品系列，并选出由于不希望的属性而难以品尝的样品。结果，所有评委都选择了含有200ppm的样品，因为产品散发出非常强烈和压倒性的香气，因此该样品口味难以忍受。因此，200ppm被确定为植物奶中使用的上限。
实例8：发酵提取物在植物奶中的应用
在杏仁奶基料中以300ppb评估根据实例2制备的发酵提取物(γ-十二碳烯-6-内酯20.5％和γ-十二内酯5.2％)。八名评委的技术小组都将测试样品评为更柔滑，口感更饱满，没有任何异味。

Claims (20)

1.一种发酵提取物，其从非水解植物油的混合培养物发酵中提取。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述混合培养物发酵包含至少一种细菌和至少一种酵母。
3.如权利要求2所述的组合物，其中所述至少一种细菌包括乳酸乳杆菌(Lactobacilluslactis)、植物乳杆菌(Lactobacillusplanatarum)、干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)或其组合。
4.如权利要求2所述的组合物，其中所述至少一种酵母包括解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)、嗜油假丝酵母(Candidapetrophilum)或其组合。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述发酵提取物包含约10％至约50％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯和约5％至约25％w/w的γ-十二内酯。
6.一种制作呈味化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
a.共培养至少一种非致病性乳酸细菌和至少一种酵母以产生混合培养物；
b.在所述混合培养物中发酵非水解植物油以产生混合培养物发酵培养基；
c.通过在发酵步骤之后混合酸来酸化所述混合培养物发酵培养基以产生酸化的混合培养物发酵培养基；以及
d.通过加热所述酸化的混合培养物发酵培养基使所述酸化的混合培养物发酵培养基内酯化；其中所述方法产生γ内酯、羟基脂肪酸或其组合中的至少一种。
7.如权利要求6所述的方法，其进一步包括以下至少一个步骤：在所述共培养步骤之前，制备所述至少一种非致病性乳酸细菌的种子培养物，制备所述至少一种酵母的种子培养物，或其组合。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述共培养步骤进一步包括通过以下来首先培养所述至少一种非致病性乳酸细菌：将所述至少一种非致病性乳酸细菌种子培养物添加到细菌发酵培养基中，以产生至少一种非致病性乳酸细菌培养物。
9.如权利要求8所述的方法，其进一步包括将所述至少一种酵母种子培养物添加到所述至少一种非致病性乳酸细菌培养物中以产生所述混合培养物。
10.如权利要求6所述的方法，其中所述非水解植物油包括向日葵油、红花油或其组合。
11.如权利要求6所述的方法，其进一步包括内酯化后的溶剂提取步骤，以产生发酵提取物。
12.如权利要求11所述的方法，其进一步包括所述溶剂提取后的蒸馏步骤，以产生精制内酯产物。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述精制内酯产物包括按所述精制内酯产物的重量计至少70％w/w的γ-十二碳烯-6-内酯。
14.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种γ内酯包括γ-十二碳烯-6-内酯、γ-十二内酯或其组合。
15.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种羟基脂肪酸包括硬脂酸、油酸、亚油酸或其组合。
16.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种非致病性乳酸细菌包括乳酸乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌或其组合。
17.如权利要求6所述的方法，其中所述至少一种酵母包括解脂耶氏酵母、嗜油假丝酵母或其组合。
18.一种由如权利要求6所述的工艺制备的呈味化合物。
19.一种产品，其包含发酵提取物和产品基料，其中从非水解植物油的混合培养物发酵中提取所述发酵提取物。
20.如权利要求19所述的产品，其中所述发酵提取物以嗅觉有效量存在。
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