CN116240112A - 一种用于防治韭菜迟眼蕈蚊的冻土毛霉及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一株韭菜迟眼蕈蚊生防菌冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO‑1及其应用；该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO. 40036；本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO‑1的微生物杀虫剂制备方法简单，使用方便，对人畜和其他非靶标生物无毒无害，对环境无污染，利用其作为微生物杀虫剂用于蔬菜害虫的生物防治，属于环境友好型杀虫剂，能够极大的降低葱蒜类作物根蛆害虫防治的农药残留风险，促进产业的绿色健康发展，复合现代生态农业的发展需求。

Description

一种用于防治韭菜迟眼蕈蚊的冻土毛霉及其应用

技术领域

本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种防治韭菜迟眼蕈蚊幼虫冻土毛霉菌Mucor hiemalis菌株BO-1菌株及其应用。

背景技术

韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphagaYang et Zhang，属双翅目Dipteria，眼蕈蚊科Sciaridae，迟眼蕈蚊属Bradysia，是我国重要的蔬菜地下害虫，对葱属蔬菜造成极大危害，主要危害韭菜、大葱、洋葱、小葱、大蒜等百合科蔬菜，偶尔也危害莴苣青菜、芹菜等，尤喜食韭菜。韭菜迟眼蕈蚊幼虫俗称韭蛆，该害虫的严重危害是导致葱蒜韭类蔬菜减产的重要因素。

目前防治韭菜迟眼蕈蚊的方法有农业防治、化学防治、物理防治和生物防治，其中施用化学杀虫剂是防治该害虫最常用的技术。常使用的化学农药主要有有机磷类、氨基甲酸酯类和新烟碱类杀虫剂，但化学防治虽然具有见效快、杀虫效果好、使用方便、不受地区和季节限制等优点，但其同时也存在着化学药剂残留、杀伤有益生物、使害虫产生抗药性引起害虫再猖獗或次要害虫上升为主要害虫等诸多无法忽视的问题。与化学防治相比，生物防治具有对环境效益好、对人畜安全的优点，是有害生物综合防治的重要发展方向。因此，加强韭菜迟眼蕈蚊生物防治技术的研究是追求韭蛆无害化防治，保障食品安全的重要途径。

生物防治具有专一性强、不存在产生抗药性以及环境污染等优点，是防治韭菜迟眼蕈蚊的理想手段。近年来国内外科研工作者针对韭蛆生防防治进行了大量的研究，包括利用天敌昆虫、捕食螨、寄生性线虫和病原微生物进行防治。有多种昆虫病原微生物可侵染韭菜迟眼蕈蚊，如球孢白僵菌Beauveria bassiana（范晓杰等，中国生物防治学报. 2017年第4期）、苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis（宋健等，应用昆虫学报. 2016年第6期）、剑毛帕厉螨Stratiolaelaps scimitus（捕食螨）（韩双等，植物保护.. 2018年第4期）和芫菁夜蛾斯氏线虫Steinernema feltiae（昆虫病原线虫）（武海斌等，昆虫学报. 2019年第2期）等，并已有一些相关发明专利公开：专利公开号CN104099277A公开了一种用于防治韭菜迟眼蕈蚊的苏云金芽孢杆菌（保藏编号为CGMCC No.9375）及其应用，该菌株对双翅目眼蕈蚊科害虫韭菜迟眼蕈蚊具有高毒杀能力；专利公开号CN103981108A公开了一种用于防治韭菜迟眼蕈蚊的球孢白僵菌（保藏编号为CGMCC No.9252）及其应用，该菌株对韭菜迟眼蕈蚊毒力极高，专一性强，杀虫效果好；专利公开号CN103981108A公开了一种无公害防治韭菜迟眼蕈蚊的方法，该方法采用昆虫病原线虫与黑色粘虫板的组合提高两者对韭菜迟眼蕈蚊的田间控制作用。

现有的韭菜迟眼蕈蚊生防资源对幼虫的致毒作用相对较低，球孢白僵菌在孢子浓度为1×10⁹个/mL时，处理三天韭菜迟眼蕈蚊的死亡率为58%，孢子浓度为1×10⁷个/mL时，处理后九天死亡率也仅为47%（周仙红等. 山东农业科学. 2016年第7期）；为了提高白僵菌等生防菌剂对韭菜迟眼蕈蚊的田间防治效果，将生防菌剂和化学杀虫剂结合越来越受到研究者的追捧（范晓杰等. 中国生物防治学报. 2017年第4期）。毛霉属真菌广泛分布在自然界中，寄生于动植物或腐生于土壤、动植物残体等基物，部分毛霉菌是一些鳞翅目、鞘翅目和双翅目昆虫的病原体。国外研究者曾从甘蓝夜蛾Mamestra brassicae、橄榄果实蝇Bactrocera oleae和地中海实蝇Ceratitis capitata虫体上分离得到对昆虫具有致毒作用的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株（Konstantopoulou et al. BioControl. 2005.2）。最近，国内也有研究者发现冻土毛霉Mucor hiemalis的个别菌株存在对昆虫的致病能力，例如叉襀科昆虫（陈健鑫等，环境昆虫学报. 2021年第1期）和茴香薄翅野螟（马有花和来有鹏，江西农业大学学报. 2022年第10期）。

发明内容

本发明的目的在于提供一株用于防治韭菜迟眼蕈蚊的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1菌株，该菌株对双翅目眼蕈蚊科害虫韭菜迟眼蕈蚊具有高毒杀能力。

本发明的另一目的在于提供一种微生物杀虫剂。

本发明的第三目的在于提供上述微生物杀虫剂的制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明一种冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1，该菌株已于2022年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 40036。

上述微生物杀虫剂，其剂型为分生孢子悬浮液（液体剂型），简称为孢子悬液。

优选方案，上述微生物杀虫剂，其所述的孢子悬浮液（液体剂型）中含有上述冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1孢子浓度为1×10⁷～1×10⁹个孢子/ml。

上述微生物杀虫剂的制备方法，包括将孢子粉按比例与含有0.05％（v/v）吐温80的水溶液混合均匀，制成孢子悬浮液。所述的孢子粉按照通常的方法制备即可。

上述冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1在防治蔬菜害虫上的应用。所述的蔬菜害虫是指双翅目害虫。所述的双翅目害虫是指眼蕈蚊科害虫。所述的眼蕈蚊科害虫是指韭菜迟眼蕈蚊Bradysia odoriphaga。

本发明菌株冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1采集筛选的过程及其分类鉴定：

（一）采集筛选的过程及形态分类鉴定：

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1是山东省聊城大学农学与农业工程学院于2018年3月从山东泰安冬季设施栽培韭菜田间发现罹病韭蛆幼虫中分离得到的。具体过程如下：2018年3月从山东省泰安市岱岳区大汶口镇韭菜大棚中采集韭菜迟眼蕈蚊幼虫，发现大量幼虫死亡的现象，将死亡幼虫虫尸装入灭菌样品袋中，记录采集地点及时间；在实验室中，将感病死亡的韭菜迟眼蕈蚊幼虫用无菌蒸馏水清洗2次，每次持续10s，采用无菌吸水纸去除多余水分，再用70%的酒精对幼虫消毒2~3次，每次持续5s，接着用无菌蒸馏水冲洗3次后放入底部铺有无菌滤纸的一次性培养皿中保湿培养。待虫体长出菌丝或孢子时，在超净工作台中挑取少量菌丝或孢子接种于PDA培养基（其组成成分及其比例为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，氯霉素0.2g，水1000ml，PH自然）平板（直径9.0cn），25±1℃恒温生化（14L∶10D）培养3 d。沿菌落边缘挑取菌丝转移至新的PDA培养基平皿，如此往复纯化4次后的菌株于4℃冰箱保存。观察该菌株菌落圆形（图1），初期菌丝呈现白色长细丝状，后期菌丝颜色变深，呈现灰色，菌落中间致密，边缘稀疏；光学显微镜下观察菌株菌丝无隔，孢囊梗直立单生，顶生球状孢子囊，含大量孢囊孢子，孢子椭圆形、圆形，孢子为单细胞，大小为1.0-2.1×1.3-2.5 μm。这些特征与《真菌鉴定手册》(魏景超编著.上海科学技术出版社.1979年)中描述的冻土毛霉属形态特征基本一致，初步判定该菌株属于冻土毛霉Mucor hiemalis，命名为冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1。

将纯化后的菌株接种于韭菜迟眼蕈蚊幼虫，发现韭菜迟眼蕈蚊幼虫再次发病，并与病原菌分离前的发病症状一致（见图2）：与健康幼虫相比，感病初期幼虫行为迟缓，消化道清晰可见，但消化道内绿色食物残渣逐渐减少，虫体光亮略透明，感病后期消化道和脂肪体溶解，虫体内部浑浊，最终虫体软化死亡，菌丝从虫尸内长出，并在孢囊梗顶端生成孢子囊。

利用ITS基因序列对Mucor hiemalis菌株BO-1进行分子鉴定分类：

利用Mucor hiemalis菌株BO-1的菌丝体提取该菌株基因组DNA，然后以所提取的DNA为模板，以真菌ITS区通用引物ITS-1和ITS-4（由上海生工生物工程技术服务有限公司合成）为引物进行PCR扩增，扩增所得产物为Mucor hiemalis菌株BO-1的ITS序列；所述的引物序列如下：

ITS-1：5′- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′，（SEQ ID No:1），

ITS-4：5′- TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′，（SEQ ID No:2）；

PCR扩增反应体系为：（30μL）:10×PCR Buffer（Mg²⁺）5μL；dNTP Mixture（2.5mM）5μL，引物（10μmol/L）各1μL，模板1μL，Taq聚合酶（5U/μL）1μL，超纯水补至30μL。反应程序为：95℃ 5min；95℃ 1min，55℃ 45s，72℃ 1min，32个循环；72℃延伸10 min。PCR产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳检测，收集电泳条带条带，委托铂尚生物有限公司测序，测序结果见SEQ IDNo:3。

冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1 ITS序列（SEQ ID No:3）如下：

GGGTCTGAGCATTGCCCACATTGCCAGGGGCTGTGGACCAGAGTTGCCGGGGATACTGGTCTGTTTATATAGTGTTTGGGTCCCCAACTTCCCCTTCCTCTACTGATTATGAACCTCTTGTGCGTACACGGGGAGAGATACATGGCAGTCTTGAGGCCACTCCAGCCCAGGGGGAGGCATTCGGGTGGACGCGGTCCTCAATTGGGGATGATTACCCGCTTCTGGCCAGTGTGCCCCGCTCTTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTAAATAATTTAGATGGCCTTTGCTAGTTTTCTAGCGAATGGTTCATTCTTTTTTACTGTGAACTGTTTTAATTTTTCAGCGTCTGAGGAATGTCTTTTAGCCATAGGGATAGGCTACTAGAATGTTAACCGAGCTGAAAGTCAGGCTTAGGCCTGGTATCCTATTAATTATTTACCAAAAGAATTCAGTATTATAATTGTAACATAAGCGTAAAAAACTTATAAAACAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGCAAAGTGCGATAACTAGTGTGAATTGCATATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCAACTTGCGCTCAATGGTATTCCATTGAGCACGCCTGTTTCAGTATCAAAAACACCCCACATTCATAATTTTGTTGTGAATGGAAATGAGAGTTTCGGCTTTATTGCTGAATTCTTTAAAATTATTAGGCCTGAACTATTGTTCTTTCTGCCTGAACATTTTTTTAATATAAAGGAATGCTCTAGTAAAAAGACTATCTCTGGGGCCTCCCAAATAAATCATTCTTAAATTTGATCAGACATCAGGCGGGATTACCCGCTGAACTTACTCATATCAATAAGGGGAGGAGATGGACCGCTCGCTCCCTGCCACGAAGTCCGCTGATCACCCGCCGTAG

将测序所得SEQ ID No:3所示的核苷酸序列于Genbank数据库中进行同源性BLAST比对，结果（见图3）与Mucor hiemalis菌株BO-1 ITS序列最大同源性为99％以上的菌株是冻土毛霉菌Mucor hiemalis，说明Mucor hiemalis菌株BO-1在分类上属于冻土毛霉菌Mucor hiemalis；同时对比结果显示冻土毛霉菌Mucor hiemalis菌株BO-1的ITS序列与任何其他冻土毛霉菌Mucor hiemalis的ITS序列都不相同，说明Mucor hiemalis菌株BO-1为一种新的冻土毛霉菌株。

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1微生物杀虫剂的使用方法：在韭蛆幼虫发生初期，将冻土毛霉M. hiemalis菌株BO-1孢子悬浮液直接兑水稀释成1×10⁷～1×10⁹个孢子/ml，用普通农用喷雾器喷灌于韭菜根部；喷洒间隔2-3天，连续喷药3次，以达到持续控害的效果。

本发明具有的优点或有益效果：

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊幼虫的致病性极强，实验室内接种10⁵和10⁷个孢子/ml孢子悬浮液后3 d后，二龄幼虫死亡率分别为80.83%和91.27%，四龄幼虫死亡率为58.40%和73.60%；

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1适温区间广泛，菌株BO-1菌丝生长、菌落产孢和孢子致病性的最适宜温度区间为18~28℃，23℃下菌丝生长最快，产孢量最多，对韭菜迟眼蕈蚊幼虫的致病性最强；

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊的田间综合防效突出，当菌株BO-1孢子悬液浓度高于1×10⁹孢子/ml时，田间灌根处理后3 d和7 d的防治效果分别为64.34%和88.41％，其防治效果甚至要优于辛硫磷，并与噻虫胺的田间防治效果相当。

本发明为韭菜迟眼蕈蚊的田间防治提供了一种高效无害、绿色环保的方法；其次，本发明冻土毛霉属于昆虫病原真菌，对人畜和其他非靶标生物无毒无害，对环境无污染，利用其作为微生物杀虫剂用于蔬菜害虫的生物防治，属于环境友好型杀虫剂，能够极大的降低葱蒜类作物根蛆害虫防治的农药残留风险，促进产业的绿色健康发展；此外，本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1的微生物杀虫剂制备方法简单，使用方便。

附图说明

图1.为冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1菌落和菌丝、孢子显微照片，其中A为菌株BO-1的菌落状态，B为菌株BO-1的孢囊梗和孢子囊，C为菌株BO-1菌丝，D为孢子囊破裂释放孢囊孢子。

图2.为冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1感染的韭菜迟眼蕈蚊幼虫对比照片，其中A为健康的韭菜迟眼蕈蚊幼虫，B为感染初期韭菜迟眼蕈蚊幼虫，C为发病期的韭菜迟眼蕈蚊幼虫，D为韭菜迟眼蕈蚊幼虫死亡菌丝从虫尸中长出。

图3.为根据ITS基因序列构建的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1系统发育树。

图4.为冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊二龄和四龄幼虫的致病力，其中左侧图片为接种菌株BO-1孢子悬浮液后二龄幼虫死亡率随时间的变化，右侧图片为四龄幼虫死亡率随时间的变化。

图5.为环境温度对冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1菌丝生长和产孢力的影响，其中左侧图片为不同温度下菌株BO-1菌落直径随时间的变化，反应菌丝生长的快慢，右侧图片为不同温度下菌株BO-1培养10 d产孢量的差异。

图6.为环境温度对冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊二龄和四龄幼虫的致病力的影响，其中左侧图片为不同温度下接种菌株BO-1孢子悬浮液后二龄幼虫死亡率随时间的变化，右侧图片为四龄幼虫死亡率随时间的变化。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

实施例1

冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1微生物杀虫剂的制备

按照如下方法进行：

将冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1（已于2022年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNo. 40036）接种于PDA平板培养基（其组成成分及其比例为马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15g，氯霉素0.2g，水1000ml，PH自然）上，在23±1℃恒温生化（14L∶10D）培养10d至产孢。用移液管将体积百分比为0.05％（v/v）无菌吐温80（分析纯生化试剂）水溶液加入PDA平板中，采用小毛刷反复刷洗培养基表面50次，期间替换吐温80水溶液2-3次。将从平板培养基中的获得的孢子粗悬浮液，经灭菌后的三层擦镜纸（显微镜擦镜纸）过滤，采用血球计数板计数孢子浓度，用水将孢子悬液稀释至浓度为1×10⁹孢子/ml的孢子悬浮液，即为微生物杀虫剂。

实施例2

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1防治韭菜迟眼蕈蚊幼虫室内生测试验

（一）试验设计

将实施例1制备的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1菌液用水分别稀释成1×10³、1×10⁵和1×10⁷孢子/ml孢子悬浮液三个浓度梯度，以无菌水处理作为对照。

（二）试验方法

将配制好的孢子悬液用水稀释成系列浓度，分别挑取2龄、4龄幼虫30头，放入下铺有滤纸的直径的培养皿（直径9.0cm）中，用移液枪滴加1 ml孢子悬液于虫体上，流失的药液保留在滤纸上。将新鲜无毒韭菜剪成10 mm韭菜段，浸泡在实施例1制备的浓度分别为1×103、1×105和1×107孢子/ml孢子悬浮液中5 min，取出晾干放置在上述平皿中作为幼虫饲料。将处理后的试虫转移至25±1℃的恒温生化培养箱中饲养，每24 h调查死亡虫数，并及时更换新鲜韭菜叶以确保韭菜迟眼蕈蚊幼虫食物供给充沛，数据统计分析应用SPSS18.0软件进行数据处理。每处理设3次重复，以0.05％（V/V）吐温-80水悬液处理作为对照，对照自然死亡率在5％内视为有效实验。

结果（见图4）显示，冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1以1×105和107孢子/ml处理，接种后3 d四龄幼虫死亡率为58.40%和73.60%，二龄幼虫死亡率分别为80.83%和91.27%；1×103孢子/ml处理5 d四龄幼虫死亡率率为57.62%，二龄幼虫存活率为76.83%；说明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊幼虫有很高的杀虫活性。

实施例3

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1生长、产孢与致病性与环境温度的关系

（一）试验设计

探究13℃、18℃、23℃、28℃和33℃对冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1生长、产孢与致病性的影响。

（二）试验方法

（1）温度对冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1生长和产孢的影响

将分离到的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1在PDA培养基平板培养5 d，用无菌打孔器打菌饼（直径8mm），用挑针将菌饼接种到PDA培养基平板正中央上，分别放置在13℃、18℃、23℃、28℃、33℃的恒温生化培养箱中培养。每24小时用直尺以十字交叉法测量菌落直径，观察其生长情况，每温度处理设3个培养皿重复；待培养至第10 d随机选取无杂菌的3个培养皿菌落，倒入50 ml 0.05％（v/v）无菌吐温80（分析纯生化试剂）水溶液，采用小毛刷反复来回刷洗培养基表面50次，充分洗脱孢子，将滤液用3层擦镜纸过滤，滤液于光学显微镜下用血球计数板测孢子浓度，计算不同温度下孢子产量。

结果（见图5）显示，18~23℃是冻土毛霉菌Mucor hiemalis菌株BO-1菌丝生长和产孢的适温区间，接种5 d菌落即可长满整个平板，13℃下菌丝生长缓慢，33℃对菌丝生长有显著抑制作用。在23℃下菌株BO-1菌丝生长速度最快，菌落产孢量最多，其次为28℃和18℃。

（2）温度对冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1致病力的影响

将分离到的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1接种到PDA培养基平板上，在23℃的恒温生化培养箱中培养10 d产孢。参照实例1描述的方法制作菌株BO-1的孢子悬液，浓度为1×105孢子/ml。按照实例2的方法挑取韭菜迟眼蕈蚊二龄和四龄幼虫作为试虫，并浸渍韭菜段作为幼虫食料。将处理后的培养皿（内含试虫）分别转移至13℃、18℃、23℃、28℃和33℃的恒温生化培养箱。每24 h调查死亡虫数，并及时更换新鲜韭菜叶以确保韭菜迟眼蕈蚊幼虫食物供给充沛，数据统计分析应用SPSS18.0软件进行数据处理，比较不同处理下幼虫死亡率的差异。

结果（见图6）显示，18~23℃是冻土毛霉菌Mucor hiemalis菌株BO-1对韭菜迟眼蕈蚊幼虫表现强致病力的适温区间。在23℃条件下，韭菜迟眼蕈蚊二龄幼虫在接种后4 d死亡率超过90%，四龄幼虫在接种6 d死亡率超过90%。因此，23℃是菌株BO-1发挥致病力最佳温度条件，其次为18℃和28℃。13℃下幼虫死亡速度较缓慢，33℃对菌株BO-1致病性有一定抑制作用。

实施例4

本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1防治韭菜迟眼蕈蚊田间对比试验

（一）试验设计

（1）处理I：实施例1制备的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1孢子悬浮液，浓度分别为1×105、1×107和1×109孢子/ml。

（2）处理II：40%辛硫磷乳油（青岛海利尔药业集团股份有限公司），用水稀释500倍液。

（3）处理III：20%噻虫胺悬浮剂（河北威远生物化工有限公司），用水稀释1000倍液。

（3）处理IV：清水（空白对照）

（二）试验时间和地点

2021年4月山东省聊城市经济技术开发区许营镇山东铁女农业科技园韭菜种植基地内进行。

（二）试验方法

将温室种植的韭菜田分割成21m2（长*宽=3m*7m）小区，每处理重复3次，采取随机分组排列方法放置。在韭蛆发生初期，按（一）中各处理采用采用根部喷淋法进行处理，将稀释备用的药液用HD-380型喷雾器（调节喷雾器喷头使药液形成水柱状）靠近韭菜根部土表喷淋，每小区用水量2.85 L，间隔3 d重复一次，共施药2次。调查施药前韭菜迟眼蕈蚊幼虫基数，并调查施药后第3 d和7 d幼虫存活虫口数；每小区五点随机取样，每点刨出1丛（约6-10株），统计鳞茎内外活蛆数。计算各处理的虫口减退率和防治效果。

计算公式为：

虫口减退率％＝（施药前虫口基数－施药后虫口数）/施药前虫口基数×100％。

防治效果％＝（处理组虫口减退率－对照组虫口减退率）/（1-对照组虫口减退率）×100％。

结果（见表1），冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1孢子悬浮液浓度高于1×107孢子/ml时，连续施药2次后对韭蛆的田间防治效果显著。当孢子浓度为1×109孢子/ml时，施药后3 d和7 d防治效果可达到64.34%和88.41％，田间防治效果与化学药剂噻虫胺相当（药后7 d防效为93.57%），优于辛硫磷（药后7 d防效为72.64%）。当孢子浓度为1×107孢子/ml时，药后7 d防效为77.71%。同时，本发明冻土毛霉菌Mucor hiemalis菌株BO-1属于生物防治方法，对环境无污染，对其他天敌无害，对人畜安全无毒害，还可以替代或降低农药使用量，保障食品安全，符合我国生态农业可持续发展要求，因此具有较好的应用前景。

表1本发明冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1防治韭菜迟眼蕈蚊田间对比试验结果

Claims (6)

1.一种冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1，该菌株已于2022年01月04日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 40036。

2.一种杀虫剂，其特征在于，所述杀虫剂包含权利要求1所述的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1。

3.根据权利要求2所述的杀虫剂，其特征在于：所述杀虫剂的剂型为悬浮液。

4.根据权利要求3所述的杀虫剂，其特征在于：所述的悬浮液中含有冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1孢子浓度为1×10⁷～1×10⁹个孢子/ml。

5.如权利要求2-4任一所述的杀虫剂的制备方法，其特征在于，将孢子粉按比例与含有0.05％（v/v）吐温80的水溶液混合均匀，制成孢子悬浮液，所述孢子粉按照常规方法制备即可。

6.权利要求1所述的冻土毛霉Mucor hiemalis菌株BO-1在防治蔬菜害虫上的应用。

Images