CN116218922A - 一种甘油二酯油的酶法制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种甘油二酯油的酶法制备方法,采用酶法水解法制备甘油二酯油,在酶法水解前,对反应底物进行均质处理,提高脂肪酶在反应体系中的催化效率,达到了降低反应时间,降低酶添加量的目的,从而达到了降低生产成本的目的。本发明提供了一种高效、低成本的酶法制备甘油二酯的方法,大大降低了酶促反应制备甘油二酯的成本。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域,具体涉及到一种甘油二酯油的酶法制备方法。
背景技术
甘油二酯(DAG)是指甘油三酯上一个脂肪酸被水解掉产生的一种功能性油脂。天然油脂中,甘油二酯属于微量组分,其含量一般不超过5%。近年来诸多研究发现,甘油二酯油具有体重控制、降血脂、降尿酸等功效,具有极大的市场开发价值。
传统的甘油二酯油制备方法为高温部分水解法,该方法由于其经济性,得到广泛应用,但是偏甘油酯(包括甘油一酯和甘油二酯)是缩水甘油酯和氯丙醇酯等风险因子的前体物质,高温处理的油脂中缩水甘油酯等有害物质含量一般较高。近年来,酶法在甘油二酯油生产中得到了广泛的应用,主要采用酶法酯化、酶法甘油解和酶法水解等方法来制备甘油二酯油脂。酶法制备甘油二酯具有反应温度低、风险因子含量低等优点,但酶的成本较高,这严重制约脂肪酶在甘油二酯产业化中的应用。
仍需找到一种高效的甘油二酯油的制备方法,进一步降低脂肪酶的添加量和使用成本,提高脂肪酶催化效率和缩短反应时间,提高酶法在甘油二酯制备中的应用前景。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊,而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述和/或现有技术中存在的问题,提出了本发明。
本发明的其中一个目的是提供一种甘油二酯油的酶法制备方法,采用酶法水解法制备甘油二酯油,在酶法水解前,对反应底物进行均质处理,提高脂肪酶在反应体系中的催化效率。
为解决上述技术问题,本发明提供了如下技术方案:一种甘油二酯油的酶法制备方法,包括,
向反应器中加入油脂和水,高压均质后,加入脂肪酶反应,反应结束后,去除水和脂肪酶,再分离出游离脂肪酸,得到甘油二酯油;
其中,所述脂肪酶包括来源于Rhizopus oryzae、Thermomyces lanuginosus和Candida antarctica中的一种或多种。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述高压均质,均质压力10MPa以上,均质时间至少3min。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述高压均质,均质压力为25~75MPa,均质时间6~15min。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述油脂包括植物油脂、动物油脂、微生物油脂中的至少一种。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述脂肪酶的添加量不超过所述油脂重量的0.5wt%。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述加入脂肪酶反应,反应温度为20~50℃,反应时间为1~4h。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述水的添加量为所述油脂重量的5%~40%,优选10%~30%。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:还包括,高压均质前向反应底物中加入乳化剂,乳化剂的添加量小于1%。
作为本发明甘油二酯油的酶法制备方法的一种优选方案,其中:所述乳化剂包括司班、吐温、单甘酯中的一种或多种。
本发明的另一个目的是提供如上述任一项所述的甘油二酯油的酶法制备方法在食品和医药品领域中的应用。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
本发明对反应底物(水和油脂)进行均质处理,使其充分混合,随后添加脂肪酶,均质处理显著提高了底物的水解效率,缩短反应时间。反应底物在经过均质处理后,脂肪酶的添加量显著降低,相应地,甘油二酯油的制造成本降低,有利于工业化制备甘油二酯油。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂,下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明,但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施,本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广,因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次,此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例,也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
如无特别说明,实施例中所采用的原料均为商业购买。
甘油二酯含量的检测方法:HPLC检测的操作方法和参数,参考江聪(Jiang Conget al.,Concentration of n-3polyunsaturated fatty acid glycerides by Candidaantarctica lipase A-catalyzed selective methanolysis[J].Food Bioscience,2022,46,101562)的方法。
实施例1
将200g一级食用菜籽油和45g水混合后,在不同的均质压力(15MPa~90MPa)下均质8min,均质后向反应底物中添加0.4g的ROL脂肪酶(添加量为基于菜籽油重量的0.2%)进行酶法水解反应,在36℃反应不同时间后(1h~4h),分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量,结果见表1所示。
表1均质压力和酶促反应时间对酶解粗产物中甘油二酯含量的影响
由表1中实验结果可知,当反应底物(菜籽油和水)在反应前不进行均质时,在0.2%脂肪酶催化反应4h后,粗产物中甘二酯含量为31.2%,继续反应至6h,粗产物中甘油二酯含量达到平衡,其甘油二酯含量为40.8%,随后继续增加反应时间,粗产物中甘油二酯含量变化不大,并呈降低的趋势。
当反应底物在15MPa的压力下均质后再进行酶促水解反应,反应达到平衡需要的时间相比于未均质组从6h降低到3h。当均质压力提高到45MPa时,反应达到平衡所需的时间进一步缩短。由表中结果可知,反应前对底物进行均质处理可显著缩短酶促反应时间,但对提高产物中甘油二酯含量的影响较小。
在其他条件不变的条件下,继续增加均质的压力至60、75和90MPa,反应2h后,其甘二酯含量变化不大,分别为44.1%、43.9%和44.2%,说明在高的均质压力下,2h反应已经达到了平衡。
甘油二酯油新食品原料规定,甘油二酯油中单甘酯的含量要小于1.5%,游离脂肪酸的含量小于0.5%,甘油二酯含量大于等于40%。为了进一步确定粗产物经过纯化后,其单甘酯和游离脂肪酸含量是否符合要求,我们对其粗产物进行了分子蒸馏纯化,因为单甘酯和甘油二酯是最难分离的,而游离脂肪酸和甘二酯性质差异大,易分离,因此,分子蒸馏后游离脂肪酸是比较容易符合新食品原料的要求,而单甘酯含量是比较难符合要求。
具体蒸馏条件为:主蒸发温度170℃、冷凝温度30℃、真空度<0.001mbar。在上述条件下,以在不同均质压力下,反应2h的甘油解粗产物作为原料,对其进行分子蒸馏,经过一次分子蒸馏后,其粗产物中单甘酯的含量如下表2所示。
表2均质压力对纯化产物中单甘酯含量和游离脂肪酸含量的影响
由表2所示,均质压力为75MPa以内时,其分子蒸馏后,单甘酯含量符合新食品原料要求,而超过这个压力,单甘酯含量难以达到要求,需要联合其他方法或者进行第二次分子蒸馏才能进一步降低其含量,这无疑会显著增加生成成本。
实施例2
将200g精炼亚麻籽油和45g水混合后,在35MPa下均质一定的时间,均质后向反应底物中添加0.4g的ROL脂肪酶(添加量为基于菜籽油重量的0.2%)进行酶法水解反应,在36℃反应3h,反应结束后,分离出水和脂肪酶,随后取样分析粗产物中甘油二酯的含量,粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表3所示。
表3不同均质时间对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化产物中单甘酯含量的影响
由表中结果可知,均质处理显著提高酶的催化效率,在相同的反应时间下,提高酶解粗产物中甘油二酯的含量。经分子蒸馏后,经过较长时间的均质后(≧18min)的纯化产物中单甘酯含量升高。因此,均质时间优选6~15min。
实施例3
将200g精炼亚麻籽油和45g水混合后,在35MPa下均质不同的时间(0min或者8min),均质后向反应底物中添加一定量(0.1~1%,基于亚麻籽油重量)的ROL脂肪酶进行酶法水解反应,在36℃反应3h,反应结束后,分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量。粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表4所示。
表4不同酶添加量和均质时间对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化产物中单甘酯含量的影响
由表4中结果可知,当脂肪酶添加量不超过0.4%时,反应底物的均质处理有利于提高脂肪酶的催化效率和粗产物中甘油二酯的含量。当脂肪酶添加量不低于0.8%时,在同样反应3h条件下,均质处理对提高产物中甘油二酯的含量无显著影响,反而可能会加速甘油二酯的水解,造成甘油二酯含量呈降低的趋势。这说明均质处理后,高酶添加量的酶促反应最佳时间低于3h(0.8%酶添加量时,最佳反应时间为2.5h;1%添加量时,最佳反应时间为2h),延长反应时间至3h,反而造成甘油二酯含量的降低。这说明均质处理后,脂肪酶的添加量可以相应地降低,这有利于降低甘油二酯油的生产成本,有利于甘油二酯油的产业化开发。
通过实验结果还可以发现,对原料在35MPa下均质8min,0.2%的脂肪酶催化3h后,其产物中甘二酯含量为41.7%。如果不进行均质处理,同样是反应3h,要达到41.6%的甘二酯含量,其脂肪酶的添加量要提高到0.8%,因此,我们发明了在低酶添加量的情况下生产甘油二酯油的技术。
实施例4
将200g分提棕榈油和30g水混合后,在35MPa下均质8min,均质后向反应底物中添加0.2%(基于棕榈油重量)的脂肪酶进行酶法水解反应,在30℃反应4h,反应结束后,分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量,粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表5所示。
表5不同脂肪酶对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化产物中甘油酯含量的影响
本实施例考察了三种脂肪酶(2020年购于酶制剂公司)在水解棕榈油反应中的催化活性,结果表明,三种脂肪酶均能部分水解棕榈油,制备甘油二酯,ROL脂肪酶具有最佳的催化效果。当使用Lipozyme TL IM和Candida antarctica lipase-A(CAL-A)作为催化剂,且不对反应底物进行均质处理时,粗产物中甘二酯含量分别为25.6%和21.3%,均质处理后,显著提高脂肪酶的催化效率,提高粗产物中甘油二酯的含量。
实施例5
将200g精炼亚麻籽油和45g水混合后,添加0.5%(基于亚麻籽油重量)的乳化剂后,再在35MPa下均质0min或8min,均质后向反应底物中添加0.2%的ROL脂肪酶进行酶法水解反应,在36℃反应3h,反应结束后,分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量,粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表6所示。
表6添加不同乳化剂和均质不同时间对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化后单甘酯含量的影响
由上表6结果可知,如果反应底物不进行均质处理,添加乳化剂可以改进水解效率,提高粗产物中甘油二酯的含量,但当反应底物已经进行了均质处理,添加或者不添加乳化剂,对酶促水解效率的提高和产物中甘油二酯含量的提升无影响。此外,当选用硬脂酸单甘酯作为乳化剂,并不进行均质处理时,产物中甘二酯的含量仅为27.3%,说明长链饱和单甘酯乳化剂没有起到提高催化效率的效果,而不饱和脂肪酸单甘酯具有较好的效果。
实施例6
将200g精炼亚麻籽油和45g水混合后,添加一定量(基于亚麻籽油重量)的吐温20乳化剂后,再在35MPa下均质8min,均质后向反应底物中添加0.2%的ROL脂肪酶进行酶法水解反应,在36℃反应3h,反应结束后,分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量,粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表7所示。
表7乳化剂添加量对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化后单甘酯含量的影响
由上表结果可知,吐温20添加量在0.1%~0.5%之间时,可以提高甘油二酯合成的效率,当该乳化剂添加量在1%以上时,反而导致反应效率的降低,可能是在高添加量(>1%)的情况下,对酶的活性有一定的影响。
实施例7
将200g分提棕榈油和一定量的水混合后,在35MPa下均质8min,均质后向反应底物中添加0.2%(基于棕榈油重量)的ROL脂肪酶进行酶法水解反应,在36℃反应3h,反应结束后,分离出水和脂肪酶后,取样分析粗产物中甘油二酯的含量,粗产物经一次分子蒸馏后,分析其单甘酯含量,结果见表8所示。
表8水添加量对酶解粗产物中甘油二酯含量和纯化产物中甘油酯含量的影响
由上表结果可知,水添加量在5%~20%(对应10mL~40mL)之间时,水添加量增加可以提高甘油二酯合成的酶促制备效率,当水添加量增加到40%以上时,继续增加水的添加量,反而导致反应效率的降低,因此,水添加量为5%~40%,优选10%~30%。
本发明采用酶法水解法制备甘油二酯油,在酶法水解前,对反应底物进行均质处理,提高脂肪酶在反应体系中的催化效率,达到了降低反应时间,降低酶添加量的目的,从而达到了降低生产成本的目的。本发明提供了一种高效、低成本的酶法制备甘油二酯的方法,大大降低了酶促反应制备甘油二酯的成本,具有一定工业化应用前景。
应说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (10)
1.一种甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:包括,
向反应器中加入油脂和水,高压均质后,加入脂肪酶反应,反应结束后,去除水和脂肪酶,再分离出游离脂肪酸,得到甘油二酯油;
其中,所述脂肪酶包括来源于Rhizopus oryzae、Thermomyces lanuginosus和Candidaantarctica中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述高压均质,均质压力10MPa以上,均质时间至少3min。
3.如权利要求2所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述高压均质,均质压力为25~75MPa,均质时间6~15min。
4.如权利要求1~3中任一项所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述油脂包括植物油脂、动物油脂、微生物油脂中的至少一种。
5.如权利要求4所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述脂肪酶的添加量不超过所述油脂重量的0.5wt%。
6.如权利要求1~3、5中任一项所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述加入脂肪酶反应,反应温度为20~50℃,反应时间为1~4h。
7.如权利要求6所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述水的添加量为所述油脂重量的5%~40%,优选10%~30%。
8.如权利要求1~3、5、7中任一项所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:还包括,高压均质前向反应底物中加入乳化剂,乳化剂的添加量小于1%。
9.如权利要求8所述的甘油二酯油的酶法制备方法,其特征在于:所述乳化剂包括司班、吐温、单甘酯中的一种或多种。
10.如权利要求1~9中任一项所述的甘油二酯油的酶法制备方法在食品和医药品领域中的应用。
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