CN116212093A - 用于治疗皮肤损伤的干细胞薄膜生物敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及用于治疗皮肤损伤的干细胞薄膜生物敷料及其制备方法。本发明提供一种干细胞薄膜生物敷料，其包括复合干细胞薄膜、水凝胶营养层以及粘性敷料，其中，所述复合干细胞薄膜形成在所述水凝胶营养层的一侧表面，所述粘性敷料形成在所述水凝胶营养层的另一侧，所述复合干细胞薄膜包括层叠的多个单层干细胞薄膜。该干细胞薄膜生物敷料能够促进创口表皮细胞生长，缩短伤口愈合时间，缩短病程。

Description

用于治疗皮肤损伤的干细胞薄膜生物敷料及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，本发明涉及用于治疗皮肤损伤的干细胞薄膜生物敷料及其制备方法。
背景技术
皮肤大面积损伤、严重创伤、整容整形以及术后创面覆盖目前是十分重要的临床问题。目前存在的治疗手段，如患者自体植皮、异体植皮、人工合成材料修复材料植皮等均存在其局限性，在临床过程中增加了应用的难度和成本。因此亟需寻找一种无排斥反应的且具有促进皮肤损伤修复功能的治疗手段。
随着生物学以及组织工程技术的发展，间充质干细胞因其具有的潜在修复功能为人们所关注。然而目前将细胞悬液输注的方法，由于细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)遭到水解酶的破坏，往往造成回输后细胞再生效率以及利用率低下。
因此，开发一种物排异反应且能够促进创面快速愈合的药物迫在眉睫。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提供一种干细胞薄膜生物敷料，其促进创口表皮细胞生长，缩短伤口愈合时间，缩短病程。
为此本发明第一方面提供一种干细胞薄膜生物敷料。根据本发明的实施方案，所述干细胞薄膜生物敷料包括复合干细胞薄膜、水凝胶营养层以及粘性敷料，
其中，所述复合干细胞薄膜形成在所述水凝胶营养层的一侧表面，所述粘性敷料形成在所述水凝胶营养层的另一侧，
所述复合干细胞薄膜包括层叠的多个单层干细胞薄膜。
细胞薄膜(Cell sheets)指的是在体外培养的条件下，将分离得到的细胞培养于特定的材料之上，并采用特定的手段在不破坏细胞连接的情况下，使得细胞与培养基材分离，所得到的完整单层细胞薄膜。细胞薄膜与细胞注射以及高分子-细胞嵌合植入物相比，在临床应用上存在以下优势：(1)细胞薄膜可以在移植手术直接移植于所需部位；(2)细胞薄膜可以直接应用于这些部位，起到关键治疗作用；(3)细胞薄膜完整保留了细胞外基质，有利于细胞的再生和体内利用，因此，基于干细胞膜的新型生物敷料是治疗皮肤损伤的理想手段。
本发明提供一种干细胞薄膜生物敷料，该干细胞薄膜生物敷料包括多层干细胞薄膜、为细胞提供保持活性所必要的养分以及生长因子的水凝胶营养层。该干细胞薄膜生物敷料可以通过多层干细胞旁分泌作用产生的细胞生长因子以及细胞外间质促进创口表皮细胞生长，缩短伤口愈合时间。而且本发明中的水凝胶营养层以明胶水凝胶作为基底，水凝胶营养层内含多种细胞保持活性所必要的养分以及生长因子，可以有效提高细胞存活率，延长细胞存活时间。
根据本发明上述实施方案的干细胞薄膜生物敷料还可以具有如下附加技术特征中的至少之一：
根据本发明的实施方案，所述复合干细胞薄膜包括层叠的3～5个单层干细胞薄膜。由此，可以进一步提高细胞薄膜的韧性和坚固性。
根据本发明的实施方案，所述复合干细胞薄膜为间充质干细胞薄膜。
根据本发明的实施方案，所述间充质干细胞薄膜由选自脐带来源的间充质干细胞、骨髓来源的间充质干细胞、胎盘来源的间充质干细胞、牙髓来源的间充质干细胞、脂肪来源的间充质干细胞中的至少之一形成。
根据本发明的实施方案，所述复合干细胞薄膜通过以下方式获得：
(1)在培养皿中利用干细胞培养基对干细胞进行培养，以便形成单层干细胞薄膜；
(2)去除所述干细胞培养基，将所述单层干细胞薄膜置于剥离液中，以便获取游离的单层干细胞薄膜；
(3)从所述剥离液中收集所述游离的单层干细胞薄膜，并将多个所述游离的单层干细胞薄膜进行叠加，以便获得复合干细胞薄膜。
根据本发明的实施方案，在步骤(1)中，所述间充质干细胞的传代次数不超过7代。利用传代次数不超过7代的间充质干细胞，能够进一步提升获取的间充质干细胞薄膜的完整性，提升干细胞薄膜的状态。而采用8代及以上的细胞制备干细胞薄膜，偶尔会出现细胞薄膜破碎，细胞薄膜自动脱落，难以形成完整细胞薄膜的情况。
根据本发明的实施方案，所述培养皿的底部的内表面涂覆有涂层，所述涂层的表面自由能不超过90mJ/m2。由此，使细胞更容易贴附生长，并且在特定的外界条件刺激下细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
根据本发明的实施方案，所述涂层的表面自由能不超过60mJ/m2。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果进一步提升。
培养皿的表面自由能会影响培养皿表面的亲水性/疏水性。如亲水性太强，细胞表面的粘附蛋白对培养皿的作用过强，则容易导致细胞无法脱落成单层细胞薄膜，或致使细胞局部脱落导致细胞薄膜破碎；疏水性太强则会导致细胞无法贴壁生长。
根据本发明的实施方案，所述涂层的厚度为2～100nm，优选2～50nm，进一步优选2～30nm。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。另外，发明人发现，如果涂层的厚度过厚，细胞的生长会受到不利的影响。
根据本发明的实施方案，所述涂层包含高聚物和/或嵌段共聚物。
根据本发明的实施方案，所述涂层由聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物形成。
根据本发明的实施方案，所述涂层是通过对2-乙烯吡啶和苯乙烯进行固相沉积而形成的。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
根据本发明的实施方案，所述剥离液为DPBS缓冲液。
根据本发明的实施方案，采用固相支持物收集所述游离的单层干细胞薄膜。
根据本发明的实施方案，所述固相支持物为高聚物支撑物。
根据本发明的实施方案，所述固相支持物为PVDF膜。
根据本发明的实施方案，所述PVDF膜为星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜。
本发明第二方面提供第一方面所述的干细胞薄膜生物敷料的制备方法。根据本发明的实施方案，所述制备方法包括：
1)将所述粘性敷料贴附于所述水凝胶营养层的一侧，以便获得粘性敷料-水凝胶营养层；
2)将所述复合干细胞薄膜转移至所述粘性敷料-水凝胶营养层中所述水凝胶营养层的另一侧，以便获取所述干细胞薄膜生物敷料。
根据本发明的实施方案，所述水凝胶营养层包括间充质干细胞培养基和10～30％wt的明胶。
根据本发明的实施方案，所述水凝胶营养层的厚度为0.5～3mm。
本发明第三方面提供第一方面所述的干细胞薄膜生物敷料、第二方面所述的制备方法制备的干细胞薄膜生物敷料在制备治疗皮肤损伤的药物中的用途。
本发明第四方面提供一种药物。根据本发明的实施方案，所述药物含有第一方面所述的干细胞薄膜生物敷料和/或第二方面所述的制备方法制备的干细胞薄膜生物敷料。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的核磁共振氢谱；
图2显示了根据本发明一个实施例的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的SEM图谱。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
在本发明的描述中，需要理解的是，术语“中心”、“纵向”、“横向”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
此外，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”等的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征“上”或“下”可以是第一和第二特征直接接触，或第一和第二特征通过中间媒介间接接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”可是第一特征在第二特征正上方或斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”可以是第一特征在第二特征正下方或斜下方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。
根据本发明的一个具体的实施例，本发明提供一种干细胞薄膜生物敷料，包括复合干细胞薄膜、水凝胶营养层以及粘性敷料，
其中，复合干细胞薄膜形成在水凝胶营养层的一侧表面，粘性敷料形成在水凝胶营养层的另一侧，
复合干细胞薄膜包括层叠的多个单层干细胞薄膜。
根据本发明的实施例，粘性敷料的具体类型、材质并没有特别的限制，本领域技术人员可以根据实际需要，选择常用的合适的粘性敷料，优选透气性的粘性敷料。干细胞薄膜生物敷料的尺寸也可根据其中含有的干细胞薄膜的尺寸选择合适的大小。
根据本发明的实施例，复合干细胞薄膜包括层叠的3～5个单层干细胞薄膜。由此，可以进一步提高细胞薄膜的韧性和坚固性。
可根据不同的应用对象以及适应症，选择合适的复合干细胞薄膜中含有的单层干细胞薄膜层数。例如，在小鼠动物模型中所使用的复合干细胞薄膜中，干细胞薄膜层数为三层。
根据本发明的实施例，复合干细胞薄膜为间充质干细胞薄膜，其中，间充质干细胞薄膜由选自骨髓来源的间充质干细胞、脂肪来源的间充质干细胞、脐带来源的间充质干细胞、胎盘来源的间充质干细胞中的至少之一形成。由此，可以进一步提高间充质干细胞薄膜的修复皮肤损伤能力。
根据本发明的实施例，复合干细胞薄膜通过以下方式获得：
(1)在培养皿中利用干细胞培养基对间充质干细胞进行培养，以便形成单层干细胞薄膜；
(2)去除干细胞培养基，将单层干细胞薄膜置于剥离液中，以便获取游离的单层干细胞薄膜；
(3)从剥离液中收集所述游离的单层干细胞薄膜，并将多个游离的单层干细胞薄膜进行叠加，以便获得复合干细胞薄膜。
根据本发明的实施例，在步骤(1)中，所述间充质干细胞的传代次数不超过7代。间充质干细胞的传代次数并没有特别的限制，但优选间充质干细胞的传代次数不超过7代，因为符合此要求的间充质干细胞能够进一步提升获取的间充质干细胞薄膜的完整性，提升干细胞薄膜的状态，不容易提前脱落
根据本发明的实施例，向培养皿中含有的培养基内接种间充质干细胞的接种密度不受特别的限制，可以根据需要收获干细胞薄膜的时间长短来控制，例如，需要较快获得干细胞薄膜，则增大间充质干细胞的接种密度。接种密度为10,000个/平方厘米～50,000个/平方厘米，在直径为35mm的培养皿中培养72小时后可以达到接近100％的过度融合状态，适合制备干细胞薄膜。
根据本发明的实施例，干细胞培养基可以是本领域常规的适于培养间充质干细胞的培养基，例如，无血清干细胞培养基(Cellartis，Takara)或者DMEM培养基，另外，也可以向培养基中加入额外的成分，例如加入16.8μg/ml抗坏血酸，以利于干细胞合成细胞外间质，增强细胞薄膜强度。
根据本发明的实施例，培养皿的底部的内表面涂覆有涂层，涂层的表面自由能不超过90mJ/m2，优选不超过60mJ/m2。由此，干细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
根据本发明的实施方案，涂层的厚度为2～100nm，优选2～50nm，进一步优选2～30nm。由此，细胞薄膜从培养皿脱离的效果更佳。
根据本发明的实施方案，涂层包含高聚物和/或嵌段共聚物。所述涂层的材料中高聚物和/或嵌段共聚物的种类并没有特别的限制，只需保证涂层的表面自由能不超过90mJ/m2即可。例如，涂层由聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物形成，或者，涂层是通过对2-乙烯吡啶和苯乙烯进行固相沉积而形成的。
根据本发明的实施例，在步骤(1)中，在培养皿中培养间充质干细胞至接近100％融合度后，应在48小时内处理得到干细胞薄膜，超出48小时则有几率使得干细胞薄膜自行脱落或者发生破碎。
根据本发明的实施方案，剥离液为DPBS缓冲液。此剥离液降低细胞薄膜与培养皿之间结合力的效果较佳。
根据本发明的实施例，可以采用PVDF膜收集游离的单层干细胞薄膜。具体的，单层干细胞薄膜从培养皿脱离后，可以采用PVDF膜将单层干细胞薄膜吸附至表面，并根据实际需要，以生理盐水冲洗数遍。优选地，该PVDF膜为星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜。由此，其对单层干细胞薄膜的吸附效果更佳。
为便于理解，下面对上述星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜进行详细描述。
星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物(star-shaped PDMAEA)具有如式I所示的结构
Figure BDA0003391975780000071
式I中，R为
Figure BDA0003391975780000072
n为15～105的正整数。该星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的聚合度在100～400之间，分子量在10,000～60,000道尔顿之间。发明人发现，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物中的长烷基链具有疏水性，与PVDF具有良好的相容性；而丙烯酸二甲氨基乙酯链段具有较高的亲水性，在改善亲水性的同时也增加了改性剂与PVDF膜结合的稳定性。由此，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜具有更高的亲水性、渗透性以及抗污性，在多次、长时间使用后仍具有较高的恢复性能。
根据本发明的一个具体实施例，星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物的制备方法如下：
取适量引发剂偶氮二异丁腈与摩尔比为(60～420):1的丙烯酸二甲氨基乙酯和星形链转移试剂四支链2-(十二烷基三硫代碳酸酯基)-2-甲基丙酸(其结构如式II)溶解于50mL 2-丁酮中，采用冷冻-除气-解冻法除去反应容器内的氧气，并注入氮气或者氩气作为保护气，置于70～120℃的金属浴中搅拌反应4～20h；将所得聚合物溶液滴入己烷中，通过析出-沉淀法收集产物，所得到的产物经过旋蒸、真空干燥等步骤除杂并干燥至恒重，得到星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物，其核磁共振氢谱如图1，SEM图谱如图2。
Figure BDA0003391975780000073
其中，R’为/>
Figure BDA0003391975780000074
后续，将制备得到的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物作为添加剂加入到PVDF铸膜液中，采用刮涂法制备的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜。具体方法包括：取50g PVDF、2g PVP、2.7g星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物和适量DMF加入反应容器中，在70℃的金属浴中搅拌反应10～15h，然后置于60℃的真空烘箱中脱气8h，得到铸膜液。采用溶剂致相分离法制备PVDF平板膜，以水作为凝固浴，温度为室温，将铸膜液倒在干净的玻璃板上，使用自动刮膜机进行刮膜，刮刀厚150μm。将刮好的膜在空气中暴露30s后，放入凝固浴中直到其在玻璃板上脱落，将制好的膜(M-0、M-1、M-2、M-3和M-4)放入蒸馏水中浸泡，每12h换一次水，以除去膜中残留的溶剂和致孔剂，得到星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜产品。
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：制备间充质干细胞薄膜生物敷料
1、培养皿处理
用于制备间充质干细胞薄膜的培养皿底部具有厚度为8nm的聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物涂层。将该培养皿以辐照灭菌法进行充分灭菌后，用于培养间充质干细胞制备干细胞薄膜。该涂有涂层的培养皿底部表面自由能为49.0±2.5mJ/m2。
2、制备单层间充质干细胞薄膜
取人脐带来源间充质干细胞(第四代)并复苏，以Takara的无血清干细胞培养基(Cellartis，Takara)重悬后，以300x g离心力离心五分钟，向细胞中加入无血清干细胞培养基并将细胞按照30,000个/平方厘米接种于直径为35mm上述具有嵌段共聚物涂层的低表面能培养皿中，并将培养皿放入37℃、5％二氧化碳、湿度饱和的细胞培养箱中培养。每两天更换一次培养基，观察细胞生长状态，细胞生长至过饱和状态后(100％融合度)，得到完整单层干细胞薄膜。将培养皿中培养基完全移除后，加入DPBS使其完全覆盖细胞薄膜后，于室温下放置，待细胞薄膜自行脱落。以DPBS清洗三遍细胞薄膜后，细胞薄膜完全脱离细胞培养皿，并以完整单层薄膜的形式漂浮于DPBS溶液中。采用本文上述方法获得的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜产品收集制备得到的单层干细胞薄膜，并将三层单层干细胞薄膜叠加后，转移至外有透气粘性敷料的水凝胶营养层(厚度2mm)上，后移除PVDF膜产品，成功制备得到间充质干细胞薄膜生物敷料。
其中，水凝胶营养层组成：Cellartis DEF-CS 500Xeno-Free Culture Medium(Takara)+25％wt明胶+10％V/V血清替代物。
实施例2：制备间充质干细胞薄膜生物敷料
1、培养皿处理
用于制备间充质干细胞薄膜的培养皿底部具有上述真空蒸发法制得的厚度为50nm的聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物涂层。将该培养皿以辐照灭菌法进行充分灭菌后，用于培养间充质干细胞制备干细胞薄膜。该涂有涂层的培养皿底部表面自由能为43.0±3.7mJ/m2。
2、制备单层间充质干细胞薄膜
取人脐带来源间充质干细胞(第四代)并复苏，以DMEM培养基重悬后，以300x g离心力离心五分钟，向细胞中加入含有10％血清替代物的DMEM培养基并将细胞按照30,000个/平方厘米接种于直径为35mm上述具有嵌段共聚物涂层的低表面能培养皿中，并将培养皿放入37℃、5％二氧化碳、湿度饱和的细胞培养箱中培养。每三天更换一次培养基，观察细胞生长状态，细胞生长至过饱和状态后(100％融合度)，得到完整单层干细胞薄膜。将培养皿中培养基完全移除后，加入DPBS使其完全覆盖细胞薄膜后，于室温下放置，待细胞薄膜自行脱落。以DPBS清洗三遍细胞薄膜后，细胞薄膜完全脱离细胞培养皿，并以完整单层薄膜的形式漂浮于DPBS溶液中。采用本文上述方法获得的星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜产品收集制备得到的单层干细胞薄膜，并将三层单层干细胞薄膜叠加后，转移至外有透气粘性敷料的水凝胶营养层(厚度2mm)上，后移除PVDF膜产品，成功制备得到间充质干细胞薄膜生物敷料。
其中，水凝胶营养层组成：Cellartis DEF-CS 500Xeno-Free Culture Medium(Takara)+25％wt明胶+10％V/V血清替代物。
实施例3：间充质干细胞薄膜生物敷料促进创伤修复
采用同体对照法，在10只C57BL/6小鼠背部制作两个直径为10mm的圆形切口创面。左侧创面采用本发明中实施例1制备的间充质干细胞薄膜生物敷料(敷料组)，敷料中细胞总量为3，000，000个细胞(382万个细胞每平方厘米)，将实施例1中的敷料贴附于伤口之上，右侧创面采用普通的间充质干细胞悬液(对照组)进行涂抹，干细胞悬液中含有细胞总量为3，000，000个(其平均浓度为382万个细胞每平方厘米)，用纱布覆盖包扎。
表1中统计了施用药物不同天数后，敷料组和对照组中小鼠背部剩余的创伤面积。
表1敷料组和对照组的创伤面积汇总
Figure BDA0003391975780000091
Figure BDA0003391975780000101
上述表1结果显示，自第3天起至第14天，敷料组的创伤面积相比对照组显著减少，这说明本发明提供的间充质干细胞薄膜生物敷料相比间充质干细胞悬液，能够促进小鼠伤口快速愈合，其伤口愈合速度显著快于同等用量的间充质干细胞悬液，提示本发明的间充质干细胞薄膜生物敷料对于伤口愈合有促进作用，能够缩短病程。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (11)

1.一种干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，包括复合干细胞薄膜、水凝胶营养层以及粘性敷料，
其中，所述复合干细胞薄膜形成在所述水凝胶营养层的一侧表面，所述粘性敷料形成在所述水凝胶营养层的另一侧，
所述复合干细胞薄膜包括层叠的多个单层干细胞薄膜。
2.根据权利要求1所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，所述复合干细胞薄膜包括层叠的3～5个单层干细胞薄膜。
3.根据权利要求1或2所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，所述复合干细胞薄膜为间充质干细胞薄膜；
任选地，所述间充质干细胞薄膜由选自脐带来源的间充质干细胞、骨髓来源的间充质干细胞、胎盘来源的间充质干细胞、牙髓来源的间充质干细胞、脂肪来源的间充质干细胞中的至少之一形成。
4.根据权利要求2所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，所述复合干细胞薄膜通过以下方式获得：
(1)在培养皿中利用干细胞培养基对干细胞进行培养，以便形成单层干细胞薄膜；
(2)去除所述干细胞培养基，将所述单层干细胞薄膜置于剥离液中，以便获取游离的单层干细胞薄膜；
(3)从所述剥离液中收集所述游离的单层干细胞薄膜，并将多个所述游离的单层干细胞薄膜进行叠加，以便获得复合干细胞薄膜。
5.根据权利要求4所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，在步骤(1)中，所述间充质干细胞的传代次数不超过7代；
任选地，所述培养皿的底部的内表面涂覆有涂层，所述涂层的表面自由能不超过90mJ/m2；
任选地，所述涂层的表面自由能不超过60mJ/m2；
任选地，所述涂层的厚度为2～100nm，优选2～50nm，进一步优选2～30nm；
任选地，所述涂层包含高聚物和/或嵌段共聚物；
任选地，所述涂层由聚(2-乙烯吡啶-co-苯乙烯)嵌段共聚物形成；
任选地，所述涂层是通过对2-乙烯吡啶和苯乙烯进行固相沉积而形成的。
6.根据权利要求4所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，所述剥离液为DPBS缓冲液。
7.根据权利要求4所述的干细胞薄膜生物敷料，其特征在于，采用固相支持物收集所述游离的单层干细胞薄膜；
任选地，所述固相支持物为高聚物支撑物；
任选地，所述固相支持物为PVDF膜；
任选地，所述PVDF膜为星形-聚丙烯酸二甲氨基乙酯聚合物亲水改性的PVDF膜。
8.一种权利要求1～7中任一项所述的干细胞薄膜生物敷料的制备方法，其特征在于，包括：
1)将所述粘性敷料贴附于所述水凝胶营养层的一侧，以便获得粘性敷料-水凝胶营养层；
2)将所述复合干细胞薄膜转移至所述粘性敷料-水凝胶营养层中所述水凝胶营养层的另一侧，以便获取所述干细胞薄膜生物敷料。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述水凝胶营养层包括间充质干细胞培养基和10～30％wt的明胶；
任选地，所述水凝胶营养层的厚度为0.5～3mm。
10.权利要求1～7中任一项所述的干细胞薄膜生物敷料、权利要求8或9所述的制备方法制备的干细胞薄膜生物敷料在制备治疗皮肤损伤的药物中的用途。
11.一种药物，其特征在于，含有权利要求1～7中任一项所述的干细胞薄膜生物敷料和/或权利要求8或9所述的制备方法制备的干细胞薄膜生物敷料。
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