CN116212088B - 一种稀土金属基抑菌绷带及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种稀土金属基抑菌绷带及其制备方法,所述稀土金属基抑菌绷带由包括如下工艺制备而得:将纱布浸润于抗菌添加剂溶液中后制得,所述抗菌添加剂溶液包括含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖,三者的摩尔浓度比为1:(1~5):(1~2)。本发明的抑菌绷带用以提升绷带的抑菌能力,对大肠杆菌(E.coli)的抑制率为100%。
Description
技术领域
本发明属于医疗用品领域,尤其是涉及一种稀土金属基抑菌绷带及其制备方法。
背景技术
细菌引起的伤口感染仍然是世界范围内一个主要的公共卫生问题。绷带是人们日常生活中最常用的医疗器械。但绷带不能抑制或杀死细菌,只能用于小型创伤急救,起到暂时止血的作用,在止血之前难以对伤口处进行消毒处理,伤口处易发生二次感染。因此,传统绷带对预防或治疗伤口感染没有任何作用。自上世纪二十年代年发现青霉素以来,抗生素在现代医疗保健中挽救了数百万人的生命。在伤口治疗过程中,将绷带与抗生素结合使用可以更有效地愈合,减少感染。但虽然抗生素可以立即有效地杀死大多数细菌,但近年来滥用或误用抗生素已导致耐药性细菌的出现。这种情况正在严重演变,使传统的抗生素治疗方法变得越来越不有效。高效地根除细菌而不影响细菌耐药性的替代方法与绷带结合在一起治疗伤口感染是非常可取的。
稀土金属含有多个单电子轨道,具有优异的磁光电性能和良好的抗菌性能,广泛应用于抗菌材料的研发。事实上,稀土多功能材料在抗菌领域的开发利用源于20世纪初,早期硫酸铈钾被用于防止烧伤感染的抗菌剂,随后人们发现硫酸钕与硫酸镨可医治结核病。在细菌中,它可能作为一种抗菌防腐剂,对广泛的革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌有效,单核增生李斯特菌对一些稀土化合物高度敏感。稀土化合物灭活微生物的程度随pH值、温度、相对湿度(RH)、添加剂(表面活性剂、糖等)和细胞周围有机物的变化而变化。目前还没有将稀土多功能材料应用于抑菌绷带的报道和研究。
发明内容
有鉴于此,本发明旨在克服现有技术中的缺陷,提出一种稀土金属基抑菌绷带及其制备方法。
为达到上述目的,本发明的技术方案是这样实现的:
第一方面,本发明提供了一种稀土金属基抑菌绷带,该稀土金属基抑菌绷带由包括如下工艺制备而得:
将纱布浸润于抗菌添加剂溶液中后制得,所述抗菌添加剂溶液包括含Eu的多金属氧簇、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS),三者的摩尔浓度比为1:(1 ~ 5):(1 ~ 2)。
优选地,所述含Eu的多金属氧簇、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS)的摩尔浓度比为1 :4 :2。
优选地,所述改性壳寡糖的制备方法包括如下步骤:
将壳寡糖分散于水中形成壳寡糖悬浮液并升温至50 ~ 60℃,将缩水甘油三甲基氯化铵水溶液加入到壳寡糖悬浮液中,继续在此温度条件搅拌10 ~ 20 min使原料充分混合,升温至80 ~ 85℃开始反应,得到粗产品,向粗产品加入丙酮,析出沉淀,沉淀产物用无水乙醇索氏提取 18 ~ 24h以除去未反应的缩水甘油三甲基氯化铵,将产物于50 ~ 60℃浓缩干燥获得改性壳寡糖。
优选地,所述含Eu的多金属氧簇为Nax[EuW10O36]•yH2O,其中x取自8、9、10,y取自30、31、32、33、34、35。
优选地,所述含Eu的多金属氧簇为Na9[EuW10O36]•32H2O。
第二方面,本发明还提供了上述抑菌绷带的制备方法,该制备方法包括如下步骤:
S1:配制抗菌添加剂溶液
向容器中加入含Eu的多金属氧簇溶液、含锌离子的溶液和改性壳寡糖溶液搅拌均匀后得到抗菌添加剂溶液待用;
S2:制备稀土金属基抑菌绷带
将纱布浸入抗菌添加剂溶液中,封口后于50-60℃加热浸渍6-12小时后冷却至室温,将绷带转入无菌托盘,在37℃恒温培养箱将绷带烘干至无水分,取出置于无菌密封袋中备用,得到稀土金属基抑菌绷带。
优选地,所述抗菌添加剂溶液中含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖的摩尔浓度比为1:(1 ~ 5):(1 ~ 2)。
优选地,所述抗菌添加剂溶液中含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖的摩尔浓度比为1:4:2。
相对于现有技术,本发明具有以下优势:
(1)本发明的稀土金属基抑菌绷带中的抗菌添加剂用以提升抑菌能力,对大肠杆菌(E.coli)的抑制率为100%;
(2)在本发明中抗菌添加剂的引入并交联后使稀土金属基抑菌绷带的拉伸性大大增强;
(3)本发明中含稀土的抗菌添加剂延长了的抑菌的时间,对伤口中的大肠杆菌具有较高的抑制作用。
附图说明
图1为实施例1中制备的Nax[EuW10O36]•yH2O的红外光谱图;
图2为实施例3制备的用于提升抗菌能力的抗菌添加剂的扫描电镜图;
图3为实施例1中Nax[EuW10O36]•yH2O的DLS动态光散射谱图和实施例3中HTCOS的DLS动态光散射谱图;
图4为大肠杆菌涂板后在有/无实施例6制备的抑菌绷带封装下的涂板效果图;
图5为实施例8的抑菌绷带中使用单一材料和复合材料对革兰氏阴性菌大肠杆菌(E.coli)的高抑菌性能效果图。
具体实施方式
除有定义外,以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂如下:
硫酸锌(ZnSO4)、壳寡糖(COS,分子量=1000)、缩水甘油三甲基氯化铵(GTMAC)、乙酸(CH3COOH)和丙酮购自阿拉丁化学试剂有限公司,所有的化学物质都未经进一步后处理,直接使用,蒸馏水(ρ=18.2 MΩ·cm, 25℃)来自Millipore milli-Q净水系统。革兰氏阴性菌大肠杆菌E.coli来自北京四环生物制药有限公司。如无特殊说明,均为常规生化试剂;所述实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。
下面结合实施例来详细说明本发明创造。
实施例1 Na9[EuW10O36]·32H2O的制备与纯化
将26.8 mmol Na2WO4·2H2O溶解在20 mL 蒸馏水中,用乙酸(CH3COOH)调节pH至7.0~7.5。将包含2.4 mmol Eu(NO3)3·6H2O的2 mL的水溶液逐滴加入上述溶液中,在80~90℃搅拌,冷却至室温,得到结晶的Na9[EuW10O36]·32H2O,过滤后,在空气中干燥得到Na9[EuW10O36]·32H2O。图1为Na9[EuW10O36]·32H2O的红外光谱谱图。
实施例2 抗菌添加剂原料的配置
配制10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液:取10 ~ 11 mL二次蒸馏水转入15 mL Ep管中,称取335 mg Na9[EuW10O36]•32H2O,转入离心管中,搅拌均匀直至澄清,即得到10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液。
配制50 mM的Zn2+的储备液:称取80.725 mg ZnSO4溶于2.0 mL去离子水中,旋涡震荡仪混合均匀得到浓度为50 mM的Zn2+的储备液。
实施例3 壳寡糖(COS)的改性
称取20 g壳寡糖粉末置于四口烧瓶中,准确加入6.7%的纯化水,配好搅拌器、冷凝管和恒压滴液漏斗,置于油浴锅中,开启机械搅拌,转速为500 r/min。逐渐将油浴温度升至60℃,在该条件持续搅拌将壳寡糖打散。移取5 mL GTMAC于去离子水中,充分搅拌溶解后,加入恒压滴液漏斗中,控制滴入速度使其在 30 min内滴完。体系中去离子水最终体积应使壳聚糖浓度为 0.04 g/mL。待全部滴加完全后继续在60℃条件下搅拌10 min使原料充分混合,升温至80℃开始反应,得到一系列接枝度的HTCOS。反应粗产品倒入离心管使用大于其3倍体积的丙酮沉淀产品,沉淀产物用无水乙醇索氏提取 24 h以除去未反应的季铵盐。将产物于50℃烘干,得到红褐色粉末。为等到更纯净的产物,将产物放于去离子水中透析数日,用冷冻干燥机冷冻干燥48 h,最终得到红褐色絮状物。
配制浓度为20 mM的HTCOS溶液:称取200 mg HTCOS固体药品,将其溶于10 ~ 11mL二次蒸馏水中,搅拌均匀直至澄清,将其转移至15 mL离心管中备用。
实施例4 抗菌添加剂的制备
向100 mL烧杯中,分别引入5 mL 10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液,4 mL 50 mM的Zn2+,5 mL 20 mM的HTCOS溶液,在室温搅拌5小时待用。
图2为抗菌添加剂的SEM扫描电镜图,可以看到视野内呈现规则地排列棒状结构图,以10 μm为标尺,该棒状形貌的尺寸,为宽:5.9 μm ~ 10 μm × 长:21 μm ~ 100 μm。其中分散的小块状颗粒是未复合的过量的含Eu多酸,其粒径的大小不一来自含Eu多酸在HTCOS存在下的不同程度的交联。
图3为抗菌添加剂的DLS动态光散射谱图,图中左侧曲线表示只存在Eu多酸条件下的粒径分布曲线,右侧曲线表示Eu多酸与Zn2+和HTCOS结合后的化合物粒径分布曲线,从图中可以看到化合物的单分散性较好,Eu多酸的粒径分布于1.5微米左右,抗菌添加剂的粒径分布在95微米左右。
实施例5 稀土金属基抑菌绷带的制备
将普通纱布浸入质量浓度为20%的抗菌添加剂溶液中,封口后于50℃加热浸渍12小时后冷却至室温,将绷带转入无菌托盘,在37℃恒温培养箱将绷带烘干至无水分,取出置于无菌密封袋中备用。
实施例6 革兰氏阴性菌E.coli的培养
将MRSA单菌落接种到Luria-Bertani (LB)琼脂培养基中,在37℃、180 rpm条件下培养14 ~ 16 h,得到革兰氏阴性菌E.coli的悬液,光密度在600 nm (OD600)的紫外吸收值用来评估E.coli的生长情况,该发明中控制OD600=0.4 ~ 0.6。
实施例7 琼脂平板抗菌试验
将E.coli菌种转入LB液体培养基,在摇床中,37℃,180 rpm培养5 小时后,待OD600= 0.4 ~ 0.6后,将其用无菌水稀释104倍,吸取0.1 mL稀释的菌悬液,将其平铺于LB琼脂板上,以上实验作为对照组,重复以上操作制备6个琼脂板。
将以上琼脂板分为两组,每组3个计数板,选择一组封存在未添加抗菌添加剂制备成型的抑菌绷带中,置于37℃恒温培养箱孵育18 h;另外一组封在本发明的抑菌绷带中并转移37℃恒温培养箱孵育18 h。
如图4所示,未添加抗菌添加剂的抑菌绷带的LB固体涂板中大肠杆菌的长势较好且分布较均一,而在本发明的抑菌绷带中孵育的琼脂板中大肠杆菌全部死亡,这其中的变量是由于抗菌添加剂的引入导致了大肠杆菌的存活率降至0%。
实施例8 抑菌绷带中使用单一材料和复合材料的抑菌性能验证
为了研究对比抑菌绷带中使用单一化合物和复合材料的抑菌效果差异,本发明对每个化合物进行三个平行实验,计算菌落个数平均值,在图片中仅展示一个结果,再对细菌存活率进行计算。实验中以第一组空白组作为对照,假设空白对照组的大肠杆菌的生存率为100%,在第二组实验中按照实施例中原有配方基础条件不变,添加Na9[EuW10O36]·32H2O,不添加COS或HTCOS。在第三组实验中按照实施例中原有配方基础条件不变,添加COS,不添加Na9[EuW10O36]·32H2O或HTCOS。在第四组实验中按照实施例中原有配方基础条件不变,添加HTCOS,不添加Na9[EuW10O36]·32H2O或COS。在第五组实验中按照实施例中原有配方基础条件不变,添加Na9[EuW10O36]·32H2O和COS,不添加HTCOS。在第六组实验中按照实施例中原有配方基础条件不变,添加Na9[EuW10O36]·32H2O和HTCOS,不添加COS。在以上物料的添加量中,以实施案例中的最优添加量为基准。
经过图5中菌落个数的统计可以看出,通过对第一组空白对照实验的细菌存活率与第二组进行比较,发现单独加入含Eu纳米颗粒后的抗菌材料对两种菌的抑菌效果与空白对照中细菌的数量相比有略微的减少,没有很明显的区别,细菌减少量为20%左右,说明Na9[EuW10O36]·32H2O有较小的抑菌效果。对第三组平行实验的细菌存活率进行统计,发现抑菌材料的抑菌效果与空白对照中细菌的数量相比有减少,细菌减少量为31%左右。在第四组中添加了改性后的壳寡糖HTCOS,与空白对照中细菌的数量相比细菌的减少量在37%左右,和第三组相比,在添加单一化合物中,抑菌率有提升,但是提升幅度较小。在第五组中添加了改性前的壳寡糖COS和含Eu纳米颗粒Na9[EuW10O36]·32H2O,进行平行实验的细菌存活率统计,发现抑菌材料的抑菌效果与空白对照中细菌的数量有较多的减少量,细菌减少量为67%左右,但是还存在较多的菌落。在第六组中添加了改性后的壳寡糖HTCOS和含Eu纳米颗粒Na9[EuW10O36]·32H2O,对实验的细菌存活率进行统计,发现抑菌材料对E.coli的抑菌率达到100%,在实验中也验证了新材料对S.aureus的抑菌效果,但是抑菌效果较差。通过以上实验的对比说明最终含有改性后的多元化合物有较好的杀菌能力,与添加单一抑菌化合物和改性前的抑菌化合物其抑菌能力都有较大的提高,和没有改性前的多元壳寡糖化合物相比,抑菌率提高了33%。
对比例1
向100 mL烧杯中,分别引入1 ~ 4 mL 10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液,4 mL 50mM的Zn2+,5 mL 10 mM的HTCOS溶液,在室温搅拌5小时待用。按照实施例4重复以上配方制备的抑菌绷带,其中,含铕(Eu)多酸、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS)的摩尔浓度比变化范围为(1 ~ 4):20:5。
向100 mL烧杯中,分别引入5 mL 10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液,5 ~ 10 mL 50mM的Zn2+,5 mL 10 mM的HTCOS溶液,在室温搅拌5小时待用。按照实施例3重复以上配方制备的抑菌绷带,其中,含铕(Eu)多酸、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS)的摩尔浓度比变化范围为1:(5 ~ 10):1。
向100 mL烧杯中,分别引入5 mL 10 mM Na9[EuW10O36]•32H2O溶液,4 mL 50 mM的Zn2+,1 ~ 4 mL 10 mM的HTCOS溶液,在室温搅拌5小时待用。按照实施例3重复以上配方制备的抑菌绷带,其中,含铕(Eu)多酸、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS)的摩尔浓度比变化范围为5:20:(1 ~ 4)。
琼脂涂板后发现以上配比范围内的抑菌绷带抑制大肠杆菌生长的能力均低于含铕(Eu)多酸、锌离子(Zn2+)、改性壳寡糖(HTCOS)的摩尔浓度比为1 :4 :2的配方。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明创造,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明创造的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种稀土金属基抑菌绷带,其特征在于:所述稀土金属基抑菌绷带由包括如下工艺制备而得:
将纱布浸润于抗菌添加剂溶液中后制得,所述抗菌添加剂溶液包括含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖,三者的摩尔浓度比为1:(1 ~ 5):(1 ~ 2);
所述含Eu的多金属氧簇为Nax[EuW10O36]•yH2O,其中x取自8、9、10,y取自30、31、32、33、34、35;
所述改性壳寡糖的制备方法包括如下步骤:
将壳寡糖分散于水中形成壳寡糖悬浮液并升温至50 ~ 60℃,将缩水甘油三甲基氯化铵水溶液加入到壳寡糖悬浮液中,继续在此温度条件搅拌10 ~ 20 min使原料充分混合,升温至80 ~ 85℃开始反应,得到粗产品,向粗产品加入丙酮,析出沉淀,沉淀产物用无水乙醇索氏提取 18 ~ 24h以除去未反应的缩水甘油三甲基氯化铵,将产物于50 ~ 60℃浓缩干燥获得改性壳寡糖。
2.根据权利要求1所述的稀土金属基抑菌绷带,其特征在于:所述含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖的摩尔浓度比为1 :4 :2。
3.根据权利要求1所述的稀土金属基抑菌绷带,其特征在于:所述含Eu的多金属氧簇为Na9[EuW10O36]•32H2O。
4.权利要求1-3任一所述的稀土金属基抑菌绷带的制备方法,其特征在于:所述制备方法包括如下步骤:
S1:配制抗菌添加剂溶液
向容器中加入含Eu的多金属氧簇溶液、含锌离子的溶液和改性壳寡糖溶液搅拌均匀后得到抗菌添加剂溶液待用;
S2:制备稀土金属基抑菌绷带
将纱布浸入抗菌添加剂溶液中,封口后于50-60℃加热浸渍6-12小时后冷却至室温,将绷带转入无菌托盘,在37℃恒温培养箱将绷带烘干至无水分,取出置于无菌密封袋中备用,得到稀土金属基抑菌绷带。
5.根据权利要求4所述的稀土金属基抑菌绷带的制备方法,其特征在于:所述抗菌添加剂溶液中含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖的摩尔浓度比为1:(1 ~ 5):(1 ~ 2)。
6.根据权利要求4所述的稀土金属基抑菌绷带的制备方法,其特征在于:所述抗菌添加剂溶液中含Eu的多金属氧簇、锌离子、改性壳寡糖的摩尔浓度比为1:4:2。
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