CN116196316B

CN116196316B - β-蜕皮甾酮在制备降尿酸、治疗肾损害药物中的应用

Info

Publication number: CN116196316B
Application number: CN202310465751.XA
Authority: CN
Inventors: 田婧卓; 梁爱华; 孟晶
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date: 2023-04-27
Filing date: 2023-04-27
Publication date: 2023-07-28
Anticipated expiration: 2043-04-27
Also published as: CN116196316A

Abstract

本发明提供了β‑蜕皮甾酮在制备降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害药物中的应用，涉及医药技术领域。以β‑蜕皮甾酮或/和其异构体、或/和其药学上可接受的盐、酯或/和前药是该药物中的唯一活性组分，该药物还包括其药学可接受的载体，一方面对高尿酸血症有降尿酸作用，另一方面能降低血液血肌酐和尿素氮、减少尿酸盐结晶，从而改善高尿酸症肾脏损伤；还具有减轻肾小管扩张程度及管壁变薄、减少肾脏上皮细胞脱落的效果。相比现有技术，本发明活性成分β‑蜕皮甾酮既可以降尿酸又可以保护高尿酸血症的肾损害，为β‑蜕皮甾酮制备药物提供新用途。

Description

β-蜕皮甾酮在制备降尿酸、治疗肾损害药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及β-蜕皮甾酮在制备降尿酸、治疗肾损害药物中的应用，具体涉及β-蜕皮甾酮在制备降尿酸、治疗高尿酸性肾损害药物中的应用。

背景技术

随着现代人民生活水平的提高，高尿酸血症发生率逐年增高，目前我国高尿酸血症的发病率约为13.3%，涉及约1.7亿人口。高尿酸血症是指嘌呤代谢异常导致尿酸生成增多和（或）尿酸排泄减少引起血尿酸水平异常升高的一种代谢综合征。体内尿酸浓度过高时可析出尿酸盐结晶，沉积在肾脏、关节等组织，导致尿酸性肾病或痛风。高尿酸血症还是慢性肾病、糖尿病、高血压及代谢综合征等疾病的独立危险因素，可增加死亡风险。因此，治疗高尿酸血症具有重大的临床需求。

治疗高尿酸血症，临床上较为常用的药物为抑制尿酸合成的黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇和非布司他等、促进尿酸排泄的丙磺舒和苯溴马隆等。尽管上述药物的疗效显著，但是存在着不同程度的不良反应。别嘌醇在部分患者可引起严重的甚至致死性的皮肤损害；非布司他存在不可预知的心血管风险，可增加患者的死亡风险；苯溴马隆会可导致严重的肝毒性。药品监督管理局曾对上述药物的严重不良反应发布了警示信息。此外，高尿酸血症可以导致肾损伤，但是临床目前应用的药物非但没有肾保护作用，有的反而会加剧肾脏损伤程度（比如药物：别嘌醇等）。鉴于此，临床上对治疗高尿酸血症且具有肾保护作用的药物的开发有着较高的需求。

β-蜕皮甾酮，又名蜕皮甾酮，20-羟基蜕皮甾酮（β-ecdysterone，Ecdysterone，20-hydroxyecdysone），是一种天然存在的类固醇成分，在草本植物中含量最为丰富，以牛膝、露水草等植物居多。该化合物在蛋白质和核酸等物质的合成、糖代谢、脂类成分代谢、中枢神经系统及骨骼发育等多方面具有广泛的药理作用，有良好的药用用途的前景。

刘志刚（泄浊除痹方治疗高尿酸血症物质基础研究[D].广州中医药大学，2011.）对泄浊除痹方进行了治疗高尿酸血症的研究，其中，泄浊除痹方中的主要中药成分为土茯苓、萆薢、牛膝、山慈菇和王不留行，其中，君药土茯苓主要活性成分为黄酮类化合物以及薯蓣皂苷类成分；牛膝作为臣药，其主要含有活性成分三萜皂苷类、蜕皮甾酮、牛膝甾酮等成分。泄浊除痹方通过各成分的相互配伍，总黄酮在对细胞生长活性没有显著抑制的条件下，浓度为1-2.5g/L时，该含有蜕皮甾酮的组方对尿酸的吸收有明显的抑制作用，但该组方的活性成分不仅仅为蜕皮甾酮，其总黄酮、总甾体、皂苷类成分和生物碱、木脂素的协同配方是该处方的有效成分。

虽然现有技术中，虽然已经有关于降尿酸药物的研究，但是对于高尿酸血症所引起的肾脏损害的保护也至关重要。目前，尚未发现β-蜕皮甾酮作为唯一的活性成分在制备降尿酸或/和治疗高尿酸性肾损害药物中的相关实验研究和应用，因此，本发明提供了一种以β-蜕皮甾酮及其药学上可接受的盐作为唯一活性组分在制备降尿酸或治疗高尿酸性肾损害药物中的应用。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种β-蜕皮甾酮在制备治疗高尿酸性肾脏损害药物中的应用；所述药物中，β-蜕皮甾酮或/和其异构体、或/和其药学上可接受的盐、酯或/和前药是该药物中的唯一活性组分，该药物还包括其药学可接受的载体，为降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害提供了新的药物，其安全性高、疗效确切、成分明确，质量和剂量可控。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

首先，本发明提供了一种β-蜕皮甾酮在制备降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害药物中的应用，所述β-蜕皮甾酮为β-蜕皮甾酮或/和其异构体、或/和其药学上可接受的盐、酯或/和前药；所述β-蜕皮甾酮的分子式为C₂₇H₄₄O₇，化学结构式为：

。

优选地，所述应用中，所述药物为具有降低高尿酸症的血尿酸水平的药物。

优选地，所述应用中，所述药物为具有改善高尿酸症肾脏损伤、降低血液血肌酐和尿素氮、减少尿酸盐结晶的药物。

优选地，所述应用中，所述药物为具有减轻肾小管扩张程度及管壁变薄、减少肾脏上皮细胞脱落的药物。

优选地，所述应用中，所述药物包括唯一活性成分β-蜕皮甾酮或/和其异构体、或/和其药学上可接受的盐、酯或/和前药，和其药学上可接受的载体。

本发明中，所述载体，为药学上所有可接受的载体，包括但不限于稀释剂、粘合剂、吸收剂、崩解剂、分散剂、湿润剂、助溶剂、缓冲剂、表面活性剂。

本发明中，所述载体的种类及厂家对药物的技术效果不具有显著性影响。

本发明中，所述载体，可以是淀粉、糊精、蔗糖、乳粉、甜味剂、甘露糖醇、乳糖、纤维素类及其衍生物、碳酸钙、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、硬脂酸镁、滑石粉、香精。

优选地，所述应用中，所述的药物的给药方式包括口服、舌下、口腔粘膜、静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下、经皮、鼻腔和直肠途径。

本发明中，所述应用中，所述的药物的剂型可以为固体、液体或气体。

优选地，所述应用中，所述的药物的剂型包括粉末剂、片剂、颗粒剂、丸剂、硬胶囊或软胶囊、乳膏剂、软膏剂、硬膏剂、凝胶剂、糊剂、散剂、贴剂、溶液剂、混悬剂、注射剂、糖浆剂、搽剂、乳剂、酊剂、酏剂、气雾剂和喷雾剂。

然后，本发明提供了一种降尿酸的药物，包括活性成分和其药学上可接受的载体。

优选地，所述活性成分为β-蜕皮甾酮或/和其异构体、或/和其药学上可接受的盐、酯或/和前药。

然后，本发明提供了一种治疗高尿酸性肾脏损害的药物，包括活性成分和其药学上可接受的载体。

再者，本发明提供了一种降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害的药物，包括活性成分和其药学上可接受的载体。

优选地，所述药物中，活性成分的使用剂量为20-100mg/kg。

进一步优选地，所述药物中，活性成分的使用剂量为25-50mg/kg。

优选地，所述药物的剂型包括粉末剂、片剂、颗粒剂、丸剂、硬胶囊或软胶囊、乳膏剂、软膏剂、硬膏剂、凝胶剂、糊剂、散剂、贴剂、溶液剂、混悬剂、注射剂、糖浆剂、搽剂、乳剂、酊剂、酏剂、气雾剂和喷雾剂。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明所述的β-蜕皮甾酮的应用，能显著降低血尿酸水平，表现出显著的降尿酸作用。

2、本发明所述的β-蜕皮甾酮的应用，β-蜕皮甾酮通过降低肾脏中的尿酸沉积从而改善肾脏损伤。

3、本发明所述的β-蜕皮甾酮的应用，β-蜕皮甾酮可降低血液血肌酐和尿素氮，减轻肾小管扩张程度及管壁变薄、减少肾脏上皮细胞脱落，对肾脏损伤有明显的改善作用。

4、本发明所述的β-蜕皮甾酮的应用，β-蜕皮甾酮既具有明显的降尿酸作用，又可减轻尿酸所致的肾脏损伤，本发明活性成分β-蜕皮甾酮具有优势，疗效确切、成分明确，质量和剂量可控，降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害的效果显著。

附图说明

图1是给予β-蜕皮甾酮后对大鼠肾脏组织中尿酸盐沉积影响的观察图，其中，A为对照组，B为模型组，C和D均为β-蜕皮甾酮过低剂量组，E为β-蜕皮甾酮低剂量组，F为β-蜕皮甾酮中剂量组，G为β-蜕皮甾酮高剂量组，H为β-蜕皮甾酮过剂量组，I为别嘌呤醇组，J为苯溴马隆组。

图2是大鼠肾脏组织病理学观察图，其中，A为对照组，B为模型组，C和D均为β-蜕皮甾酮过低剂量组，E为β-蜕皮甾酮低剂量组，F为β-蜕皮甾酮中剂量组，G为β-蜕皮甾酮高剂量组，H为β-蜕皮甾酮过剂量组，I为别嘌呤醇组，J为苯溴马隆组。

具体实施方式

以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本申请的发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同意义。

下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。

本发明中，所述β-蜕皮甾酮（CAS号：5289-74-7）来源广泛，可以从商业途径采购，也可以从植物、动物中提取得到；可用于提取的植物/动物来源包括但不限于牛膝、露水草、虾、蟹、蚕等。β-蜕皮甾酮也可以通过半合成和/或全合成等方法得到。

本发明中，所述β-蜕皮甾酮的分子式为C₂₇H₄₄O₇，化学结构式为：

。

从¹H NMR和¹³C NMR表征数据，确定本发明所应用的β-蜕皮甾酮的结构。

下述实施例中，所述β-蜕皮甾酮购自宝鸡辰光生物科技有限公司，批号为HR20625W5；别嘌醇购自世贸天阶制药（江苏）有限责任公司，批号为20190814；苯溴马隆购自阿拉丁，货号为B124801。本发明的使用的活性成分或药物，其不同厂家的产品对效果不具有显著性影响。

实施例1β-蜕皮甾酮对高尿酸血症大鼠血尿酸水平的影响

1、材料与方法

1.1动物分组与给药方式

雄性SPF级SD大鼠80只，体重为200-220g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号为SCXK（京）2016-0006。动物饲养于屏障环境动物实验室，自动控温（温度20-26℃），相对湿度为40-70%，全新风。采取人工光照，12小时明暗周期。动物适应性饲养1天后开始分组实验。动物使用标准大鼠颗粒饲料喂养，由北京市科澳协力饲料有限公司提供。饮用纯净水。

将大鼠随机分为10组，每组8只，分别为：

（1）阴性对照组（对照组）；（2）模型组；（3）β-蜕皮甾酮过低剂量组-1，6mg/kg；（4）β-蜕皮甾酮过低剂量组-2，12mg/kg；（5）β-蜕皮甾酮低剂量组25mg/kg；（6）β-蜕皮甾酮中剂量组50mg/kg；（7）β-蜕皮甾酮高剂量组100mg/kg；（8）β-蜕皮甾酮过剂量组200mg/kg；（9）别嘌醇组25mg/kg；（10）苯溴马隆组25mg/kg。

1.2腺嘌呤联合乙胺丁醇诱导大鼠高尿酸血症合并肾损伤模型的建立

腺嘌呤购自Sigma-Aldrich（USA），用0.5%CMC-Na配制成浓度为20mg/mL的混悬液，现用现配，给药体积为5mL/kg，给药剂量为100mg/kg。盐酸乙胺丁醇片为成都锦华药业有限责任公司产品，用0.5%CMC-Na配制成浓度为50mg/ml的混悬液，现用现配，给药体积为5mL/kg，给药剂量为250mg/kg。从第1天起，模型组和各剂量CQ组灌胃给予造模药腺嘌呤100mg/kg和乙胺丁醇250mg/kg，两者均每天给予一次，共持续7天，制备高尿酸血症大鼠模型。对照组在相对时间内灌胃给予等量0.5%CMC-Na。

1.3样本处理及统计方法

观察和检测指标：末次给药后禁食16h，各组大鼠腹主动脉取血，静置后3500rpm离心15分钟，分离收集血清，利用全自动生化仪检测血清中尿酸的含量。

统计方法：数据以均数±标准差表示，采用one-way ANOVA进行分析。各给药组分别与模型组进行比较。

2、结果

β-蜕皮甾酮对高尿酸血症大鼠血尿酸水平的影响检测结果如表1所示：

表1

与模型组比较，*P<0.05。

结果显示，与对照组相比，模型组血清中尿酸水平显著升高（P<0.05），给予中剂量的β-蜕皮甾酮对高尿酸血症的动物的血尿酸水平有显著的降低作用，降低百分率为46.58%（P<0.05）。结果显示，本发明中的50mg/kg的活性成分β-蜕皮甾酮具有显著的降低血尿酸的作用。但是当β-蜕皮甾酮剂量过低时，血尿酸水平较模型组未见明显降低。此外阳性药别嘌呤醇和苯溴马隆表现出对高尿酸血症的动物的血尿酸水平有显著的降低作用，降低百分率分别为48.90%和44.37%，与50mg/kg的β-蜕皮甾酮组的降尿酸作用相近。

实施例2β-蜕皮甾酮对高尿酸血症大鼠肾脏损伤的改善作用

1、材料和方法

模型的建立以及实验分组及给药同实施例1。

1.1肾功能生化指标检测：取血和收集血清的方法同实施例1，采用全自动生化仪，利用肌氨酸氧化酶法检测血肌酐（SCr）的含量，利用脲酶法和动力法检测尿素氮（BUN）的含量。β-蜕皮甾酮对高尿酸血症大鼠血液BUN和SCr水平的影响，其检测结果见表2。

1.2肾脏组织的病理检查：麻醉大鼠，解剖，将肾组织取出。用10%的中性福尔马林将肾组织固定。固定充分后，按照常规进行取材、梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、制备3μm石蜡切片。分别用HE（苏木素&伊红）染色和六胺银染色，光学显微镜检查肾组织病变以及肾脏组织中尿酸盐沉积情况。检测结果见图1-图2，图1为给予β-蜕皮甾酮后对大鼠肾脏组织中尿酸盐沉积影响的观察图（六胺银染色），图2为大鼠肾脏组织病理学观察图。其中，图1和图2的A为对照组，B为模型组，C和D均为β-蜕皮甾酮过低剂量组，E为β-蜕皮甾酮低剂量组，F为β-蜕皮甾酮中剂量组，G为β-蜕皮甾酮高剂量组，H为β-蜕皮甾酮过剂量组，I为别嘌呤醇组，J为苯溴马隆组。图中右下角的长度单位为50μm。

2、结果

2.1β-蜕皮甾酮对大鼠肾脏组织中尿酸盐沉积的影响

对照组未观察到尿酸盐结晶沉积的现象，模型组在肾脏组织中观察到大量的尿酸盐结晶沉积。给予β-蜕皮甾酮后沉积的尿酸盐结晶明显减少。结果说明β-蜕皮甾酮可明显减少高尿酸血症大鼠肾脏组织的尿酸盐结晶沉积，其中50mg/kg组的效果最为明显。而当β-蜕皮甾酮的剂量较低时未见尿酸盐结晶明显减少。此外，给予阳性药别嘌呤醇和苯溴马隆后沉积的尿酸盐结晶也明显减少。

2.2β-蜕皮甾酮对大鼠肾脏损伤相关生化指标的影响

结果表明，与对照组相比，模型组中血清的BUN和SCr水平均显著升高（p<0.001），提示高尿酸血症大鼠表现出一定的肾损伤。给予β-蜕皮甾酮后较模型组的血清BUN和SCr水平显著降低（p<0.01），说明β-蜕皮甾酮对高尿酸血症造成的肾损伤具有明显的改善作用。但是当β-蜕皮甾酮剂量过高时，血清BUN和SCr水平与模型组相比仅可见轻微的降低趋势，且当β-蜕皮甾酮剂量过低时，血清BUN和Scr水平与模型组相比未见明显差异。此外，阳性药别嘌呤醇和苯溴马隆的血清BUN和SCr水平与模型组相比未见明显差异，提示别嘌呤醇和苯溴马隆对高尿酸血症造成的肾损伤无明显改善作用。

2.3β-蜕皮甾酮对大鼠肾脏组织病理学的影响

对照组的肾间质、肾小管和肾小球等组织结构均基本正常，细胞排列整齐，未见肾小管扩张、变性或坏死等病理改变。

模型组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，但可见肾小管管壁变薄、严重扩张、上皮细胞脱落及嗜酸性变性、炎性细胞浸润等病理改变。

β-蜕皮甾酮过低剂量组中肾小球形态基本正常，但仍可见肾小管严重扩展、上皮细胞脱落及嗜酸性变性、炎性细胞浸润等病理改变。

β-蜕皮甾酮低剂量组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，与模型组相比肾小管扩张现象有所减轻，但是仍可见少量肾小管扩张的现象，局部可见肾小管上皮细胞脱落等病理改变。

β-蜕皮甾酮中剂量组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，肾小管扩张现象明显减轻，仅偶见肾小管上皮细胞脱落。

β-蜕皮甾酮高剂量组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，肾小管扩张现象较模型组有所减轻，但局部仍可见少量肾小管扩张的现象，改善效果逊于中剂量组。

β-蜕皮甾酮过剂量组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，但局部可见肾小管轻度扩张和肾小管上皮细胞脱落、部分肾小管管壁变薄等病理改变。

别嘌呤醇组和苯溴马隆组的肾脏组织中肾小球形态基本正常，但可见肾小管严重扩张、管壁变薄、嗜酸性变性、炎性细胞浸润等病理改变。

结合六胺银染色结果、生化结果和病理学结果，说明本发明中的活性成分β-蜕皮甾酮可通过降低肾脏中的尿酸沉积，对高尿酸血症合并的肾脏损伤具有明显的保护作用，50mg/kg组的效果最为明显。而阳性药别嘌呤醇和苯溴马隆仅可见较好的降低肾脏中尿酸沉积作用，但对高尿酸血症合并的肾脏损伤无明显保护作用。

表2

与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.β-蜕皮甾酮作为唯一活性成分在制备降尿酸和/或治疗高尿酸性肾脏损害药物中的应用，其特征在于，所述β-蜕皮甾酮的分子式为C₂₇H₄₄O₇，化学结构式为：

；所述β-蜕皮甾酮在药物应用中的使用剂量为50mg/kg。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为具有降低高尿酸症的血尿酸水平的药物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为具有改善高尿酸症肾脏损伤、降低血液血肌酐和尿素氮、减少尿酸盐结晶的药物。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为具有减轻肾小管扩张程度及管壁变薄、减少肾脏上皮细胞脱落的药物。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物由唯一活性成分β-蜕皮甾酮和其药学上可接受的载体组成。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型选自溶液剂、混悬剂或注射剂。