CN116195512A - 一种虎杖快速繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药材种苗繁育技术领域，公开了一种虎杖快速繁殖方法。所述方法包括：(1)对虎杖种子消毒，然后在培养基A中进行培养获得无菌苗；(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段为外植体，在培养基B中进行愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C中进行丛芽诱导培养产生丛芽；(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D中进行生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后进行炼苗。所述方法繁殖速度快、效率高，1颗萌发种子6个月可繁殖近15000株幼苗；成活率高，炼苗后幼苗成活率可达95％以上；所得幼苗整齐一致，适宜大面积机械化耕作。
Description
技术领域
本发明涉及中药材种苗繁育技术领域，具体涉及一种虎杖快速繁殖方法。
背景技术
中药虎杖来源于为蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sied.et Zucc.)的干燥根和根茎，具有利湿退黄、清热解毒、散瘀止痛、止咳化痰的功效。虎杖还是提取白藜芦醇的主要原料植物，需求量连年上升。近年来，白藜芦醇作为抗衰老、抗癌、防治心血管疾病的保健品而备受国内外推崇。
我国虎杖野生资源丰富，但连年的采挖已造成野生资源日渐减少，同时市场需求量不断增加。为解决这一矛盾，人工种植是必由之路。目前虎杖人工种植尚属于起步阶段，种源大多来源于野生根茎或种子。虎杖种子萌发后移栽至大田需种植3～4年，而利用根茎切块种植需2～3年采挖，但根茎繁殖所需根茎较多，种植成本投入较大。另外，虎杖为雌雄异株植物，根茎繁殖或种子繁殖的群体遗传多样性丰富，药材质量和产量参差不齐。
利用组织培养技术可以在较短时间内实现种苗的高效繁殖和生产，而且有利于保持母本的优良特性，实现药材质量和产量相对稳定。本专利提供了一种虎杖快速繁殖方法，其应用前景广阔，成果转化后将会产生重大的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的虎杖繁殖系数较低，繁殖速度较慢等问题，提供一种虎杖快速繁殖方法。
为了实现上述目的，本发明提供一种虎杖快速繁殖方法，所述方法包括以下步骤：
(1)对虎杖种子消毒，然后在培养基A中进行培养获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段为外植体，在培养基B中进行愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D中进行生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后进行炼苗。
优选地，在步骤(1)中，所述消毒的过程包括：将虎杖种子去除外层花被后用75％酒精浸泡20-30s，然后使用无菌水冲洗1次，接着使用0.1％升汞浸泡5-8min，然后使用无菌水冲洗3次。
优选地，在步骤(1)中，所述培养基A为MS培养基或添加植物激素的MS培养基。
优选地，在步骤(1)中，培养的时间为20-30天。
优选地，在步骤(2)中，所述培养基B的配方为MS+1～3mg/L KT+1～3mg/L NAA。
优选地，在步骤(2)中，愈伤组织诱导培养的时间为30-40天。
优选地，在步骤(3)中，所述培养基C的配方为MS+1～2mg/L 6-BA+0.5～1mg/LNAA。
优选地，在步骤(4)中，所述培养基D的配方为1/2MS+0.5～1mg/L 6-BA。
优选地，在步骤(4)中，生根培养的时间为20～30天。
优选地，在步骤(4)中，所述炼苗的过程包括如下步骤：在22～25℃环境打开培养基盖子，放置适应7-10天，再移出至草炭土和蛭石配置而成的且保持湿润的基质中适应15-20天。
本发明所述的虎杖繁殖方法繁殖速度快、效率高，1颗萌发种子6个月可繁殖近15000株幼苗；成活率高，炼苗后幼苗成活率可达95％以上。现有栽培技术中，用根茎繁殖，种植3年后单株可分株20个左右；用种子繁殖，3年生虎杖植株结子量约1000-2500粒，种子萌发率约50％-70％，单株可获得种苗约1300株。因此，本发明所述的方法与现有生产用种相比，具有繁殖系数高，时间短的特点。另外，本发明所得幼苗生活力强，株形整齐一致，有利于大面积种植进行机械化操作。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
本发明提供一种虎杖快速繁殖方法，所述方法包括以下步骤：
(1)对虎杖种子消毒，然后在培养基A中进行培养获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段为外植体，在培养基B中进行愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D中进行生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后进行炼苗。
优选地，在步骤(1)中，所述消毒的过程包括：将虎杖种子去除外层花被后用75％酒精浸泡20-30s，然后使用无菌水冲洗1次，接着使用0.1％升汞浸泡5-8min，然后使用无菌水冲洗3次。
进一步优选的，在步骤(1)中，所述消毒的过程包括：将虎杖种子去除外层花被后用75％酒精浸泡30s，然后使用无菌水冲洗1次，接着使用0.1％升汞浸泡5min，然后使用无菌水冲洗3次。
在优选的实施方式中，在步骤(1)中，所述培养基A不添加植物激素的MS培养基。
在优选的实施方式中，在步骤(1)中，培养的时间为20-30天。具体的，可以为20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天。
在优选的实施方式中，在步骤(2)中，所述培养基B的配方为MS+1～3mg/L KT+1～3mg/L NAA。
在本发明中，所述KT是指激动素(Kinetin，6-糠基氨基嘌呤)，NAA是指a-萘乙酸(1-naphthlcetic acid)，6-BA是指6-苄氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine)
在优选的实施方式中，在步骤(2)中，愈伤组织诱导培养的时间为30-40天。具体的，可以为30天、31天、32天、33天、34天、35天、36天、37天、38、39天或40天。
在本发明中，可以通过将愈伤组织诱导培养产生的愈伤组织进行继代培养的方式获得更多的愈伤组织，进而可以得到更多的虎杖种苗。因此，在优选地实施方式中，所述步骤(2)还包括：将愈伤组织诱导培养产生的愈伤组织进行继代培养，继代培养的培养基配方和培养时间与愈伤组织诱导培养相同。
在优选的实施方式中，在步骤(3)中，所述培养基C的配方为MS+1～2mg/L 6-BA+0.5～1mg/L NAA。
在优选的实施方式中，在步骤(4)中，所述培养基D的配方为1/2MS+0.5～1mg/L 6-BA。
在优选的实施方式中，在步骤(4)中，生根培养的时间为20～30天。具体的，可以为20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天或30天。
在优选的实施方式中，在步骤(4)中，所述炼苗的过程包括如下步骤：在22～25℃环境打开培养基盖子，放置适应7-10天，再移出至草炭土和蛭石配置而成的且保持湿润的基质中适应15-20天。
进一步优选地，所述基质是由草炭土和蛭石按照重量比为1：1配制而成。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述，但本发明的保护范围并不局限于此。
实施例1
(1)选取饱满的虎杖种子，去除外层花被后用75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗1次，0.1％升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次然后在培养基A(MS培养基)中培养30天获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段(4个)为外植体，在培养基B(MS+1mg/L KT+2mg/L NAA)中进行30天愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C(MS+1.5mg/L 6-BA+1mg/L NAA)中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D(1/2MS+0.5mg/L 6-BA)中进行30天生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后再在25℃环境打开培养基盖子，放置适应一周，再移出至草炭土和蛭石按照重量比为1:1配置而成的且保持湿润的基质中适应20天。最终获得220株虎杖种苗。
实施例2
(1)选取饱满的虎杖种子，去除外层花被后用75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗1次，0.1％升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次然后在培养基A(MS培养基)中培养30天获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段(4个)为外植体，在培养基B(MS+1mg/L KT+2mg/L NAA)中进行30天愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；将愈伤组织诱导培养产生的愈伤组织进行1次继代培养，继代培养的培养基配方和培养时间与愈伤组织诱导培养相同
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C(MS+1.5mg/L 6-BA+1mg/L NAA)中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D(1/2MS+0.5mg/L 6-BA)中进行30天生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后再在25℃环境打开培养基盖子，放置适应一周，再移出至草炭土和蛭石按照重量比为1:1配置而成的且保持湿润的基质中适应20天。最终获得850株虎杖种苗。
实施例3
(1)选取饱满的虎杖种子，去除外层花被后用75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗1次，0.1％升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次然后在培养基A(MS培养基)中培养30天获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段(4个)为外植体，在培养基B(MS+1mg/L KT+2mg/L NAA)中进行30天愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；将愈伤组织诱导培养产生的愈伤组织进行2次继代培养，每次继代培养均将愈伤组织切成1cm见方的小块，继代培养的培养基配方和培养时间与愈伤组织诱导培养相同
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C(MS+1.5mg/L 6-BA+1mg/L NAA)中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D(1/2MS+0.5mg/L 6-BA)中进行30天生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后再在25℃环境打开培养基盖子，放置适应一周，再移出至草炭土和蛭石按照重量比为1:1配置而成的且保持湿润的基质中适应20天。最终获得3600株虎杖种苗。
实施例4
(1)选取饱满的虎杖种子，去除外层花被后用75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗1次，0.1％升汞浸泡5min，无菌水冲洗3次然后在培养基A(MS培养基)中培养30天获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段(4个)为外植体，在培养基B(MS+1mg/L KT+2mg/L NAA)中进行30天愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；将愈伤组织诱导培养产生的愈伤组织进行3次继代培养，进行每次继代培养前需要将愈伤组织切成1cm见方的小块，继代培养的培养基配方和培养时间与愈伤组织诱导培养相同
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C(MS+1.5mg/L 6-BA+1mg/L NAA)中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D(1/2MS+0.5mg/L 6-BA)中进行30天生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后再在25℃环境打开培养基盖子，放置适应一周，再移出至草炭土和蛭石按照重量比为1:1配置而成的且保持湿润的基质中适应20天。最终获得15000株虎杖种苗。
测试例1
随机选取实施例1-4中得到的虎杖种苗各30棵，按照大田种植虎杖的方式进行栽种，然后计算存活率。结果表1所示。
表1
| 种植棵数 | 存活棵数 | 存活率 | |
| 实施例1 | 30 | 30 | 100％ |
| 实施例2 | 30 | 30 | 100％ |
| 实施例3 | 30 | 30 | 100％ |
| 实施例4 | 30 | 30 | 100％ |
由表1的数据可知，使用实施例1-4得到的虎杖种苗进行栽种，存活率均为100％。说明采用本发明所述的方法繁殖得到的虎杖种苗进行栽种具有较高的存活率。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种虎杖快速繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)对虎杖种子消毒，然后在培养基A中进行培养获得无菌苗；
(2)取步骤(1)得到的无菌苗的茎段为外植体，在培养基B中进行愈伤组织诱导培养产生愈伤组织；
(3)将步骤(2)得到的愈伤组织接种到培养基C中进行丛芽诱导培养产生丛芽；
(4)将步骤(3)中的丛芽分割后转入培养基D中进行生根培养，得到已生根的虎杖幼苗，然后进行炼苗。
2.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述消毒的过程包括：将虎杖种子去除外层花被后用75％酒精浸泡20-30s，然后使用无菌水冲洗1次，接着使用0.1％升汞浸泡5-8min，然后使用无菌水冲洗3次。
3.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述培养基A为MS培养基或添加植物激素的MS培养基。
4.根据权利要求1或3所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(1)中，培养的时间为20-30天。
5.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述培养基B的配方为MS+1～3mg/L KT+1～3mg/L NAA。
6.根据权利要求1或5所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(2)中，愈伤组织诱导培养的时间为30-40天。
7.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述培养基C的配方为MS+1～2mg/L 6-BA+0.5～1mg/L NAA。
8.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述培养基D的配方为1/2MS+0.5～1mg/L 6-BA。
9.根据权利要求1或8所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(4)中，生根培养的时间为20～30天。
10.根据权利要求1所述的虎杖快速繁殖方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述炼苗的过程包括如下步骤：在22～25℃环境打开培养基盖子，放置适应7-10天，再移出至草炭土和蛭石配置而成的且保持湿润的基质中适应15-20天。
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| CN202111444404.6A Pending CN116195512A (zh) | 2021-11-30 | 2021-11-30 | 一种虎杖快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116195512A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014073083A (ja) * | 2012-10-02 | 2014-04-24 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | 植物の再生方法及び植物の増殖方法 |
| CN104885933A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-09-09 | 深圳市新华南方生物科技股份有限公司 | 一种虎杖苗培养方法 |
| CN105580735A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-05-18 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法 |
-
2021
- 2021-11-30 CN CN202111444404.6A patent/CN116195512A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014073083A (ja) * | 2012-10-02 | 2014-04-24 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | 植物の再生方法及び植物の増殖方法 |
| CN104885933A (zh) * | 2015-05-07 | 2015-09-09 | 深圳市新华南方生物科技股份有限公司 | 一种虎杖苗培养方法 |
| CN105580735A (zh) * | 2016-02-01 | 2016-05-18 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种可提高虎杖愈伤组织中白藜芦醇含量的培养液及培养方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 左开井 等: "《植物分子生物学实验手册》", 30 April 2021, 上海交通大学出版社, pages: 11 - 12 * |
| 王宇 等: "虎杖的组织培养及高效无性系的建立研究", 《江西农业学报》, vol. 21, no. 3, pages 73 - 76 * |
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