CN116178303B - 一类含氮荧光染料、其合成方法及应用 - Google Patents
一类含氮荧光染料、其合成方法及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一类含氮荧光染料、其合成方法及应用，属于有机合成领域，该荧光染料为3a、3b和3c中的任意一种，3a、3b、3c的结构式如下：。3a与ClO‑离子之间具有良好的选择性，较高的灵敏度，检出限达到0.038µmol·L‑1，pH适用范围广（3~10之间），可以在生理环境下检测ClO‑离子。同时还可以用于实时监测体系的粘度。有望应用于实际，为深入探究次氯酸在体内的生理学及病理学意义和体系粘度检测，提供一种有效的手段。
Description
技术领域
本发明属于有机合成领域，具体涉及一类含氮荧光染料、其合成方法及应用。
背景技术
新型含氮类光学探针是一种多环芳烃类光学探针，结构是由两个苯环组成，具有大离阈的π-π共轭体系。萘已作为一种荧光报告基团被广泛用于设计荧光探针，主要是基于以下三点：（1）新型含氮光学探针化学性质稳定、光稳定性好、酸碱条件下适用性好且具有杰出的光学特性。无官能团取代的萘分子的荧光激发波长在321nm，荧光量子产率可高至0.29；（2）萘分子易于修饰，各位点都可发生取代反应，合成方法简单，产率较高。通过修饰不同基团可以极易改变萘分子的共轭体系和分子刚性平面，从而对萘分子的光学性能进行改进优化；（3）最突出的优点是萘衍生类化合物具有双光子荧光性质，相较于其他双光子荧光化合物而言，其双光子吸收截面更大。因此，新型含氮光学探针被广泛用于金属离子和生物小分子的检测。
有机荧光染料在工业、农业、医药、轻纺、能源、国防和基因生物方面具有广阔的应用前景，已被广泛应用于涂料、油墨、纸张、食品、塑料、洗涤剂、化妆品和纺织行业。目前国际上在荧光染料方面已经取得了一定的进展，但国内在这方面的发展相对还比较缓慢，因此设计并合成具有特殊功能的荧光染料已经成为化学工作者的一项迫切任务
荧光染料是染料化学中的一个重要的分支。近几十年来，荧光染料及其衍生物在材料、生物、医学等方面取得了很多突破性进展，逐渐成为了染料化学中一个关键的研究方向。伴随分析化学、生物科学、生命科学、医学等学科的飞速发展，有机荧光染料已经被广泛地应用在生物分子标记、酶分析、环境分析、细胞染色和临床检验诊断等诸多方面，是化学、生物学、环境科学和医学研究中不可缺少的荧光信号报告团。因此，开发具有实用价值的功能性有机荧光染料已成为当前倍受关注的研究课题。特别是随着生命科学的发展，人们希望能够获得分子或离子生物学功能的直观信息，因此各种成像技术得以迅速发展，特别是近红外成像一直是人们关注的焦点，与传统分析技术相比近红外荧光成像具有非破坏性、灵敏度高、选择性好等优点。而荧光成像的发展受到荧光染料性质的制约，因此开发性能优异的荧光染料，是化学生物学一个重要的研究方向，近红外荧光染料是一类功能性染料，由于其在近红外光区有很好的吸收，因此近红外技术在细胞成像、肿瘤治疗、生物分子标记﹑医学诊断等中都有着广泛的应用。
发明内容
本发明针对传统荧光染料的稳定性差，发射波长短，溶解性较差等问题，以提高和改善荧光染料的光物理和光化学性能为目的，通过杂化策略构建了一系列新型的荧光染料，本发明的目的在于提供了一类新型含氮荧光染料，具有更大的光量子产率和适中的斯托克斯位移，本发明还提供了该类新型含氮荧光染料的合成方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一类含氮荧光染料，该类荧光染料为3a、3b和3c中的任意一种，其中3a、3b、3c的结构式分别如下：
。
具体合成过程如下：
（1）化合物1与三氯氧磷在DMF中反应得到化合物2；
（2）化合物2与氰乙酸乙酯在乙醇中以哌啶为催化剂进行反应得到3a，化合物2与丙二腈在乙醇中以哌啶为催化剂进行反应得到3b，化合物2与苯并噻唑-2-乙腈在乙醇中以哌啶为催化剂进行反应得到3c，化合物1、化合物2、3a、3b、3c的化学式如下：
优选地，步骤（1）中化合物2的制备过程具体为：将三氯氧磷在-5℃~5℃滴入DMF中，滴完后再搅拌一段时间，加入化合物1和DMF，在85~95℃搅拌反应完全，将产物转入冰水中，放入冰箱析出固体，抽滤，即可得化合物2，化合物1和三氯氧磷的摩尔比为1:（10~15）。
优选地，步骤（2）中3a的制备过程具体为：将化合物2和氰乙酸乙酯加入无水乙醇中，滴加哌啶（一般3~5滴），常温搅拌反应完全，用冰乙酸洗涤过滤，无水Na2SO4干燥，柱层析即可得3a，化合物2和氰乙酸乙酯的摩尔比为1:1~1.5。
优选地，步骤（2）中3b的制备过程具体为：将化合物2和丙二腈加入无水乙醇中，滴加哌啶，常温搅拌反应完全，用冰乙酸洗涤过滤，无水Na2SO4干燥，柱层析即可得3b，化合物2和丙二腈的摩尔比为1:1~1.5。
优选地，步骤（2）中3c的制备方法具体为：将化合物2和苯并噻唑-2-乙腈加入无水乙醇中，滴加哌啶，常温搅拌反应完全，用冰乙酸洗涤过滤，无水Na2SO4干燥，柱层析即可得3c，化合物2和苯并噻唑-2-乙腈的摩尔比为1:1~1.5。
上述新型含氮类荧光染料的合成路线如下：
上述含氮荧光染料在荧光检测中的应用。
上述含氮荧光染料以非疾病的诊断为目的在次氯酸荧光检测中的应用。
上述含氮荧光染料在监测由PBS和甘油组成的溶剂体系中粘度的应用。
本发明相比于经典新型含氮染料，上述三种新型含氮类染料具有更优良的性能：（1）更多的反应位点，使后续反应更加便利（2）更大的光量子产率，继承和发展了新型含氮类荧光染料光量子产率高的特点；（3）适中的斯托克斯位移，可在后续荧光检测中摒除激发波长的干扰，使分析结果更加准确。
附图说明
图 1是实施例1制得的3a的核磁氢谱图；
图2是实施例1制得的3a的核磁碳谱图；
图3是实施例2制得的3b的核磁氢谱图；
图4是实施例2制得的3b的核磁碳谱图；
图5是实施例3制得的3c的核磁氢谱图；
图6是实施例3制得的3c的核磁碳谱图；
图7是3a、3b、3c受DCM和DMF溶剂效应影响紫外光谱；
图8是3a、3b、3c受DMSO和PBS溶剂效应影响紫外光谱；
图9是3a、3b在pH从1~14中日光、荧光颜色的变化；
图10是3c在pH从1~14中日光、荧光颜色的变化；
图11是3a的浓度效应紫外光谱图；
图12是3a的浓度效应荧光光谱图；
图13是3a的离子选择性荧光和紫外光谱图；
图14是3a在pH从1~14下的紫外荧光光谱图；
图15是3a 在PBS：甘油不同比例之中的荧光光谱图；
具体实施方式
以下通过优选实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。
本发明中所使用的各种原料均为普通市售产品，或者通过本领域技术人员公知的方法或现有技术中公开的方法获得。
实施例1
1）化合物2的制备（参考文献Chen, H.; Tang, Y.; Ren, M.; Lin, W. Singlenear-infrared fluorescent probe withhigh- and low-sensitivity sites forsensing different concentration ranges of biological thiols with distinctmodes of fluorescence signals.Chem Sci2016,7, 1896-1903.制备），具体过程为：
量取5 mL DMF于25 mL两口圆底烧瓶中，在通风橱内取2 mL（21.5mmol）三氯氧磷加入滴液漏斗中，在恒温低温反应浴中，控制温度在0℃左右，打开滴液漏斗使其逐滴加入，待三氯氧磷滴入完后，再搅拌30分钟，然后取出加入0.3535 g（2mmol） 化合物1和0.2 mLDMF，在90℃搅拌5 h， 冷至室温，将产物转入冰水中，放入冰箱析出固体，抽滤，即可得产物化合物2。
合成路线如下：
2）3a的制备
在25 mL圆底烧瓶中加入50 mg （0.225mmol）化合物2，28mg （0.25mol）氰乙酸乙酯，3 mL无水乙醇溶剂和3滴哌啶催化剂，常温下搅拌6h，生成黄色沉淀，用冰乙酸洗涤过滤，用无水Na2SO4干燥，得到3a粗品；将3a粗品进一步用柱色谱分离，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯（PE：EA）=30：1，旋蒸出溶剂，真空干燥，得到35 mg橘黄色固体（yield, 70%），即3a纯品。
合成路线如下：
3a的核磁氢谱如图1所示，1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.37 (s, 1H), 7.41 (d,J= 8.6 Hz, 1H), 6.81 – 6.67 (m, 2H), 4.30 (q,J= 7.1 Hz, 2H), 3.85 (s, 2H),3.45 (s, 3H), 2.83 (dd,J= 8.6, 5.3 Hz, 1H), 2.68 (dd,J= 8.6, 5.3 Hz, 1H),1.75 (s, 4H), 1.56 (s, 3H), 1.36 (t,J= 7.1 Hz, 3H). 3a的核磁碳谱如图2所示，13CNMR (101 MHz, CDCl3) δ 154.19, 129.41, 113.51, 111.98, 99.99, 61.38, 55.71,55.41, 29.81, 27.43, 25.88, 24.45, 14.40.
实施例2
3b的制备
在25 mL圆底烧瓶中加入50 mg（0.225mmol）化合物2，16.3 mg（0.25mol）丙二腈，3 mL无水乙醇和3滴哌啶，常温下搅拌6h，产生棕色沉淀，用冰乙酸洗涤过滤，用无水Na2SO4干燥，得到3b粗品；将3b粗品进一步用柱色谱分离，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯（PE：EA）=30：1，旋蒸出溶剂，真空干燥，得到40 mg棕色固体（yield, 68%）。
合成路线如下：
3b的核磁氢谱如图3所示，1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 7.42 (s,2H), 7.00 – 6.87 (m, 2H),5.15 (s, 4H), 3.87 (s, 6H), 2.76 (d,J= 16.9 Hz, 2H),2.72 – 2.64 (m, 3H), 1.33 – 1.22 (m, 3H). 3b的核磁碳谱如图4所示，13C NMR (101MHz, CDCl3) δ 161.20 , 151.99 , 142.06 , 134.90 , 128.63 , 123.71 , 114.11 ,112.05 , 55.42 , 29.60 , 28.18 .
实施例3
3c的制备
在25 mL圆底烧瓶中加入50 mg（0.225mmol） 化合物2，43mg（0.25mmol）苯并噻唑-2-乙腈，3 mL无水乙醇和3滴哌啶，常温下搅拌6h，产生红色沉淀，用冰乙酸洗涤过滤，用无水Na2SO4干燥，得到3c粗品；将3c粗品进一步用柱色谱分离，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯（PE：EA）=30：1，旋蒸出溶剂，真空干燥，得到40 mg红色固体（yield, 65%），即3c纯品。
合成路线如下：
3c的核磁氢谱如图5所示，1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.64 (s, 1H), 8.09 (d,J= 8.1 Hz, 1H), 7.89 (d,J= 7.6 Hz, 1H), 7.75 (d,J= 8.7 Hz, 1H), 7.52 (t,J=8.3 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 6.84 (dd,J= 8.7, 2.6 Hz, 1H), 6.77 (d,J= 2.5 Hz,1H), 3.87 (s, 3H), 3.28 – 3.13 (m, 2H), 3.00 – 2.87 (m, 3H), 1.26 (s, 2H). 3c的核磁碳谱如图6所示，13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ 163.85 , 161.79 , 153.88 ,144.07 ,140.24 ,135.03 , 129.05 , 127.07 , 123.70 , 121.53 , 113.17 , 112.43, 55.52 , 27.98 , 26.02 .
探针储备液的配置：用万分之一分析天平称取0.0037 g (M=366.45) 3a于棕色玻璃瓶中，用移液枪准确加入10.00 ml DMSO，配制成浓度为1.00×10-3mol·L-1的3a溶液。用万分之一分析天平称取0.0032 g (M=319.4) 3b于棕色玻璃瓶中，用移液枪准确加入10.00ml DMSO，配制成浓度为1.00×10-3mol·L-1的3b溶液。用万分之一分析天平称取0.0043 g(M=427.5) 3c于棕色玻璃瓶中，用移液枪准确加入10.00 ml DMSO，配制成浓度为1.00×10-3mol·L-1的3c溶液。
待测离子储备液的配制：称取（1）次氯酸钠（ClO-）（2）亚硫酸氢钠（HSO3 -）（3）硫酸钠（SO4 2-）（4）碳酸钠（CO3 2-）（5）碳酸氢钠（HCO3 -）（6）醋酸钠（CH3COO-）（7）氯化钠（Cl-）（8）氰化钾（CN-）（9）碘化钾（I-）（10）硫氰化钾（SCN-）（11）磷酸钾（PO4 3-）（12）氟化钾（F-）（13）亚硫酸钠（SO3 2-）（14）GSH（15）Cys（16）Hcy（17）亮氨酸（18）异亮氨酸（19）脯氨酸（20）缬氨酸等物质各0.1 mmol，分别用10.0 mL去离子水溶解，配制成1.0×10-2mol·L-1的离子溶液，贴明标签备用。
PBS（pH=7.4）缓冲溶液的配制：用电子分析天平称取71.6 g十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），用1000.0 mL去离子水溶解，配制成0.2 mol·L-1的溶液；称取31.2 g二水合磷酸氢二钠（NaH2PO4·2H2O），用1000.0 mL去离子水溶解，配制成0.2 mol·L-1的溶液。取19 mL新配置的NaH2PO4溶液，81 mL Na2HPO4溶液于1000.0 ml容量瓶中，加入去离子水定容至1000.0 mL即可。分别用1M盐酸，1M氢氧化钠溶液调节缓冲体系pH，配置pH 1-14的缓冲溶液，用于检测探针在不同酸碱体系下的响应情况。
实施例4
3a、3b、3c的溶剂效应检测：测紫外吸收光谱时先设置扫描参数，起点为250 nm，终点为800 nm，速度快，间隔1 nm，用DCM溶液进行基线校正。然后在比色皿中加入30 μL的1.00×10-3mol·L-13a，扫描一条3a的空白曲线，然后加入等浓度的1.00×10-3mol·L-1ClO-离子溶液，观察吸光度的变化。3b、3c的溶剂效应检测同理，结果详见图7和图8所示。由图7可以看出，3c在DCM中吸收峰最高，3a次之，3b最低。3a在非质子性溶剂DMF中吸收峰最高，而且最高吸收峰所对应的波长最长，吸收峰高度3c次之，3b最低。说明3a在非质子溶剂中检测较为合适。由图8可知，3a在非质子溶剂二甲亚砜中吸收峰最高，3b次之，3c最低。在质子溶剂PBS缓冲体系中3a紫外吸收峰最高，3b次之，3c最小。通过图7、图8的对比可以看出测试3a比较适宜的溶剂是非质子溶剂二甲亚砜。
为了寻找最佳的反应体系，现将3a置于乙醇、乙腈、DMSO与PBS不同配比之中，如下表所示，在PBS：DMSO=2:8和1:9、0:10中较为适宜，又因为有机溶剂毒性大，所以考虑到环保及安全问题，则检测3a最合适的体系是PBS：DMSO =2:8。
表1 乙醇、乙腈、DMSO置于不同比例的PBS之中对比
实施例5
3a、3b、3c受pH变化检测：分别拍摄3a、3b、3c在pH从1~14中的日光照和荧光照，观察pH对其影响，结果详见图9、图10。
由图9中a可知，3a在日光灯下，在pH从1-14的体系之中，溶液颜色逐渐由绿色变成黄色再变成淡黄色，最终接近无色。由图b可知，3a在365nm的紫外灯照射下，在pH从1-2的体系之中，呈现绿色荧光，在pH从3-14的体系之中，无荧光，说明3a在酸性条件下荧光较强。由图c可知，3b在日光灯下，是无色溶液，而且几乎不受pH的影响。由图d可知，3b在365 nm紫外灯下，有很强的蓝色荧光，也几乎不受pH变化的影响。
由图10可以观察到，3c在日光灯下，为黄色透明溶液，而且在pH从1-5时溶液黄色较为深一些，在pH从6-14时溶液黄色较为浅一些。3c在365nm紫外灯下，呈现蓝色荧光，而且在pH从1-5时溶液蓝色荧光较为亮一些，在pH从6-14时溶液蓝色荧光较为暗一些。说明3c在酸性条件下荧光较强一些。
综上，3b和3c受pH影响不明显，同时其溶剂效应的结果说明3b和3c紫外吸收波长较短，因此，3a更适合进行测试，下面将对3a的离子选择性、浓度效应、pH值影响等几个方面进行检测。
实施例6
3a离子选择性检测：在检测选择性时，用移液枪分别移取3 mL体系溶液（PBS:DMSO=2:8）于试管中，然后加入30 μL 1.00×10-3mol·L-1的3a储备液，再分别加入30 μL 1.00×10-2mol·L-1的（1）次氯酸钠（ClO-）（2）亚硫酸氢钠（HSO3 -）（3）硫酸钠（SO4 2-）（4）碳酸钠（CO3 2-）（5）碳酸氢钠（HCO3 -）（6）醋酸钠（CH3COO-）（7）氯化钠（Cl-）（8）氰化钾（CN-）（9）碘化钾（I-）（10）硫氰化钾（SCN-）（11）磷酸钾（PO4 3-）（12）氟化钾（F-）（13）亚硫酸钠（SO3 2-）（14）GSH（15）Cys（16）Hcy（17）亮氨酸（18）异亮氨酸（19）脯氨酸（20）缬氨酸，5min后，检测荧光光谱。荧光的激发波长为360 nm，狭缝宽度为2.5 nm，发射狭缝宽度为5 nm。检测紫外光谱时起点为230 nm，终点为600nm，速度快，间隔1 nm， 然后用空白体系进行基线校正，用吸量管移取3 mL体系 (PBS:DMSO=2:8) 于比两个色皿中，排除体系本身对检测结果的影响。然后在比色皿中加入30 μL的1.00×10-3mol·L-13a，扫条只有探针的对比线，然后加入上述检测荧光光谱时在光谱试管中配置的溶液，检测吸光度，结果详见图11。
如图11所示，由荧光离子选择性图谱可以看出，3a在410 nm处具有较强的荧光发射，只有在加入ClO-之后荧光强度增强，而加入其他离子，基本不变。由紫外吸收光谱可以看出，只有加入在加入ClO-之后紫外吸收明显，而加入其他离子，基本不变。下方的图片分别是日光照和荧光照，从左到右分别加入了（1）3a（2）次氯酸钠（ClO-）（3）亚硫酸氢钠（HSO3 -）（4）硫酸钠（SO4 2-）（5）碳酸钠（CO3 2-）（6）碳酸氢钠（HCO3 -）（7）醋酸钠（CH3COO-）（8）氯化钠（Cl-）（9）氰化钾（CN-）（10）碘化钾（I-）（11）硫氰化钾（SCN-）（12）磷酸钾（PO4 3-）（13）氟化钾（F-）（14）亚硫酸钠（SO3 2-）（15）GSH（16）Cys（17）Hcy（18）亮氨酸（19）异亮氨酸（20）脯氨酸（21）缬氨酸。通过对比可以看出，日光照中只有加ClO-的溶液颜色变为绿色，而加入其他离子与3a颜色一致。荧光照中只有加ClO-的溶液显示绿色荧光，而加入其他离子无荧光。
实施例7
为进一步探究ClO-离子浓度对反应的影响，本申请检测了3a在反应体系中，与系列浓度的ClO-离子响应时，紫外-吸收光谱及荧光光谱的变化。
3a浓度梯度检测：用移液枪移取3 mL体系溶液（PBS:DMSO=2:8）于比色皿中，加入30 μL 1.00×10-3mol·L-13a储备液，扫描一条3a的空白曲线。取1 mL ClO-离子储备液，加去离子水稀释至10 mL，配制成1.0×10-3mol·L-1的溶液。依次加入5 µL 1.0×10-3mol·L- 1ClO-离子溶液。进行紫外和荧光扫描13次后，峰值不再变化，记录每次加入ClO-离子溶液的体积和浓度，结果详见图12和图13。
如图12所示，在紫外光谱中，485 nm和350nm处的吸收峰随ClO-离子浓度增大而逐渐降低，300nm处的吸收峰随ClO-离子浓度增大而逐渐升高，由右侧荧光照可知加ClO-离子之前无荧光，加入ClO-离子之后呈现绿色荧光；如图13所示，在荧光光谱中，410nm处荧光强度随ClO-离子浓度增大而增强，由日光照可知，加ClO-离子之前溶液为黄色，加入ClO-离子之后溶液变成绿色。当ClO-离子浓度在0~1×10-4mol·L-1范围内，溶液的荧光强度与ClO-离子浓度之间具有良好的线性关系，经线性拟合，一元一次方程的表达式为：y = 4.16011 x+213.7860，线性相关系数R2= 0.97147。根据国际纯粹和应用化学联合会（IUPAC）规定对各种光学分析方法，由公式：L=KSb/S，计算得到检出限为0.038 µmol·L-1，其中L为方法的最低检测浓度，Sb为空白多次（30次）测量的标准偏差，S为方法的灵敏度（即标准曲线的斜率），K取值为3。
实施例8
3a pH范围检测：用吸量管移取2.4 mL DMSO和0.6 mL pH值为1~14的缓冲液于光谱试管中混合均匀，然后分别加入30 μL的1.00×10-3mol·L-13a，测荧光光谱，然后再加入30 μL的1.00×10-2mol·L-1ClO-溶液，5min后，再次测荧光光谱。荧光的激发波长为360 nm，激发狭缝宽度为2.5 nm，发射狭缝宽度为5 nm。测紫外吸收光谱时先设置扫描参数，起点为230 nm，终点为600nm，速度为快，间隔为1 nm，然后用空白体系（纯水:DMSO=2:8）进行基线校正，排除体系本身对检测结果的影响，其次用吸量管移取2.4 mL DMSO和0.6mL pH值为1~14的缓冲液于光谱试管中混合均匀。然后在比色皿中加入30 μL的1.00×10-3mol·L-13a，测紫外光谱，然后加入30 μL的1.00×10-2mol·L-1的ClO-水溶液，5min后，再次测紫外光谱。
为了探究缓冲溶液pH值是否会影响3a对ClO-离子的响应并且判断其检测范围，本申请在不同的pH环境中检测了3a对ClO-离子的响应情况。如图14所示，紫外吸收光谱及荧光光谱都表明在pH从3~10之间3a对ClO-离子的响应具有良好的稳定性，因此可以证明3a可以在生理环境下检测ClO-离子。
实施例9
3a粘度检测：提前配置体积比PBS：甘油=9:1到PBS：甘油=0:10的3 mL体系于比色皿中，依次加入30 μL 1.00×10-3mol·L-13a储备液，分别测荧光光谱。荧光的激发波长为360 nm，狭缝宽度为5 nm，发射狭缝宽度为5 nm。
由图15所示，随着甘油比例的增大，在550nm处新产生一个峰，并且随着甘油浓度越来越大，体系粘度越来越大，荧光强度也越来学大。荧光强度增加了3.5倍。可见3a不仅能够特异性识别次氯酸，还能够实现对体系浓度的实时监测。
本申请以6-甲氧基-1-四氢萘酮为原料，设计路线，合成一种中间体，然后分别与氰乙酸乙酯、丙二腈、苯并噻唑-2-乙腈反应得到一系列以C=N键为响应基团的荧光探针3a、3b、3c。研究结果表明，3a对ClO-离子有明显的响应，展现出良好的“裸眼”比色识别能力，并且通过紫外-可见分光光度计、荧光分光光度计测试仪器，对3a的离子选择性和3a对ClO-响应的浓度梯度、pH范围、受粘度的影响进行了检测。通过检测结果，我们可以得到：3a与ClO-离子之间具有良好的选择性，较高的灵敏度（反应在5 min内反应达到稳定），检出限达到0.038 µmol·L-1，pH适用范围广（3~10之间），可以在生理环境下检测ClO-离子。同时还可以用于实时监测体系的粘度。有望应用于实际，为深入探究次氯酸在体内的生理学及病理学意义和体系粘度检测，提供一种有效的手段。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一类含氮荧光染料，其特征在于，该荧光染料的结构式如3a所示：
。
2.权利要求1所述含氮荧光染料的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
化合物1与三氯氧磷在DMF中反应得到化合物2；化合物2与氰乙酸乙酯在乙醇中以哌啶为催化剂进行反应得到3a，化合物1、化合物2、3a的化学式如下：
。
3.根据权利要求2所述含氮荧光染料的合成方法，其特征在于，3a的制备过程具体为：将化合物2和氰乙酸乙酯加入无水乙醇中，滴加哌啶，常温搅拌反应完全，用冰乙酸洗涤过滤，干燥，柱层析即可得3a，化合物2和氰乙酸乙酯的摩尔比为1:1~1.5。
4.权利要求1所述的含氮荧光染料在制备荧光检测剂中的应用。
5.权利要求1所述的含氮荧光染料以非疾病的诊断为目的在次氯酸荧光检测中的应用。
6.权利要求1所述的含氮荧光染料在监测由PBS和甘油组成的溶剂体系中粘度的应用。
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| WO2023288109A1 (en) * | 2021-07-15 | 2023-01-19 | Amydis, Inc. | N-heterocyclyl substituted 2-cyano-3-(naphthalen-2-yl)acrylamide derivatives as fluorophors for detection of amyloid and amyloid-like proteins for diagnosis of neurodegenerative disorders |
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