CN108484479A - 一种咔唑基双光子荧光探针及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种咔唑基双光子荧光探针及其制备方法和用途，其中咔唑基双光子荧光探针是以咔唑为母体，其结构式如下：本发明双光子荧光探针分子在半胱氨酸(Cys)与其他干扰试剂共存的体系中，表现出专一性响应和高的灵敏度。细胞毒性测试表明该探针对于细胞几乎没有什么毒副作用，此外，双光子共聚焦荧光显微成像实验表明该荧光染料Lyso‑DCHO对MCF‑7细胞渗透性好，可以有效定位细胞中的溶酶体(定位系数分别为0.90)，适用于可视化检测细胞溶酶体内的Cys。

Description

一种咔唑基双光子荧光探针及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种咔唑基双光子荧光探针及其制备方法和用途，以实现双光子共聚焦成像可视化检测细胞溶酶体内的Cys，具有选择性高、灵敏度高、检出限低的优点。
背景技术
氨基酸是构成生物体蛋白质并与生命活动有关的最基本的物质，与生物的生命活动有着密切的关系。其中半胱氨酸(Cys)，作为人体必须的氨基酸之一，是参与蛋白质合成的20种氨基酸中的一种，同时也是构建重要的谷胱甘肽的三个氨基酸之一。并且Cys在许多关键的细胞功能中起重要作用。例如，蛋白质合成，解毒和代谢等。溶酶体是真核细胞中一个酸性的细胞器，在细胞内可以起到消化、防御和调节激素分泌的作用。因此，监测细胞溶酶体中的Cys水平在生物医学研究和诊断中起着重要作用。
荧光化学探针由于具有灵敏度高、选择性好、易合成、廉价以及良好的生物应用等特点，已成为生命科学和环境科学中主要的检测工具。目前，大部分检测细胞中Cys的荧光探针均为单光子荧光探针，单光子荧光探针一般具有自荧光干扰大，激发波长小导致对细胞的光毒性大，容易发生荧光自淬灭等缺点。与单光子荧光探针相比，双光子荧光探针具有很多明显的优点，如：细胞光毒性小，不会引起荧光自淬灭，时间空间分辨率高，深的组织渗透。因而双光子荧光探针已经作为科学家们研究的一个重要课题。咔唑作为一种经典的荧光团，不仅具有大的共轭体系和共平面性能，而且具有良好的光稳定性、低毒性。以咔唑为荧光团的单光子荧光探针已经被很多文献所报道，但是作为双光子荧光探针的文献报道相对较少。
发明内容
本发明旨在提供一种咔唑基双光子荧光探针及其制备方法和用途。所要解决的技术问题是通过分子设计得到一种合适的荧光探针结构，以实现双光子共聚焦成像可视化检测细胞溶酶体内的Cys。本发明双光子荧光探针具有选择性高、灵敏度高、检出限低的优点，细胞毒性测试表明本发明荧光探针对细胞几乎没有毒性作用。
本发明咔唑基双光子荧光探针，简记为Lyso-DCHO，是以咔唑为母体，其结构式如下：
本发明咔唑基双光子荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
步骤1：中间体1的合成
将KOH(2.0g，35.8mmol)、KI(0.4g，2.39mmol)和1,4-二溴丁烷(7.73g，35.8mmol)的混合物加热至60℃，反应1小时后缓慢加入3,6-二碘代咔唑(10g，23.9mmol)，继续加热回流反应12小时；反应结束后冷却至室温，加入200mL H2O，用二氯甲烷(100mL×2)萃取混合物，将有机相蒸发，得到粗残余物，通过柱色谱法(石油/二氯甲烷＝10：1作为洗脱剂)纯化，得到中间体1，6.8g，产率为51.4％。
步骤2：中间体2的合成
将中间体1(1g，1.8mmol)、4-乙炔苯甲醛(0.7g，5.4mmol)、Pd2(PPh 3)2Cl2(5.1mg，0.007mmol)、CuI(2.7mg，0.014mmol)和Et3N(5mL)在无水和无氧条件下于30℃搅拌反应12小时，反应结束后冷却至室温，将沉淀滤出并浓缩，得到粗产物，通过柱色谱(石油/二氯甲烷＝4:1作为洗脱剂)纯化，得到中间体2，0.65g，产率为64.5％。
步骤3：Lyso-DCHO的合成
在氮气保护下，将中间体2(1g，1.8mmol)、KOH(0.061g，1.08mmol)、KI(0.18g，1.08mmol)和THF(10mL)的混合物加热至70℃，反应1小时后加入吗啉(6mL)，继续加热回流反应36小时，反应结束后冷却至室温，过滤，蒸发滤液，得到粗产物，通过柱色谱法(石油醚/二氯甲烷/乙酸乙酯＝1:1:2作为洗脱剂)纯化，得到淡黄色固体Lyso-DCHO，0.47g，产率为46.5％。
本发明Lyso-DCHO的合成过程如下：
本发明咔唑基双光子荧光探针的用途，是在定性检测细胞溶酶体内的Cys时作为检测试剂的应用。具体检测方法如下：
将本发明双光子荧光探针溶于DMSO中制得1mM的母液，取100μL的该母液于10mL容量瓶中，再用DMSO:PBS(v/v)＝1:1的溶剂定容，配制成10μM的检测试剂。检测试剂分别在313nm和373nm有吸收峰；随着Cys的加入，Lyso-DCHO位于373nm的吸收峰逐渐降低，且在313nm的吸收峰逐渐升高，当Cys加入4.5倍当量时313nm的吸光度达到饱和(图2)。10μM检测试剂加入8倍当量的其他氨基酸、各种阴离子和金属阳离子作用20min后(图3a)，检测350-700nm范围内的荧光光谱变化，可以看出Lyso-DCHO仅对Cys有明显的荧光变化，具有专一性响应；当随着Cys(0-60μM)的不断加入，可以观察到521nm处的荧光发射峰强度逐渐减弱，且402nm处的荧光逐渐增强。在加入4.5倍当量的Cys后，402nm处的荧光强度趋于饱和(图3b)。10μM检测试剂在加入Cys的浓度范围为0-5μM时，其荧光强度与Cys的浓度之间有很好的线性关系(R＝3δ/k)，检测浓度低至99nM(图4)。
本发明双光子荧光探针结构简单，易于合成。本发明双光子荧光探针符合ICT机理并与Cys有明确的作用位点，其中咔唑部分作为供体(D)，其末端具有两个相同的接受单元(A)。在加入Cys后，会与探针结构中的两个醛基发生化学反应生成Lyso-DCHO-Cys(图1)，反应前后电子云密度分布发生变化，荧光和紫外吸收性质也随之改变。在紫外灯下，肉眼就可以看出其荧光变化，荧光颜色从绿色变成蓝色光，该方法操作简单，快速灵敏。本发明双光子荧光探针对Cys具有专一性荧光响应，灵敏度高，检出限低。
附图说明
图1是本发明荧光探针分子Lyso-DCHO与Cys反应机理图。
图2是10μM探针加入Cys(0-60μM)的紫外滴定光谱图，其插图是紫外吸收峰强度比值(A313/A373)变化与Cys浓度的关系。
图3是10μM探针加入8倍当量的其他氨基酸、各种阴离子和金属阳离子作用20min后的荧光选择性谱图(3a)；10μM探针加入Cys(0-60μM)的荧光滴定光谱图(3b)，3b插图是荧光发射峰强度比值(I402/I521)变化与Cys浓度的关系。
图4是10μM探针在加入Cys(0-5μM)后的荧光强度与浓度的线性关系图。
图5是探针Lyso-DCHO加入Cys前后的双光子有效吸收截面。
图6是在不同含量(0μM、10μM、20μM、30μM)的探针分子作用下的MCF-7细胞存活率图。
图7是10μM探针分子在MCF-7细胞中加入60μM的Cys后的细胞溶酶体定位成像。设置探针分子Lyso-DCHO为绿色通道(λem＝500-540nm,λex＝720nm)；设置商品化线粒体染色剂LysoTracker Red FM为红色通道(λem＝580-600nm,λex＝579nm)。其中图a，b分别为绿色通道和红色通道下的荧光共聚焦成像。图c是MCF-7细胞的明场，图d是a、b、c的叠加，图e是图d中单个细胞的荧光强度剖面图，图f是Lyso-DCHO和LysoTracker Red FM强度的相关性分布图，重叠系数为0.90。
图8是10μM探针分子在MCF-7细胞(经1.0mM NEM预处理30min，NEM是硫醇清除剂)中加入60μM的Cys前后的双光子共聚焦细胞成像。在720nm激发下，蓝色通道中荧光发射收集范围420-460nm，绿色通道中荧光发射收集范围是500-540nm。图A是只加10μM探针Lyso-DCHO的细胞成像，图B是加探针10μM Lyso-DCHO和60μM Cys的细胞成像。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明。
实施例1：荧光探针分子Lyso-DCHO的合成
1、中间体1的合成
将KOH(2.0g，35.8mmol)、KI(0.4g，2.39mmol)和1,4-二溴丁烷(7.73g，35.8mmol)的混合物加热至60℃，反应1小时后缓慢加入3,6-二碘代咔唑(10g，23.9mmol)，继续加热回流反应12小时；反应结束后冷却至室温，加入200mL H2O，用二氯甲烷(100mL×2)萃取混合物，将有机相蒸发，得到粗残余物，通过柱色谱法(石油/二氯甲烷＝10：1作为洗脱剂)纯化，得到中间体1，6.8g，产率为51.4％。
2、中间体2的合成
将中间体1(1g，1.8mmol)、4-乙炔苯甲醛(0.7g，5.4mmol)、Pd2(PPh 3)2Cl2(5.1mg，0.007mmol)、CuI(2.7mg，0.014mmol)和Et3N(5mL)在无水和无氧条件下于30℃搅拌反应12小时，反应结束后冷却至室温，将沉淀滤出并浓缩，得到粗产物，通过柱色谱(石油/二氯甲烷＝4:1作为洗脱剂)纯化，得到中间体2，0.65g，产率为64.5％。
3、Lyso-DCHO的合成
在氮气保护下，将中间体2(1g，1.8mmol)、KOH(0.061g，1.08mmol)、KI(0.18g，1.08mmol)和THF(10mL)的混合物加热至70℃，反应1小时后加入吗啉(6mL)，继续加热回流反应36小时，反应结束后冷却至室温，过滤，蒸发滤液，得到粗产物，通过柱色谱法(石油醚/二氯甲烷/乙酸乙酯＝1:1:2作为洗脱剂)纯化，得到淡黄色固体Lyso-DCHO，0.47g，产率为46.5％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm):δ10.05(s,2H),8.57(s,2H),7.98(d,J＝7.9Hz,4H),7.79(m,6H),7.74(d,J＝8.5Hz,2H),4.48(t,J＝6.9Hz,2H),3.52(t,J＝4.2Hz,4H),2.27(t,J＝6.5Hz,6H),1.85(m,2H),1.48(m,2H).13C NMR(100MHz,CDCl3,ppm):δ191.41,140.78,135.13,131.90,130.16,130.05,129.64,124.59,122.57,113.40,109.23,94.91,87.52,66.88,58.15,53.64,43.18,26.67,24.03.
实施例2：荧光探针分子的光谱测试
将本发明双光子荧光探针溶于DMSO中制得1mM的母液，取100μL的该母液于10mL容量瓶中，再用DMSO:PBS(v/v)＝1:1的溶剂定容，配制成10μM的检测试剂。检测试剂分别在313nm和373nm有吸收峰；随着Cys的加入，Lyso-DCHO位于373nm的吸收峰逐渐降低，且在313nm的吸收峰逐渐升高，当Cys加入4.5倍当量时313nm的吸光度达到饱和(图2)。10μM检测试剂加入8倍当量的其他氨基酸、各种阴离子和金属阳离子作用20min后(图3a)，检测350-700nm范围内的荧光光谱变化，可以看出Lyso-DCHO仅对Cys有明显的荧光变化，具有专一性响应；当随着Cys(0-60μM)的不断加入，可以观察到521nm处的荧光发射峰强度逐渐减弱，且402nm处的荧光逐渐增强。在加入4.5倍当量的Cys后，402nm处的荧光强度趋于饱和(图3b)。10μM检测试剂在加入Cys的浓度范围为0-5μM时，其荧光强度与Cys的浓度之间有很好的线性关系(R＝3δ/k)，检测浓度低至99nM(图4)。
实施例3：荧光探针分子加入Cys前后的双光子性能测试
利用双光子诱导荧光测量技术，测试荧光探针分子(Lyso-DCHO)的双光子有效吸收截面，Lyso-DCHO在760nm处具有58GM的最大双光子有效吸收截面，并且在加入Cys后在720nm处最大值变为45GM。说明探针可以应用于双光子共聚焦成像。
实施例4：细胞毒性测试
MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)实验是根据已报道的文章操作进行细胞毒性测试。分别在同一批细胞中加入0，5，10，15μM的荧光探针分子，条件是在37℃、含5％CO2的细胞培养箱中孵育24小时，根据细胞存活度的公式：细胞存活率％＝OD570(样品)/OD570(对照组)×100，可算得细胞存活率(图6)。从图6中我们可以看出，浓度为10μM时，细胞存活率有96％左右，探针浓度达到20μM时，细胞存活率还有约92％，当探针浓度达到30μM时，细胞存活率还有约89％，说明了本发明荧光探针分子对细胞无明显毒性作用，因此可以用来检测细胞中溶酶体内的Cys。
实施例5：细胞溶酶体定位测试
MCF-7细胞由DEME(invitrogen)培养液培养，成像前一天，MCF-7细胞放于激光共聚焦皿中，成像时10μM的荧光探针Lyso-DCHO的DMSO溶液加入MCF-7细胞并置于37℃、含5％CO2的细胞培养箱中孵育0.5小时，用中性的PBS缓冲溶液洗涤3次后，再往培养皿中加入0.5μM商品化溶酶体染色剂LysoTracker Red FM溶液继续孵育0.5小时，用中性的PBS缓冲溶液洗涤3次后，用双光子荧光共聚焦成像，设置探针分子Lyso-DCHO为绿色通道(λem＝500-540nm,λex＝720nm)；设置商品化线粒体染色剂LysoTracker Red FM为红色通道(λem＝580-600nm,λex＝579nm)。其中图a，b分别为绿色通道和红色通道下的荧光共聚焦成像。图c是MCF-7细胞的明场，图d是a、b、c的叠加，图e是图d中单个细胞的荧光强度剖面图，图f是Lyso-DCHO和LysoTracker Red FM强度的相关性分布图，重叠系数为0.90。从图7可以看出，Lyso-DCHO绝大多数定位在溶酶体内，可用于可视化检测细胞溶酶体内Cys。
实施例6：细胞成像测试
MCF-7细胞由DEME(invitrogen)培养液培养，成像前一天，MCF-7细胞放于玻底培养皿中，成像时MCF-7细胞和1.0mM NEM于37℃、含5％CO2的细胞培养箱中孵育0.5小时，之后加入10μM的荧光探针Lyso-DCHO的DMSO溶液于37℃、含5％CO2的细胞培养箱中孵育0.5小时，用中性的PBS缓冲溶液或培养液洗涤3次，用双光子荧光共聚焦成像，在720nm激发下，蓝色通道中荧光发射收集范围420-460nm，绿色通道中荧光发射收集范围是500-540nm(图8A)。向上述含荧光探针的细胞培养液中加入(60μM)Cys，在37℃、含5％CO2的细胞培养箱中孵育0.5小时，用中性的PBS缓冲溶液或培养液洗涤3次，再进行双光子荧光共聚焦成像，蓝色通道内荧光明显增强，绿色通道内荧光减弱(图8B)。从图8中可以看出，探针可用于细胞内Cys的双光子荧光成像。

Claims (6)

1.一种咔唑基双光子荧光探针，是以咔唑为母体，其特征在于其结构式如下：
2.一种权利要求1所述的咔唑基双光子荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1：中间体1的合成
将KOH 35.8mmol、KI 2.39mmol和1,4-二溴丁烷35.8mmol的混合物加热至60℃，反应1小时后缓慢加入3,6-二碘代咔唑23.9mmol，继续加热回流反应12小时；反应结束后冷却至室温，加入H2O，用二氯甲烷萃取混合物，将有机相蒸发，得到粗残余物，通过柱色谱法纯化，得到中间体1；
步骤2：中间体2的合成
将中间体1 1.8mmol、4-乙炔苯甲醛5.4mmol、Pd2(PPh 3)2Cl2 0.007mmol、CuI0.014mmol和Et3N 5mL在无水和无氧条件下于30℃搅拌反应12小时，反应结束后冷却至室温，将沉淀滤出并浓缩，得到粗产物，通过柱色谱纯化，得到中间体2；
步骤3：Lyso-DCHO的合成
在氮气保护下，将中间体2 1.8mmol、KOH 1.08mmol、KI 1.08mmol和THF的混合物加热至70℃，反应1小时后加入吗啉6mL，继续加热回流反应36小时，反应结束后冷却至室温，过滤，蒸发滤液，得到粗产物，通过柱色谱法纯化，得到淡黄色固体Lyso-DCHO。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
步骤1中，柱色谱法纯化时的洗脱液为石油和二氯甲烷按体积比10：1的比例混合得到。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
步骤2中，柱色谱法纯化时的洗脱液为石油和二氯甲烷按体积比4：1的比例混合得到。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：
步骤3中，柱色谱法纯化时的洗脱液为石油醚、二氯甲烷和乙酸乙酯按体积比1:1:2的比例混合得到。
6.一种权利要求1所述的咔唑基双光子荧光探针的用途，其特征在于：是在定性检测细胞溶酶体内的Cys时作为检测试剂的应用。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110483573A (zh) * 2019-09-12 2019-11-22 安徽大学 一种线粒体靶向次氯酸比率型双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN111995617A (zh) * 2020-09-21 2020-11-27 安徽大学 同型半胱氨酸荧光探针及其制备方法和用途
CN113429335A (zh) * 2021-06-25 2021-09-24 安徽大学 一种溶酶体靶向的双响应双光子荧光探针及其制备方法和用途

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102127055A (zh) * 2010-11-25 2011-07-20 山东大学 一种单、双光子半胱氨酸荧光探针及其应用
CN103614135A (zh) * 2013-11-29 2014-03-05 安徽大学 一种双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN106977450A (zh) * 2017-04-28 2017-07-25 山西大学 一种萘基双光子荧光探针及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102127055A (zh) * 2010-11-25 2011-07-20 山东大学 一种单、双光子半胱氨酸荧光探针及其应用
CN103614135A (zh) * 2013-11-29 2014-03-05 安徽大学 一种双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN106977450A (zh) * 2017-04-28 2017-07-25 山西大学 一种萘基双光子荧光探针及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孟芳芳: "氨基酸荧光探针的设计、合成及生物应用研究", 《济南大学硕士学位论文》 *
黄池宝，等: "双光子荧光探针", 《化学进展》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110483573A (zh) * 2019-09-12 2019-11-22 安徽大学 一种线粒体靶向次氯酸比率型双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN110483573B (zh) * 2019-09-12 2021-10-08 安徽大学 一种线粒体靶向次氯酸比率型双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN111995617A (zh) * 2020-09-21 2020-11-27 安徽大学 同型半胱氨酸荧光探针及其制备方法和用途
CN111995617B (zh) * 2020-09-21 2021-05-25 安徽大学 同型半胱氨酸荧光探针及其制备方法和用途
CN113429335A (zh) * 2021-06-25 2021-09-24 安徽大学 一种溶酶体靶向的双响应双光子荧光探针及其制备方法和用途
CN113429335B (zh) * 2021-06-25 2023-05-16 安徽大学 一种溶酶体靶向的双响应双光子荧光探针及其制备方法和用途

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