CN116162575A - 一种枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一种枯草芽孢杆菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116162575A
CN116162575A CN202310221166.5A CN202310221166A CN116162575A CN 116162575 A CN116162575 A CN 116162575A CN 202310221166 A CN202310221166 A CN 202310221166A CN 116162575 A CN116162575 A CN 116162575A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacillus subtilis
fermentation
tobacco
concentrated solution
tobacco sheet
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310221166.5A
Other languages
English (en)
Inventor
张登
严映杰
李德贵
李新生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Tobacco Group Taicang Haiyan Tobacco Sheet Co ltd
Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Tobacco Group Taicang Haiyan Tobacco Sheet Co ltd
Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Tobacco Group Taicang Haiyan Tobacco Sheet Co ltd, Shanghai Tobacco Group Co Ltd filed Critical Shanghai Tobacco Group Taicang Haiyan Tobacco Sheet Co ltd
Priority to CN202310221166.5A priority Critical patent/CN116162575A/zh
Publication of CN116162575A publication Critical patent/CN116162575A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
    • A24B15/18—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
    • A24B15/20—Biochemical treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C12R2001/125—Bacillus subtilis ; Hay bacillus; Grass bacillus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本申请公开了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B‑NS‑7，保藏编号为CGMCC No.23716。本申请还公开了一种液体菌剂，所述液体菌剂包括上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B‑NS‑7。本申请还公开了上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B‑NS‑7或上述的液体菌剂在烟草薄片香气提升、活性酶增产中的应用。本申请还公开了一种提升烟草薄片浓缩液香气的方法，将上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B‑NS‑7的种子液或上述的液体菌剂接种至烟草薄片浓缩液中，发酵。

Description

一种枯草芽孢杆菌及其应用
技术领域
本说明书涉及烟草生产技术领域，特别涉及一种对烟草薄片浓缩液具有香气提升的枯草芽孢杆菌及其应用。
背景技术
烟草薄片又称重组烟叶、再造烟叶。目前生产烟草薄片的工艺主要包括造纸法、辊压法和稠浆法，其中造纸法应用最广泛。造纸法烟草薄片生产过程中利用水浸提萃取卷烟生产过程废弃物(烟梗、烟片末)及部分低档次烟叶得到萃取液，再经浓缩制备得到浓缩液，涂布于不溶物片基上，进一步烘干、分割制成烟草薄片。该制造工艺很大程度上只是原材料物理性质的改变，原料的固有化学性质并未完全改变。燃吸时烟草中的大分子化合物如淀粉、蛋白质、果胶对烟叶品质的影响最大。如淀粉含量过高导致在燃吸时产生焦糊气味，对烟气产生不良影响，直接影响卷烟香气质及吸味；蛋白质含量过高导致在燃烧时发出难闻气味，而且燃烧性能不良，使烟气中有害成分如HCN(氰化氢)等含量增加，造成品味苦、涩、辛辣，影响烟草薄片的香味品质和安全性。因此研究有效提高烟草薄片吸食品质的方法非常有意义和价值。
烟草薄片原料中存在大量微生物可通过生长繁殖产生多种具有生物活性的酶，这些酶可以加速淀粉、蛋白质、果胶等生物大分子物质的降解，同时会促使部分有害物质或其前体分解，并通过特定微生物的吸收、利用及转化形成一系列有益的小分子化合物，从而使烟草化学成分发生改变，进而提升烟气品质。有研究表明，利用外加微生物菌剂处理烟草，如外加小球菌和芽孢杆菌可提高烟叶的内在品质，改善香气质量；利用黑曲霉或米曲霉制成的微生物菌剂处理废弃的烟梗大大提升了挥发物质的含量；利用增香菌和微生物酶混合发酵，形成的烟草发酵增质剂对烟叶化学成分产生明显正面影响。另外还有研究显示，通过在烟草中对高产淀粉酶、蛋白酶、果胶酶和纤维素酶微生物的筛选，得到复合酶活性高且有较强硝酸盐、亚硝酸盐还原能力的细菌，该微生物能在较短时间内降低烟草中淀粉、蛋白质、果胶及纤维素大分子物质的含量，从而使发酵处理后的烟丝刺激性和杂气明显降低。因此，近些年对于微生物降解烟草薄片有害物质，提升烟草薄片香气的研究越来越多，筛选烟草薄片中的有益微生物具有重要意义。
发明内容
本申请提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7，保藏编号为CGMCCNo.23716。
本申请还提供了一种液体菌剂，所述液体菌剂包括上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7。
本申请还提供了上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7或上述的液体菌剂在烟草薄片香气提升、活性酶增产中的应用。
本申请还提供了一种提升烟草薄片浓缩液香气的方法，将上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7的种子液或上述的液体菌剂接种至烟草薄片浓缩液中，发酵。
本申请实施例带来的有益效果包括但不限于：本申请从公司烟草薄片生产线浓缩液中筛选出有益功能菌株枯草芽孢杆菌(B.subtilis)B-NS-7，利用该菌株对浓缩液进行发酵处理后，降低了浓缩液中有害前体物如淀粉、蛋白质、果胶等生物大分子的含量，使酮类、醛类、酯类等香气成分含量和种类得到明显增加，提高了造纸法烟草薄片的内在品质。与其他现有增香技术方法相比，该生物增香法具有技术路线简单、工艺易控制、成本低、对人体安全的优点。
附图说明
本申请将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例将通过附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，其中：
图1为枯草芽孢杆菌B-NS-7菌株的革兰氏染色镜检照片；
图2为枯草芽孢杆菌B-NS-7菌分子生物学鉴定结果；
图3为烟草薄片浓缩液采用枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵后，香气峰值时的气相-质谱图；
图4为烟草薄片浓缩液采用枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵后，香气峰值时的香味物质增加种类和含量；
图5为浓缩液采用枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵后制成的烟草薄片样品与常规烟草薄片样品的感官质量评价比较结果。
具体实施方式
为了更清楚地说明本说明书实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本说明书的一些示例或实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图将本说明书应用于其它类似情景。除非从语言环境中显而易见或另做说明，图中相同标号代表相同结构或操作。
如本说明书和权利要求书中所示，除非上下文明确提示例外情形，“一”、“一个”、“一种”和/或“该”等词并非特指单数，也可包括复数。一般说来，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其它的步骤或元素。
香气值作为烟草制品评吸的一个重要价值指标，如何提高烟草制品的香气质量是当前烟草研究的一个重要领域。众多研究发现，在烟草制品中加入微生物，利用微生物在烘烤、陈化过程中，微生物在酶促作用、化学作用协同作用下，可产生一些致香成分，增加烟草制品中的香气量和香气值，整体提高烟草制品香气质量。
芽孢杆菌属(Bacillus)细菌在烟草薄片生产线各物料样品中均有分布，该菌属微生物不仅具有耐高温的特点，很多菌种还有很强的酶分泌能力，如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)等能分泌蛋白酶、淀粉酶、果胶酶到胞外，降解萃取液、浓缩液中的蛋白质、淀粉、果胶等生物大分子物质而促进产香。
本申请提供一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7，保藏编号为CGMCCNo.23716。
本申请中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7的菌落呈乳白色，半透明，圆形，边缘平整，表面湿润光滑，为革兰氏阳性菌。
本申请还提供一种液体菌剂，所述液体菌剂包括上述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)B-NS-7。在一些实施例中，枯草芽孢杆菌B-NS-7菌株可以在LB培养基中于33～37℃、pH7.0、180～220r/min条件下培养12～24h，所得菌液即为上述的液体菌剂。
在一些实施例中，枯草芽孢杆菌B-NS-7菌株可以接种于100mL的LB培养基，于37℃、pH7.0、200r/min条件下培养12h，所得菌液即为上述的液体菌剂。在一些实施例中，所述液体菌剂可以用于烟草薄片浓缩液发酵。在一些实施例中，LB培养基配方可以为(每500mL)：酵母粉2.5g，蛋白胨5g，葡萄糖5g，灭菌水500mL，NaOH调节pH至7.0。在一些实施例中，LB培养基需灭菌后使用。
本申请还提供上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7或上述的液体菌剂在烟草薄片香气提升、活性酶增产中的应用。烟草薄片香味是评定其品质的重要指标。香气成分可对烟草薄片的香气量、香气质和香型产生重要影响。因此，最大限度的提升烟草薄片的香味是改善烟草薄片品质的核心。
在一些实施例中，所述香气成分可以包括酮类、醛类、酯类。在一些实施例中，所述酮类可以包括巨豆三烯酮、茄酮、4-氧代异佛尔酮中至少一种；在一些实施例中，所述醛类可以为苯甲醛；在一些实施例中，所述酯类可以包括二氢猕猴桃内酯、棕榈酸甲酯、乙酸苏合香酯中至少一种。在一些实施例中，所述香气成分还可以包括二烯盐碱、新植二烯。
在一些实施例中，所述活性酶可以包括淀粉酶、蛋白酶中至少一种。在一些实施例中，所述活性酶还可以包括果胶酶和纤维素酶。这些活性酶降低烟草中淀粉、蛋白质、果胶及纤维素大分子物质的含量，从而使发酵处理后的烟丝刺激性和杂气明显降低。
本申请还提供一种提升烟草薄片浓缩液香气的方法，将上述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7的种子液或上述的液体菌剂接种至烟草薄片浓缩液中，发酵。
在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的0.5～2.5％；在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的0.7～2.3％；在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的0.9～2.1％；在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的1.1～1.9％；在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的1.3～1.7％；在一些实施例中，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的1.1～1.5％；在一些实施例中，优选的，所述种子液或液体菌剂的接种体积可以为烟草薄片浓缩液体积的1％。
在一些实施例中，所述发酵的温度可以为24～40℃；在一些实施例中，所述发酵的温度可以为26～38℃；在一些实施例中，所述发酵的温度可以为28～36℃；在一些实施例中，所述发酵的温度可以为30～34℃；在一些实施例中，所述发酵的温度可以为32～34℃；在一些实施例中，优选的，所述发酵的温度可以为37℃。
在一些实施例中，所述发酵的时间可以为12～48h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为14～46h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为16～44h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为18～42h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为20～40h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为22～38h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为24～36h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为26～34h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为28～32h；在一些实施例中，所述发酵的时间可以为28～30h；在一些实施例中，优选的，所述发酵的时间可以为24h。
在一些实施例中，所述发酵的转速可以为100～200r/min。在一些实施例中，所述发酵的转速可以为110～190r/min。在一些实施例中，所述发酵的转速可以为120～180r/min。在一些实施例中，所述发酵的转速可以为130～170r/min。在一些实施例中，所述发酵的转速可以为140～160r/min。在一些实施例中，所述发酵的转速可以为140～150r/min。在一些实施例中，优选的，所述发酵的转速可以为180r/min。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂公司购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
实施例1—具有多重降解效果的有益功能菌株筛选
1、细菌的分离纯化：将烟梗、烟碎片分别取15.0g，研磨成粉末，放入无菌水中，伴随220r/min均匀摇动下浸泡24-48h，然后取1mL上述上清液和烟草薄片浓缩液，分别用无菌水进行10-1、10-2、10-3、10-4和10-5梯度稀释，取原液和各梯度稀释液0.1mL涂布接种于LB培养基中，放在37℃下培养1d。挑出菌落形态不同的各菌落，再接种于琼脂培养基上，反复划线试验，直至得到明显的单一菌落。
2、细菌的初筛：将上述分离纯化出的细菌点接种在不同种类的筛选培养基平板上，观察透明圈的有无及大小，挑选出可同时降解淀粉、蛋白质的细菌进行分离纯化和保存。
筛选培养基为：
(1)淀粉培养基：可溶性淀粉15.0g，蛋白胨15.0g，牛肉膏10.0g，NaCl 10.0g，琼脂20.0g，水1000mL，pH7.0，115℃灭菌30min。
(2)蛋白质培养基：牛肉膏5g，脱脂奶粉12.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂20.0g，水1000mL，pH7.0，115℃灭菌30min。
测量水解圈直径和菌落直径，计算HC值。HC值＝酶水解圈直径/菌落直径。HC值越大，菌株产酶能力越大。经过HC值比较，得到产酶能力较好的菌株B-NS-1、B-NS-5、B-NS-6、B-NS-7、B-NS-9、B-NS-10及B-YM-6。
表1蛋白酶与淀粉酶HC值
Figure BDA0004116711180000051
Figure BDA0004116711180000061
注：“-”表示无水解圈
3、细菌的复筛
(1)发酵浓缩液：取450mL浓缩液于量筒内，搅拌均匀后，取出50mL浓缩液于锥形瓶内，作为空白组(原液)；余下的400mL浓缩液接种质量分数1％的菌株，放置在30℃水浴锅内活化2h，再平均分装到8个锥形瓶内，放置在恒温摇床内，设置温度30℃，转速120r/min，发酵时间为24、48和72h作为实验组。
(2)通过顶空固相微萃取气质联用仪，对实验组和空白组进行香气成分测定。加入内标物100μL浓度为500mg/L乙酸苯乙醋的乙醇溶液，固相微萃取处理样品。然后进行气相色谱-质谱分析。气相色谱-质谱条件如下所述，色谱条件/色谱柱：HP-5MS(60m×0.25mm×0.25μm)；载气：高纯氦气；进样量：1μL；进样口温度：230℃；流速：1.0mL/min；分流比：10:1；溶剂延迟：10min；升温程序：起始温度40℃，以6℃/min升至140℃，保持2min，再以3℃/min升至260℃，再以6℃/min升至280℃。质谱条件/接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；离子化方式：EI；电子能量：70eV；质量扫描范围：m/z 35-400。
(3)通过香气成分的测定表明，B-NS-7菌株(图1)(保藏号CGMCC No.23716)发酵浓缩液后香气成分提升幅度最为突出，通过分子生物学鉴定方法，采用菌株16S rRNA鉴定，其中正向引物27F序列为5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，反向引物1492R序列为5'-ACGGCTACCTTCTTACGACTT-3'，鉴定结果B-NS-7菌株为枯草芽孢杆菌，鉴定结果如图2所示，该菌株已于2021年11月30日在北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏号为CGMCC No.23716。枯草芽孢杆菌为食品安全级微生物，因此确定该菌株为最优有益功能菌株，后续进一步进行该菌株的发酵条件优化。
实施例2--采用枯草芽孢杆菌B-NS-7菌株制备烟草薄片浓缩液发酵用菌剂
将枯草芽孢杆菌B-NS-7菌株接种于100mL的LB培养基，于37℃、pH7.0、200r/min条件下培养12h后所得的菌液即为烟草薄片浓缩液发酵用菌剂。
实施例3--采用枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵烟草薄片浓缩液
(1)取100mL浓缩液于量筒内，搅拌均匀后，取出50mL浓缩液于锥形瓶内作为对照组，余下50mL的浓缩液按体积比1％接种上述制备的枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂，放置在37℃水浴锅内活化2h，然后放置在37℃恒温摇床内转速180r/min发酵24h后获得发酵的烟草薄片浓缩液。
(2)采用顶空固相微萃取-气质联用仪分别对未发酵浓缩液和发酵浓缩液进行香气成分测定。加入内标物100μL浓度为500mg/L乙酸苯乙醋的乙醇溶液，固相微萃取处理样品，继而进行气相色谱-质谱分析(图3)。气相色谱-质谱条件如下所述，色谱条件/色谱柱：HP-5MS(60m×0.25mm×0.25μm)；载气：高纯氦气；进样量：1μL；进样口温度：230℃；流速：1.0mL/min；分流比：10:1；溶剂延迟：10min；升温程序：起始温度40℃，以6℃/min升至140℃，保持2min，再以3℃/min升至260℃，再以6℃/min升至280℃。质谱条件/接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；离子化方式：EI；电子能量：70eV；质量扫描范围：m/z 35-400。
实施例4--枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵浓缩液的条件优化
(1)正交试验设计：选取影响枯草芽孢杆菌B-NS-7菌剂发酵能力的工艺条件作为正交试验的因素，同时确定水平选择合适的正交表后进行表头设计，将试验中所需要的因素安排到正交表各列中(表2)。根据正交表的设计原则和确定的因素与水平，正交表采用SPSS设计。生成的正交表一共有16种试验方案，采用的L16(44)，L代表正交，16代表试验次数，44代表4水平4因素。
表2优化发酵条件正交试验因素和水平
Figure BDA0004116711180000071
(2)浓缩液发酵：在确定好正交表的基础上，确定试验方案，保证方案分配平均、有效。其中，所述确定实验方案是指将选取正交表中每列中的每个水平数字换成该因素的实际水平值，即得到试验的具体方案(表3)。依据实施例3所述方法进行浓缩液发酵后的香气成分与含量测定，结果显示第14组的产香效果最明显(图4)，发酵条件为37℃，接种菌剂体积比2％，转速180r/min发酵24h。
(3)正交结果分析：由表3中R值可知各因素对发酵浓缩液的中性香味成分含量影响大小的顺序为A＞C＞B，即发酵温度对香味成分含量的影响最大，接种量次之，发酵时间的影响最小。浓缩液发酵的最佳条件是A4B2C1，即发酵温度为37℃，接种量体积比为1％，发酵时间为24h。
表3正交结果与分析
Figure BDA0004116711180000072
Figure BDA0004116711180000081
(4)发酵验证：为了确保实验结果的准确性，根据实验最优条件和正交计算最优条件进行发酵验证实验，每组实验进行三次平行，测定的香气含量取平均值。实际实验表明，最优条件发酵浓缩液平均增香幅度为46.3％，正交计算最优条件下发酵浓缩液平均增香幅度为53.8％，由此获得发酵浓缩液的最优条件：37℃，接种菌剂体积比1％，转速为180r/min发酵24h，且符合正交分析计算所得结果。通过公司专家组评吸检验，发酵后的浓缩液制成的烟草薄片刺激性较小，香气质量有所提升，整体感官质量优于未发酵浓缩液制成的烟草薄片(图5)。
上文已对基本概念做了描述，显然，对于本领域技术人员来说，上述详细披露仅仅作为示例，而并不构成对本说明书的限定。虽然此处并没有明确说明，本领域技术人员可能会对本说明书进行各种修改、改进和修正。该类修改、改进和修正在本说明书中被建议，所以该类修改、改进、修正仍属于本说明书示范实施例的精神和范围。
同时，本说明书使用了特定词语来描述本说明书的实施例。如“一个实施例”、“一实施例”、和/或“一些实施例”意指与本说明书至少一个实施例相关的某一特征、结构或特点。因此，应强调并注意的是，本说明书中在不同位置两次或多次提及的“一实施例”或“一个实施例”或“一个替代性实施例”并不一定是指同一实施例。此外，本说明书的一个或多个实施例中的某些特征、结构或特点可以进行适当的组合。
一些实施例中使用了描述成分、属性数量的数字，应当理解的是，此类用于实施例描述的数字，在一些示例中使用了修饰词“大约”、“近似”或“大体上”来修饰。除非另外说明，“大约”、“近似”或“大体上”表明所述数字允许有±20％的变化。相应地，在一些实施例中，说明书和权利要求中使用的数值参数均为近似值，该近似值根据个别实施例所需特点可以发生改变。在一些实施例中，数值参数应考虑规定的有效数位并采用一般位数保留的方法。尽管本说明书一些实施例中用于确认其范围广度的数值域和参数为近似值，在具体实施例中，此类数值的设定在可行范围内尽可能精确。
最后，应当理解的是，本说明书中所述实施例仅用以说明本说明书实施例的原则。其他的变形也可能属于本说明书的范围。因此，作为示例而非限制，本说明书实施例的替代配置可视为与本说明书的教导一致。相应地，本说明书的实施例不仅限于本说明书明确介绍和描述的实施例。

Claims (10)

1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7，保藏编号为CGMCC No.23716。
2.一种液体菌剂，其特征在于，所述液体菌剂包括权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)B-NS-7。
3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7或权利要求2所述的液体菌剂在烟草薄片香气提升、活性酶增产中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述香气成分包括酮类、醛类、酯类。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述酮类包括巨豆三烯酮、茄酮、4-氧代异佛尔酮中至少一种；所述醛类为苯甲醛；所述酯类包括二氢猕猴桃内酯、棕榈酸甲酯、乙酸苏合香酯中至少一种。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述香气成分还包括二烯盐碱、新植二烯。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述活性酶包括淀粉酶、蛋白酶中至少一种。
8.一种提升烟草薄片浓缩液香气的方法，其特征在于，将权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B-NS-7的种子液或权利要求2所述的液体菌剂接种至烟草薄片浓缩液中，发酵。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下特征中的一项或几项：
所述种子液或液体菌剂的接种体积为烟草薄片浓缩液体积的0.5～2.5％；
所述发酵的温度为24～40℃；
所述发酵的时间为12～48h；
所述发酵的转速为100～200r/min。
10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法还包括以下特征中的一项或几项：
所述种子液或液体菌剂的接种体积为烟草薄片浓缩液体积的1％；
所述发酵的温度为37℃；
所述发酵的时间为24h；
所述发酵的转速为180r/min。
CN202310221166.5A 2023-03-09 2023-03-09 一种枯草芽孢杆菌及其应用 Pending CN116162575A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310221166.5A CN116162575A (zh) 2023-03-09 2023-03-09 一种枯草芽孢杆菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310221166.5A CN116162575A (zh) 2023-03-09 2023-03-09 一种枯草芽孢杆菌及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116162575A true CN116162575A (zh) 2023-05-26

Family

ID=86414640

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310221166.5A Pending CN116162575A (zh) 2023-03-09 2023-03-09 一种枯草芽孢杆菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116162575A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107488614B (zh) 用于降解烟叶中淀粉的xc-3菌株及其应用
CN112342168B (zh) 一株地衣芽孢杆菌及其促进酱油发酵增香的应用
CN111616403B (zh) 一种加速烟叶醇化及提升烟叶品质的生物制剂及其应用
CN111248409A (zh) 一种低盐豆瓣酱发酵方法
Yao et al. Screening of Cellulase-producing Bacteria and their Effect on the Chemical Composition and Aroma Quality Improvement of Cigar Wrapper Leaves.
CN109315829B (zh) 一种发酵碳化烟叶颗粒及其制备方法和应用
CN107916198B (zh) 一种有效抑制大曲中土味素形成的微生物菌剂
CN107354109B (zh) 一种用于烟叶快速发酵的赋香复合微生物制剂及其应用
CN103320352B (zh) 一种微生物菌株及其应用
CN112998304A (zh) 一种假秦艽焙制发酵香料的制备方法和应用
CN110564581B (zh) 一种传统固态食醋定向风味调控发酵技术及其应用
CN112760257A (zh) 一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum菌株YC21及其应用
CN109288124B (zh) 一种发酵碳化核桃壳颗粒及其制备方法和应用
CN108741208B (zh) 一株从再造烟叶浓缩液分离的增香菌及其应用
CN109136146B (zh) 一种烟草土壤戴氏菌及其分离方法和应用
CN108850267B (zh) 一种发酵碳化普洱茶颗粒及其制备方法和应用
CN109315830B (zh) 一种发酵碳化金银花颗粒及其制备方法和应用
CN116355801A (zh) 一株贝莱斯芽孢杆菌及其在腐乳发酵生产中的应用
CN116162575A (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其应用
CN113755384B (zh) 一株不动杆菌及其应用
CN112852667B (zh) 一种提高酱油风味物质含量的方法
CN115404180A (zh) 一种产香芽孢杆菌及其在烟草中的应用
CN111876349B (zh) 一株产聚赖氨酸的白色链霉菌及其应用
CN107760618B (zh) 利用洞穴芽球菌提升烟叶品质的方法
CN109288126B (zh) 一种发酵碳化树苔颗粒及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination