CN116158350A - 绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及中药材种植领域，具体公开了一种绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法。该绞股蓝组织培养基用作绞股蓝不定根的诱导培养基和/或继代培养基；包括复合植物生长调节剂，所述复合植物生长调节剂包括1.4‑1.6mg/L的6‑苄基氨基嘌呤和0.25‑0.35mg/L的萘乙酸。该绞股蓝不定根的培养方法采用上述绞股蓝组织培养基对选取的绞股蓝外植体进行诱导培养。本申请的绞股蓝不定根的培养方法可以在较短时间内得到大量的绞股蓝不定根，并且在继代培养过程中能够持续获得不定根，为后续的液体培养提供实验基础，也可以成为规模化生产的原料。
Description
技术领域
本申请涉及中药材种植领域，更具体地说，它涉及一种绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法。
背景技术
绞股蓝是一种具有重要经济价值的中药材，在历史上有广泛的用药记载，是除了五加科植物以外唯一含有人参皂苷类物质的植物。其既可以作为保健滋补品直接制成绞股蓝茶饮用，同时也是市面上许多治疗心脑血管疾病中成药的重要原料，如绞股蓝总苷片、冠心通等。绞股蓝受种植条件、地理气候等原因的限制，其栽培主要集中在陕西、福建等地。近年来，随着农村人口流失、农业生产人员老龄化等问题，绞股蓝的产量正在逐年下滑，而随着我国制药业的发展，人民群众对于健康生活的意愿不断升高，绞股蓝的农业栽培越来越难以满足市场的需求。除此之外，栽培绞股蓝需要投入大量的人力物力成本，且在种植过程过伴随着各种各样的病虫害问题，造成了农药残留以及种植成本高等问题。因此，开发一种低成本、可持续、有效成分含量高的绞股蓝资源开发方法就显得尤为重要。
不定根是植物的茎或叶上所发生的根，不定根培养在多种中药材上已经有相当成熟的研究，例如，已有相关技术披露利用5L反应体系建立了人参皂苷含量高的不定根培养体系；或者利用5L气升式生物反应器建立了贯叶连翘不定根培养体系用以进行金丝桃素的生产；抑或是实现了何首乌的离体诱导以及悬浮培养的研究。虽然绞股蓝的主要药用部位为地上部分的干燥部分，但近年来已有研究报告，绞股蓝地下部分同样具有良好的降血脂作用，且地下部分皂苷种类比地上部分多出26种。这也为绞股蓝不定根的应用提供了具有说服力的理论依据。然而作为一种经济价值高、药用作用广泛的重要中草药资源，绞股蓝不定根的相关研究却处于空白阶段。
发明内容
为了解决上述问题，研究确定可行的绞股蓝不定根的培育思路，本申请提供一种绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法。
第一方面，本申请提供一种绞股蓝组织培养基，采用如下的技术方案：
一种绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基和/或继代培养基；包括复合植物生长调节剂，所述复合植物生长调节剂包括1.4-1.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.25-0.35mg/L的萘乙酸。
通过采用上述技术方案，针对绞股蓝植株，例如葫芦科绞股蓝属五叶绞股蓝或者七叶绞股蓝，本申请对其不定根进行诱导或增殖培养，针对性设计了绞股蓝组织培养基，该绞股蓝组织培养基可以用作绞股蓝不定根的诱导培养基和/或继代培养基，即，在一具体实例中，该绞股蓝组织培养基可以同时适用于绞股蓝不定根的诱导培养基以及继代培养基。
具体，本申请的绞股蓝组织培养基中加入了包含6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）的复合植物生长调节剂，6-BA的用量为1.4-1.6mg/L，例如可选择1.4mg/L、1.5mg/L、1.6mg/L、1.7mg/L、1.8mg/L、1.9mg/L、2mg/L中的任一值，优选用量为1.5mg/L；NAA的用量为0.25-0.35mg/L，例如可选择0.25mg/L、0.26mg/L、0.27mg/L、0.28mg/L、0.29mg/L、0.3mg/L、0.31mg/L、0.32mg/L、0.33mg/L、0.34mg/L、0.35mg/L中的任一值，NAA的优选用量为0.28-0.33mg/L，更优选的为0.3mg/L。
优选的，还包括1.5-3g/L的基本培养基、25-35g/L的碳源和5-10g/L的胶凝剂中的至少一种。
优选的，所述基本培养基为MS或1/2MS培养基，所述碳源为蔗糖，所述胶凝剂为植物凝胶。
通过采用上述技术方案，绞股蓝组织培养基中还设计有基本培养基、碳源和胶凝剂，基本培养基可以是MS或1/2MS培养基，MS或1/2MS培养基的用量为1.5-3g/L，例如可选择1.5mg/L、1.6mg/L、1.7mg/L、1.8mg/L、1.9mg/L、2mg/L、2.1mg/L、2.2mg/L、2.3mg/L、2.4mg/L、2.5mg/L、2.6mg/L、2.7mg/L、2.8mg/L、2.9mg/L、3mg/L中的任一值；碳源一般选择蔗糖，蔗糖的用量为25-35g/L，例如可选择25g/L、26g/L、27g/L、28g/L、29g/L、30g/L、31g/L、32g/L、33g/L、34g/L、35g/L中的任一值；胶凝剂常选择植物凝胶，如琼脂，植物凝胶的用量为5-10g/L，例如可选择5g/L、6g/L、7g/L、8g/L、9g/L、10g/L中的任一值。
优选的，所述绞股蓝组织培养基用作绞股蓝不定根的继代培养基，所述复合植物生长调节剂还包括0.3-0.4mg/L的吲哚乙酸或吲哚丁酸。
通过采用上述技术方案，当绞股蓝组织培养基用作绞股蓝不定根的继代培养基时，培养基中的复合植物生长调节剂可视情况加入吲哚乙酸或吲哚丁酸，优选吲哚丁酸（IBA），其用量为0.3-0.4mg/L，例如可选择0.3mg/L、0.31mg/L、0.32mg/L、0.33mg/L、0.34mg/L、0.35mg/L、0.36mg/L、0.37mg/L、0.38mg/L、0.39mg/L、0.4mg/L中的任一值。
第二方面，本申请提供一种绞股蓝不定根的培养方法，采用如下的技术方案：
一种绞股蓝不定根的培养方法，采用上述的绞股蓝组织培养基对选取的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养。
通过采用上述技术方案，本申请采用上述的绞股蓝组织培养基对选取的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养。
优选的，对选取的绞股蓝茎段外植体依次进行清洗处理和消毒处理，然后将消毒处理后的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养。
通过采用上述技术方案，在对选取的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养之前，先进行茎段外植体的预处理以及消毒，包括清洗处理和消毒处理，该步骤可以采用现有已知工艺进行，作为一实例，清洗处理可以采用碱性合成洗涤剂（如十二烷基硫酸钠）或吐温等表面活性物性将绞股蓝植株进行漂洗，漂洗时间为15-25min，然后采用流水进行冲洗，冲洗时间可为2h以上，然后将绞股蓝的茎段切成预设小段，为外植体的消毒做准备；消毒处理可以采用75%乙醇消毒30s左右，利用酒精使其表面被浸湿，然后采用表面灭菌剂对茎段进行消毒，例如采用7.5%浓度的NaClO水溶液对茎段消毒8-10min，表面灭菌剂还可以选择已知的其他种类，例如次氯酸钙、升汞、抗菌素等，可根据情况选取1-2种使用，使用浓度可根据不同材料进行调整，消毒后还可进一步将茎段切成长约5mm左右小段备用。
优选的，所述诱导培养具体为：控制温度为21-27℃，湿度为40-60%，于黑暗或光照条件下对选取的绞股蓝茎段外植体进行不定根的诱导。
通过采用上述技术方案，设计绞股蓝不定根诱导的具体培养温度在21-27℃，例如可以为21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃中的任一值，优选温度为23-26℃，研究发现，温度在23-26℃时不定根的诱导率及诱导时间无显著差异，温度低于23℃或高于26℃时不定根的诱导率降低且诱导时间延长；
其湿度为40-60%，例如可以为40%、41%、42%、43%、44%、45%、46%、47%、48%、49%、50%、51%、52%、53%、54%、55%、56%、57%、58%、59%、60%中的任一值；
诱导培养可在黑照条件下培养，亦可以进行一定的光照处理，例如，光照处理条件原则上可为：光照时间为38-42天，每天10-14h，光照强度为1000-2000lx，作为一实例，可施以光照时间为40天且每天12h、光照强度在1300lx的光照处理，可以观察到有少量不定根诱导出。研究发现，黑照条件下培养更有利于不定根的诱导及后续生长，在2000lx、1000lx光强12h光照下不定根的诱导率以及增殖力均弱于暗培养。
因此，优先选择于上述温度湿度且在全暗条件下进行培养。
优选的，所述诱导培养的时间为30-35天。
通过采用上述技术方案，采用上述培养工艺，茎段外植体在培养15-20day时开始有不定根的发育点形成，30day左右时会有不定根开始陆续长出。
优选的，于完成所述诱导培养后，采用上述的绞股蓝组织培养基进行继代培养。
通过采用上述技术方案，在上述诱导培养结束后，对茎段继续进行继代培养，继代培养采用的绞股蓝组织培养基，即，可以使用与诱导培养基相同的培养基即可，亦或者在此基础上添加0.3-0.4mg/LIBA效果更佳。同时，不定根的培养可使用固体培养基也可以选择液体培养基，在使用固体培养基进行培养时，外植体上会陆续不断的长出新的不定根，原有的不定根也会继续生长延长，从而实现不定根的扩繁和增殖。与固体培养基培养相比，液体培养基能够增大不定根表面与培养基的接触面积，从而实现更加快速的增殖与扩繁。
优选的，所述继代培养的时间为25-35天。
通过采用上述技术方案，采用上述培养工艺，继代培养过程中，外植体上会继续长出新的不定根，并且之前的不定根也会继续生长延长以及体积增大，培养至30天左右，即可得到本申请的绞股蓝不定根。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请的绞股蓝不定根的培养方法可以在较短时间内得到大量的绞股蓝不定根，并且在继代培养过程中能够持续获得不定根，为后续的液体培养提供实验基础，也可以成为规模化生产的原料。
2、本申请的绞股蓝组织培养基中，复合植物生长调节剂中6-BA及NAA的用量较低，可有效节约成本。
3、本申请的绞股蓝组织培养基，可同时适用作为绞股蓝不定根的诱导培养基以及继代培养基，不需要针对不定根的诱导以及继代培养阶段分别单独设计培养基；
4、本申请的绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法，具有不受地理位置、气候条件限制，诱导时间短，增殖率高，能持续获得等优势，非常适合五叶绞股蓝或七叶绞股蓝不定根的诱导培养。
附图说明
图1是本申请实施例的绞股蓝不定根的培养方法中培养至第20天时外植体不定根的照片；
图2是本申请实施例的绞股蓝不定根的培养方法中培养至第30天时外植体不定根的照片；
图3是本申请实施例的绞股蓝不定根的培养方法中培养至第60天时外植体不定根的照片。
实施方式
以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。
实施例
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基，其组份为：2.2g/L的1/2MS培养基、30g/L的蔗糖、7g/L的植物凝胶以及复合植物生长调节剂，复合植物生长调节剂包括1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.3mg/L的萘乙酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基，其组份为：1.8g/L的1/2MS培养基、32g/L的蔗糖、6g/L的植物凝胶以及复合植物生长调节剂，复合植物生长调节剂包括1.4mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.28mg/L的萘乙酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基，其组份为：2g/L的1/2MS培养基、28g/L的蔗糖、8g/L的植物凝胶以及复合植物生长调节剂，复合植物生长调节剂包括1.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.32mg/L的萘乙酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基，其组份为： 3g/L的1/2MS培养基、35g/L的蔗糖、10g/L的植物凝胶以及复合植物生长调节剂，复合植物生长调节剂包括1.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.35mg/L的萘乙酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基，其组份为：1.5g/L的1/2MS培养基、25g/L的蔗糖、5g/L的植物凝胶以及复合植物生长调节剂，复合植物生长调节剂包括1.4mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.25mg/L的萘乙酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1相同。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例2相同。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例3相同。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例4相同。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例5相同。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：所述复合植物生长调节剂还包括0.3mg/L的吲哚丁酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：所述复合植物生长调节剂还包括0.35mg/L的吲哚丁酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：所述复合植物生长调节剂还包括0.32mg/L的吲哚丁酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：所述复合植物生长调节剂还包括0.34mg/L的吲哚丁酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：所述复合植物生长调节剂还包括0.36mg/L的吲哚丁酸。
实施例
本实施例的绞股蓝组织培养基，用作绞股蓝不定根的诱导培养基以及继代培养基，其组份与实施例1基本相同，不同仅在于：没有添加植物凝胶。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法包括以下步骤：
1、诱导培养基以及继代培养基的制备：
采用实施例16的绞股蓝组织培养基示出的组分比例，调节pH值至5.8，制备获得诱导培养基，采用实施例16的绞股蓝组织培养基示出的组分比例，调节pH值至5.8，制备获得继代培养基；
2、外植体消毒以及诱导培养：
对选取的绞股蓝外植体依次进行清洗处理和消毒处理，然后将消毒处理后的绞股蓝外植体置于诱导培养基中，控制温度,25℃（温度原则上在21-27℃均可），湿度为50%（湿度原则上在40-60%均可），于黑暗条件下对选取的绞股蓝外植体进行不定根的诱导。诱导培养的时间为20-35天，一般20天左右即可观察到外植体周围长出淡黄色愈伤组织，外植体上开始长出不定根及发育点。继续进行诱导培养，可视具体情况确定诱导培养的时间，例如30天左右，稍长亦可（如35天），此时可观察到明显的不定根。
3、继代培养：
诱导培养之后，将诱导培养后的外植体转移至上述的继代培养基进行继代培养，继代培养的具体条件与诱导培养相同。继代培养的时间为30天左右（原则上25-35天均可）。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法包括以下步骤：
1、诱导培养基的制备：
使用NaOH和HCl将加入浓度为1.5mg/mL 6-BA与0.3mg/mL NAA植物生长调节剂的500mL 1/2MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成诱导培养基；
2、茎段外植体的预处理与消毒：
使用5%洗衣粉水溶液将五叶绞股蓝漂洗10min，置于流水下冲洗2h，使用无菌手术刀将其切成长约10cm的小段，去除根部、叶片及叶柄，只保留茎部；
使用75%酒精对其消毒，上下颠倒摇匀30s，加入浓度为7.5%的NaClO水溶液，上下颠倒摇匀8min，使用无菌双蒸水冲洗3-4遍，消毒完毕；
3、不定根的诱导：
使用无菌手术刀将茎段两头剔除，后切成5mm左右小段，置于诱导培养基上，使用无菌透气胶带密封培养基，避免污染；
将带有茎段外植体的诱导培养基置于25℃黑暗条件下进行不定根的诱导，湿度为60%，诱导时间为20day；
参见图1所示，20day后，可看到外植体周围长出淡黄色愈伤组织，外植体上开始长出不定根及发育点；图1中可以观察到在外植体的上方及左侧已有不定根的发育点形成，右侧已有一不定根在发育；
4、继代培养
参见图2，诱导培养至第30day时，可在外植体上观察到明显的不定根，图2可以观察到，外植体的两侧已经形成了4条不定根；这时剔除长势较差以及较为纤细的不定根，将余下材料转移至采用上述步骤1方法制得的新的诱导培养基中进行继代培养；继代培养的条件与诱导培养完全一致，均为在25℃且60%湿度下进行暗培养。
继代培养过程中，外植体上会继续长出新的不定根，并且外植体上之前的不定根也会继续生长延长，参见图3，培养至累计第60day时（即继代培养30天），从图3可以观察到不定根相比于继代之前长度延长，体积增大，并且过程中伴随新不定根的长出和发育；即可得到本实施例的绞股蓝不定根。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法包括以下步骤：
1、诱导培养基的制备：
使用NaOH和HCl将加入浓度为1.5mg/mL 6-BA与0.3mg/mL NAA植物生长调节剂的500mL 1/2MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成诱导培养基；
2、外植体的预处理与消毒：
使用5%洗衣粉水溶液将绞股蓝漂洗10min，置于流水下冲洗2h，使用无菌手术刀将其切成长约10cm的小段，去除根部、叶片及叶柄，只保留茎部；
使用75%酒精对其消毒，上下颠倒摇匀30s，加入浓度为7.5%的NaClO水溶液，上下颠倒摇匀10min，使用无菌双蒸水冲洗3-4遍，消毒完毕；
3、不定根的诱导：
使用无菌手术刀将茎段两头剔除，后切成5mm左右小段，置于诱导培养基上，使用无菌透气胶带密封培养基，避免污染；
将带有茎段外植体的诱导培养基置于25℃黑暗条件下进行不定根的诱导，湿度为60%，诱导时间为20day；
参见图1所示，20day后，可看到外植体周围长出淡黄色愈伤组织，外植体上开始长出不定根及发育点；
4、继代培养基的制备：
使用NaOH和HCl将加入浓度为1.5mg/mL 6-BA、0.3mg/mL NAA以及0.3mg/L IBA植物生长调节剂的500mL 1/2MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成继代培养基；
参见图2，诱导培养至第30day时，可在外植体上观察到明显的不定根，这时剔除长势较差以及较为纤细的不定根，将余下材料转移至上述制得的继代培养基中进行培养；继代培养的条件与诱导培养完全一致，均为在25℃且60%湿度下进行暗培养。
继代培养后，外植体上会继续长出新的不定根，并且之前的不定根也会继续生长延长，参见图3，培养第60day时，即可得到本发明的绞股蓝不定根。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：
步骤1中，使用NaOH和HCl将加入浓度为1.5mg/mL 6-BA与0.3mg/mL NAA植物生长调节剂的500mL MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成诱导培养基。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：诱导培养以及继代培养基过程中，培养温度均为23℃。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：采用实施例2的绞股蓝组织培养基作为诱导培养基以及继代培养基。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：采用实施例3的绞股蓝组织培养基作为诱导培养基以及继代培养基。
实施例
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：采用实施例4的绞股蓝组织培养基作为诱导培养基以及继代培养基。
实施例25
本实施例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：采用实施例5的绞股蓝组织培养基作为诱导培养基以及继代培养基。
对比例1
本对比例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：采用绞股蓝叶片或者带有叶片的茎段作为外植体。
对比例2
本对比例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：
步骤1中，使用NaOH和HCl将加入浓度为1mg/mL 6-BA与0.2mg/mL NAA植物生长调节剂的500mL MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成诱导培养基。
对比例3
本对比例的绞股蓝不定根的培养方法基本与实施例18相同，区别仅在于：
步骤1中，使用NaOH和HCl将加入浓度为1mg/mL 2,4-D与0.2mg/mL KT植物生长调节剂的500mL MS培养基中调节pH值至5.8，在115℃高温高压下灭菌20min，制成诱导培养基。
对实施例17-21以及对比例1-3培养获得的绞股蓝不定根或最终培养状态进行观察以及统计，对其30day时不定根诱导率以及60day时不定根增殖率进行计算，具体计算公式如下：
诱导率=生长出不定根的外植体/接种的外植体总数*100%；
增殖率=继代培养（诱导期间）新长出的不定根的生长点/带有不定根的生长点总数*100%。
其中，每次实验共进行三次重复，所得结果为三次数据的平均值加减标准差。
计算结果如下表1所示。
表1
| 组别 | 30day时不定根诱导率（%） | 不定根增殖率（%） |
| 实施例17 | 100±0 | 89.82±4.43 |
| 实施例18 | 100±0 | 90.67±2.62 |
| 实施例19 | 100±0 | 90.33±3.77 |
| 实施例20 | 88.67±7.86 | 84.33±6.54 |
| 实施例21 | 94.44±7.86 | 96±2.83 |
| 实施例22 | 100±0 | 89.31±2.63 |
| 实施例23 | 100±0 | 89.29±3.49 |
| 实施例24 | 100±0 | 88.31±2.63 |
| 实施例25 | 100±0 | 88.35±6.27 |
| 对比例1 | 0 | 0 |
| 对比例2 | 0 | 0 |
| 对比例3 | 0 | 0 |
据此可知，本申请培养条件下绞股蓝不定根诱导率可达100%，增殖率达88%以上。具有诱导时间短，诱导率以及增殖率高的优点，非常适合五叶绞股蓝或七叶绞股蓝不定根的诱导培养。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (10)
1.一种绞股蓝组织培养基，其特征在于，用作绞股蓝不定根的诱导培养基和/或继代培养基；
包括复合植物生长调节剂，所述复合植物生长调节剂包括1.4-1.6mg/L的6-苄基氨基嘌呤和0.25-0.35mg/L的萘乙酸。
2.根据权利要求1所述的绞股蓝组织培养基，其特征在于，还包括1.5-3g/L的基本培养基、25-35g/L的碳源和5-10g/L的胶凝剂中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的绞股蓝组织培养基，其特征在于，所述基本培养基为MS或1/2MS培养基，所述碳源为蔗糖，所述胶凝剂为植物凝胶。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的绞股蓝组织培养基，其特征在于，所述绞股蓝组织培养基用作绞股蓝不定根的继代培养基，所述复合植物生长调节剂还包括0.3-0.4mg/L的吲哚乙酸或吲哚丁酸。
5.一种绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，采用权利要求1-4任意一项所述的绞股蓝组织培养基对选取的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养。
6.根据权利要求5所述的绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，对选取的绞股蓝茎段外植体依次进行清洗处理和消毒处理，然后将消毒处理后的绞股蓝茎段外植体进行诱导培养。
7.根据权利要求5所述的绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，所述诱导培养具体为：控制温度为21-27℃，湿度为40-60%，于黑暗或光照条件下对选取的绞股蓝茎段外植体进行不定根的诱导。
8.根据权利要求7所述的绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，所述诱导培养的时间为20-35天。
9.根据权利要求5-8任意一项所述的绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，于完成所述诱导培养后，采用权利要求1-4任意一项所述的绞股蓝组织培养基进行继代培养。
10.根据权利要求9所述的绞股蓝不定根的培养方法，其特征在于，所述继代培养的时间为25-35天。
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