CN116077358A - 一种营养液及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种营养液，所述营养液中至少包括如下组分中的一种、两种或更多种：氨基酸、寡肽或多肽、维生素、生长因子、乳酸及其衍生物和抗氧化剂等，且所述营养液中至少包含羟脯氨酸和乳酸及其衍生物。本发明的营养液不仅对皮肤具有保湿作用，同时因含有乳酸及其衍生物这一活性成分，将其注射入皮肤内还可以刺激皮肤产生新生胶原纤维，特别是加入乳酸及其衍生物和/或面部填充剂后可以长期刺激皮肤产生胶原纤维。

Description

一种营养液及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种营养液及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤是身体防御自然力量的第一道防线，皮肤干燥不仅可能导致审美上令人不悦的皮肤外观，而且还可能导致瘙痒、发红、斑点、刺激和发炎。保护皮肤免受自然力量的影响并且处理干燥以避免一些皮肤状况是至关重要且必需的。皮肤老化是指皮肤功能衰老性损伤，使皮肤对机体的防护能力，调节能力等减退。皮肤的老化分为内源性老化和外源性老化。内源性老化是指皮肤随年龄增长的自然老化，其表现为皮肤变白，出现细小皱纹、弹性下降、皮肤松弛等。外源性老化的最主要原因是日晒所致的光老化。表现为皱纹、皮肤松弛、粗糙、淡黄或灰黄色的皮肤变色、毛细血管扩张、色素斑形成等。
目前的产品在应用时可能会引起进一步的刺激、油腻感或瑕疵。因此，本领域亟需有效处理干燥皮肤而没有任何不利的皮肤副作用的保湿组合物。
发明内容
为了改善上述技术问题，本发明提供如下技术方案：
一种营养液，所述营养液中至少包括如下组分中的两种或更多种：
(1)氨基酸；
(2)乳酸及其衍生物；
(3)寡肽或多肽；
(4)维生素；
(5)生长因子；
(6)抗氧化剂；
其中，所述营养液中至少包含羟脯氨酸和乳酸及其衍生物。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，氨基酸的重量百分比可以为2％～30％，优选为5％～25％，8％～20％，或者为10％-15％。
氨基酸是所有蛋白质的组成部分，包括皮肤中最丰富的纤维蛋白(如角蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白)。皮肤下垂和皱纹是慢性日晒损伤和老化未愈合皮肤的特征，它们主要与胶原蛋白和弹性纤维的退化有关。本发明通过向营养液中加入适量的氨基酸，有助于皮肤在自我修复过程中维持皮肤结构，以显著影响皮肤的外观。同时氨基酸还是促进伤口愈合和修复受损皮肤所需的重要营养物质，可以帮助维持细胞层(如角质层)中的酸碱平衡和水分保持，以防止阳光伤害，进而维持适当的皮肤微生物群。
优选地，所述氨基酸选自赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酰、酪氨酸、精氨酸、羟脯氨酸及组氨酸。优选地，所述氨基酸选自羟脯氨酸和至少一种上述其他氨基酸的组合。
优选地，所述营养液中，羟脯氨酸的重量百分比可以为0.05％～5％，优选为0.1％～3％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，寡肽或多肽的重量百分比可以为0.1％～10％，优选为0.5％～8％，1％～6％，或者为2％-5％。
本发明中，羟脯氨酸为胶原蛋白的主要成分，它是通过4-脯氨酰羟化酶对脯氨酸进行翻译后修饰而产生的，占胶原蛋白含量的约14％，其具有抗静电和保湿效果，并有助于胶原蛋白的热稳定性。维生素C充当脯氨酰羟化酶的辅助因子，是脯氨酸羟基化所必需的。这种辅因子的缺乏会影响产生足够的羟脯氨酸，导致胶原蛋白的合成受损。而由羟脯氨酸组成的寡肽对于皮肤和骨骼细胞具有激活作用。脯氨酰-羟脯氨酸，这种寡肽研究证明可以200nmol/mL的剂量增加细胞增殖(1.5倍)和透明质酸合成(3.8倍)。
根据本发明，所述寡肽为由10个以内氨基酸相连而成的肽。例如二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽和十肽。
根据本发明，所述多肽为由10个以上氨基酸相连而成的肽。优选不超过40个氨基酸的小分子多肽。例如11-40，或者12-30或者15-25等。
本发明所用的术语“多肽”、“寡肽”为氨基酸聚合物。该聚合物可以是线形或分支的，它可以包含修饰的氨基酸，并且它可以由非氨基酸隔断。该术语也包括已经被修饰(例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作，如以标记组分缀合)的氨基酸聚合物。
本领域技术人员知悉，小分子肽对于细胞的作用是双重的，其即可以补充细胞营养需求以修复缺损，又可以改善细胞的功能状态，以助于皮肤新陈代谢，还可以减缓皮肤衰老。
优选地，所述寡肽包括链状肽和环状肽，可以为β-丙氨酸和L-组氨酸、精氨酸-赖氨酸、胶原三肽、谷胱甘肽、蓝铜胜肽、寡肽-1、寡肽-3等中的至少一种。
本发明的寡肽活性成分，其中的二肽主要可以保护DNA，具有抗氧化、抗羧化、抗糖化等功效。本发明的寡肽活性成分，其中的三肽主要是刺激胶原蛋白和氨基葡聚糖的合成，增加肌肤的紧实度，强化结缔组织。
本发明的寡肽活性成分，其中的四肽是一种仿青春荷尔蒙，可重整肌肤，调控细胞介素，以降低紫外线对肌肤的伤害，并进而促进伤口愈合。
本发明的寡肽活性成分，其中的五肽主要用于促进皮肤胶原蛋白增生，以增加皮肤厚度。
本发明的寡肽活性成分，其中的六肽主要用于促进纤维母细胞再生，以修复伤口，并刺激弹力蛋白合成，以重建真皮组织，增加皮肤弹性、柔软度，进而提升皮肤活力。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，维生素的重量百分比可以为0.005％～15％，优选为0.01％～10％，0.02％～8％，还优选1％-5％。
优选地，所述维生素例如可以为维生素A、B、C、D、E和K。
维生素是维持人体正常功能不可缺少的营养素，其是一类与机体代谢具有密切关系的低分子有机化合物，且是物质代谢中起重要调节作用的酶的重要组成成分。本发明通过将少量维生素注入皮肤后，能够促进身体新陈代谢，进而提升皮肤活力。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，生长因子的重量百分比可以为0.0001％～0.05％，优选为0.0001％～0.02％，0.0001％～0.005％，或者为0.0005％～0.002％。
优选地，所述生长因子可以为重组人角质细胞生长因子(KGF-2)、成纤维细胞生长因子(FGF)和重组人白介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)中的至少一种。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，乳酸及其衍生物的重量百分比可以为0.05％～10％，例如为0.1％～5％，0.1％～3％，0.1％～2％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
本领域技术人员可以理解，乳酸及其衍生物的重量百分比可以为前述范围内的任意亚范围或者具体点值。
优选地，所述乳酸及其衍生物可以选自乳酸、乳酸盐、乳酸低聚物及聚乳酸微纳米颗粒等可缓慢降解持续产生乳酸的物质。
本发明的乳酸及其衍生物(乳酸及乳酸盐)活性成分，是人体皮肤和头发的天然组分，具有独特的pH调节和保湿功能，将其应用于日化产品中(如洗浴产品、皮肤护理产品、头发护理产品和口腔护理产品等)具有良好地去皱作用，并且能有效减弱阳光对皮肤的影响；外用可去除角质层，使皮肤快速更新；同时乳酸可增加皮肤的弹性和结实程度，将其注射入皮肤内还可以刺激皮肤产生新生胶原纤维。所述乳酸盐为乳酸的离子形式，它是肌肉细胞、红细胞、脑及其它组织无氧酵解的产物，通常血中含量处于低水平。乳酸低聚物或聚乳酸均为聚丙交酯，是一种新型的生物降解材料，使用可再生的植物资源(如玉米)所提出的淀粉原料制成。淀粉原料经由糖化得到葡萄糖，再由葡萄糖及一定的菌种发酵制成高纯度的乳酸，再通过化学合成方法合成一定分子量的聚乳酸。其具有良好的生物可降解性，使用后能被自然界中微生物完全降解，最终生成二氧化碳和水，不污染环境。
所述乳酸低聚物或聚乳酸具有如下分子式：
Figure BDA0003399543320000051
其中，n为1-30，优选为1-20，还优选为1-10。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，抗氧化剂的重量百分比可以为0.01％～5％，优选为0.05％～2％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
优选地，所述抗氧化剂选自乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、抗坏血酸硫酸酯二钠、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、苯基巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、四己基癸醇抗坏血酸酯和亚磷酸三(壬基苯基)酯。
根据本发明的实施方案，所述营养液中，还任选地添加赋形剂。例如，所述赋形剂可以为水。
根据本发明的实施方案，所述营养液中各组分的重量百分比之和为100％。
本发明还提供上述营养液的制备方法，包括将上述各组分混合，以制备得到所述营养液。
根据本发明的实施方案，所述制备方法包括先将氨基酸溶解于赋形剂中，然后依次加入羟脯氨酸、寡肽或多肽、乳酸及其衍生物、抗氧化剂、维生素和生长因子，混合，制备得到所述营养液。
根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括对混合液进行过滤。例如，采用0.2微米滤膜无菌过滤。
根据本发明的实施方案，所述制备方法还包括对过滤后的营养液进行分装。
本发明还提供一种制剂，其包含上述营养液。
根据本发明的实施方案，所述制剂的剂型包含注射、填充、外敷和口服。
本发明还提供一种复配液，其包含上述营养液与面部填充剂。
根据本发明的实施方案，所述复配液中，面部填充剂的重量百分比可以为0.1％-20％，优选0.5％～15％，1％～10％，或者为2％～8％，示例性为2％、3％、4％、5％、6％或7％。
根据本发明的实施方案，所述面部填充剂可以为聚乳酸类可降解微粒，例如可以为聚乳酸微球。
本发明还提供上述营养液和/或复配液在促使皮肤保湿、增强皮肤屏障完整性、减少皮肤红斑、增加抗氧化活性、抑制MMP1、增加胶原蛋白产生、抑制促炎性细胞因子和/或增加细胞间脂质层中的应用。
本发明还提供一种使皮肤保湿、增强皮肤屏障完整性和/或减少皮肤红斑的方法，所述方法包括将上述营养液施用于皮肤。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中将所述营养液施用于面部、颈部、躯干、臂部、手部、足部和/或腿部。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中将所述营养液施用于面部。
优选地，所述的方法可以通过注射填充的方式，植入面部皱纹或沟槽内，除了即可的填充作用外，随着时间微粒逐渐降解，降解产生的乳酸刺激自体组织产生胶原，最终微粒消失，皱纹或沟槽被新产生的胶原修复。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中至少每天一次施用所述营养液。或者，可以至少、至多或恰好每天一次、每天两次、每天三次、每天四次、每天五次、每天六次、每天七次、每天八次、每天九次或每天十次(或其中可得到的任意范围)施用营养液。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中至少每天一次施用所述营养液，持续至少一周。该营养液可以每天施用并持续一段时间，例如至少、至多或恰好一天、两天、三天、四天、五天或六天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周或6个月，或1、2、3、4或5年或更长时间(或其中可得到的任意范围)。在一些实施方案中，将营养液施用于人。
在一些实施方案中，人为至少35岁。在一些实施方案中，人为至少、至多或恰好1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、25、30、35、40、50、60、或70岁(或其中可得到的任意范围)。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中将所述营养液施用于人。
根据本发明的实施方案，所述的方法，其中所述人至少35岁。
本发明还提供一种在皮肤中增加抗氧化活性、抑制MMP1、增加胶原蛋白产生、抑制促炎性细胞因子、增加皮肤屏障完整性或增加细胞间脂质层的方法，所述方法包括上述营养液局部施用于皮肤。
本发明的有益效果:
本发明的营养液不仅对皮肤具有保湿作用，同时因含有乳酸及其乳酸衍生物的活性成分，将其注射入皮肤内还可以刺激皮肤产生新生胶原纤维，特别是加入乳酸及其衍生物和/或面部填充剂后可以长期刺激皮肤产生胶原纤维。
附图说明
图1中a、b分别为实施例5制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后7天的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图2中a、b分别为实施例5制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后14天的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图3中a、b分别为实施例5制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后21天的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图4中a、b分别为实施例6制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后1个月的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图5中a、b分别为实施例6制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后2个月的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图6中a、b分别为实施例6制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后3个月的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
图7中a、b分别为实施例6制得的营养液(试验组)、对比例1制得的营养液(对照组)注射后6个月的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。
具体实施方式
下文将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。
实施例1
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸6％、丙氨酸3％、脯氨酸6％，羟脯氨酸0.5％、精氨酸-赖氨酸寡肽5％、维生素A0.02％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.001％、乳酸0.5％、抗坏血酸棕榈酸酯0.5％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、乳酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
实施例2
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸3％、丙氨酸2％、脯氨酸2％、羟脯氨酸1％、精氨酸-赖氨酸寡肽8％、维生素A0.03％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.005％、乳酸1％、抗坏血酸棕榈酸酯1％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、乳酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
实施例3
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸15％、丙氨酸5％、脯氨酸5％、羟脯氨酸0.1％、精氨酸-赖氨酸寡肽0.5％、维生素A0.025％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.0001％、乳酸0.1％、抗坏血酸棕榈酸酯0.1％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、乳酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
实施例4
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸3％、丙氨酸2％、脯氨酸3％、羟脯氨酸0.6％、精氨酸-赖氨酸寡肽5％、维生素A 0.02％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.002％、乳酸0.6％、抗坏血酸棕榈酸酯0.6％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入精氨酸-赖氨酸寡肽、乳酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
实施例5
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸10％、丙氨酸4％、脯氨酸6％、羟脯氨酸0.2％、精氨酸-赖氨酸寡肽1％、维生素A 0.015％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.0005％、乳酸0.2％、抗坏血酸棕榈酸酯0.2％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、乳酸、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
实施例6
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸10％、丙氨酸4％、脯氨酸5％，羟脯氨酸0.2％、精氨酸-赖氨酸寡肽1％、维生素A 0.015％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.0005％、抗坏血酸棕榈酸酯0.2％、聚乳酸微球3％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、聚乳酸微球、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤，再加入聚乳酸微球，待分散均匀后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少25％，优选25％至85％。
对比例1
一种营养液，所述营养液由以下重量百分比计的各组分构成：甘氨酸10％、丙氨酸4％、脯氨酸6％、羟脯氨酸0.2％、精氨酸-赖氨酸寡肽1％、维生素A 0.015％、重组人角质细胞生长因子(KGF-2)0.0005％、抗坏血酸棕榈酸酯0.2％，余量为水。
制剂可以通过向搅拌釜中加入一定量的50℃左右的注射用水，搅拌下加入上述重量百分比的氨基酸，待氨基酸溶解完毕后，降至室温(20至25℃)，然后依次加入羟脯氨酸、精氨酸-赖氨酸寡肽、抗坏血酸棕榈酸酯、维生素A和重组人角质细胞生长因子(KGF-2)。待混合溶解均匀后，经0.2微米滤膜无菌过滤后分装。
另外，如果需要的话，例如可以添加附加成分来改变组合物的流变特性，或添加对皮肤有益的成分。例如可以添加赋形剂以改变组合物的流变特性。或者，水的量可以改变，只要组合物中水的量为至少60％，优选60％至85％。
试验例
为验证营养液中乳酸具有刺激皮肤产生胶原蛋白的作用。本发明以实施例5制得的营养液(试验组)，与对比例1(对照组)的营养液进行对照，进行动物实验。具体实验方法如下：
实验动物为雄性小鼠，重量(23±4)g，实验部位为颈部皮肤，注射剂量：单点注射0.1ml，取样时间节点：注射开始后7天、14天和21天。
检测方法：实验小鼠左侧为试验组，右侧为对照组，前7日每天在实验侧注射对应实验溶液。在时间节点时处死实验动物，切取观察的组织。组织固定后进行天狼星红染色，观察注射溶液对小鼠各部位组织产生的影响。
检测结果：图1中a、图2中a、图3中a分别为实施例5制得的营养液(试验组)注射后7天、14天和21天的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。图1中b、图2中b、图3中b分别为对比例1制得的营养液(对照组)注射后7天、14天和21天的组织切片PSR染色偏振光显微镜照片。从注射后7天、14天、21天的病理结果对比可见：注射实施例5制得的营养液比注射对比例1制得的营养液后的皮肤中产生了更多的新生Ⅲ型胶原纤维(呈绿色，弱双折光性)。且其中注射实施例5制得的营养液(试验组)21天后，病理切片染色后产生的新生Ⅲ型胶原纤维的量最多。
对于实施例5制得的制得营养液(试验组)和对比例1制得的营养液(对照组)各时间点组织切片的偏振光显微镜照片，经Image J软件统计其新生Ⅲ型胶原纤维的量占总量的百分比，结果见表1。
表1新生Ⅲ型胶原纤维的量占总量的百分比
Figure BDA0003399543320000131
由表1中结果可知：由本发明实施例5制得的制得营养液(试验组)注射后7天、14天和21天的组织切片比对比例1制得的营养液(对照组)注射后7天、14天和21天的组织切片中新生Ⅲ型胶原纤维的含量明显增多。且其中注射实施例5制得的营养液(试验组)21天后，病理切片染色后产生的新生Ⅲ型胶原纤维的量最多。
进一步地，以实施例6制得的营养液为试验组，对比例1制得的营养液为对照组，进行动物实验。具体实验方法如下：
选取健康的成年实验兔30只，雌雄不限。
术前一周实验动物麻醉，麻醉成功后剃除背部毛发，将四肢固定于手术台上，并在背部剃除毛发后的部位标记出两个1.5cm×1.5cm的等距方框。两个方框内分别注入0.2ml试验组和对照组制得的营养液，使局部形成一圆形隆起的皮丘，外观见皮肤变白，毛孔变大。注射部位分别于术后1个月、2个月、3个月和6个月进行取样，每个时间点随机取3只动物处死，以确保实验结果的准确性。实验结束时，每只动物取出注射部位以及周边1.5cm×1.5cm组织放入10％的多聚甲醛固定液中，石蜡包埋，组织病理切片后进行Picro-siriusRed(PSR)染色(I型，Ⅲ型胶原染色)。
检测结果：图4中a、图5中a、图6中a、图7中a分别为注射实施例6的营养液(试验组)1个月、2个月、3个月和6个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片。图4中b、图5中b、图6中b、图7中b分别为注射对比例1的营养液(对照组)1个月、2个月、3个月和6个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片。
从注射后1个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片可见，注射实施例6的营养液后1个月，聚乳酸微球均匀分散在植入部位的皮肤组织内，与周围组织接触面积相对较大，其中可见较多新生的Ⅲ型胶原纤维(呈绿色，弱双折光性)，而对照组(注射对比例1的营养液)的Ⅲ型胶原纤维较少。
从注射后2个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片可见，注射实施例6的营养液后2个月，聚乳酸微球表面有新生的Ⅲ型胶原纤维(呈绿色，弱双折光性)，且周围组织中，Ⅰ型胶原纤维的比例比1个月时逐渐增多，且排列较1个月之前更加有序。而对照组(注射对比例1的营养液)的Ⅲ型胶原纤维较少，与上次(注射1个月)检测结果相比，注射部位组织内Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的比例未见明显变化。
从注射后3个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片可见，注射实施例6的营养液后3个月，聚乳酸微球均匀分散在植入部位的皮肤组织内，且聚乳酸微球周围新生的Ⅲ型胶原纤维可见明显增多(呈绿色，弱双折光性)，同时Ⅰ型胶原纤维的占比逐步增加，但总量仍远低于新生的Ⅲ型胶原纤维，且胶原纤维排列逐步有序。而对照组(注射对比例1的营养液)的Ⅲ型胶原纤维较少，与上次(注射2个月)检测结果相比，注射部位组织内Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的比例未见明显变化。
从注射后6个月的组织切片的PSR染色偏振光显微镜照片可见，注射实施例6的营养液后6个月，聚乳酸微球均匀分散在植入部位的皮肤组织内，且周围组织中可见大量新生的Ⅲ型胶原纤维(呈绿色，弱双折光性)，同时Ⅰ型胶原纤维明显增多，其中Ⅰ型胶原纤维和Ⅲ型胶原纤维交错排列，且较之前(注射3个月)排列更加有序。而对照组(注射对比例1的营养液)的Ⅲ型胶原纤维较少，与上次(注射3个月)检测结果相比，注射部位组织内Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的比例未见明显变化。
对于实施例6制得的制得营养液(试验组)和对比例1制得的营养液(对照组)各时间点组织切片的偏振光显微镜照片，经ImageJ软件统计其新生Ⅲ型胶原纤维的量占总量的百分比，结果见表2。
表2新生Ⅲ型胶原纤维的量占总量的百分比
Figure BDA0003399543320000151
由表2中结果可知：由本发明实施例6制得的制得营养液(试验组)注射后1个月、2个月、3个月和6个月的组织切片比对比例1制得的营养液(对照组)注射后1个月、2个月、3个月和6个月的组织切片中新生Ⅲ型胶原纤维的含量明显增多。且其中注射实施例6制得的营养液(试验组)3个月后，病理切片染色后产生的新生Ⅲ型胶原纤维的量最多。
综上可见：本发明通过将含有聚乳酸微球的营养液注射到皮肤内后，随着聚乳酸的降解，可以持续刺激皮肤产生新生的Ⅲ型胶原纤维。
以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种营养液，其特征在于，所述营养液中至少包括如下组分中的两种或更多种：
(1)氨基酸；
(2)乳酸及其衍生物；
(3)寡肽或多肽；
(4)维生素；
(5)生长因子；
(6)抗氧化剂；
其中，所述营养液中至少包含羟脯氨酸和乳酸及其衍生物。
2.如权利要求1所述的营养液，其特征在于，所述营养液中，氨基酸的重量百分比可以为2％～30％，优选为5％～25％，8％～20％，或者为10％-15％。
优选地，所述氨基酸选自赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、脯氨酸、甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸、谷氨酰胺、苏氨酸、天冬氨酰、酪氨酸、精氨酸及组氨酸中的一种、两种或更多种。
优选地，所述营养液中，羟脯氨酸的重量百分比可以为0.05％～5％，优选为0.1％～3％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
3.如权利要求1或2所述的营养液，其特征在于，所述营养液中，寡肽或多肽的重量百分比可以为0.1％～10％，优选为0.5％～8％，1％～6％，或者为2％-5％。
优选地，所述寡肽包括链状肽和环状肽，可以为β-丙氨酸和L-组氨酸、精氨酸-赖氨酸、胶原三肽、谷胱甘肽、蓝铜胜肽、寡肽-1、寡肽-3等中的至少一种。
4.如权利要求1-3任一项所述的营养液，其特征在于，所述营养液中，维生素的重量百分比可以为0.005％～15％，优选为0.01％～10％，0.02％～8％，还优选1％-5％。
优选地，所述维生素例如可以为维生素A、B、C、D、E和K。
5.如权利要求1-4任一项所述的营养液，其特征在于，所述营养液中，生长因子的重量百分比可以为0.0001％～0.05％，优选为0.0001％～0.02％，0.0001％～0.005％，或者为0.0005％～0.002％。
优选地，所述生长因子可以为重组人角质细胞生长因子(KGF-2)成纤维细胞生长因子(FGF)和重组人白介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)中的至少一种。
优选地，所述营养液中，乳酸及其衍生物的重量百分比可以为0.05％～10％，例如为0.1％～5％，0.1％～3％，0.1％～2％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
优选地，所述乳酸及其衍生物可以选自乳酸、乳酸盐、乳酸低聚物及聚乳酸微纳米颗粒等可缓慢降解持续产生乳酸的物质。
6.如权利要求1-5任一项所述的营养液，其特征在于，所述营养液中，抗氧化剂的重量百分比可以为0.01％～5％，优选为0.05％～2％，0.1％～1％，或者为0.2％～0.6％。
优选地，所述抗氧化剂选自乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、半胱氨酸、半胱氨酸HCI、二鲸蜡醇硫代二丙酸酯、抗坏血酸硫酸酯二钠、双十三烷醇硫代二丙酸酯、没食子酸月桂酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、氢醌、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸酯镁、天然植物抗氧化剂例如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、苯基巯基乙酸、磷酸抗坏血酸酯生育酚酯钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、巯基乙酸钠、山梨醇缩糠醛、硫二甘醇、亚硫基二乙酰胺、硫二乙酸、巯基乙酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、四己基癸醇抗坏血酸酯和亚磷酸三(壬基苯基)酯。
优选地，所述营养液中，还任选地添加赋形剂。例如，所述赋形剂可以为水。
优选地，所述营养液中各组分的重量百分比之和为100％。
7.权利要求1-6任一项所述的营养液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将上述各组分混合，以制备得到所述营养液。
优选地，所述制备方法包括先将氨基酸溶解于赋形剂中，然后依次加入羟脯氨酸、寡肽或多肽、乳酸及其衍生物、抗氧化剂、维生素和生长因子，混合，制备得到所述营养液。
优选地，所述制备方法还包括对混合液进行过滤。例如，采用0.2微米滤膜无菌过滤。
优选地，所述制备方法还包括对过滤后的营养液进行分装。
8.一种制剂，其特征在于，其包含权利要求1-6任一项所述的营养液和/或权利要求7所述的制备方法制得的营养液。
优选地，所述制剂的剂型包含注射、填充、外敷和口服等中的至少一种。
9.一种复配液，其特征在于，其包含权利要求1-6任一项所述的营养液和/或权利要求7所述的制备方法制得的营养液与面部填充剂。
优选地，所述复配液中，面部填充剂的重量百分比可以为0.1-15％，优选0.5％～15％，1％-10％，或者为2～8％。
优选地，所述面部填充剂可以为聚乳酸类可降解微粒。
10.权利要求1-6任一项所述的营养液、或权利要求8所述的制剂、或权利要求9所述的复配液的应用，其特征在于，所述营养液、制剂或复配液促使皮肤保湿、增强皮肤屏障完整性、减少皮肤红斑、增加抗氧化活性、抑制MMP1、增加胶原蛋白产生、抑制促炎性细胞因子和/或增加细胞间脂质层。
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