CN116042693B - 一种培育高产量大豆植株的方法以及一种大豆的基因及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种培育高产量大豆植株的方法以及一种大豆的基因及其应用，属于大豆遗传育种技术领域。为了提供一种与大豆产量以及增大大豆子粒和单株总粒重相关的基因和方法。本发明提供一种培育高产量大豆植株的方法，所述方法的步骤如下：步骤1：将SEQ ID NO.1所示的基因与载体pCAMBIA3300载体连接，获得重组载体；步骤2：将步骤1所述的重组载体转化至农杆菌中，获得重组农杆菌；步骤3：将步骤2所述的重组农杆菌转入大豆中获得转基因大豆植株，鉴定后获得阳性的转基因大豆植株。为高产大豆品种的培育奠定理论基础。

Description

一种培育高产量大豆植株的方法以及一种大豆的基因及其 应用
技术领域
本发明属于大豆遗传育种技术领域，具体涉及一种培育高产量大豆植株的方法以及一种大豆的基因及其应用。
背景技术
大豆(Glycine max(L.)Merr)是世界范围内广泛种植的重要作物之一，其蛋白质和植物油消耗量分别占世界总消耗量的70％和28％(http://soystats.com)。子粒大小是决定作物产量的重要因素之一，也是作物育种的重要指标。除此之外，子粒大小也是植物物种进化适应性的重要决定因素，子粒大小与发芽力、发芽率和种子活力呈正相关，子粒大小的增加能赋予进化优势，是作物驯化过程的首选性状之一。子粒大小性状均属于复杂的遗传性状，受到多种生物学过程的协同调控。本研究旨在剖析子粒大小的3个主要形态学性状(即粒长、粒宽、粒厚)和子粒大小的重要衡量指标(即百粒重)，了解这些性状的分子调控机制以及识别潜在的因果基因，为高产大豆品种的培育提供理论依据和基因资源。
目前对大豆子粒大小的研究大多处于QTL定位阶段，仅鉴定了少数能够调控大豆子粒大小的基因，大量的遗传位点和功能基因尚未被挖掘和解析。研究发现，大豆GmCYP78A基因对大豆子粒大小具有一定的调控作用。与GmCYP78A10同家族的大豆基因GmCYP78A70(Glyma01g07580)过表达的大豆株系子粒增大，然而基因沉默后的大豆子粒大小没有明显变化。而3个GmCYP78A基因，包括GmCYP78A70、GmCYP78A57(Glyma02g13210)、GmCYP78A72(Glyma19g42940)，同时沉默后的大豆子粒减小，表明这3个GmCYP78A基因对子粒大小的调节具有功能冗余性。BIG SEEDS1(BS1)基因编码一个植物特异性的转录调节因子，能够负调控植物初级细胞的增殖，大豆中BS1同源基因GmBS1(Glyma10g38970)和GmBS2(Glyma20g28840)的下调表达导致大豆子粒明显变大，粒重增加。GA20OX基因编码赤霉素生物合成的限速步骤中的赤霉素20氧化酶，大豆GmGA20OX(Glyma07g08950)基因在拟南芥中的过量表达提高了转基因拟南芥种子的大小和千粒重。大豆SoyWRKY15a(Glyma05g20710)基因编码一种WRKY转录因子，野生大豆中GsWRKY15a基因的表达水平与野生大豆子粒的重量呈正相关，而栽培大豆中GmWRKY15a基因的表达水平与栽培大豆的子粒重量不相关。大豆PP2C-1(Glyma17g33690)基因的拟南芥过表达株系的粒重增加，且该基因的过表达增加了拟南芥发育中的种皮细胞的大小，种皮大小影响最终的子粒大小。GmCIF1(Glyma17g04040)是一种大豆细胞壁转化酶抑制基因，GmCIF1沉默后的植株产生的子粒变大，粒重增加。Nguyen等利用FN诱变和CRISPR/Cas9基因组编辑的方法明确了AtKIX8(At3g24150)的大豆同源基因GmKIX8-1(Glyma17g12140)能够通过负向调节细胞增殖而调控子粒大小。与野生型相比，GmKIX8-1功能丧失的K83 FN突变体的子粒明显较大，其百粒重高于野生型30％。这与前人在拟南芥中的研究结果一致。Duan等发现GmST05(Seed Thickness 05)基因的表达与大豆子粒大小存在正相关。大豆增产的研究还应该持续。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种与大豆产量以及增大大豆子粒和单株总粒重相关的基因和方法。解决增加大豆产量的技术问题。
本发明提供一种培育高产量大豆植株的方法，所述方法的步骤如下：
步骤1：将SEQ ID NO.1所示的基因与载体pCAMBIA3300载体连接，获得重组载体；
步骤2：将步骤1所述的重组载体转化至农杆菌中，获得重组农杆菌；
步骤3：将步骤2所述的重组农杆菌转入大豆中获得转基因大豆植株，鉴定后获得阳性的转基因大豆植株。
进一步地限定，步骤3中鉴定用的引物序列如SEQ ID NO.5所示和SEQ ID NO.6所示或如SEQ ID NO.7所示和SEQ ID NO.8。
本发明提供一种大豆基因，所述大豆基因的序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明提供一种含有上述的大豆基因的重组载体。
进一步地限定，所述重组载体的出发载体为pCAMBIA3300载体。
本发明提供一种上述的重组载体的制备方法，所述制备方法的具体步骤如下：将表达载体pCAMBIA3300的质粒利用限制性内切酶Xba I进行单酶切，纯化酶切产物，将pCAMBIA3300质粒的单酶切产物与SEQ ID NO.1所示的基因进行连接，形成重组载体。
本发明提供一种编码上述的大豆基因的氨基酸序列。
本发明提供一种上述的大豆基因、SEQ ID NO.2所示的基因、上述的重组载体或上述的氨基酸序列、超表达SEQ ID NO.1所示的基因的大豆植株在提高大豆产量中的应用。
本发明提供一种上述的大豆基因、SEQ ID NO.2所示的基因、上述的重组载体或上述的氨基酸序列、超表达SEQ ID NO.1所示的基因的大豆植株在提高大豆株高、分枝数、主茎节数和单株粒数中的应用。
本发明提供一种上述的大豆基因、SEQ ID NO.2所示的基因、上述的重组载体或上述的氨基酸序列、超表达SEQ ID NO.1所示的基因的大豆植株在提高大豆子粒的粒长、粒宽和粒厚中的应用。
有益效果：本发明公开了一个大豆新基因GmAGO7a，明确该基因对大豆增大子粒和单株总粒重的正向调控作用，提高大豆产量、提高大豆株高、分枝数、主茎节数、单株粒数以及大豆子粒的粒长、粒宽和粒厚。为高产大豆品种的培育奠定理论基础。
本发明中GmAGO7a基因的过量表达可以实现大豆单株产量的提升，得到的转基因材料通过之后的继代繁殖及鉴定，可以成为稳定的高产遗传材料。本发明对加速大豆产量的遗传改良具有重要的理论意义和实践价值。
本发明的目的是介绍一个新的大豆基因GmAGO7a及利用其获得种子大小提高和单株粒重增加大豆植株的方法。本发明的技术关键在于从大豆品种东农47中克隆GmAGO7a基因并对其进行功能分析，利用农杆菌介导的大豆遗传转化和转基因植株的表型鉴定等方法明确GmAGO7a基因具有提高大豆种子粒大小和单株粒重的功能，同时得到T2代和T3过量表达GmAGO7a基因的大豆植株，该植株特征在于种子大小和单株粒重显著高于野生型对照植株。
附图说明
图1为GmAGO7a蛋白结构域分析；
图2为GmAGO7a蛋白二级结构；
图3为过表达载体pCAMBIA3300-GmAGO7a转化大肠杆菌的菌液PCR验证；其中，M：DL15000(+)DNA分子量标准；1-6：pCAMBIA3300-GmAGO7a重组载体菌液PCR；
图4为过表达载体pCAMBIA3300-GmAGO7a转化根癌农杆菌EHA105的菌液PCR验证；其中，M：DL15000(+)DNA分子量标准；1-4：pCAMBIA3300-GmAGO7a重组载体菌液PCR；
图5为大豆半种子转化法过程；
图6为T0代转基因大豆的Bar试纸条检测；
图7为T1代转基因大豆的PCR检测；其中，M：DL2000(+)DNA分子量标准；1：阳性对照；2：阴性对照；3-11：PCR扩增产物；
图8为T1代转基因大豆的PCR检测；其中，M：DL2000(+)DNA分子量标准；1：阳性对照；2-10：PCR扩增产物；11：阴性对照；
图9为T1代转基因大豆GmAGO7a基因表达量；其中，WT：野生型大豆；1-9：转基因大豆株系；**：在0.01水平上显著；
图10为T2代转基因大豆的Bar试纸条检测；
图11为T2代转基因大豆植株农艺性状测定；其中，CK：野生型大豆；3、5-7：转基因大豆株系；**：在0.01水平上显著；*：在0.05水平上显著；
图12为T3代转基因大豆子粒大小测定；其中，WT：野生型大豆；3、5-7：转基因大豆株系；**：P<0.01；*：P<0.05。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的药品试剂，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。此外，大豆品种东农47、东农50：公众可以从东北农业大学获得；pCAMBIA3300表达载体：公众可以从东北农业大学获得。根癌农杆菌、大肠杆菌感受态：公众可以从东北农业大学获得。
实施例1.GmAGO7a基因生物信息学分析
利用Phytozome数据库获取基因Glyma.01g053100的CDS序列(SEQ ID NO.1)，序列全长3,090bp，编码1,029个氨基酸，共包含20种氨基酸，其中亮氨酸(Leu)所占比例最大，达到10.9％，而色氨酸(Trp)所占比例最小，仅为0.7％。蛋白质的相对分子质量为117,631.58Da，理论等电点为9.25，负电荷残基数(Asp+Glu)为99个，正电荷残基数(Arg+Lys)为129个。不稳定系数为46.60，预测该蛋白结构不稳定。脂肪系数为83.06，亲水性平均系数为-0.494，预测该蛋白为亲水性蛋白。Glyma.01g053100基因编码蛋白主要包含4种结构域，第175位至323位氨基酸形成的Pfam：ArgoN结构域，第332位至384位氨基酸形成DUF1785结构域，第392位至523位氨基酸形成PAZ结构域，第680位至990位氨基酸形成Piwi结构域，基因如SEQ ID NO.2所示(图1)。
利用SOPMA在线软件预测SEQ ID NO.2所示的基因编码蛋白质的二级结构，结果表明GmAGO7a蛋白由4种结构组成，主要结构为无规则卷曲，占比50.92％；其次为α螺旋结构，占比28.38；片层结构占比16.62％，β转角结构占比4.08％(图2)。
实施例2.GmAGO7a基因表达载体的构建
1.提取大豆品种东农47叶片的总RNA，并反转录成cDNA，作为基因克隆的模板。Phytozome数据库中获取GmAGO7a(Glyma.01g053100)基因的CDS全长序列，序列总长度为3090bp，设计目的基因扩增引物(引物1，GmAGO7a-3300-F：
AGAACACGGGGGACTATGGAAGAGACAGATGA，SEQ ID NO.3；GmAGO7a-3300-R：
ATCCTCTGTTTCTAGCTAGCAATAGAACATGAGC，SEQ ID NO.4)，利用引物1克隆GmAGO7a基因(经过测序的序列如SEQ ID NO.1所示)，纯化PCR产物；将表达载体pCAMBIA3300的质粒利用Xba I执行单酶切，纯化酶切产物；通过Infusion酶将上述pCAMBIA3300质粒的单酶切产物与GmAGO7a基因PCR产物进行连接，形成含有GmAGO7a基因的重组质粒，命名为pCAMBIA3300-GmAGO7a。
2.将上述重组质粒pCAMBIA3300-GmAGO7a转化大肠感受态细胞转化至大肠杆菌感受态DH5α中，采用引物1进行菌液PCR及测序验证(图3)，PCR结果为阳性的单克隆送测序，测序引物采用引物1，若菌液测序结果为正确的GmAGO7a序列，从菌液中提取重组质粒，转化到根癌农杆菌感受态EHA105中，并再次用菌液PCR进行验证(图4)。PCR条带正确的菌液保存至-80℃冰箱，用于后续的大豆遗传转化。
实施例3.转GmAGO7a基因大豆的创制
将重组质粒pCAMBIA3300-GmAGO7a转入农杆菌EHA105中，采用根癌农杆菌介导法，以大豆品种东农50为受体进行大豆半种子转化(图5)，具体方法如下：
(1)菌液制备：将300uL农杆菌涂布于YEP固体培养基(含Kan和Rif)，28℃培养24-36h；
(2)种子灭菌：挑选饱满、完整、无病斑的大豆品种东农50，氯气灭菌后保存，待用；
(3)种子萌发：将灭过菌的大豆种子在暗处用无菌水浸泡16h；
(4)制备半种子：利用CCM液体培养基重悬菌体，并稀释菌液浓度至OD600＝0.8，用于侵染。刮去萌发大豆的种皮，沿着胚轴中间位置切开，将子叶一分为二，灭菌刀蘸取菌液，在生长点附近轻划5刀左右；
(5)侵染与共培养：制备好的半种子完全浸入侵染液，28℃摇床，90rpm震荡30min。
弃去侵染液，无菌纸吸干外植体表面的侵染液，外植体伤口处朝上，平放在CCM固体培养基上，暗处培养3-5d；
(6)丛生芽的诱导与筛选：用无菌水清洗外植体，然后用无菌纸吸干外植体表面水分。
切掉胚芽以及大部分胚轴，胚轴部分向下，外植体倾斜插入SIM培养基中，14d换1次SIM培养基，共换2次；
(7)丛生芽的伸长与生根：仅保留外植体的丛生芽，切除其余部分，将丛生芽有切面的一侧插入SEM培养基中，共进行4次伸长，每个伸长周期为14d。将长势较好的组培苗移入RM培养基中进行生根；
(8)移苗：根部长势较好的组培苗移入水中，炼苗2-3d，随后将其移栽至营养土中。
实施例4.转GmAGO7a基因大豆的超表达植株的分子检测
1.T0代转基因大豆蛋白质水平的检测
利用实施例3描述方法获得的12株再生植株进行标记基因编码蛋白(Bar蛋白)检测，利用Bar试纸条，基于酶联免疫法检测，以试纸条上出现检出线作为转基因再生植株阳性的评价标准，结果显示，共检测出4株T0代转基因大豆植株(图6)。
2.T1代转基因大豆DNA水平检测
将4株T0代转基因大豆植株收获的种子(T1代)进行盆栽种植，取T1代转基因大豆叶片提取DNA，基于pCAMBIA3300载体的35S序列及GmAGO7a基因序列设计特异性检测引物GmAGO7a-35S-F/R(引物2，GmAGO7a-35S-F:ACGGGGGACTATGGAAGAGACAGATGAGTC，SEQ IDNO.5；GmAGO7a-35S-R:GCTCCTCCACCAATGTCTTTGCTTCC，SEQ ID NO.6)，扩增产物为1068bp，同时，利用标记基因Bar基因检测引物3300-Bar-nos402-F/R(引物3，3300-Bar-nos402-F:GCGGTACCGGCAGGCTGAAG，SEQ ID NO.7；3300-Bar-nos402-R:CCGCAGGAACCGCAGGAGTG，SEQID NO.8)进行检测，扩增产物为402bp。利用Bar引物和特异性引物均能扩增出目的条带的大豆植株视为转基因植株，共鉴定出9株T1代转基因大豆株系(图7和图8)。
3.T1代转基因大豆RNA水平检测
基于GmAGO7a基因序列设计荧光定量PCR引物qGmAGO7a-F/R(引物4，qGmAGO7a-F:AAAACACAAAGGGTATGCTGAC，SEQ ID NO.9；qGmAGO7a-R:CTCATCAATATGAAAGAGGCGC，SEQ IDNO.10)，以大豆管家基因Actin 4作为内参，设计内参引物Actin4-F/R(引物5，Actin 4-F:GTTTCAAGCTCTTGCTCGTAATCA，SEQ ID NO.11；Actin 4-R:GTGTCAGCCATACTGTCCCCATTT，SEQID NO.12)，提取9个T1代转GmAGO7a基因大豆株系RNA，进行qRT-PCR实验，检测转基因株系的RNA水平。结果表明9个转基因大豆株系叶片中GmAGO7a基因的相对表达量均显著高于对照。其中3号、5号、6号、7号转基因株系中GmAGO7a基因的相对表达量高于对照的4至6倍(图9)。
4.T2代转基因大豆Bar试纸条检测
分别取3号、5号、6号、7号转GmAGO7a基因大豆株系的T2代叶片，进行Bar试纸条检测。以试纸条上出现检出线，作为再生植株为阳性的评价标准，结果发现4个样本均为阳性植株，可用于后续的功能分析与验证(图10)。
实施例5.转GmAGO7a基因大豆的超表达植株的表型鉴定
1.T2代转基因大豆植株农艺性状分析
将4个T2代转GmAGO7a基因大豆阳性株系(3号、5号、6号、7号)与野生型大豆东农50植株的株高、分枝数、主茎节数以及单株粒数等农艺性状进行分析，发现转基因大豆株系的株高均显著或极显著高于野生型大豆；5号和6号转基因大豆株系的主茎节数多于野生型大豆植株，但差异不显著；3号和7号转基因大豆株系的分枝数目显著多于野生型大豆，5号和6号转基因株系的分枝数多于野生型大豆，但是差异并不显著；转基因大豆株系单株粒数与野生型大豆株系的差异并不显著(图11)。
2.T3代转GmAGO7a基因大豆子粒大小测定
以大豆品种东农50为对照，以粒长、粒宽、粒厚以及百粒重作为子粒大小的评价指标，对4个T3代转GmAGO7a基因大豆株系的子粒大小进行测定。结果表明，转GmAGO7a基因大豆粒长、粒宽、粒厚、百粒重均显著大于野生型，其中4个转基因株系的粒长均极显著(P<0.01)大于野生型；3号和5号转基因株系的粒宽同样极显著(P<0.01)大于野生型，而6号和7号转基因株系的粒宽显著(P<0.05)大于野生型；5号转基因株系的粒厚显著(P<0.05)大于野生型，其余3个转基因株系粒厚均极显著(P<0.01)大于野生型；就百粒重而言，除7号转基因株系百粒重显著(P<0.05)高于野生型外，其余3个转基因株系百粒重均极显著(P<0.01)高于野生型(图12)。
实施例6.GmAGO7a基因序列变异和转录丰度与大豆子粒大小相关性状的关系
序列分析发现，来自东农47的GmAGO7a基因(SEQ ID NO.1)与基因参考序列(SEQID NO.2)存在2个碱基差异，进一步分析发现2个碱基差异构成GmAGO7a基因的两种单倍型，一个是含有SEQ ID NO.1的单倍型，一个是含有SEQ ID NO.2的单倍型，携带两种单倍型的大豆材料百粒重之间存在极显著差异。同时，GmAGO7a基因(SEQ ID NO.1)在黄熟期大豆子粒中的表达量与4个子粒大小性状(粒长、粒宽、粒厚、百粒重)均呈极显著正相关(表1)。
表1 GmAGO7a基因表达量与子粒大小相关性状的相关系数
基因表达量 粒长 粒宽 粒厚 百粒重
GmAGO7a 0.62** 0.60** 0.60** 0.67**
N＝32，**：α＝0.01水平。
东农47中的GmAGO7a编码序列：(SEQ ID NO.1)：
ATGGAAGAGACAGATGAGTCAACCAATGCTAACCAGAAATTCGCCATCAAAAGAAGGAGCTTCAGGAATGGAGGCAACTCTCATGAGCATCATCATTATCACCATCATCACCAC
CACCACCACCATCATCATCACTATCAGCACCACCATCATCATCAGCTGCTACAATACTCA
AATCAGCTTGGTTTCTGCAACAACCAGAACAAGTTTCAGAGATACTACCCAGCTCTTCT
GCCTCTACCTTCTCTTATACCTCTTCAACAACTTCCTTTGACTCCACCCTTCCCTCAGAA
CCACACTATCAAATCAAAAACCCATTTGCACAAACCTCCATGCATGCTCAATAGCTCCC
CCTCCTCAGATTACAAGCTCTCTCAACTACCACTTAATCCTGCTCCAAAAGAACTTCAG
CAGCAATCAAAGGCATCCTTGAAAGGAGATGATGGGAAGAAACTCATTCCAGCAAAGA
AGCCACATGCAGTACTTGTTGCAAGTAGGCCAGACTCTGGTGGCAGAGAAGGCTCTGT
GATCTCTCTTCTTGCCAACCACTTTTTGGTGCAATTTGATCCATCACAGAAGATATATCAT
TACAATGTTGAAATCACTCCTCATCCCTCCAAGGATGTTGCCAGAGCAATCAAGCAGAA
GTTGGTAAATAACAATTCTGCAGTCCTCTCAGGTGCTACTCCAGCATATGATGGTAGAA
AGAATCTTTATAGTCCAGTTGAATTCCAAAATGACAAGCTTGAGTTCTACATAAGCCTCC
CAATCCCCACTAGCAAGTTGAATTCACCTTATGGAGAAATGCCTGATTTGAAAGAGAAG
CATGAACAGCTTAAACTTTTCAGGATAAATGTCAAGTTGGTCTCAAAGATCAATGGGAA
GGAGTTGAGTAATTACTTGAGCAACGAGGGTGATGATTGGATTCCACTTCCACAGGATT
ATCTGCATGCTTTGGATGTAGTTCTTAGGGAAAGTCCAACTGAGAAATGCATACCTGTA
GGGAGGTCATTCTATTCAAGTTCAATGGGAAGAAGCAAAGACATTGGTGGAGGAGCTG
TTGGATTGAGAGGCTTCTTTCAGAGTCTTAGACCAACACAACAAGGACTTGCTCTCAAT
GTGGATTTCTCGGTAACTGCTTTCCATGAGAGCATAGGAGTGATTGCATACTTGCAGAA
GCGCGTCGAGTTTCTTCGAGACCTGTCTCAAAGGAAGACAGCTCAATTAACTGGCGAA
GAGAGGAAGGAAGTGGAGAAGGCGTTGAAGAGCATCAGGGTCTTTGTTTGCCACAGA
GAAACTGTTCAGCGATATCGTGTCTATGGCTTGACTGAGGAGGTTACTGAAAATCTTTG
GTTTGCTGACAGAGATGGGAAGAATCTGAGGTTGGTGAATTACTTTAAAGATCAATATA
ACTATGACATACAATTCAGAAAACTGCCATGCTTGCAAATTAGTAGGAGTAAGCCTTGT
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ACCCTCCCAAACTAAAGCTTGGAGATGGAGGTCATGTAAGAAATCTGACTCCTTCACGT
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GTGGGCACTAATTAGTTTTGGGGGCACACCTGAGCAGAAGTCCAATGTCCCCAGATTTA
TAAACCAGTTATGTCAAAGGTGTGAACAATTGGGCATTTTTCTCAACAAGAACACTGTT
ATTAGTCCCCAGTTTGAATCTATCCAAATTCTTAACAATGTCACCCTTTTGGAATCTAAG
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GAGAAAACACAAAGGGTATGCTGACTTGAAGCGAATTGCCGAGACAAGTGTTGGTGTC
ATGAGCCAATGCTGCCTGTACCCCAACCTCAACAAGTTGAGTTCACAATTTTTGGCTAA
TTTGGTCCTCAAAATCAATGCCAAAGTTGGTGGATGCACAGTTGCCTTATACAACTCAT
TGCCTTCGCAGTTACCGCGCCTCTTTCATATTGATGAGCCAGTGATATTCATGGGTGCTG
ATGTGACACATCCTCACCCTCTTGATGATGTCAGTCCATCTGTTGCTGCTGTTGTTGGTA
GCATGAATTGGCCGACAGCAAACAAGTACATTTCAAGAATAAGGTCTCAAACACATAG
ACAAGAAATCATCCAGGATCTCGGTGCAATGGTGGGGGAATTGCTTGATGATTTTTACC
AGGAGGTAGAGAAACTCCCCAATAGAATCATTTTCTTCAGAGACGGGGTTAGTGAAAC
TCAGTTTTACAAAGTGCTGGAAGAGGAACTTCAATCCATCAGGTTTGCATGTTCAAGGT
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TTGTTTCCCTTTGAAACTGACCAGTCTTCAACTCAAAACAATTTTCTATATGAAAACATT
CCTCCTGGGACTGTGGTTGATTCTGTGATCACTCATCCAAAGGAATTTGACTTCTATCTT
TGTAGCCATTGGGGTGTTAAAGGAACAAGTAGGCCAACTCACTACCATGTCTTGTGGGA
TGAAAACCAGTTTACTTCTGATGAACTACAGAAACTGGTTTACAACTTATGCTACACTT
TTGTTAGGTGTACCAAGCCAATTTCTTTGGTGCCTCCTGCATATTATGCACACTTAGCTG
CATATAGAGGCAGACTCTACCTTGAGAGATCAGAGTCCTTAGGTTTGTTCCGAAGCACA
TCTACACTATCCAGAGCTGCTCCTCCAAAGACAGCAGCTCTACCTAAACTTAGTGAAAACATCAAGAAGCTCATGTTCTATTGCTAG；
参考基因组Williams V2.a1 GmAGO7a的编码序列(Glyma.01G053100)(SEQ IDNO.2)：
ATGGAAGAGACAGATGAGTCAACCAATGCTAACCAGAAATTCGCCATCAAAAGAAGGAGCTTCAGGAATGGAGGCAACTCTCATGAGCATCATCATTATCACCATCATCACCACCACCACCACCATCATCATCACTATCAGCACCACCATCATCATCAGCTGCTACAATACTCAAATCAGCTTGGTTTCTGCAACAACCAGAACAAGTTTCAGAGATACTACCCAGCTCTTCTGCCTCTACCTTCTCTTATACCTCTTCAACAACTTCCTTTGACTCCACCCTTCCCTCAGAACCACACTATCAAATCAAAAACCCATTTGCACAAACCTCCATGCATGCTCAATAGCTCCCCCTCCTCAGATTACAAGCTCTCTCAACTACCACTTAATCCTGCTCCAAAAGAACTTCAGCAGCAATCAAAGGCATCCTTGAAAGGAGATGATGGGAAGAAACTCATTCCAGCAAGGAAGCCACATGCAGTACTTGTTGCAAGTAGGCCAGACTCTGGTGGCAGAGAAGGCTCTGTGATCTCTCTTCTTGCCAACCACTTTTTGGTGCAATTTGATCCATCACAGAAGATATATCATTACAATGTTGAAATCACTCCTCATCCCTCCAAGGATGTTGCCAGAGCAATCAAGCAGAAGTTGGTAAATAACAATTCTGCAGTCCTCTCAGGTGCTACTCCAGCATATGATGGTAGAAAGAATCTTTATAGTCCAGTTGAATTCCAAAATGACAAGCTTGAGTTCTACATAAGCCTCCCAATCCCCACTAGCAAGTTGAATTCACCTTATGGAGAAATGCCTGATTTGAAAGAGAAGCATGAACAGCTTAAACTTTTCAGGATAAATGTCAAGTTGGTCTCAAAGATCAATGGGAAGGAGTTGAGTAATTACTTGAGCAACGAGGGTGATGATTGGATTCCACTTCCACAGGATTATCTGCATGCTTTGGATGTAGTTCTTAGGGAAAGTCCAACTGAGAAATGCATACCTGTA
GGGAGGTCATTCTATTCAAGTTCAATGGGAAGAAGCAAAGACATTGGTGGAGGAGCTG
TTGGATTGAGAGGCTTCTTTCAGAGTCTTAGACCAACACAACAAGGACTTGCTCTCAAT
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GCGCGTCGAGTTTCTTCGAGACCTGTCTCAAAGGAAGACAGCTCAATTAACTGGCGAA
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TCTACACTATCCAGAGCTGCTCCTCCAAAGACAGCAGCTCTACCTAAACTTAGTGAAAACATCAAGAAGCTCATGTTCTATTGCTAG。

Claims (5)

1.一种培育提高大豆产量的大豆植株的方法，其特征在于，所述方法的步骤如下：
步骤1：将SEQ ID NO.1所示的基因与载体pCAMBIA3300载体连接，获得重组载体；
步骤2：将步骤1所述的重组载体转化至农杆菌中，获得重组农杆菌；
步骤3：将步骤2所述的重组农杆菌转入大豆中获得转基因大豆植株，鉴定后获得阳性的转基因大豆植株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3中鉴定用的引物序列如SEQ ID NO.5所示和SEQ ID NO.6所示或如SEQ ID NO.7所示和SEQ ID NO.8。
3.大豆植株中过表达SEQ ID NO.1所示的大豆基因、大豆植株中转入含有SEQ ID NO.1所示的大豆基因的重组载体或在大豆植株中SEQ ID NO.1所示的大豆基因编码的氨基酸序列的蛋白表达量提高在提高大豆产量中的应用。
4.大豆植株中过表达SEQ ID NO.1所示的大豆基因、大豆植株中转入含有SEQ ID NO.1所示的大豆基因的重组载体或在大豆植株中SEQ ID NO.1所示的大豆基因编码的氨基酸序列的蛋白表达量提高在提高大豆株高、分枝数中的应用。
5.大豆植株中过表达SEQ ID NO.1所示的大豆基因、大豆植株中转入含有SEQ ID NO.1所示的大豆基因的重组载体或在大豆植株中SEQ ID NO.1所示的大豆基因编码的氨基酸序列的蛋白表达量提高在提高大豆子粒的粒长、粒宽和粒厚中的应用。
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