CN116042408A - 一种解磷菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种解磷菌及其应用，所述解磷菌的分类命名为黑曲霉菌(Aspergillus niger)，菌株命名为Aspergillus niger ZGSX‑1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62453，保藏日期为2022年5月5日。将所述解磷菌培养后过滤，除去菌丝和孢子，得到发酵菌液，用发酵菌液进行解磷。本发明使用生物的、有机的、无污染的、快速的、不同于传统的方法从不同品位磷矿粉中快速制备可溶性磷和有效磷，可用于磷肥生产工艺等的生产。

Description

一种解磷菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种解磷菌及其应用。
背景技术
磷肥生产分为有机磷肥和无机磷肥。有机磷肥是利用一些动植物残骸作为有机磷肥的原料。而大规模磷肥生产过程中的原料主要是来自于磷矿石。磷肥的生产一般分为3种方法。1、物理方法：将块状磷矿石研磨通过100目筛，即得磷矿粉肥。2、酸分解法：即用硫酸、硝酸、磷酸或盐酸等无机酸溶解磷矿石，将其中的不溶性磷转化为能被植物利用的可溶性磷。这类产品通常称为湿法磷肥。3、热分解法：利用电热或燃料热所产生的高温使磷矿晶体结构破坏或与其他配料反应，形成可被植物吸收的磷酸盐。这一过程通常称为热法磷酸。由于热法磷肥生产成本高，能耗大，且生产中粉尘及有害气体对环境污染比较严重，而物理方法对磷矿中磷的利用非常有限，故目前世界磷肥工业都已湿法为主。
中国磷资源分布不平衡，主要集中在云、贵、鄂、川四个省，占全国磷矿资源的78％。湿法磷产品加工企业也主要集中在上述四个省份。四个省份的磷肥产量在2018年也达到了全国总产量的81％。磷资源贫化加快，可采资源锐减，中低品位磷矿占比增加。湿法磷肥产能过剩，环境污染问题突出等问题。磷石膏，磷酸生产和净化过程中还将产生大量的淤渣和酸性的废水废气，这些对环境造成污染。中国的大部分湿法磷化工产业集中在长江经济带，“三磷”问题是磷化工产业迫在眉睫的任务，也是制约湿法磷化工产业可持续发展的瓶颈。
磷肥施用后，土壤中的大多数磷素被钙、铁、铝等离子及土壤黏粒固定，形成无效态磷，无法被植物直接吸收利用。能被植物利用的磷素形态以HPO4 2-和H2PO4 -为主，被称为“有效磷”。由于土壤的差异，磷肥添加于土壤后，通常磷与土壤产生的吸附作用使磷肥不再以原有的形态存在。在我国南方，土壤大多呈酸性，铁铝等离子含量较高，磷肥中可利用的磷被游离的铁铝等离子固定，并转化为不溶性的磷酸铁和磷酸铝等。在我国北方，土壤多为碱性，钙离子含量较高，可与游离的磷酸根结合，转化为磷酸二钙，磷酸八钙，最终转化为磷酸十钙。因此，解磷菌剂的施用可以增加磷的溶解度并减少磷的固定，从而提高土壤中磷肥利用率。解磷菌剂一般通过将培养好的微生物菌体直接加入土壤，微生物在生长繁殖过程中分泌的代谢产物或者其他菌体协同产生某些物质能够将难溶性的磷转化为有效磷，便于植物直接利用。
解磷微生物既可以分解有机磷也可以分解无机磷(磷矿等)，其包括了有机磷分解菌和无机磷分解菌，两者之间没有严格的界限。能够浸出磷矿的微生物工业菌种可以分为异养菌和自养菌两大类。异养菌分解磷矿速度缓慢，自养菌主要通过产酸性浸出液分解磷矿。微生物解磷主要是通过微生物(包含细菌，真菌和放线菌)酸解，酶解、pH降低或其他方式将土壤或者磷矿石中的难溶性磷酸盐转化为作物可以利用的可溶性磷酸盐，供作物吸收利用。已经报道的具有解磷作用的微生物有20多个属，其中具有解磷作用的细菌种类和数量最多，例如硫杆菌属(Thiobacillus)、固氮菌属(Azotobacter)、芽胞杆菌属、假单胞杆菌属(Pseudomonas)、欧文氏菌属(Erwinia)、伯克氏菌属(Burkholderia)、土壤杆菌属(Agrobacterium)等等。已经筛选出来且被证明具有解磷作用的真菌种类比较少，在生产上应用比较多的是菌根菌类。具有解磷作用的真菌类群主要有青霉菌属(Penicillium)、曲霉菌属(Aspergillus)、链格孢属(Alternaria)、根霉属(Rhizopus)、短梗霉属(Aureobasidium)、镰刀菌属(Fusarium)、踝节菌属(Talaomyces)、小菌核菌属(Sclerotium)、酵母菌属(Saccharomyces)和菌根菌属(Arbuscularmy)。具有解磷作用的放线菌主要是链霉菌属(Streptomyces)，链霉菌属的解磷作用相对较差，但因其产生抗性物质，故具有独特的防病功能。
是否可以作为微生物解磷菌剂可以通过在培养基中添加磷矿粉，通过一定时间培养后，测量磷矿粉溶解在培养基中的量来计算微生物的解磷能力。例如：利用LB(Luria-Bertani Media)液体培养基在30℃培养枯草芽孢杆菌2天后，按照10:1比例将枯草芽孢杆菌接种在含有矿粉的NBRIP培养基(National Botanical Research institute’sphosphate growth medium，国际植物研究所磷酸盐生长培养基：葡萄糖10g，(NH4)2SO40.5g，KCl 0.3g，MgCl20.3g，使用蒸馏水定容1L，pH＝7.0～7.5)中，100r/min振荡培养条件下培养，pH值在第二天急剧下降，在第10天可溶磷增加至最大152mg/mL。另外也可以通过微生物对磷矿的浸出试验，例如高尚等利用氧化硫硫杆菌对某中品位磷矿进行浸出试验，试验表明，培养温度、震荡速率、细菌培养时间、磷矿粉浓度和pH等因素对氧化硫硫杆菌的浸矿效果均有影响，在培养温度32℃、溶液初始pH＝5、矿粉浓度1.5g/L的最佳条件下，7天浸磷率可达70.28％，溶磷效果较强。
目前，工业生产磷肥的主要原料还是来自于磷矿石，生产的方法如上述：主要有酸法和热法，物理磨粉后直接作为磷肥施用因为其利用率低，所以很少采用。不管采用那种方法，其原料通常都要较高品位的磷矿石，并且在选矿和富集加工成高浓度的磷肥的过程中耗能大，同时还带来了巨大的环境污染。湿法磷肥生产过程中，以无机酸分解磷矿生产磷肥。湿法磷肥生产过程中所用无机酸通产为硫酸、硝酸、盐酸和磷酸等，其中尤其是以硫酸为最多。首先，湿法磷肥对矿粉的品质要求较高，需要进行磷矿的浮选。其次，在生成过程中的危险因素较高。生成过程废气，废渣等污染问题严重，磷矿中通常含有杂质(称为倍半氧化物)，生产过程中会伴随有沉淀产生，导致磷的损失。同时由于R2O3的存在也会导致过磷酸钙熟化过程中水溶性P2O5降低，通常称为“退化”。此外磷石膏的产生是湿法磷肥工业中的副产物，虽然人们在开发新的技术和手段充分利用磷石膏，但是依然面临对环境造成污染的可能。再次，在处理低品位复杂矿石时，传统工艺存在选矿成本高、效率低、药剂用量大，化学污染严重和流程复杂等。基于成本降低、能耗降低以及环境污染问题，研究者都在积极地寻找新的途径。
微生物法将磷矿粉中或者土壤中的不溶性磷转化为可溶性磷，提高磷肥利用率及作物产量的同时，改善土壤环境、减少磷素对土壤及河流污染，使农业生产更加可持续发展。微生物菌剂的方式虽然也能解决湿法工业生产过程中环境污染问题，但是其转化速度慢，通常要微生物与矿物共同培养3-7天甚至更长时间才能够达到75％以上的解磷率。此外，由于有机酸性不强，需添加有机营养物质作为生长所需的碳源和氮源，不同的环境对菌株的影响较大，因此分解磷矿速度较慢，应用很大程度受到限制。
综上，使用湿法磷肥或微生物分解法对磷矿进行解磷存在着成本高、环境污染或者解磷率低、分解速度慢等各种问题，目前亟需一种方法可以降低成本、减少环境污染同时提高解磷率和解磷速度。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提出了一种解磷菌及其应用。本发明在微生物浸矿的基础上，筛选得到能够解磷的微生物，同时结合了化学法的方法，利用已经发酵好的微生物培养液对磷矿粉进行直接快速的处理，可以将矿粉中不溶性的磷充分转化为可溶性磷，培养液中的可溶性磷可以直接制作水肥，也可以通过一定的方法干燥后再利用。相比于湿法磷肥和微生物法两种方法，本发明的方法同时解决了上述两种方案中存在的问题，能够很好的应用。
本发明提供一种解磷菌，所述解磷菌的分类命名为黑曲霉菌(Aspergillusniger)，菌株号为ZGSX-1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：中国广州，菌种保藏号为GDMCC NO:62453，保藏日期为2022年5月5日。
进一步的，所述解磷菌的18S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
18S rDNA序列分析：测得18S rDNA序列1675bp，如SEQ ID NO.1所示。将所测序列从GeneBank数据库中的相关种进行比较，构建18S rDNA全序列为基础的系统发育树。结果表明：菌株与黑曲霉菌达到99％以上同源。所以认定本发明使用的是黑曲霉菌(Aspergillus niger)，具体命名为黑曲霉菌Aspergillus niger ZGSX-1。
本发明还提供所述的解磷菌在解磷中的应用。
进一步的，所述解磷为磷矿解磷。
进一步的，将所述解磷菌培养后过滤，除去菌丝和孢子，得到发酵菌液，用发酵菌液进行解磷。本发明的解磷方法不需要使用解磷菌本身与磷矿粉混合，只需要使用其发酵液直接对磷矿粉等进行处理。处理手段更快，更方便，更环保，受其它因素影响更小，且使用范围更广，不需要考虑菌株失效、储存和菌株活性等一系列问题，可最大程度提取有效磷且处理后的磷矿粉仍可用于其他资源的利用。
进一步的，将所述发酵菌液和磷矿粉进行混合，混匀后加热，然后测定有效磷含量。
进一步的，所述解磷菌培养时间为2-4天，优选为3天。
进一步的，所述磷矿粉和所述发酵菌液和质量体积比为1:(10～200)，优选为1:200。
进一步的，所述加热温度为30-100℃。
进一步的，所述加热时间为10-60min，优选为30min。
综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：
1、从自然界筛选得到了一株新的解磷真菌，不仅能够作为传统微生物法进行磷矿浸出，而且利用该微生物发酵菌液直接对磷矿粉进行快速、高效的处理后可以将磷矿粉中的不溶性磷转化为可溶性磷。
2、利用发酵液进行矿粉快速处理的方法不同于以往微生物处理磷矿粉的任何一种方式。处理过程不仅传承了传统微生物解磷的优点，如完全无污染，无排放；处理过程耗能少，节约成本；处理对象多样化，不挑剔；而且还具有处理时间短，速度快；处理效率高，易操作的优点，方便多次处理矿粉。30℃以上处理10-60min，就可以从矿粉中提取80％以上的有效磷。
3、与传统微生物法相比，本发明的方法处理磷矿粉过程不受解磷微生物生长状态及其他因素影响。
4、本发明的方法与其他曲霉属菌株或者产酸菌株相比解磷效果明显。
5、本发明的解磷发酵液室温存放15天内依然可以高效解磷。
6、本发明的解磷发酵液还可以处理多种难溶于水的磷酸化合物。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明中磷酸钙为唯一磷源培养基上的解磷菌。左：平板正面。右：平板反面。
图2为本发明中曲霉菌的显微照片。其中A为菌丝照片，图例为100μm。图B-C为孢子丝照片，图例分别为50和100μm。
图3为本发明实施例3的响应面实验结果。图A是温度和比例的关系，图B为时间和比例的关系。
图4为本发明实施例4高效解磷菌剂对种子萌发生长的影响。
图5为本发明实施例5的高效解磷菌剂处理难溶磷酸盐效果。CK，水处理磷酸盐作为对照；磷酸盐名称，菌液处理相应磷酸盐组。
图6为本发明实施例6的高效解磷菌剂的稳定性测定。CK，水处理磷矿粉对照。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明开发了不同于现有微生物菌剂的方法进行磷矿粉中有效磷的提取，并可以用于磷肥(特别是水剂磷肥)的生产。一般微生物菌剂的制备都是大量培养解磷微生物，然后将培养好的微生物直接或者与其他载体进行混合后当做肥料进行施用。国家大力提倡化肥、农药“减施增效”。水肥一体化新型肥料研发与应用是国家农业部发布的《到2020年化肥使用量零增长行动方案》中大力提倡及鼓励的政策。与传统方法相比较，该方法不是使用磷矿粉和微生物共培养，而是使用本发明分离得到的微生物培养后的培养液对磷矿粉进行处理，处理后的磷矿粉中的不溶性磷可以大幅度地转化为可溶性磷。与传统的湿法工业生产相比，该方法符合国家水肥一体化新型肥料研发与应用方针，遵循了国家农业部发布的《到2020年化肥使用量零增长行动方案》中大力提倡和鼓励的政策。最关键的是改法相比于湿法磷肥，能够很好地解决湿法磷肥突出的环境污染问题。不产生磷石膏，大量的淤渣和酸性的废水废气，对环境不造成任何污染，能够为碳中和战略助力。该方法也与现有的微生物磷肥有着本质的区别，不再是通过微生物与土壤或者磷矿粉的共同培养达到解磷的作用，而是直接利用微生物发酵液对磷矿粉进行直接快速的处理。
本发明从自然界中使用无机磷平板法筛选、分离得到一株具有良好解磷效果的解磷真菌ZGSX-1，经18S rDNA鉴定属于曲霉菌属(Aspergillus niger)。其不仅可以在以磷矿为唯一磷源的培养基中生长(表明该菌株可以分解磷矿)，而且其培养液可以高效率地、快速地将磷矿粉中的不溶性磷转化为可溶性磷。
将分离得到的微生物菌株ZGSX-1接种于马铃薯固体培养基中培养72h。将平板培养好的真菌孢子用少量无菌水悬浮(～109个/mL)，按照1％接种量接入盛有100mL马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中，于28-30℃，160r/min条件下摇床培养72h。滤纸过滤除去菌丝和孢子，滤液收集。上述滤液和矿粉(处理为100目)按照不同比例进行混合，同时使用未培养过微生物的培养基作为空白对照，混匀后加热至不同温度处理不同时间，然后按照GB/T8573-2017中喹钼柠酮重量法测定有效磷含量。其在菌液和矿粉比例为200:1的比例下，30℃以上最短处理10-30min可以从矿粉中提取80％以上的有效磷。溶解于培养液的磷可以用来生产水剂磷肥或者用其他干燥方式进行回收从而用于固体磷肥的生产等。同样的曲霉属的另外一株曲霉解磷效果明显低于该菌株，发酵液pH值较低的波兰青霉菌发酵液相比于对照而言无解磷效果。说明并非所有产酸的微生物都可以进行磷矿粉解磷过程。水稻种子萌发模型证明其处理液相比于对照溶液能够促进植物种子的萌发以及根的生长。
实施例1
从土壤中分离具有解磷功能的微生物。使用的培养基成分为：葡萄糖10g，硫酸铵0.5g，氯化钠0.3g，氯化钾0.3g，硫酸镁0.3g，硫酸亚铁0.03g，硫酸锰0.03g，磷酸钙5.0g，琼脂15g，pH 7.0-7.5，蒸馏水1000mL，121℃灭菌30min。
取土样3份，分别来自于磷矿区、磷肥施用土壤、正常土样三个取样地。分别称取10g土壤，加入到含90mL无菌水和玻璃珠的三角瓶中，摇床200r/min处理30min制成土壤菌悬液，将土壤悬液直接涂布平板(以磷酸钙作为唯一磷源)。每个样品涂布100个平板，28-30℃培养2天后观察结果。将能够生长的所有的菌株再次在该培养基上进行再次确认，最终得到一株具有明显解磷作用最强的真菌，如图1所示，菌落周围的透明圈说明能够解磷。经过18S rDNA鉴定该菌株为曲霉属(Aspergillus.)。将该菌株命名为ZGSX-1。
微生物发酵法处理磷矿粉的具体方法及其所用物品。
1.培养基
葡萄糖马铃薯固体培养基(PDA)：马铃薯浸粉6g，葡萄糖20g，琼脂15g，取超净水定容至1L。
葡萄糖马铃薯液体培养基(PDB)：马铃薯浸粉6g，葡萄糖20g，取超净水定容至1L。
2.其他材料
EDTA-Na2溶液：称取EDTA-Na2 37.5g于烧杯中，取超净水定容至1L。
硝酸1+1溶液：取等体积硝酸和超净水混合制得。
喹钼柠酮溶液：源叶公司。
实验室通常用仪器。烘箱、天平、恒温水浴锅等。
3.解磷菌发酵液的准备
将分离得到的微生物菌株ZGSX-1从甘油管接出到PDA中，30℃培养箱中培养2d，将长满培养基的菌株用灭菌的接种环刮取半环接入200mL PDB中，于30℃摇床200r/min培养3天。将培养好的发酵液用滤纸过滤，即得菌体发酵液，可以直接使用或暂存于-20℃冰箱。
将矿粉和上述滤液(处理为100目)按照1：10-1:200的质量体积比例进行混合，同时使用未培养过微生物的培养基作为空白对照，以及水处理的磷肥作为阳性对照。混匀后加热(30-100℃)处理10-60min，然后按照GB/T8573-2017中喹钼柠酮重量法测定有效磷含量。其在矿粉和菌液比例为1：200的比例下，30℃以上最短处理20min可以从矿粉中提取80％以上的有效磷。再经过两次处理后可以从矿粉中提取90％以上的有效磷。溶解于培养液的磷可以用来生产水剂磷肥或者用其他干燥方式进行回收从而用于固体磷肥的生产等。水稻种子萌发模型证明其处理液相比于对照溶液能够促进植物种子的萌发。
4.磷矿粉的处理
取1g磷矿粉进行不同条件下的处理。
5.有效磷的提取
用培养3d后的菌液，在矿粉和菌液比例为1:200时，加热到30℃以上处理30min，按照GB/T 8573-2017中喹钼柠酮重量法，测定有效磷含量。
磷含量计算公式如下：
有效磷含量(W1)，以五氧化二磷(P2O5)质量分数计，数值以％表示，依次按式(1)计算：
式中：
m1为测定有效磷所得磷钼酸喹啉沉淀的质量的数值，单位为克(g)；
m2为测定有效磷时，空白试验所得磷钼酸喹啉沉淀的质量的数值，单位为克(g)；
0.03207为磷钼酸喹啉质量换算为五氧化二磷质量的系数；
mA为测定有效磷时，试料质量的数值，单位为克(g)；
25为吸取试样溶液体积的数值，单位为毫升(mL)；
250为试样溶液总体积的数值，单位为毫升(mL)；
计算结果表示到小数点后两位，取平均测定结果的算术平均值为测定结果。测定结果如表1所示：
表1微生物发酵液解磷效果
使用不同菌株的解磷结果如表2所示：
表2不同菌株解磷情况比较
本发明的菌株过滤后的发酵菌液的pH约为1.5，为了探究该菌株发酵液解磷的具体机制，使用NaOH对发酵液进行了中和，中和后再进行解磷实验，结果显示，中和后的发酵液解磷能力明显降低，与未中和的发酵液对照相比有显著性差异。说明pH值的降低在发酵液解磷作用中起到关键的作用。
实施例2
为了了解微生物培养后的发酵液进行解磷过程的条件，本实施例探索了处理时间(因子1)、处理温度(因子2)和处理比例(因子3)在解磷过程中的作用(见表3)。本发明对以上因素进行探索，得出了本发明的菌株最适宜解磷的条件。
表3正交实验表各因子序号代表的条件
根据上述不同条件处理，设计正交实验得到最佳处理条件(见表4)。
表4正交实验表
正交分析结果如表5所示：
表5多因素方差分析结果
R2＝1.000
*p<0.05；**p<0.01
正交实验结果表明，解磷过程中发酵液和磷矿粉比例最为重要，决定了从磷矿粉中获得水溶性磷的效率。
实施例3响应面实验
根据Design Expert软件设计出17组进行响应面实验，结果如图3所示，结果与正交结果相互印证。结果表明，本发明的解磷菌在培养3天后，采用磷矿粉和发酵液比例为1:200处理即可达到较好的解磷效果。
实施例4本发明的高效解磷菌剂对种子萌发生长的影响
将均匀质地的小麦种子用超纯水浸泡过夜，取小麦种子在3％～4％次氯酸钠溶液中漂洗3-4次，然后用无菌水洗涤3-4次备用。不同处理组处理后的菌剂过膜除菌，以水和菌株培养基为对照，培养皿中的滤纸喷洒相同处理菌剂保湿，不同时间测量记录培养种子的萌发，芽长和根长，3次重复用于统计分析。测量培养5～6d种子的芽长和根长。结果如图4所示，虽然芽长没有明显的变化，但是根长在菌液处理的磷矿粉溶液中明显增长。
实施例5本发明的高效解磷菌剂处理难溶磷酸盐效果
本发明采用实施例1中的方法，对难溶性磷盐，如磷酸三钙、磷酸铝等的解磷效果进行了测定，具体实验结果如图5所示，结果表明菌株ZGSX-1对难溶性磷盐也具有显著的解磷效果。
实施例6本发明的高效解磷菌剂的稳定性测定
为评定本发明的高效溶磷菌的稳定性，将制成的菌剂高温高压蒸汽灭菌处理或于25℃条件下分别放置3天、10天和15天后处理(微加热，30min，1:200)难溶磷矿粉，随后进行有效磷的测定，结果如图6所示，菌剂在不同处理条件下稳定，处理后对于溶磷能力的影响不大。
综合以上实施例，本发明公开了一种解磷菌及其应用，所述解磷菌的分类命名为黑曲霉菌(Aspergillus niger)，菌株命名为Aspergillus niger ZGSX-1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62453，保藏日期为2022年5月5日。将所述解磷菌培养后过滤，除去菌丝和孢子，得到发酵菌液，用发酵菌液进行解磷。本发明使用生物的、有机的、无污染的、快速的、不同于传统的方法从不同品位磷矿粉中快速制备可溶性磷和有效磷，可用于磷肥生产工艺等的生产。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种解磷菌，其特征在于，所述解磷菌的分类命名为黑曲霉菌(Aspergillusniger)，菌株命名为Aspergillus niger ZGSX-1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC NO:62453，保藏日期为2022年5月5日。
2.根据权利要求1所述的解磷菌，其特征在于，所述解磷菌的18SrDNA序列如SEQ IDNO.1所示。
3.权利要求1-2任一项所述的解磷菌在解磷中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述解磷为磷矿解磷。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，将所述解磷菌培养后过滤，除去菌丝和孢子，得到发酵菌液，用发酵菌液进行解磷。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，将所述发酵菌液和磷矿粉进行混合，混匀后加热，然后测定有效磷含量。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述解磷菌培养时间为2-5天，优选为3天。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述磷矿粉和所述发酵菌液和质量体积比为1:(10～200)，优选为1:200。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述加热温度为30-100℃。
10.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述加热时间为10-60min，优选为30min。
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