CN116035940B - 一种抗氧化胶原蛋白肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种抗氧化胶原蛋白肽及其制备方法，涉及胶原蛋白肽技术领域。本发明采用的技术方案如下：包括如下重量份数的各组分：胶原蛋白肽60～80份，抗坏血酸过氧化物酶5～20份，乳铁蛋白0.5～2份，抗氧剂0～3份，稳定剂0～1份。通过胶原蛋白肽和抗坏血酸过氧化物酶的协同作用，改善了目前市场上胶原蛋白肽性能没有得到充分发挥的难题，使得胶原蛋白的抗氧化效果得到显著的提升。

Description

一种抗氧化胶原蛋白肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及胶原蛋白肽技术领域，具体涉及一种抗氧化胶原蛋白肽及其制备方法。

背景技术

医学研究指出，人在极端不良情绪下，如愤怒、紧张、恐惧等会产生自由基。现代社会中紫外线、X线、电磁波、致癌物质、酒精、一些药物和污染物质等，也会导致更多自由基的产生。自由基可以攻击人体细胞组织而且造成连锁反应，从而可能引发多种慢性疾病。如帕金森病、白内障、休克、炎症、心肌梗死、动脉硬化、高血压、肾炎、糖尿病、癌症、老化、胃及十二指肠溃疡等等。人之所以会衰老，老化迹象一点一滴出现，如色素沉着、体力衰退、是因为体内产生氧化作用。

自由基之所以对人体有害，是因为它具有活泼的化学性质，会和体内细胞中的有机物质发生链式反应（因自由基含未配对的电子，所以极不稳定，会从邻近的分子上夺取电子，让自己处于稳定的状态。这样一来，邻近的分子又变成一个新的自由基，然后再去夺取电子。如此下去，即自由基链式反应），使得体内过氧化物大量堆积，让细胞失去正常的生理功能，从而导致疾病的产生。可见，衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。

胶原蛋白肽是被水解的胶原蛋白，分子量比较小，可以直接被人体吸收。食源性胶原蛋白肽因为具有分子质量小、结构简单、易于人体吸收、抗氧化活性高、在不同环境条件下稳定性强等特，逐渐成为一种安全有效的抗氧化剂。动物骨中含有大量的骨胶原蛋白，具有高营养价值、抗氧化活性、提高人体免疫力的功效，可以将动物骨进行再次加工提取。

CN 113880942 A（一种具有抗氧化活性的鸡骨胶原蛋白肽及其应用）仅仅是对鸡骨头中的胶原蛋白肽进行了提取，通过工艺的方法对胶原蛋白肽进行了制备，但并未对其进行复合使用或性能的进一步最大化处理。CN 109567213 A（一种复合胶原蛋白肽粉）具体涉及一种复合胶原蛋白肽粉，其原料按重量份包括：胶原蛋白肽粉58～62份、蔗果三糖2～8份、食用葡萄糖8～12份、乳粉12～18份、复合酵素5～15份、食用玉米淀粉8～12份、麦芽糊精1～5份、增强剂0.01～1份。该发明具有强化体质耐力、改善胃肠道功能、美容养颜、促进细胞生长、抗衰老的作用。但是该发明提供的胶原蛋白肽粉的抗衰老作用主要是由于增强剂的作用，加工过程中依然存在抗氧化因子的分解，抗氧化性较低的问题。CN 108452296 A（一种具有抗氧化活性的牛骨胶原蛋白肽及其制备方法）具体采用的配方如下：牛骨胶原蛋白肽粉2400～3600份，红景天10～30份、夜交藤5～15份、鱼腥草3～7份、朱砂七10～20份、玳玳花1～3份、冬虫夏草10～20份、忍冬藤4～12份、芡实3～7份、菝葜叶4～12份、凤凰衣8～16份、鸡内金4～8份、贯众3～7份、角蒿5～15份、枫香脂2～6份、金樱子1～3份。该发明采用的配方较为复杂，且性能没有较明显的改善，不便于实际操作生产。

对于体内积累的过量的超氧化物自由基或其他活性氧（ROS），自由基的产生与清除的平衡对生物体起着重要作用，而抗坏血酸过氧化物酶（aseorbateperoxidase,APX）是植物活性氧代谢中的重要抗氧化酶之一，尤其是清除活性氧的关键酶。ROS包括H₂O_2，而H₂O₂是一种相对稳定的小分子，能够通过细胞壁运输，若不及时清除，就会转化为毒性更大的分子。而人体的衰老以及生病与H₂O₂以及超氧化物自由基有一定的关系。APX通过提高体内自由基代谢途径中的酶活力，可以增强人体抵御氧化的能力，从而增强人体整体的素质以及年轻态。

现有的技术仅仅是对胶原蛋白肽的直接加工应用，并没有将胶原蛋白肽的价值最大化发挥。

本发明从以上问题入手，发明了一种高效的抗氧化胶原蛋白肽，这种肽较常规的肽，活性有明显的提升。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗氧化胶原蛋白肽，以解决目前市场上胶原蛋白肽活性没有完全释放，活性不高的这一问题。同时本发明的抗氧化胶原蛋白肽具有长期稳定性。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种抗氧化胶原蛋白肽，包括如下重量份数的各组分：胶原蛋白肽60～80份，抗坏血酸过氧化物酶5～20份，乳铁蛋白0.5～2份，抗氧剂0～3份，稳定剂0～1份。

优选地，所述的胶原蛋白的分子量为300～4000道尔顿。

进一步优选地，所述的胶原蛋白的分子量为1500～3000道尔顿。

胶原蛋白肽的分子量是1500～3000道尔顿，吸收率达到96%～99％，能够提供人体高纯度、好吸收、无负担优质的胶原补充，在保证吸收率的前提下，提高有效作用量。小分子胶原蛋白吸收速度，比其他蛋白质高出许多。分子量越小越容易吸收。但分子量小到几百道尔顿，反而容易被胃部的蛋白酶消化，并分解成更小的氨基酸，直接代谢以排出体外。

优选地，所述的抗坏血酸过氧化物酶的活性不低于3.5×10³U/mL。

抗坏血酸过氧化物酶（aseorbateperoxidase,APX）是清除H₂O₂以及超氧化物的关键酶。APX通过提高体内自由基代谢途径中的酶活力，可以增强人体抵御氧化的能力。只有机体内的自由基不断产生并不断清除，才能保证基体组织细胞不受损害。当这种平衡受到破坏，人体内的超氧化歧化酶（SOD）活性下降，阻断和清除活性氧的功效降低，基体会存在活性氧堆积，对细胞膜造成严重损害。通过抗坏血酸过氧化物酶可以进一步增强胶原蛋白肽的抗氧化性，使得基体的抗氧化性增强。

优选地，所述的抗坏血酸过氧化物酶的DPPH自由基清除率不低于80％。

DPPH又称1，1-二苯基-2-三硝基苯肼，是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自共振稳定作用的3个苯环的空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此评价清除自由基的能力，也即通过在517nm波长处检测样品清楚DPPH的效果，来计算抗氧化能力。

以95％的乙醇为溶剂配制浓度为0.1mmol/L的DPPH自由基溶液，此溶液需现配现用。取2.0mL的抗坏血酸过氧化物酶溶液（10mg抗坏血酸过氧化物酶溶解于5mL水溶液中，在55℃搅拌溶解），同2.0mLDPPH溶液混合，25℃避光孵育30min，于517nm处测定反应溶液的吸光度，95％乙醇做空白对照。DPPH自由基清除率的计算方法按如下式进行：

DPPH自由基清除率(％)＝(1-实验组吸光度空白组吸光度)×100％

优选地，所述的抗氧剂和稳定剂的重量份数比为1.5～2：1。

优选地，所述的抗氧剂为剂由β-胡萝卜素和茶多酚按重量份数比为20～60：80～40组成。

优选地，所述的稳定剂为由鼠李糖脂和酪朊酸钠按重量份数比为10～30：90～70组成。

一种抗氧化胶原蛋白肽的制备方法，包括如下步骤：

S1：将胶原蛋白，抗坏血酸过氧化物酶，乳铁蛋白，其他助剂搅拌均匀，然后研磨成粒径不大于3000目的干粉。

S2：将S1制得的干粉加入提取罐中并与去离子水按1：20的质量比混合均匀，搅拌，60℃条件下加热6h，蒸馏使体积缩小至1/5。

优选地，所述的搅拌条件为在250～400r/min的转速下搅拌10～15min。

S3：对S2制得的浓缩液进行萃取、层析、洗脱和干燥后得抗氧化胶原蛋白肽。

一种抗氧化胶原蛋白肽在抗氧化领域的应用。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

胶原蛋白与抗坏血酸过氧化物酶两者相互协同，不仅增强了胶原蛋白的抗氧化效果，同时抗坏血酸过氧化物酶也对自由基的活性进行了很好的抑制，进一步加强了抗氧化效果。

具体实施方式

下面结合实施例进一步阐述本发明，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质型的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。

胶原蛋白肽1：购自西安普瑞斯生物工程有限公司，分子量300道尔顿；

胶原蛋白肽2：购自西安普瑞斯生物工程有限公司，分子量4000道尔顿；

胶原蛋白肽3：购自西安普瑞斯生物工程有限公司，分子量1500道尔顿；

胶原蛋白肽4：购自西安普瑞斯生物工程有限公司，分子量3000道尔顿；

胶原蛋白肽5：购自西安普瑞斯生物工程有限公司，分子量6000道尔顿；抗坏血酸过氧化物酶1，市售，活性4.0×10³U/mL，DPPH自由基清除率

80%；

抗坏血酸过氧化物酶2，市售，活性7.0×10³U/mL，DPPH自由基清除率90%；

抗坏血酸过氧化物酶3，市售，活性2.0×10³U/mL，DPPH自由基清除率80%；

抗坏血酸过氧化物酶4，市售，活性4.0×10³U/mL，DPPH自由基清除率60%；

乳铁蛋白，市售；

β-胡萝卜素，市售；

酪朊酸钠，市售；

茶多酚，购自西安佰斯特生物科技有限公司，型号：BH0018；

鼠李糖脂，购自武汉中弘生物科技有限公司，型号：01-99。

本发明各实施例和对比例采用如下制备方法制备：

S1：将胶原蛋白肽、抗坏血酸过氧化物酶、乳铁蛋白、抗氧剂和稳定剂搅拌均匀，然后研磨成粒径为2000目的干粉。

S2：将S1制得的干粉加入提取罐中并与去离子水按1：20的质量比混合均匀，搅拌，60℃条件下加热6h，蒸馏使体积缩小至1/5。

S3：对S2制得的浓缩液进行萃取、层析、洗脱和干燥后得抗氧化胶原蛋白肽。

优选地，所述的搅拌条件为在300r/min的转速下搅拌15min。

本发明选取体重范围在20±1g的小鼠60只。实验前保证受试动物体征表现良好。将小鼠随机分为12组，每组5只，每日5g抗氧化胶原蛋白肽/只，连续灌胃饲喂30天，末次饲喂后禁食24小时，采集血液，分离出血清，检测血清中红细胞超氧化歧化酶的活性，样品的血清中红细胞超氧化歧化酶（SOD）的活性影响结果如下表1和表2所示。

表1 实施例1～6的性能测试值

表2 实施例7～10和对比例1～2的性能测试值

从上述实施例3和对比例1～2可知，当采用单一的胶原蛋白肽或者单一的抗坏血酸过氧化物酶时，抗氧化胶原蛋白肽的活性（通过红细胞超氧化歧化酶（SOD）的活性体现）显著的下降。从实施例1～3可知，在组分范围内的配方均可实现良好的抗氧化效果；从实施例3～7可知，当胶原蛋白肽的分子量优选300～4000道尔顿，更进一步优选1500～3000道尔顿；从实施例3和实施例8～10可知，当抗坏血酸过氧化物酶的活性和DPPH自由基清除率在优选范围内时，红细胞超氧化歧化酶（SOD）的活性较强，当抗坏血酸过氧化物酶的活性和DPPH自由基清除率在优选范围外时，红细胞超氧化歧化酶（SOD）的活性下降较为显著。

以上对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

尽管已经描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (6)

1.一种抗氧化胶原蛋白肽，其特征在于，包括如下重量份数的各组分：胶原蛋白肽60～80份，抗坏血酸过氧化物酶5～20份，乳铁蛋白0.5～2份，抗氧剂0～3份，稳定剂1份；

所述的抗坏血酸过氧化物酶的活性不低于3.5×10³U/mL；

所述的抗坏血酸过氧化物酶的DPPH自由基清除率不低于75％；

所述的稳定剂为由鼠李糖脂和酪朊酸钠按重量百分比为10～30：90～70组成；

所述的胶原蛋白肽的分子量为300～4000道尔顿。

2.根据权利要求1所述一种抗氧化胶原蛋白肽，其特征在于，所述的胶原蛋白肽的分子量为1500～3000道尔顿。

3.根据权利要求1所述一种抗氧化胶原蛋白肽，其特征在于，所述的抗氧剂为由β-胡萝卜素和茶多酚按重量百分比为20～60：80～40组成。

4.权利要求1所述一种抗氧化胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：将胶原蛋白肽、抗坏血酸过氧化物酶、乳铁蛋白、抗氧剂和稳定剂搅拌均匀，然后研磨成粒径不大于3000目的干粉；

S2：将S1制得的干粉加入提取罐中并与去离子水按1:20的质量比混合均匀、搅拌，60℃条件下加热6h，蒸馏使体积缩小至1/5；

S3：对S2制得的浓缩液进行萃取、层析、洗脱和干燥后得抗氧化胶原蛋白肽。

5.根据权利要求4所述一种抗氧化胶原蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述的搅拌条件为在250～400r/min的转速下搅拌10～15min。

6.一种如权利要求1所述的抗氧化胶原蛋白肽在抗氧化领域的应用。