CN115998767A - 金属锰在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供锰元素或其药学上可接受的锰盐在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用。本发明通过探究金属锰元素对急性加慢性不可预知抑郁小鼠模型(LPS+CUMS)症状的相关作用，进而发现了锰元素在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用前景。以及将锰元素与治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的其它药物成分同时联用来治疗抑郁小鼠模型，结果显示不论是单独采用锰还是将锰与其它药物成分联用，小鼠的抑郁样行为均得到显著改善。

Description

金属锰在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及金属锰在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用。

背景技术

抑郁症是一种复杂的精神性疾病，以连续且长期的心情低落为主要的临床特征，外在表现为焦虑、悲伤、快感缺失、绝望感等，患者患有躯体化症状，胸闷，气短，并且伴随机体免疫力降低。抑郁症的发病机制与脑内小胶质细胞激活引起的神经炎症相关，以及过度炎症诱导抑郁样行为。研究表明：慢性不可预测刺激加LPS诱导炎症性小鼠抑郁样行为激活小鼠脑部的小胶质细胞，并会促进促炎细胞因子的产生。目前已有的抗抑郁药物存在很多副作用和药物不良反应，且治疗效果往往随个体差异而变化；而长期服用抗抑郁药物又会产生严重的药物依赖性。

锰是多种生理过程如生长发育，抗氧化应激防御和神经元功能等所需的营养无机微量元素。锰是多种酶的辅助因子如谷氨酰胺合成酶，丙酮酸羧化酶等。锰元素摄入途径主要来自日常饮食，随着年龄的增长而变化。同时锰能通过金属转运体DMT1穿过血脑屏障。已有资料报道过量锰会损害中枢神经系统，产生不可逆转的神经毒性，甚至造成严重的神经退行性疾病。小胶质细胞是中枢神经系统所固有的免疫活性细胞，在中枢神经系统的免疫防御系统中发挥重要作用。本发明的研究显示，在慢性应激诱导的小鼠炎症性抑郁模型中，在一定范围内增加锰的浓度可显著改善抑郁样行为。即，一定浓度的锰元素可能通过调节神经炎症反应产生抗抑郁作用。目前金属锰作为活性成分在治疗、预防或者改善抑郁症中的应用未见报道。

发明内容

有鉴于此，针对现有技术存在的问题和缺陷，本发明提供金属锰在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用。本发明研究发现，金属锰可能在治疗、预防或者改善抑郁症方面更加简单有效，有望作为抑郁症的治疗、预防或者改善手段。本发明的技术方案为：

第一方面，本发明提供锰元素或其药学上可接受的锰盐在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用。

进一步地，所述药学上可接受的锰盐包括氯化锰、硫酸锰中的至少一种。

第二方面，本发明提供一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物，所述药物包括：有效量的锰元素或其药学上可接受的锰盐，以及药学上可接受的辅料。

进一步地，所述药物为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂。

第三方面，本发明提供一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，所述药物组合物包括：有效量的锰元素或其药学上可接受的锰盐，以及同时施用后对治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的其它药物成分。

进一步地，所述药学上可接受的锰盐包括氯化锰水合物、硫酸锰水合物、乳酸锰水合物。

进一步地，所述同时施用后对治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的药物成分包括：阿戈美拉汀(Ago)、盐酸阿米替林、氟西汀、多塞平、氟伏沙明、艾司西酞普兰、帕罗西汀、度洛西汀、氯丙咪嗪、曲唑酮、舍曲林、伏硫西汀、文拉法辛、异丙烟肼、米氮瓶、安非他酮、怡诺思、来士普、阿米替林、多西平、马普替林、曲霉素、罗西汀、巴西汀、氯丙咪唑、盐酸丙咪唑、帕罗西汀等。

进一步地，所述药物组合物还包括可以对所述药物成分增效的助剂。

进一步地，所述助剂包括磺丁基β-环糊精。

第四方面，本发明提供另一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物，所述药物包括上述药物组合物，以及药学上可接受的辅料。

进一步地，所述药物为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂。

本发明通过探究金属锰元素对急性加慢性不可预知抑郁小鼠模型(LPS+CUMS)症状的相关作用，进而发现了锰元素在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用前景。以及将锰元素与治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的其它药物成分同时联用来治疗抑郁小鼠模型，结果显示不论是单独采用锰还是将锰与其它药物成分联用，小鼠的抑郁样行为均得到显著改善。

附图说明

图1为本发明实施例1中小鼠体重BW变化情况。

图2为本发明实施例1中小鼠进食变化情况。

图3为本发明实施例1中小鼠糖水偏好百分比变化。

图4为本发明实施例1中小鼠旷场试验活动次数变化。

图5为本发明实施例1中小鼠旷场试验中央区域路程变化。

图6为本发明实施例1中小鼠旷场试验中央区域时间变化。

图7为本发明实施例1中小鼠进入高架十字迷宫试验开臂次数百分比变化。

图8为本发明实施例1中小鼠滞留高架十字迷宫试验闭臂时间百分比变化。

图9为本发明实施例1中小鼠在强迫游泳试验中运动时间百分比变化。

图10为本发明实施例1中小鼠在悬尾试验中运动时间变化。

具体实施方式

在本发明的描述中，需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

在本发明中，通过探究金属锰缓解急性加慢性不可预知抑郁小鼠模型(LPS+CUMS)的症状，进而发现了锰元素在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用前景。锰元素采用药学上可接受的锰盐，锰盐包括氯化锰、硫酸锰、氧化锰。锰盐所形成的药物具有开发为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂的前景。

本发明还提供一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，所述药物组合物包括：有效量的锰元素或其药学上可接受的锰盐，以及同时施用后对治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的其它药物成分，比如阿戈美拉汀(Ago)、盐酸阿米替林、氟西汀、多塞平、氟伏沙明、艾司西酞普兰、帕罗西汀、度洛西汀、氯丙咪嗪、曲唑酮、舍曲林、伏硫西汀、文拉法辛、异丙烟肼、米氮瓶、安非他酮、怡诺思、来士普、阿米替林、多西平、马普替林、曲霉素、罗西汀、巴西汀、氯丙咪唑、盐酸丙咪唑、帕罗西汀等。

在本发明中，详细考察了阿戈美拉汀(Ago)和锰元素联用的效果。Ago是一种新型的抗抑郁药，目前临床上主要用来治疗成人抑郁症。本试验通过锰元素(Mn)、及锰联合Ago(Ago-Mn)治疗后，与抑郁模型组(Dep)相比，同时采用Ago作为参照，治疗组小鼠的抑郁样行为得到显著的改善，其抗抑郁作用在动物模型上得到了证实。

进一步地，在上述锰元素与其它药物成分的药物组合物中，还可以加入对所述药物成分增效的助剂，比如磺丁基β-环糊精，磺丁基β-环糊精是阴离子型高水溶性环糊精衍生物，能很好地与Ago药物分子包合形成非共价复合物，提高药物的稳定性，水溶性，安全性，有效降低肾毒性，缓和药物溶血性，控制药物释放速率，从而促进活性药物溶解而增强在体内的吸收性，对发挥抗抑郁功效有辅助作用，目前已应用于注射药，口服药，鼻部用药和眼部用药等。

本发明实施例中具体采用的锰盐为四水氯化锰。

该药物组合物也有望开发成治疗、预防或者改善抑郁症的药物。制剂形式包括但不限定为：粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂等。

下面结合附图和具体的实施例对本发明做进一步详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

实施例1

探究金属锰缓解急性加慢性不可预知抑郁小鼠模型(LPS+CUMS)的症状

选择35只8周雄性C57小鼠(北京斯贝福生物技术有限公司，批次DC202210102661501)，平均体重20g，随机分为ctrl对照组(7只)、Dep抑郁模型组(7只)、Mn治疗组(7只)、Ago阳性对照组(7只)和Mn-Ago组(7只)。模型组和治疗组施以慢性不可预知刺激，包括：禁水(20h)、禁食(20h)、湿垫料(20h)、樟脑球刺激(20h)、斜笼(20h)、摇笼(20h)、束缚(8h)、夹尾5min(距尾根1cm处)、热水游泳(40℃，5min)、冰水游泳(4℃，3min)。每天随机给予1～2种刺激，使动物不能预料刺激的发生，造模35天。末次刺激后，按照小鼠体重每千克给予腹腔注射脂多糖溶液(LPS，200μg/kg·体重)。造模后通过统计比较ctrl对照组与Dep抑郁模型组、Mn治疗组、Ago阳性对照组和Mn-Ago组等五组小鼠的食物摄入量，糖水偏好程度，体重变化情况以及旷场运动，悬尾测试，强迫游泳和高架十字迷宫行为学检测小鼠的抑郁，焦虑和绝望样行为，分析正常小鼠和CUMS小鼠抑郁模型造模情况。

试验内容如下：

1.抑郁造模的日程安排如表1所述(D：天；h：小时；min：分钟)：

表1抑郁造模的日程安排

2.给药治疗：

ctrl对照组：普通饲养连续35天，记录小鼠进食，进水和体重变化，不予以其它任何处理。

Dep抑郁模型组：给予连续35天CUMS刺激造模，期间15天后给予小鼠腹腔注射等量(约100ul/只))溶液由二甲基亚砜和20％磺丁基β-环糊精稀释液配制(即用100ml生理盐水溶解20g磺丁基β-环糊精固体粉末配制20％的稀释液，再用150ul的二甲基亚砜加入1350ul的20％磺丁基β-环糊精稀释液配制成注射液)，持续注射20天。并在第35天时给予腹腔注射LPS，期间记录小鼠进食，进水和体重变化，不予以其它任何处理。

Mn治疗组：给予连续35天CUMS刺激造模，期间15天后，称5mg固体MnCl₂，溶于10mlPBS中，配制成浓度为0.5mg/ml的MnCl₂溶液，然后按照5mg/kg的量连续20天给各治疗组的小鼠给予腹腔注射MnCl₂溶液，注射量约100ul/只(小鼠平均体重为20g，根据小鼠体重的轻微波动，注射量存在约1～2ul的差异)，并在第35天时给予腹腔注射LPS，期间记录小鼠进食，进水和体重变化，不予以其它任何处理。

Ago阳性对照组：给予连续35天CUMS刺激造模，期间15天后，称400mg的Ago固体粉末溶于8ml二甲基亚砜配制0.2mol/L的Ago母液，再用生理盐水溶解磺丁基β-环糊精配制20％的稀释液，最后取150ul的Ago母液加入20％的磺丁基β-环糊精稀释液中(0.02mol/L的Ago溶液)，Ago溶液腹腔给药剂量为25mg/kg(即0.103mmol/kg)，连续20天给各治疗组的小鼠给予腹腔注射约100ul/只的Ago溶液，并在第35天时给予腹腔注射LPS，期间记录小鼠进食，进水和体重变化，不予以其它任何处理。

Mn-Ago组：给予连续35天CUMS刺激造模，期间15天后，先称400mg的Ago固体粉末溶于8ml二甲基亚砜配制0.2mol/L的Ago母液，再用生理盐水溶解磺丁基β-环糊精配制20％的稀释液，最后取150ulAgo母液加入1350ul的20％磺丁基β-环糊精稀释液中形成0.02mol/L的Ago溶液，Ago溶液腹腔给药剂量为25mg/kg(即0.103mmol/kg)。再称10mg固体MnCl₂，溶于100ul的20％磺丁基β-环糊精稀释液中形成100mg/ml的MnCl₂溶液，最后配制Mn-Ago溶液，按照100ulMn-Ago溶液中含有约0.5mg MnCl₂和0.5mgAgo混合100mg/ml的MnCl₂溶液和0.02mol/L的Ago溶液。连续20天给各治疗组的小鼠给予腹腔注射约100ul/只的Mn-Ago溶液，并在第35天时给予腹腔注射LPS，期间记录小鼠进食，进水和体重变化，不予以其它任何处理。

3.行为学检测：

1)小鼠糖水偏好试验：具体操作为：建模开始前先进行糖水适应性训练，第一天放置两瓶各100g含1％的蔗糖溶液，第二天将其中一瓶换成相同体积的纯水，第三天再将小鼠禁食禁水24小时后，再各准备一瓶100g含1％的蔗糖溶液和相同体积的纯水，测量1小时内糖水和纯水的消耗量。正式糖水偏好试验分别于试验开始前1天，第5天，第10天，第15天，第20天，第25天，第30天，第35天进行。试验完成后按照公式计算糖水偏好指数，比较分析各组小鼠在不同天数内糖水偏好指数的差异。(计算公式：糖水偏好指数＝(糖水消耗量/总液体消耗量)×100％)

2)旷场试验：记录实验期间小鼠的中央区域活动时间和路程变化及四周活动次数情况等；具体操作为：将小鼠放置场箱中央，首先让小鼠适应1min，从第2min开始让摄像头自动记录小鼠5min内的活动情况。

3)强迫游泳试验：将小鼠放入直径12cm，高40cm的圆形桶，调节水深15cm；水温(24±1)℃，计时器记录不动时间。首先让小鼠适应1min，从第2min开始记录后续5min内小鼠的运动时间的总和。(本试验记录时，小鼠尾巴的摆动幅度也是判断的一个指标。小鼠放入水中时不要直接扔进去，右手捏住尾巴的前三分之一，左手托住小鼠，轻轻放入水中。)

4)悬尾试验：将小鼠尾部距末端约1cm处用医用胶带固定，使其倒吊于距地面30cm左右的横杆上，动物为克服不正常体位而挣扎活动，但活动一段时间后，出现间断性不动，显示绝望状态，各组悬尾时间为6min，小鼠首先适应1min，从第2min开始记录后续5min内小鼠的运动时间的总和。

5)高架十字迷宫：将小鼠从饲养笼中取出，尽量背向试验员，将小鼠轻轻放在仪器宫体的中央区域，小鼠面向开臂，然后试验员迅速安静的离开，打开动物行为分析软件，跟踪动物在高架十字迷宫仪器内的轨迹运动，先让小鼠适应1min，从第2min开始记录后续5min内小鼠的运动时间的总和。

4.试验结果

图1的小鼠体重(BW)变化折线图表明：与正常对照组(ctrl)对比，Dep组小鼠体重显著减少，而小鼠给予腹腔注射的Mn组试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组的体重均明显回升，其中Mn-Ago试验组在第30天后的体重已经恢复到和ctrl对照组相当，Mn试验组和Ago试验组在第30天后的体重相当。

图2的小鼠进食变化折线图表明：与正常对照组(Ctrl)对比，Dep组小鼠进食量在第15天后显著减少，而小鼠给予腹腔注射的Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组的进食量在第15天后均明显回升，且在第35天后与ctrl对照组相当。

图3的小鼠糖水偏好测试(SPT)结果表面：相较于ctrl组，Dep组小鼠的糖水消耗量减少，Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组的糖水消耗量都在第15天后均在持续提升，其中Mn试验组的提升效果最为明显，这表明Mn治疗后的小鼠的糖水消耗量显著增多。此外，CUMS小鼠的糖水偏好测试结果如表2所示：

表2CUMS小鼠的糖水偏好测试(means±SEM)

图4的小鼠旷场试验(OFT)活动次数变化结果表明：相较于ctrl组，Dep组小鼠的活动次数显著减少，Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组的活动次数均显著增加，其中阳性对照药物Ago治疗后小鼠活动次数增多，Mn组相对其它2个试验组更为接近ctrl组的结果。

图5和图6的小鼠OFT中央区域路程及时间变化结果表明：Dep组的抑郁小鼠明显不喜爱运动，Ago试验组和Mn-Ago试验组的结果与ctrl组相当，而Mn试验组的治疗效果最为显著，可以有效降低不动时间。此外，CUMS小鼠的旷场运动测试结果如表3所示：

表3CUMS小鼠的旷场运动测试(means±SEM)

图7和图8的小鼠高架十字迷宫(EPM)通过开臂和闭臂观察的结果表明：抑郁样小鼠(Dep组)在闭臂的时间明显比Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组治疗的小鼠时间长，在开臂的时间明显比Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组治疗的小鼠时间短，并且3个试验组的结果相当，说明采用3个试验组治疗均可以明显缓解小鼠的抑郁样行为。

图9的小鼠强迫游泳(FST)试验中运动时间变化结果表明：Dep模型小鼠的运动时间显著比正常对照组要低，而Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组治疗后小鼠的运动时间明显增加，并且3个试验组治疗效果相当，有助于改善小鼠抑郁样行为。此外，CUMS小鼠的强迫游泳运动实验测试结果如表4所示：

表4CUMS小鼠的强迫游泳运动实验测试(means±SEM)

图10的小鼠悬尾试验(TST)中运动时间变化结果表明：Dep小鼠的运动时间比正常组小鼠要少很多，但Mn试验组、Ago试验组、Mn-Ago试验组治疗后，可以显著减少小鼠的不动时间，改善小鼠抑郁样行为，3个试验组治疗效果相当。此外，CUMS小鼠的悬尾实验测试结果如表5所示：

表5CUMS小鼠的悬尾实验测试(means±SEM)

综上所述，本发明探究了金属锰及含有金属锰的组合物在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用前景。与现有的抗抑郁药物治疗相比，加锰治疗更简单有效，具有很好的临床开发前景。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.锰元素或其药学上可接受的锰盐在制备治疗、预防或者改善抑郁症药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药学上可接受的锰盐包括氯化锰、硫酸锰中的至少一种。

3.一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物，其特征在于：所述药物包括：有效量的锰元素或其药学上可接受的锰盐，以及药学上可接受的辅料。

4.根据权利要求3所述的治疗、预防或者改善抑郁症的药物，其特征在于：所述药物为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂。

5.一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包括：有效量的锰元素或其药学上可接受的锰盐，以及同时施用后对治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的其它药物成分。

6.根据权利要求5所述的治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，其特征在于：所述药学上可接受的锰盐包括氯化锰、硫酸锰、氧化锰。

7.根据权利要求5所述的治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，其特征在于：所述同时施用后对治疗、预防或者改善抑郁症有积极作用的药物成分包括：阿戈美拉汀(Ago)、盐酸阿米替林、氟西汀、多塞平、氟伏沙明、艾司西酞普兰、帕罗西汀、度洛西汀、氯丙咪嗪、曲唑酮、舍曲林、伏硫西汀、文拉法辛、异丙烟肼、米氮瓶、安非他酮、怡诺思、来士普、阿米替林、多西平、马普替林、曲霉素、罗西汀、巴西汀、氯丙咪唑、盐酸丙咪唑、帕罗西汀。

8.根据权利要求5～7任意一项所述的治疗、预防或者改善抑郁症的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物还包括可以对所述药物成分增效的助剂。

9.一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物，其特征在于：所述药物包括权利要求5～8任意一项所述的药物组合物，以及药学上可接受的辅料。

10.根据权利要求9所述的一种治疗、预防或者改善抑郁症的药物，其特征在于：所述药物为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂或注射剂。

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