CN115989220A - 作为lpa受体抑制剂的酰氨基环己烷酸衍生物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抑制溶血磷脂酸受体1(LPA1)的通式(I)的化合物，具体地，本发明涉及作为酰氨基环己烷酸衍生物的化合物、制备这样的化合物的方法、含有它们的药物组合物及其治疗用途。本发明的化合物可用于治疗与LPA受体的调节异常相关的疾病或病症，特别是纤维化。
Description
发明领域
本发明总体上涉及抑制溶血磷脂酸受体的化合物(在下文中称作LPA抑制剂)；本发明涉及作为酰氨基环己烷酸衍生物的化合物、制备这样的化合物的方法、含有它们的药物组合物及其治疗用途。
本发明的化合物可以用于例如治疗与LPA受体机制相关的许多障碍。
发明背景
溶血磷脂酸(LPA)是一种集中在血清中的磷脂介质，其在众多发育和成体过程中通过至少六种同源G蛋白偶联受体(GPCR)充当有效的细胞外信号传递分子，所述过程包括细胞存活、增殖、迁移、分化、血管调节和细胞因子释放。
这些LPA介导的过程涉及神经系统功能、血管发育、免疫系统功能、癌症、生殖、纤维化和肥胖(参见例如Yung等人,J Lipid Res.2014年7月；55(7):1192-214)。LPA物质的形成取决于其前体磷脂，其通常可以随酰基链长度和饱和度而变化。术语LPA通常表示18:1油酰基-LPA(1-酰基-2-羟基-sn-甘油3-磷酸)，它是人血浆中数量最丰富的LPA形式，具有16:0-、18:2-和18:1-LPA(参见例如Sano等人,J Biol Chem.2002Dec 13；277(50):21197-206)。所有LPA物质都通过两种主要的代谢途径从膜磷脂产生。根据合成部位，膜磷脂通过磷脂酶A1(PLA1)、磷脂酶A2(PLA2)或PLA1和卵磷脂-胆固醇酰基转移酶(LCAT)的作用转化成相应的溶血磷脂。自体毒素(ATX)然后作用于溶血磷脂并将它们转化为LPA物质。第二种途径首先通过磷脂酶D的作用将磷脂转化为磷脂酸。然后PLA1或PLA2将磷脂酸代谢为溶血磷脂酸(参见例如Riaz等人,Int J Mol Sci.2016年2月；17(2):215)。
ATX活性是血浆细胞外LPA的主要来源，但有助于信号传递池的组织LPA的来源可能不仅涉及ATX，还涉及其它酶。LPA的生物学功能由至少六种公认的细胞表面受体介导。
所有LPA受体都是视紫质样7-TM蛋白，其通过四个Gα亚基家族(Gα12/13、Gαq/11、Gαi/o和GαS)中的至少两个发出信号。LPA受体通常触发多种异源三聚体G蛋白的应答，从而以依赖于环境和细胞类型的方式产生不同的结果。Gα12/13介导的LPA信号传递通过RHO途径蛋白的活化而调节细胞迁移、侵袭和细胞骨架重新调整。Gαi/o-PI3K下游的RAC活化也调节类似的过程，但LPA诱导的Gαi/o的最显著功能是通过RAF-MEK-MAPK级联的促有丝分裂信号传递和通过PI3K-AKT途径的存活信号传递。LPA偶联的Gαq/11蛋白主要通过PLC以及第二信使IP3和DAG调节Ca2+体内稳态。最后，GαS可以活化腺苷酸环化酶并在LPA刺激后增加cAMP浓度(参见例如Riaz等人,Int J Mol Sci.2016年2月；17(2):215)。
LPA，尤其是LPA1、LPA2和LPA3，已经涉及到迁移、侵袭、转移、增殖和存活，并且在它们的组织分布和下游信号传递途径方面不同。
LPA1是一种41-kD蛋白，其在所有检查的人成体组织中广泛表达，但在不同的水平，并且LPA1信号传递在发育和成年生命中的重要性已通过众多方法得到证明(参见例如Ye等人,2002,Neuroreport.12月3日；13(17):2169-75)。在成年小鼠中观察到LPA1的广泛表达，至少在脑、子宫、睾丸、肺、小肠、心脏、胃、肾、脾、胸腺、胎盘和骨骼肌中明显存在。LPA1也在人类中广泛表达，在胚胎发育过程中表达在空间上受到更多限制。LPA1偶联并活化三种类型的G蛋白：Gαi/o、Gαq/11和Gα12/13。LPA1活化会诱导一系列细胞应答：细胞增殖和存活、细胞迁移、细胞骨架变化、Ca2+动员、腺苷酸环化酶抑制以及促分裂原活化蛋白激酶、磷脂酶C、Akt和Rho途径的活化(参见例如Choi等人,Annu Rev PharmacolToxicol.2010；50:157-86)。
人类中的LPA2是一种39-kD蛋白，并与LPA1具有约55％氨基酸序列同源性(参见例如Yung等人,J Lipid Res.2014年7月；55(7):1192-214)。在小鼠中，LPA2在肾脏、子宫和睾丸中高表达，在肺中中度表达；在人体组织中，在睾丸和白细胞中检测到LPA2的高表达，在前列腺、脾、胸腺和胰腺中发现中度表达。
在信号传递活性方面，LPA2主要活化与LPA1所触发的相同的途径，但有一些例外，这与其独特的串扰行为有关。例如，LPA2通过与粘着斑分子TRIP6的相互作用促进细胞迁移(参见例如Lai YJ,2005,Mol.Cell.Biol.25:5859-68)，并且还报道了几种PDZ蛋白和锌指蛋白直接与LPA2的羧基端尾部相互作用(参见例如Lin FT,2008,Biochim.Biophys.Acta1781:558-62)。
人LPA3是一种40-kD蛋白，并与LPA1(约54％)和LPA2(约49％)具有序列同源性。在成年人中，LPA3在心脏、胰腺、前列腺和睾丸中高度表达。在脑、肺和卵巢中也发现了中等水平的表达。与LPA1和LPA2一样，LPA3的信号传递活性源于它与Gαi/o和Gαq/11的偶联(参见例如Ishii等人,Mol Pharmacol 58:895-902,2000)。每种LPA在整个身体中都有多种重要的调节功能。
由于LPA信号传递已经与许多疾病状态密切相关，因此人们对开发特异性LPA抑制剂表现出了极大的兴趣(参见例如Stoddard等人,Biomol Ther(Seoul)2015年1月；23(1):1-11)。不同的研究已经证实了LPA在肺纤维化(PF)的发病机制中的积极作用，肺纤维化是一种以肺泡上皮细胞损伤、肌成纤维细胞积聚和细胞外基质蛋白沉积为特征的破坏性疾病，其导致肺功能丧失和死亡(参见例如Wilson MS,Wynn TA(2009),Mucosal Immunol 2:103-121)。
证据表明，在PF患者的支气管肺泡灌洗液中的溶血磷脂酸水平显著增加，其中它通过LPA1起作用，介导受损肺中的成纤维细胞迁移(参见例如Tager等人,Nat Med.2008年1月；14(1):45-54)。此外，在博来霉素诱导的肺纤维化的小鼠模型中，缺乏LPA1或LPA2的小鼠明显被保护免于纤维化和死亡(参见例如Huang等人,Am J Respir Cell Mol Biol.2013年12月；49(6):912-922和Tager等人,Nat Med.2008年1月；14(1):45-54)。
在体外，已知LPA1会诱导肺成纤维细胞的增殖和分化(参见例如Shiomi等人,Wound Repair Regen.2011年3月-4月；19(2):229-240)，并增强成纤维细胞介导的释放的胶原凝胶的收缩(参见例如Mio等人,Journal of Laboratory and Clinical Medicine，第139卷，第1期,2002年1月，第20-27页)。在人肺成纤维细胞中，LPA2的敲低减弱了LPA诱导的TGF-β1表达和肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化，从而导致不同的促纤维化标志物诸如FN、α-SMA和胶原的表达降低，以及细胞外调节的激酶1/2、Akt、Smad3和p38促分裂原活化蛋白激酶的活化降低(参见例如Huang等人,Am J Respir Cell Mol Biol.2013年12月；49(6):912-922)。此外，Xu等人证实，LPA2的表达在博来霉素攻击的小鼠的肺中也上调，其中它能够通过RhoA和Rho激酶途径诱导TGF-β途径的活化，TGF-β是在疾病的发展过程中起重要作用的关键细胞因子(参见例如Xu等人,Am J Pathol.2009年4月；174(4):1264-79)。在体内临床前模型中，LPA1拮抗剂的口服施用显著降低博来霉素诱导的小鼠肺纤维化(Tager等人,Nat Med.2008年1月；14(1):45-54；Swaney等人,Br JPharmacol.2010年8月；160(7):1699-1713)，并且LPA1/3拮抗剂的腹膜内注射改善了辐照诱导的肺纤维化(参见例如Gan等人,2011,Biochem Biophys Res Commun 409:7-13)。在肾纤维化模型中，LPA1拮抗剂的LPA1施用抑制了肾间质纤维化(参见例如Pradere等人,J Am Soc Nephrol 2007；18:3110-3118)。
在文献中已将各种化合物描述为LPA1或LPA2拮抗剂。
WO2019126086和WO2019126087(Bristol-Myers Squibb)公开了作为LPA1拮抗剂的环己酸异噁唑嗪，其可用于治疗与溶血磷脂酸受体1的调节异常相关的障碍或病症。
WO2019126099(Bristol-Myers Squibb)公开了作为LPA1拮抗剂的异噁唑N-连接的氨甲酰基环己酸，其用于治疗与溶血磷脂酸受体1的调节异常相关的障碍或病症。
WO2019126090(Bristol-Myers Squibb)公开了作为LPA1拮抗剂的三唑N-连接的氨甲酰基环己酸。所述化合物是选择性的LPA1受体抑制剂并可用于治疗与溶血磷脂酸受体1的调节异常相关的障碍或病症。
WO2017223016(Bristol-Myers Squibb)公开了作为LPA1拮抗剂的氨甲酰氧基甲基三唑环己酸，其用于治疗纤维化，包括特发性肺纤维化。
WO2012028243(Merck)公开了用于治疗各种疾病的作为LPA2受体拮抗剂的根据式(I)的吡唑并吡啶酮衍生物及其制备方法。
WO2012100436(Curegenix)公开了作为LPA1拮抗剂的苯基异噁唑氨基甲酸酯衍生物，其用于治疗LPA介导的障碍，诸如纤维化。
Amgen Inc.在“作为潜在抗癌剂的有效LPA2(EDG4)拮抗剂的发现(Discovery ofpotent LPA2(EDG4)antagonists as potential anticancer agents)”Bioorg Med ChemLett.2008年2月1日；18(3):1037-41中公开了LPA2拮抗剂。在体外评价了关键化合物对LPA2介导的Erk活化和HCT-116细胞增殖的抑制。这些化合物可以用作工具化合物来评价阻断LPA2信号传递的抗癌作用。
值得注意的是，拮抗LPA受体可以用于治疗纤维化和由纤维化引起的疾病、障碍和病症，并且拮抗受体LPA1可能在上述疾病、障碍和病症的治疗中是有效的。
尽管有以上引用的现有技术，仍有潜力开发具有合适BSEP(胆汁盐输出泵抑制)特性和良好渗透性的受体LPA1的新抑制剂，其可用于治疗与LPA受体的调节异常相关的疾病或病症，特别是纤维化。
在这方面，现有技术没有描述或暗示本发明的通式(I)的酰氨基环己烷酸衍生物，其对受体LPA1具有拮抗剂活性并同时具有合适的BSEP特性和良好的渗透性，这代表对前述需求的解决方案。
发明概述
在第一方面，本发明涉及式(I)的化合物
其中X是-CR5、-CH-或N，
A选自由以下成员组成的集合：
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、杂芳基和(C1-C4)烷基，其中这样的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和烷基中的任一个可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN、-O(C1-C4)烷基、-NR6R7；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、卤素和CN；
R6和R7在每次出现时独立地是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、(C1-C6)卤代烷基和卤素，或
R6和R7可以与它们所连接的氮原子一起形成4-6元饱和杂环系统，所述杂环系统任选地含有另一个选自N、S和O的杂原子，所述杂环系统可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和卤素，
前提条件是，当A是
时，X是N。
在第二方面，本发明涉及药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合的式(I)的化合物。
在第三方面，本发明涉及用于用作药物的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明涉及用于治疗与溶血磷脂酸受体1(LPA1)的调节异常相关的疾病、障碍或病症的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明涉及用于预防和/或治疗纤维化和/或涉及纤维化的疾病、障碍或病症的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明涉及用于预防和/或治疗特发性肺纤维化(IPF)的式(I)的化合物。
发明详述
除非另外提供，否则术语式(I)的化合物在其含义中包含立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐或溶剂化物。
本文中使用的术语“药学上可接受的盐”表示式(I)的化合物的衍生物，其中如下适当地修饰母体化合物：用常规地认为药学上可接受的任意碱或酸，将可能存在的任意游离酸性或碱性基团转化成对应的加成盐。
所述盐的合适实例因此可以包括碱性残基诸如氨基基团的无机酸或有机酸加成盐以及酸性残基诸如羧基基团的无机碱或有机碱加成盐。
可以适当地用于制备盐的无机碱的阳离子包括碱金属或碱土金属(诸如钾、钠、钙或镁)的离子。
通过使作为碱起作用的主要化合物与无机酸或有机酸反应以形成盐而得到的那些盐包括，例如，盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、樟脑磺酸、乙酸、草酸、马来酸、富马酸、琥珀酸和柠檬酸的盐。
术语“溶剂化物”是指本发明的化合物与一种或多种溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键合。在某些情况下，溶剂化物将能够分离，例如，当一种或多种溶剂分子掺入到结晶固体的晶格中时。溶剂化物可包含化学计量的或非化学计量的量的溶剂分子。
术语“立体异构体”表示结构相同但它们的原子在空间中的排列不同的异构体。对映异构体和非对映异构体是立体异构体的实例。
术语“对映异构体”表示为彼此的镜像并且不可重叠的一对分子物质中的一个。
术语“非对映异构体”表示不是镜像的立体异构体。
术语“外消旋体”或“外消旋混合物”表示由等摩尔量的两种对映异构体物质组成的组合物，其中所述组合物没有光学活性。
符号“R”和“S”代表在手性碳原子周围的取代基的构型。异构体描述符“R”和“S”如本文所述用于表示相对于核心分子的原子构型，并意图如文献中定义的那样使用(IUP ACRecommendations 1996,Pure and Applied Chemistry,68:2193-2222(1996))。
术语“互变异构体”表示化合物的两种或更多种异构体中的每一种，所述异构体以平衡状态一起存在并且容易通过分子内的原子或基团的迁移而互换。
本文中使用的术语“卤素”或“卤素原子”或“卤代”包括氟、氯、溴和碘原子。
术语“5元杂环基”表示含有一个或多个选自N和O的杂原子的单饱和或不饱和基团。
术语“(Cx-Cy)烷基”(其中x和y是整数)表示具有x至y个碳原子的直链或支链烷基基团。因而，例如，当x是1且y是6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
术语“(Cx-Cy)亚烷基”(其中x和y是整数)表示共具有2个不饱和价的Cx-Cy烷基残基，诸如二价亚甲基残基。
表述“(Cx-Cy)卤代烷基”(其中x和y是整数)表示上面定义的“Cx-Cy烷基”基团，其中一个或多个氢原子被一个或多个卤素原子替代，所述卤素原子可以相同或不同。
所述“(Cx-Cy)卤代烷基”基团的实例因而可以包括卤代的、多卤代的和全卤代的烷基，其中所有氢原子被卤素原子替代，例如三氟甲基。
术语“(Cx-Cy)环烷基”(其中x和y是整数)表示含有指定数目的环碳原子的饱和环状烃基。实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基。
术语“芳基”表示具有6个环原子的单环碳环系，其中所述环是芳族环。合适的芳基单环环系的实例包括例如苯基。
术语“杂芳基”表示含有一个或多个选自S、N和O的杂原子的单环或二环芳族基团，且包括具有两个这样的单环、或者一个这样的单环和一个单环芳基环(它们通过共有键稠合)的基团。
指向波浪或弯曲线的键，诸如在本文结构式中使用的
描绘了作为部分或取代基与核心或主链结构的连接点的键。
不是在2个字母或符号之间的破折号(“-”)意在代表取代基的连接点。
每当碱性氨基或季铵基团存在于式I的化合物中时，可能存在生理上可接受的阴离子，其选自氯离子、溴离子、碘离子、三氟乙酸根、甲酸根、硫酸根、磷酸根、甲磺酸根、硝酸根、马来酸根、乙酸根、柠檬酸根、富马酸根、酒石酸根、草酸根、琥珀酸根、苯甲酸根、对甲苯磺酸根、扑酸根和萘二磺酸根。同样地，在有酸性基团诸如COOH基团存在下，也可以存在相应的生理学阳离子盐，例如，包括碱金属或碱土金属离子。
如上面指出的，本发明涉及一系列具体如下文所述的由通式(I)表示的化合物，其具有对受体LPA1的拮抗剂性质。
不同于现有技术的类似化合物，本发明的式(I)的化合物能够以实质且有效的方式充当LPA1的拮抗剂，当研究可用于治疗纤维化、特别是特发性肺纤维化的合适且有效的化合物时，技术人员会特别理解。
如实验部分所示，本发明的式(I)的化合物具有如表4所示的活性，其中报告了每种化合物的效能，表示为对受体的半数最大抑制浓度(IC50)。
可以理解，关于它们对受体LPA1的抑制活性，根据表4的本发明的所有化合物显示出600nM以下、优选250nM以下、更优选50nM以下的效能。
更有利地，除了对受体LPA1的拮抗剂性质之外，本发明的化合物还具有合适的BSEP特性，这与任何候选药物的进展相关。
胆汁盐输出泵(BSEP)是位于肝细胞的小管膜上的外排转运体，并且是胆汁酸从肝细胞到胆道系统的主要转运体。它与摄取和外排的其它肝转运体一起参与胆汁盐的体内稳态。
在最近的十年中，BSEP抑制已成为可能导致人药物诱发的肝损伤的开始的重要机制，并因此重要的是，在考虑可能的急性药物诱发的肝衰竭的风险时，同时考虑BSEP抑制。
使用在两个胶原层之间(夹心构型)培养的人肝细胞评价了BSEP抑制。在这种培养条件下，肝细胞表达包括BSEP在内的相关转运体并保留胆小管结构。牛磺胆酸(TCA)(一种已知的BSEP底物)的胆道清除的抑制被用于评估BSEP相互作用。
本发明的式(I)的化合物的特征在于在50μM下≤50％的体外BSEP抑制，从安全性来看，这可以被认为是合适的和可接受的，如表5所示。
甚至更有利的是，本发明的式(I)的化合物还具有良好的渗透性特性，这又可以确保适合的口服施用的生物利用度。在人Caco 2细胞系(一种模拟人胃肠道屏障的体外模型)中评估了渗透性，并因此可用于预测口服吸收。如表6所示，≥15nm/秒的被动渗透值被认为适合口服施用。
因而，在一个方面，本发明涉及作为LPA1拮抗剂的通式(I)的化合物
其中X是CR5、-CH-或N，
A选自由以下成员组成的集合：
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、杂芳基和(C1-C4)烷基，其中这样的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和烷基中的任一个可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN、-O(C1-C4)烷基、-NR6R7；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、卤素和CN；
R6和R7在每次出现时独立地是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、(C1-C6)卤代烷基和卤素，或
R6和R7可以与它们所连接的氮原子一起形成4-6元饱和杂环系统，所述杂环系统任选地含有另一个选自N、S和O的杂原子，所述杂环系统可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和卤素，
前提条件是，当A是
时，X是N。
本发明进一步涉及式(I)的化合物的对应氘代衍生物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及在下面表1中列出的化合物及其药学上可接受的盐中的至少一种。
表1.优选的式(I)的化合物的列表
在一个优选的实施方案中，本发明涉及由式Ia代表的式(I)的化合物，其中A是
且X是N，
其中
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、杂芳基和(C1-C4)烷基，其中这样的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和烷基中的任一个可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN、-O(C1-C4)烷基、-NR6R7；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、卤素和CN；
R6和R7在每次出现时独立地是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、(C1-C6)卤代烷基和卤素，或
R6和R7可以与它们所连接的氮原子一起形成4-6元饱和杂环系统，所述杂环系统任选地含有另一个选自N、S和O的杂原子，所述杂环系统可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和卤素。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(Ia)的化合物，其中R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C4-C6)环烷基、杂环烷基和杂芳基，其中这样的芳基和杂芳基中的任一个任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或(C1-C4)烷基和卤素。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及在下面表2中列出的化合物及其药学上可接受的盐中的至少一种。
表2:优选的式(Ia)的化合物的列表
在进一步优选的实施方案中，本发明涉及式(I)的化合物，
其中X是CR5、-CH-或N，
A选自由以下成员组成的集合：
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C4-C6)环烷基、杂环烷基和杂芳基，其中这样的芳基和杂芳基中的任一个任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN；
R2是(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或(C1-C4)烷基。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及在下面表3中列出的化合物及其药学上可接受的盐中的至少一种。
表3:优选的式(I)的化合物的列表
已经令人惊讶地发现，上面指出的化合物作为LPA1受体的拮抗剂是特别有效的，例如如在下文实验部分的表4中所指出。
在这方面，现在已经发现，本发明的式(I)的化合物具有拮抗剂药物效能，表示为小于600nM的对LPA1的半数最大抑制浓度(IC50)。
优选地，本发明的化合物具有小于或等于250nM的对LPA1的IC50。
更优选地，本发明的化合物具有小于或等于50nM的对LPA1的IC50。
本发明的化合物特征还在于在50μM下≤50％的BSEP抑制。
本发明的化合物特征还在于≥15nm/秒的被动渗透性值。
在一个方面，本发明涉及用于用作药物的式(I)的化合物。因而，本发明涉及在药物制备中的式(I)的化合物，优选地用于治疗与LPA受体机制相关的障碍。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及用于治疗与LPA受体机制相关的障碍的式(I)的化合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及用于治疗与溶血磷脂酸受体1(LPA1)的调节异常相关的疾病、障碍或病症的式(I)的化合物。
在一个实施方案中，本发明涉及可用于预防和/或治疗纤维化和/或涉及纤维化的疾病、障碍或病症的式(I)的化合物。
本文中使用的术语“纤维化”或“纤维化障碍”表示与细胞和/或纤连蛋白和/或胶原的异常积累和/或增加的成纤维细胞募集相关的病症，并且包括但不限于各个器官或组织(诸如心脏、肾、肝、关节、肺、胸膜组织、腹膜组织、皮肤、角膜、视网膜、肌肉骨骼和消化道)的纤维化。
优选地，本发明的式(I)的化合物可用于治疗和/或预防纤维化诸如肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化、肾纤维化、眼纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化和系统性硬化症。
更优选地，本发明的式(I)的化合物可用于治疗特发性肺纤维化(IPF)。
在一个方面，本发明也涉及一种用于预防和/或治疗与LPA受体机制相关的障碍的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明涉及一种用于预防和/或治疗与溶血磷脂酸受体1(LPA1)的调节异常相关的障碍或病症的方法，所述方法包括给需要这种治疗的患者施用治疗有效量的式(I)的化合物。
在另一个方面，本发明涉及一种用于治疗和/或预防纤维化诸如肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化、肾纤维化、眼纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化和系统性硬化症的方法。
在另一个方面，本发明涉及根据本发明的式(I)的化合物用于治疗与LPA受体机制相关的障碍的用途。
在另一个方面，本发明涉及式(I)的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗与LPA受体机制相关的障碍。
在另一个方面，本发明涉及式(I)的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗和/或预防纤维化诸如肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化、肾纤维化、眼纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化和系统性硬化症。
在另一个方面，本发明涉及式(I)的化合物用于治疗与溶血磷脂酸受体1(LPA1)的调节异常相关的疾病、障碍或病症的用途。
如本文中使用的，关于式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或其它药学活性剂的“安全且有效量”是指这样的化合物的量：其足以治疗患者的病症，但是足够低以避免严重的副作用，然而它可以常规地由熟练的技术人员确定。
可以一次性施用或根据定量施用方案施用式(I)的化合物，在所述定量施用方案中，在给定时期的变化的时间间隔施用若干剂量。典型日剂量可以根据所选择的施用途径而变化。
本发明还涉及一种药物组合物，其包含与至少一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合的式(I)的化合物。
在一个实施方案中，本发明涉及与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合的式(I)的化合物的药物组合物，例如在Remington’s Pharmaceutical SciencesHandbook，第XVII版,Mack Pub.,N.Y.,U.S.A中描述的那些。
可以根据患者需要完成本发明的化合物及其药物组合物的施用，例如，口服地、经鼻地、胃肠外地(皮下地、静脉内地、肌肉内地、胸骨内地和通过输注)和通过吸入。
优选地，口服或通过吸入来施用本发明的化合物。
更优选地，口服施用本发明的化合物。
在一个优选的实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物是固体口服剂型诸如片剂、囊形片、胶囊剂、囊片、颗粒剂、锭剂和整装粉剂。
在一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物是片剂。
本发明的化合物可以单独施用或与各种药学上可接受的载体、稀释剂(诸如蔗糖、甘露醇、乳糖、淀粉)和已知赋形剂组合，所述赋形剂包括助悬剂、增溶剂、缓冲剂、粘合剂、崩解剂、防腐剂、着色剂、调味剂、润滑剂等。
在另一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物是液体口服剂型诸如水性和非水性溶液、乳剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。这样的液体剂型还可以含有合适的已知的惰性稀释剂诸如水和合适的已知的赋形剂诸如防腐剂、润湿剂、甜味剂、调味剂、以及用于乳化和/或悬浮本发明的化合物的试剂。
在另一个实施方案中，包含式(I)的化合物的药物组合物是可吸入制剂诸如可吸入的散剂、含有抛射剂的定量气雾剂或不含抛射剂的可吸入制剂。
对于作为干粉施用，可以使用根据现有技术已知的单或多剂量吸入器。在该情况下，该粉末可以填充在明胶、塑料或其它胶囊、药筒(cartridge)或泡罩包中或在贮库中。
对本发明的化合物呈化学惰性的稀释剂或载体，例如乳糖或任何其它适用于改善可吸入分数的添加剂可以添加到本发明的粉状化合物中。
包含抛射剂气体(如氢氟烷烃)的吸入气雾剂可以包含溶液或分散形式的本发明的化合物。抛射剂驱动的制剂还可以包含其它成分，例如共溶剂、稳定剂或任选的其它赋形剂。
包含本发明化合物的不含抛射剂的可吸入制剂可以是在水性、醇性或水醇性介质中的溶液或悬浮液形式，并且它们可以通过现有技术已知的喷射或超声雾化器或通过软雾雾化器递送。
本发明的化合物可以作为唯一的活性剂施用，或与其它药物活性成分联合施用。
本发明的化合物的剂量取决于多种因素，其中包括要治疗的具体疾病、症状的严重程度、施用途径等。
本发明还涉及包含药物组合物的装置，所述药物组合物包含根据本发明的式(I)的化合物，所述装置呈单次剂量或多次剂量干粉吸入器或定量吸入器的形式。
上文关于式I的化合物描述的所有优选基团或实施方案可以彼此组合并且在细节上做必要的修正后同样适用。
可以以有机合成领域的技术人员已知的多种方式制备本发明的化合物。有机合成领域的技术人员将理解，在分子上存在的官能团应该与所提出的转化一致。这有时需要修改合成步骤的顺序以获得期望的本发明的化合物。根据下面显示的方案中概括的程序，使用普遍已知的方法，通常可以制备式(I)的化合物，包括上文列出的所有化合物。
方案1描述了式(XI)的异噁唑酰氨基环己烷酸衍生物的合成。使用氯化剂诸如SOCl2或草酰氯/催化DMF，将4-硝基苯甲酸或5-硝基吡啶甲酸(II)转化成对应的酰氯。然后使该酰氯与合适的β-烯氨基-酯(III)反应，随后与羟胺缩合以提供异噁唑(IV)。在商购可得的醇(VI)存在下将酯去保护并随后进行Curtius重排以提供异噁唑氨基甲酸酯(VII)。在酸性条件(例如HCl)下在合适的条件诸如铁(Fe)下还原硝基，生成氨基中间体(VIII)。通过在有适当的偶联剂(例如HATU)存在下与式(IX)的环己烷二甲酸单酯的酰胺偶联，随后酯去保护，可以得到最终化合物(XI)。供选择地，可以使中间体(VIII)与商购可得的酸酐(X)反应以直接提供最终化合物(XI)。
方案1
方案2描述了通向式(XI)的异噁唑酰氨基环己烷酸衍生物的一种替代合成途径。通过先前在方案1中概述的相同合成顺序，将4-卤代苯甲酸或5-卤代吡啶甲酸(XII)转化成对应的异噁唑氨基甲酸酯(XIII)。在Buchwald反应条件(例如Buchwald,S.L.等人,Chem.Rev.2016,116,12564–12649)下使异噁唑(XIII)与二苯甲酮亚胺(XIV)反应，随后在众所周知的程序(例如盐酸羟胺)下切割得到的亚胺(XV)，提供中间体(VIII)。然后按照先前在方案1中概述的合成顺序得到最终化合物(XI)。
方案2
方案3描述了通向异噁唑酰氨基环己烷酸衍生物(XI)的另一种替代合成途径。使中间体(XVI)与4-甲氧基苄胺反应，生成PMB-保护的中间体(XVII)。随后在众所周知的程序下诸如在强酸性条件下去保护以提供中间体(XVIII)，然后使其与商购可得的酸酐(X)反应以提供化合物(XIX)。在有合适的试剂诸如N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛存在下进行叔丁基化，提供中间体(XX)，其经历甲酯的碱性水解，随后进行Curtius重排，以产生化合物(XXI)。最终在酸性条件下水解叔丁酯，生成最终化合物(XI)。
方案3
在本发明的另一个实施方案中，其中R3不是H，可以根据方案4得到化合物(XXIV)。在还原胺化条件下使中间体(VIII)与合适的醛(XXII)反应，提供化合物(XXIII)，其经历先前在方案1中概述的相同合成顺序以提供最终化合物(XXIV)。
方案4
方案5描述了式(XXX)的吡唑酰氨基环己烷酸衍生物的合成。适当地保护的卤代-吡唑酯(XXV)经历硼基化(例如在有合适的钯催化剂诸如[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)存在下使用频哪醇二硼酸酯)以产生硼酸酯(XXVI)，其然后经历与适当的4-硝基苯基/吡啶卤化物(XXVII)的Suzuki-Miyaura偶联以提供对应的4-硝基苯基/吡啶基吡唑(XXVIII)。去保护以后，按照在方案1中描述的相同合成途径，将得到的甲酸(XXIX)转化成最终化合物(XXX)。
方案5
方案6描述了得到吡唑酰氨基环己烷酸衍生物(XXX)的一种替代合成途径。4-硝基苯基/吡啶卤化物(XXVII)经历硼基化以产生硼酸酯(XXXI)，其然后经历与卤代-吡唑(XXXII)的Suzuki-Miyaura偶联以提供卤代-吡唑胺(XXXIII)。随后在有商购可得的醇(VI)存在下进行烷氧基羰基化(例如使用碳酸N,N’-二琥珀酰亚胺基酯)，提供氨基甲酸酯(XXXIV)。然后按照先前在方案1中概述的合成顺序得到最终化合物(XXX)。
方案6
方案7描述了三唑酰氨基环己烷酸衍生物(XL)的合成。在有合适的钯催化剂诸如双(三苯基膦)二氯化钯(II)存在下，4-硝基苯基/吡啶卤化物(XXVII)经历与炔丙基醇(XXXV)的Sonogashira偶联以产生对应的硝基-苯基/吡啶基炔丙基醇(XXXVI)。随后使烷基叠氮化物(XXXVII)与适当的催化剂反应，提供对应的三唑醇(XXXVIII)，其然后与氧化试剂(例如高锰酸钾)反应以提供三唑甲酸(XXXIX)。然后通过在方案1中描述的相同合成顺序得到最终化合物(XL)。
方案7
方案8描述了得到三唑酰氨基环己烷酸衍生物(XL)的一种替代合成途径。使4-氨基苯基/吡啶卤化物(XLI)与商购可得的酸酐(X)反应，并随后进行甲酸保护，提供中间体(XLII)。随后在有合适的钯催化剂诸如双(三苯基膦)二氯化钯(II)存在下与炔丙基醇进行Sonogashira偶联，产生对应的炔丙基(XXXV)醇中间体(XLIII)。用适当的催化剂使后者与烷基叠氮化物(XXXVII)反应，随后用合适的氧化剂(诸如高锰酸钾)氧化，提供三唑甲酸(XLIV)。在有商购可得的醇(VI)存在下进行Curtius重排，并最终进行甲酸去保护，提供三唑酰氨基环己烷酸衍生物(XL)。
方案8
供选择地，根据方案9可以得到化合物(XL)。被保护为叔丁基二甲基甲硅烷基醚(XLV)的硝基苯基/吡啶-丙炔醇(XXXVI)经历与叠氮基三甲基硅烷的环加成以提供三唑(XLVI)。在有合适的碱诸如K2CO3存在下进行烷基化，提供R4-取代的三唑(XLVII)。去保护和随后醇的氧化提供对应的三唑甲酸(XXXIX)，其经历先前在方案1中概述的相同合成顺序以提供最终化合物(XL)。
方案9
在本发明的另一个实施方案中，其中R4＝CH3，根据方案10可以得到化合物(LI)。三甲基甲硅烷基重氮甲烷可以用于向硝基苯基/吡啶-丙炔醇(XXXVI)的环加成，以在脱甲硅烷基化以后提供N-甲基三唑(XLIX)。醇的氧化提供对应的三唑甲酸(L)，其经历先前在方案1中概述的相同合成顺序以提供最终化合物(LI)。
方案10
方案11描述了式(LV)的噻吩酰氨基环己烷酸衍生物的合成。4-硝基苯基/吡啶硼酸酯(XXXI)经历与卤代-噻吩甲酸酯(LII)的Suzuki-Miyaura偶联以提供苯基/吡啶噻吩甲酸酯(LIII)。后者的去保护产生甲酸(LIV)，其经历先前在方案1中概述的相同合成顺序以提供最终化合物(LV)。
方案11
方案12描述了一种替代合成途径以得到式(LV)的噻吩酰氨基环己烷酸衍生物。在有商购可得的醇(VI)存在下，噻吩甲酸(LVI)经历Curtius重排以提供对应的氨基甲酸酯(LVII)。将噻吩用合适的试剂诸如N-溴代琥珀酰亚胺溴化以提供中间体(LVIII)，其在Stille交叉偶联条件(例如Farina V，等人.Org.React.,1997)下与4-氨基苯基/吡啶有机锡化合物(LIX)以提供化合物(LX)。然后按照在方案1中描述的相同合成顺序得到最终化合物(LV)。
方案12
方案13描述了式(LXIV)的噻唑酰氨基环己烷酸衍生物的合成。在有商购可得的醇(VI)存在下，溴异噻唑甲酸(LXI)经历Curtius重排以提供对应的氨基甲酸酯(LXII)。随后在Stille交叉偶联条件(例如Farina V，等人.Org.React.,1997)下与4-氨基苯基/吡啶有机锡化合物(LIX)反应以提供化合物(LXIII)。然后按照在方案1中描述的相同合成顺序得到最终化合物(LXIV)。
方案13
通过以下实施例举例说明本申请描述的发明的各个方面，并不意图以任何方式限制本发明。
中间体和实施例的制备
所有在实验部分中没有描述其合成的试剂是商购可得的，或是已知的化合物，或可以由本领域技术人员通过已知的方法从已知的化合物形成。
缩写–含义
Cs2CO3＝碳酸铯
Cp*RuCl(PPh3)2＝五甲基环戊二烯基双(三苯基膦)钌(II)氯化物
CyHex＝环己烷
DCM＝二氯甲烷
DMF＝二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲基亚砜
DPPA＝叠氮磷酸二苯酯
EtOAc＝乙酸乙酯
Feo＝铁
h＝小时
HATU＝1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐
HCl＝盐酸
HCOOH＝甲酸
H2O＝水
K2CO3＝碳酸钾
KF＝氟化钾
K2HPO4＝磷酸氢二钾
KHSO4＝硫酸氢钾
KMnO4＝高锰酸钾
K3PO4＝磷酸三钾
LC-MS＝液相色谱法/质谱法
LiOH＝氢氧化锂
MeCN＝乙腈
MeOH＝甲醇
N2＝氮气
NaOH＝氢氧化钠
Na2CO3＝碳酸钠
NaHCO3＝碳酸氢钠
Na2SO4＝硫酸钠
NH4Cl＝氯化铵
PdCl2(PPh3)2＝双(三苯基膦)二氯化钯(II)
Pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(0)
Pd2(dba)3CHCl3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(0)-氯仿加合物
Pd(dppf)Cl2＝[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)
Pd(PPh3)4＝四(三苯基膦)钯(0)
pTLC＝制备型薄层色谱法
r.t.＝室温
SFC＝超临界流体色谱法
TBAF＝四丁基氟化铵
THF＝四氢呋喃
XantPhos＝4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨
XPhos＝2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基联苯
XPhos Pd G2＝氯(2-二环己基膦基-2′,4′,6′-三异丙基-1,1′-联苯)[2-(2′-氨基-1,1′-联苯)]钯(II)
一般实验细节和方法
分析方法
用于分析的仪器、材料和方法
在400MHZ(质子频率)下运行的Varian MR-400波谱仪上进行1H-NMR谱，其配备有：用于反向检测的自屏蔽Z梯度线圈5mm 1H/nX宽带探头，氘数字锁定通道单元，带有发射机偏移频移的正交数字检测单元，或在AgilentVNMRS-500上或在Bruker Avance 400波谱仪上或在bruker Fourier 300上进行1H-NMR谱。将化学位移报告为相对于作为内部标准品的三甲基硅烷(TMS)的6个ppm值。以赫兹(Hz)为单位给出偶合常数(J值)，并使用以下缩写(s＝单峰，d＝双峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br.s＝宽单峰，nd＝未测定)报告多重性。
LC/UV/MS分析方法
估计LC/MS保留时间会受到+0.5min的实验误差影响。可以在以下条件下记录LCMS：二极管阵列DAD色谱迹线、质量色谱图和质谱图可以取自以下系统：与在正和/或负电子喷射ES电离模式下运行的Micromass ZQTM或Waters SQD单四极杆质谱仪偶联的UPLC/PDA/MS AcquityTM系统，和/或与在正和/或负ES电离模式下运行的ZQTM单四极杆偶联的以分析模式使用的Fractionlynx系统，或Shimadzu LCMS-2020单四极杆液体色谱仪质谱仪，并在具有DAD检测器/Thermo Scientific MSQ Plus的Dionex UHPLC Ultimate 3000上测量LCMS波谱。
在低pH条件下或在高pH条件下使用的运行的质量控制方法：
方法1，低pH条件:柱:Acquity CSH C18 2.1x50mm 1.7um，柱温度为40℃；流动相溶剂A为milliQ水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1mL/min。
梯度表为t＝0min 97％A3％B,t＝1.5min 0.1％A99.9％B,t＝1.9min 0.1％A99.9％B和t＝2min 97％A3％B。紫外检测范围为210-350nm和ES+/ES-范围为100-1500AMU。
方法2，低pH条件:柱Acquity UPLC 1.8μm C18(2.1x50mm),
柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为0.5mL/min。梯度表为t＝0.00min 90％A10％B,t＝4.00min 95％A,5％B,t＝5.20min5％A,95％B,t＝6.00min 5％A,95％B。紫外检测范围为205和254nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
方法3，低pH条件:柱
2.6μm XB-C18(4.6x50mm),110A，柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1.0mL/min。梯度表为t＝0.00min 90％A10％B,t＝3.35min 40％A,60％B,t＝3.75min40％A,60％B,t＝3.90min 5％A,95％B,t＝4.75min 5％A,95％B,t＝5.00min90％A,10％B,t＝6.00min 90％A,10％B，紫外检测范围为190-340nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
方法4，低pH条件:柱
2.6μm XB-C18(4.6x50mm),110A，柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1.0mL/min。梯度表为t＝0.00min 70％A30％B,t＝3.35min 20％A,80％B,t＝3.75min20％A,80％B,t＝3.90min 5％A,95％B,t＝4.75min 5％A,95％B,t＝5.00min70％A,30％B,t＝6.00min 70％A,30％B，紫外检测范围为190-340nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
方法5，低pH条件:柱
2.6μm XB-C18(4.6x50mm),110A，柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1.0mL/min。梯度表为t＝0.00min 60％A40％B,t＝3.35min 20％A,80％B,t＝3.75min20％A,80％B,t＝3.90min 5％A,95％B,t＝4.75min 5％A,95％B,t＝5.00min60％A,40％B,t＝6.00min 60％A,40％B，紫外检测范围为190-340nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
方法6，低pH条件:柱
2.6μm XB-C18(4.6x50mm),110A，柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1.0mL/min。梯度表为t＝0.00min 60％A40％B,t＝3.35min 40％A,60％B,t＝3.75min40％A,60％B,t＝3.90min 5％A,95％B,t＝4.75min 5％A,95％B,t＝5.00min60％A,40％B,t＝6.00min 60％A,40％B，紫外检测范围为190-340nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
方法7，低pH条件:柱
2.6μm XB-C18(4.6x50mm),110A，柱温度为25℃；流动相溶剂A为用于LCMS的μQ-水+0.1％HCOOH，流动相溶剂B为MeCN+0.1％HCOOH。流速为1.0mL/min。梯度表为t＝0.00min 70％A30％B,t＝3.35min 20％A,80％B,t＝3.75min20％A,80％B,t＝3.90min 5％A,95％B,t＝4.75min 5％A,95％B,t＝5.00min70％A,30％B,t＝6.00min 70％A,30％B，紫外检测范围为190-340nm和ES+/ES-范围为100-1000AMU。
手性化合物的手性制备型HPLC
使用半制备型HPLC(Agilent 1100系统和Waters 600系统)和SFC(来自Jasco的SFC制备型系统)技术进行手性拆分。
在没有描述起始材料的制备的情况下，这些是商购可得的、在文献中已知的或本领域技术人员使用标准程序可容易地得到。
使用Isolera MPLC系统(由Biotage制造)使用预填充硅胶或反相筒(由Biotage供给)进行快速色谱法。
已经从立体化学纯的起始材料(例如95％ee)制备以下实施例中描述的许多化合物。
在指出的情况下，实施例中的化合物的立体化学基于以下假设指定：在整个任何随后的反应条件中，在起始材料的拆分立体中心处的绝对构型得以保持。
在下面的程序中，在每种起始材料后面，有时提供了对化合物编号的提及。这仅仅为了辅助熟练的化学家而提供。所述起始材料不一定已经从提及的批料制备。
当提及使用“类似的”或“相似的”程序时，本领域技术人员会理解，这样的程序可能包含微小变化，例如反应温度、试剂/溶剂量、反应时间、后处理条件或色谱纯化条件。
中间体A1
5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯
步骤1:5-溴-6-甲基吡啶甲酰氯(中间体A1.1)
在0℃将草酰氯(3.98mL,46mmol)和干燥DMF(0.05mL,0.690mmol)加入5-溴-6-甲基吡啶甲酸(5g,23mmol)在干燥DCM(54mL)中的悬浮液中。将混合物在室温搅拌3h，并将溶剂在减压下除去以提供作为棕色固体的标题化合物(5.90g，粗制物)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.19(d,J＝8.22Hz,1H),7.78(d,J＝8.22Hz,1H),2.64(s,3H)
步骤2:(E)-2-(5-溴-6-甲基吡啶甲酰基)-3-(甲基氨基)丁-2-烯酸甲酯(中间体A1.2)
向(E)-3-(甲基氨基)丁-2-烯酸甲酯(2.92g,22.65mmol)(根据在J.Org.Chem.,1965,30,3033-3037中报道的程序制备)在干燥THF(22mL)中的溶液中，逐滴加入吡啶(3mL,37.7mmol)。将反应物在冰浴中冷却，并缓慢地加入5-溴-6-甲基吡啶甲酰氯(中间体A1.1,5.9g,25mmol)在干燥THF(33mL)中的溶液。将反应物温热至室温并搅拌过夜。加入H2O(200mL)并将溶液用EtOAc萃取3次。将合并的有机层进一步用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下蒸发以提供作为棕色油的标题化合物(7.78g，粗制物)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):329.1(方法1)
步骤3:5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基-1,2-噁唑-4-甲酸甲酯
将(E)-2-(5-溴-6-甲基吡啶甲酰基)-3-(甲基氨基)丁-2-烯酸甲酯(中间体A1.2,7.78g,粗制物)溶解在乙酸(50mL)中并加入盐酸羟胺(1.6g,23mmol)，并将混合物在80℃加热15min。将混合物在真空下蒸发，加入NaHCO3饱和水溶液(300mL)并将混合物用EtOAc萃取3次。将合并的有机层进一步用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下蒸发。将粗制物通过快速色谱法纯化，用从93/7至40/60的环己烷/EtOAc的梯度洗脱以提供作为白色固体的标题化合物(3.5g,11mmol,48％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):313(方法1)
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.97(d,J＝8.19Hz,1H),7.65(d,J＝8.19Hz,1H),3.87(s,3H),2.76(s,3H),2.52(s,3H)
通过使用与中间体A1类似的方法，从下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体B1
1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
步骤1:1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(中间体B1.1)
将4-溴-1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(455mg,2.08mmol)、乙酸钾(611.58mg,6.23mmol)和双(频哪醇合)二硼(791.24mg,3.12mmol)在1,4-二氧杂环己烷(15mL)中的混合物在N2下脱气5分钟，然后加入Pd(dppf)Cl2(152.41mg,0.210mmol)。将混合物在85℃搅拌过夜。加入水并将混合物用EtOAc萃取3次，将收集的有机级分经Na2SO4干燥，过滤并蒸发以产生作为棕色油的标题化合物(2.3g，粗制物)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):267(方法1)
步骤2:1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯
在氮气下向1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑-5-甲酸甲酯(中间体B1.1,553mg,2.08mmol)在1,4-二氧杂环己烷(10mL)中的溶液中，加入6-溴-2-甲基-3-硝基吡啶(541.2mg,2.49mmol)、K2HPO4(1.09g,6.23mmol)、水(10mL)和X-Phos Pd G2(163.3mg,0.210mmol)。将混合物在60℃搅拌过夜。加入水并将混合物用EtOAc萃取3次，将收集的有机相经Na2SO4干燥，过滤并在减压下蒸发。将残余物通过快速色谱法纯化，用从10％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱以提供作为粉红色固体的标题化合物(142mg,0.51mmol,25％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):277.05(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.45(d,J＝8.58Hz,1H),8.08(s,1H),7.79(d,J＝8.36Hz,1H),4.02(s,3H),3.86(s,3H),2.76(s,3H)
中间体C1
2-(4-硝基苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
通过交替施加真空和氮气，将2-溴噻吩-3-甲酸乙酯(1g,4.3mmol)、(4-硝基苯基)硼酸(0.6g,3.6mmol)、Na2CO3(1.1g,10.8mmol)在1,2-二甲氧基乙烷(15mL)和水(5mL)中的混合物脱气。然后加入Pd(dppf)Cl2(0.13g,0.18mmol)并将混合物在80℃加热1h。然后将混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将残余物通过快速色谱法纯化，用从0％至10％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱以提供作为白色固体的标题化合物(795mg,2.87mmol,80％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):278.1(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.44–8.12(m,2H),7.92–7.69(m,3H),7.60–7.43(m,1H),4.16(d,J＝7.04Hz,2H),1.14(t,J＝7.04Hz,3H)
中间体D1
5-(5-((1S,2S)-2-(叔丁氧基羰基)环己烷-1-甲酰氨基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯
步骤1:5-(5-((4-甲氧基苄基)氨基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯(中间体D1.1)
将5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基-1,2-噁唑-4-甲酸甲酯(中间体A1,11.2g,39.4mmol)、4-甲氧基苄胺(6.48g,47.3mmol)和碳酸铯(18.0g,55.2mmol)在无水甲苯(79mL)中的搅拌悬浮液用氩气吹扫10min，随后加入Pd2(dba)3CHCl3(0.8g,0.8mmol)和XantPhos(1.37g,2.4mmol)。将反应物在90℃搅拌过夜。将混合物过滤并将溶剂蒸发以得到油，将其溶解在DCM中并用环己烷沉淀。将粗制物使用从0％至50％的EtOAc在正己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供作为黄色固体的标题化合物(11.20g,30.50mmol,77％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):368.2(方法2)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.61(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(d,J＝8.6Hz,2H),6.89(d,J＝8.6Hz,2H),6.77(d,J＝8.6Hz,1H),6.67(t,J＝6.1Hz,1H),4.38(d,J＝6.0Hz,2H),3.74(s,3H),3.72(s,3H),2.42(s,3H),2.35(s,3H)
步骤2:5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯(中间体D1.2)
将4M的HCl在1,4-二氧杂环己烷中的溶液(150mL,599.2mmol)加入在1,4-二氧杂环己烷(300mL)中的5-(5-{[(4-甲氧基苯基)甲基]氨基}-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基-1,2-噁唑-4-甲酸甲酯(中间体D1.1)(11.0g,30.0mmol)中。将反应物在60℃搅拌过夜，将溶剂蒸发，然后加入DCM和水并将混合物用NH4OH碱化至pH 10。将各层分离并将水相用DCM(3x550mL)洗涤。将合并的有机层用盐水(300mL)洗涤并经硫酸钠干燥以产生8.50g粗制物。将产物在Et2O(85ml)中研磨以提供作为黄色固体的标题化合物(6.75g,27.3mmol,91％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):248.2(方法2)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 7.61(d,J＝8.4Hz,1H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),5.94–5.78(m,2H),3.76(s,3H),2.36(s,3H),2.31(s,3H)
步骤3:(1S,2S)-2-((6-(4-(甲氧基羰基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(中间体D1.3)
将(-)反式-1,2-环己烷二甲酸酸酐(4.46g,28.9mmol)加入5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基-1,2-噁唑-4-甲酸甲酯(中间体D1.2)(6.50g,26.3mmol)在DMF(105mL)中的溶液中。将混合物在55℃搅拌过夜。将溶液用水(400mL)稀释并将产物用EtOAc(3x250mL)萃取。将合并的有机层用10％KHSO4(3x150mL)洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发以产生作为黄色泡沫的标题化合物(9.01g,22.5mmol,89％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):402.3(方法2)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.13(s,1H),9.65(s,1H),8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.4Hz,1H),3.77(s,3H),2.73–2.68(m,1H),2.62–2.53(m,1H),2.48(s,3H),2.41(s,3H),2.07–2.00(m,2H),1.83–1.67(m,2H),1.43–1.22(m,4H)
步骤4:5-(5-((1S,2S)-2-(叔丁氧基羰基)环己烷-1-甲酰氨基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯
在氩气下将(1S,2S)-2-({6-[4-(甲氧基羰基)-3-甲基-1,2-噁唑-5-基]-2-甲基吡啶-3-基}氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(中间体D1.3)(8.71g,21.7mmol)溶解在无水甲苯(64mL)中。将混合物加热至回流。通过注射泵历时30min将N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛(17.66g,86.8mmol)逐滴加入回流混合物中。通过注射泵历时10min将N,N-二甲基甲酰胺二叔丁基缩醛的另外部分(4.41g,27.1mmol)逐滴加入回流混合物中。将反应物冷却至室温，然后用EtOAc(400mL)稀释并将有机层用碳酸氢钠饱和溶液(3x200mL)、水(200mL)和盐水(200mL)洗涤。将有机层经硫酸钠干燥并蒸发以得到作为油的11g粗制物。
使用0-50％的EtOAc在己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，得到作为黄色泡沫的标题化合物(7.95g 18.2mmol.80％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):458.4(方法2)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 9.66(s,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.81(d,J＝8.4Hz,1H),3.76(s,3H),2.76–2.65(m,1H),2.56–2.52(m,1H),2.48(s,3H),2.41(s,3H),2.07–1.92(m,2H),1.84–1.69(m,2H),1.35(s,9H),1.34–1.24(m,4H)
中间体E1
5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸
将5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-甲酸甲酯(中间体A1,2.0g,6.4mmol)溶解在THF(20mL)中并加入2M氢氧化锂在H2O中的溶液(16mL,32mmol)，并将混合物在50℃搅拌2h。将混合物用1N的HCl在H2O中的溶液酸化至中性pH，并用EtOAc萃取3次。将合并的有机层进一步用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在减压下蒸发以提供作为淡黄色固体的标题化合物(1.8g,6mmol,90％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):299.1(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.33(d,J＝8.37Hz,1H),7.99(d,J＝8.36Hz,1H),2.67(s,3H),2.44(s,3H)
通过使用与中间体E1类似的方法，由下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体F1
1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
步骤1:3-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇(中间体F1.1)
在0℃向6-溴-2-甲基-3-硝基吡啶(3.6g,16.6mmol)在干燥MeCN(35mL)中的溶液中，加入2-丙炔-1-醇(1.45mL,24.88mmol)和三乙胺(5.55mL,39.81mmol)，随后加入碘化亚铜(0.13g,0.700mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.49g,0.700mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h，然后将盐通过硅藻土垫滤出，并将滤液在减压下浓缩。将粗制物使用从0％至60％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供作为棕色固体的标题化合物(2.45g,12.75mmol,77％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):193(方法1)
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.29(d,J＝8.39Hz,1H),7.47(dd,J＝8.40,0.64Hz,1H),4.58(d,J＝6.29Hz,2H),2.89(s,3H),1.86(t,J＝6.23Hz,1H)
步骤2:(4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1-((三甲基甲硅烷基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体F1.2)
向3-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇(中间体F1.1,1.2g,6.18mmol)在干燥1,4-二氧杂环己烷(19mL)中的溶液中，加入三甲基甲硅烷基甲基叠氮化物(1.38mL,9.27mmol)。施加三个氮气/真空循环，然后加入Cp*RuCl(PPh3)2(0.3g,0.370mmol)。将混合物在90℃搅拌5h，然后在减压下浓缩以提供粗制混合物，将其使用从0％至60％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供标题化合物(360mg,1.12mmol,18％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):322.1(方法1)
步骤3:(1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体F1.3)
在0℃向(4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1-((三甲基甲硅烷基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体F1.2,360mg,1.12mmol)在干燥THF(4mL)中的溶液中加入1M的TBAF在THF中的溶液(1.06mL,1.06mmol)。将反应混合物搅拌30min，然后加入固体NaHCO3并将反应物在室温剧烈搅拌15min。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩。将粗制物使用从0％至70％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速柱色谱法纯化，提供作为淡橙色固体的标题化合物(110mg,0.44mmol,41.5％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):250(方法1)
步骤4:1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
向(1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体F1.3,110mg,0.44mmol)在MeCN(2.1mL)和水(0.3mL)中的溶液中加入KMnO4(139.5mg,0.88mmol)，并将得到的紫色溶液在室温搅拌过夜。然后加入3M HCl直到pH<4，并将溶剂在减压下除去。将粗制物使用从0％至4％的MeOH在DCM中的梯度通过快速色谱法纯化，提供标题化合物(96.5mg,0.367mmol,83％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):264(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.75(d,J＝8.66Hz,1H),8.35(d,J＝8.63Hz,1H),4.32(s,3H),2.85(s,3H)
通过使用与中间体F1类似的方法，从下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体G1
1-乙基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
步骤1:6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.1)
在氮气气氛下将3-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)丙-2-炔-1-醇(中间体F1.1,712mg,3.7mmol)和咪唑(0.5g,7.4mmol)溶解在THF(24mL)和DMF(1mL)中，然后加入叔丁基-氯-二甲基硅烷(1.12g,7.4mmol)。将反应混合物在40℃搅拌过夜。加入水并将有机相在减压下除去。将残余物用EtOAc萃取，依次用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。将有机相蒸发，并将粗制物使用从0％至15％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，以产生作为浅黄色油的标题化合物(1.05g,3.4mmol,92.5％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):307.2(方法1)
步骤2:6-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.2)
向6-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.1,1.05g,3.4mmol)在DMF(28mL)中的溶液中加入叠氮基三甲基硅烷(10mL,75.3mmol)。将反应物置于N2下并在100℃加热1h。将溶剂在减压下除去，并将粗制物使用20-65％的MeCN(1％HCOOH)在酸性水(1％HCOOH)中的梯度通过反相快速色谱法纯化，以提供作为黄色-橙色固体的标题化合物(507mg,1.45mmol,42％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):350.2(方法1)
步骤3:6-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-乙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.3)
将6-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.2,504mg,1.18mmol)在MeCN(28mL)中的溶液在0℃冷却，并加入碳酸钾(408.6mg,2.96mmol)，随后加入碘乙烷(142μL,1.77mmol)。将反应物在室温搅拌4小时，然后将溶剂在减压下除去并将残余物用DCM和水溶解。将水相用DCM萃取3次。将合并的有机相过滤，并将溶剂在减压下除去。然后将粗制物使用0-15％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速柱色谱法纯化，以提供作为白色固体的标题化合物(169.4mg,0.45mmol,38％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):378.3(方法1)
步骤4:(1-乙基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体G1.4)
在0℃向6-(5-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-乙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基-3-硝基吡啶(中间体G1.3,169.4mg,0.45mmol)在干燥THF(7mL)中的溶液中，加入1M的四丁基氟化铵(0.47mL,0.47mmol)在THF中的溶液。将反应混合物搅拌10min，然后加入固体NaHCO3并将混合物在室温剧烈搅拌5min。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩。将粗制物使用从0％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速柱色谱法纯化，以提供作为白色固体的标题化合物(90mg,0.34mmol,87.8％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):264.1(方法1)
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ8.49(d,J＝8.68Hz,1H),8.36(d,J＝8.68Hz,1H),6.15(t,J＝6.93Hz,1H),4.89(d,J＝6.95Hz,2H),4.48(q,J＝7.37Hz,2H),2.95(s,3H),1.58(t,J＝7.35Hz,3H)
步骤5:1-乙基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
向(1-乙基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-1,2,3-三唑-5-基)甲醇(中间体G1.4,90mg,0.34mmol)在MeCN(1.6mL)和水(0.22mL)中的溶液中加入KMnO4(56.92mg,0.360mmol)，并将得到的紫色溶液在室温搅拌过夜。然后加入3M HCl直到pH<4，并将溶剂在减压下除去。将粗制物使用从0％至2％的MeOH在DCM中的梯度通过快速色谱法纯化，提供作为白色固体的标题化合物(81mg,0.29mmol,85％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):278.1(方法1)
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.73–8.64(m,2H),5.03(q,J＝7.19Hz,2H),3.03(s,3H),1.63(t,J＝7.19Hz,3H)
中间体H1
4-(6-氟-5-((1S,2S)-2-(甲氧基羰基)环己烷-1-甲酰氨基)吡啶-2-基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
步骤1:(1S,2S)-2-((6-溴-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(中间体H1.1)
向6-溴-2-氟吡啶-3-胺(1.5g,7.1mmol)在MeCN(36.03mL)中的溶液中加入(-)-反式-1,2-环己烷二甲酸酸酐(1.2g,7.8mmol)。将混合物在40℃搅拌24h。在真空下除去溶剂，然后将粗制物用饱和NH4Cl水溶液稀释，并用EtOAc萃取。将合并的有机层在减压下蒸发以提供标题化合物(7.1mmol，粗制物)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):347.0(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.10(s,1H),10.05(s,1H),8.38(dd,J＝9.79,8.25Hz,1H),7.56(d,J＝8.29Hz,1H),3.08–2.99(m,1H),2.74(t,J＝11.16Hz,1H),1.99(h,J＝9.25,8.67Hz,3H),1.80–1.71(m,3H),1.57–1.36(m,1H),1.26(d,J＝8.31Hz,3H)
步骤2:(1S,2S)-2-((6-溴-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.2)
将(1S,2S)-2-((6-溴-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(中间体H1.1,7.1mmol，粗制物)加入对甲苯磺酸一水合物(1.5g,7.8mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中。将混合物在60℃搅拌5h。在真空下除去溶剂，然后将粗制物用饱和NH4Cl水溶液稀释，并用EtOAc萃取。将有机层在减压下蒸发，并将粗制物使用从0％至35％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供作为橙色油的标题化合物(2.4g,6.7mmol,94％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):359.0(方法1)
步骤3:(1S,2S)-2-((2-氟-6-(3-羟基丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.3)
在0℃向(1S,2S)-2-((6-溴-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.2,2.4g,6.7mmol)在干燥MeCN(24mL)中的溶液中，加入2-丙炔-1-醇(0.6mL,10mmol)和三乙胺(2.2mL,16mmol)，随后加入碘化亚铜(0.05g,0.3mmol)和PdCl2(PPh3)2(0.2g,0.3mmol)。将反应混合物在室温搅拌24h，然后将盐通过硅藻土垫滤出，并将滤液在减压下浓缩。将粗制物使用从0％至60％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供作为棕色固体的标题化合物(881mg,2.6mmol,39％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):335.2(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 10.08(s,1H),8.42(dd,J＝10,8Hz,1H),7.41(d,J＝8Hz,1H),5.39(dt,J＝11,6Hz,1H),4.30(d,J＝6Hz,1H),4.17(d,J＝6Hz,1H),3.54(s,3H),2.80(t,J＝11Hz,1H),2.61(dd,J＝11,8Hz,1H),2.23–1.88(m,2H),1.73(s,2H),1.42–1.13(m,4H)
步骤4:(1S,2S)-2-((2-氟-6-(5-(羟基甲基)-1-((三甲基甲硅烷基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.4)
向(1S,2S)-2-((2-氟-6-(3-羟基丙-1-炔-1-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.3,881mg,2.6mmol)在干燥1,4-二氧杂环己烷(13mL)中的溶液中加入三甲基甲硅烷基甲基叠氮化物(2.6mL,4mmol)。施加三个氮气/真空循环，然后加入Cp*RuCl(PPh3)2(0.13g,0.16mmol)。将混合物在70℃搅拌24h，并在减压下浓缩以提供粗制混合物，将其使用从0％至60％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，提供标题化合物(541mg,1.17mmol,44％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):464.2(方法1)
步骤5:(1S,2S)-2-((2-氟-6-(5-(羟基甲基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.5)
在0℃向(1S,2S)-2-((2-氟-6-(5-(羟基甲基)-1-((三甲基甲硅烷基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.4,541mg,1.17mmol)在干燥THF(6mL)中的溶液中，加入1M的TBAF在THF中的溶液(1.23mL,1.23mmol)。将反应混合物搅拌1h，然后加入固体NaHCO3，并将反应物在室温剧烈搅拌15min。将固体滤出并将滤液在减压下浓缩以提供标题化合物(1.17mmol，粗制物)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):392.2(方法1)
步骤6:4-(6-氟-5-((1S,2S)-2-(甲氧基羰基)环己烷-1-甲酰氨基)吡啶-2-基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-5-甲酸
向(1S,2S)-2-((2-氟-6-(5-(羟基甲基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体H1.5,1.17mmol)在MeCN(8mL)和水(1mL)中的溶液中加入KMnO4(194mg,1.2mmol)，并将得到的紫色溶液在室温搅拌过夜。然后加入3M HCl直到pH<4，并将溶剂在减压下除去。将粗制物使用从5％至55％的MeCN在水中的梯度通过反相快速色谱法纯化，提供标题化合物(179mg,0.44mmol,38％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):406.1(方法1)
中间体I1
1-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-5-胺
将4-溴-2-甲基吡唑-3-胺(800mg,4.5mmol)、(4-硝基苯基)硼酸(1.14g,6.8mmol)、Pd(dppf)Cl2(446mg,0.68mmol)和K3PO4(1.93g,9.09mmol)的混合物脱气。加入水(8mL)和1,4-二氧杂环己烷(24mL)，并将混合物在120℃搅拌2h。将混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将残余物用DCM萃取，将溶剂蒸发并将残余物与MeOH一起研磨以产生作为浅棕色固体的标题化合物(1.13g,5mmol，粗制物)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):219.1(方法1)
中间体J1
(5-(5-溴-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
给配备搅拌棒、回流冷凝器、温度计和氮气/真空活塞的100mL三颈烧瓶装入中间体E1(1.8g,6mmol)和(R)-1-(2-氯苯基)乙醇(1.14g,7.3mmol)。将系统封闭，并施加三个真空/氮气回充循环。加入干燥甲苯(20mL)，随后加入三乙胺(1.65mL,12.12mmol)和DPPA(1.96mL,9.1mmol)。将溶液缓慢地加热至125℃并回流搅拌30min。将得到的浆液冷却至室温，在相分离器上过滤，并将滤液在减压下浓缩。将粗制物通过快速柱色谱法纯化，用从5％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为淡黄色油的标题化合物(2.69g,5.97mmol,98.5％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):452.3(方法1)
通过使用与中间体J1类似的方法，从下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体K1
N-(1-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸(1R)-1-(2-氯苯基)乙酯
向(R)-1-(2-氯苯基)乙醇(631.6mg,4.03mmol)在DCM(16mL)/MeCN(16mL)中的溶液中加入碳酸N,N’-二琥珀酰亚胺基酯(939mg,3.7mmol)和DMAP(152mg,1.25mmol)，并将混合物在40℃搅拌1h。将反应物冷却至室温，然后加入1-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑-5-胺(中间体I1,800mg,3.7mmol)，并将溶液在40℃搅拌过夜。将反应混合物浓缩并在柠檬酸盐缓冲溶液(pH 5.2)和EtOAc之间分配，将有机层用NaHCO3饱和溶液洗涤，经相分离器干燥，并将溶剂在减压下蒸发。将残余物通过快速色谱法纯化，用从5％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为黄色油的标题化合物(632mg,1.57mmol,43％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):401.2(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.90(s,1H),8.19(d,J＝8.6Hz,2H),7.98(s,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.69–7.26(m,4H),6.06–5.92(m,1H),3.67(s,3H),1.67–1.42(m,3H)
中间体L1
(5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
步骤1:(5-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体L1.1)
给配备搅拌棒的5mL试管装入中间体J1(850mg,1.89mmol)、Cs2CO3(1.84g,5.66mmol)、Pd2(dba)3(81mg,0.09mmol)和Xantphos(164mg,0.28mmol)。将试管密封并进行三个真空/氮气回循环。加入1,4-二氧杂环己烷(12mL)和二苯甲酮亚胺(0.47mL,2.83mmol)，并重复三个真空/氮气回充循环。将试管密封并将混合物在90℃加热16h。将混合物过滤，将固体用EtOAc(3x5mL)洗涤并将滤液在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法纯化，用从5％至80％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为黄色油的标题化合物(840mg,1.5mmol,80％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):551.37(方法1)
步骤2:N-[5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基-1,2-噁唑-4-基]氨基甲酸(1R)-1-(2-氯苯基)乙酯
将(5-(5-((二苯基亚甲基)氨基)-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体L1.1,840mg,1.5mmol)溶解在MeOH(10mL)中，然后依次加入醋酸钠(437.67mg,5.34mmol)和盐酸羟胺(222.46mg,3.2mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，并然后在减压下浓缩以除去大部分MeOH，用饱和NaHCO3水溶液(20mL)稀释，并用DCM(3x15 mL)萃取。将收集的有机级分用盐水(40mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将油状棕色残余物通过快速柱色谱法纯化，用从5％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为黄色油的标题化合物(300mg,0.776mmol,52％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):387.4(方法1)
通过使用与中间体L1类似的方法，由下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体M1
(4-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
将(1-甲基-4-(6-甲基-5-硝基吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体J2,45mg,0.11mmol)溶解在DCM(2.5mL)、MeOH(1mL)和浓HCl(0.5mL,0.11mmol)中，然后加入Feo(42.31mg,0.76mmol)并将混合物在室温搅拌3h。将溶剂在减压下浓缩，并将残余物用2N的NaOH水溶液碱化，并用EtOAc萃取3次。将收集的有机级分用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供作为黄色固体的标题化合物(30mg,0.078mmol,72％收率)，将其不经进一步纯化用在下一步中。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):386.14(方法1)
通过使用与中间体M1类似的方法，由下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体N1
(2-(5-氨基吡啶-2-基)噻吩-3-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
步骤1:(2-溴噻吩-3-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体N1.1)
向噻吩-3-基氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体J10,2.5g,8.9mmol)在DCM(30mL)中的溶液中逐滴加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.58g,8.9mmol)，并将混合物在回流下搅拌1h。将反应物冷却至室温，用DCM(10mL)稀释，用饱和K2CO3水溶液(2x20mL)、盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化，用从5％至30％的DCM在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为灰白色固体的标题化合物(2.86g,7.93mmol,89％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):362(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.36(s,1H),7.58–7.32(m,5H),7.12(d,J＝5.82Hz,1H),6.03(q,J＝6.54Hz,1H),1.52(d,J＝6.58Hz,3H)
步骤2:(2-(5-氨基吡啶-2-基)噻吩-3-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
给配备搅拌棒的5mL微波管形瓶装入6-三丁基甲锡烷基吡啶-3-胺(107.31mg,0.28mmol)和(2-溴噻吩-3-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体N1.1,100mg,0.28mmol)。将瓶密封，并施加三个真空/氮气回充循环。加入甲苯(1.8mL)和DMF(0.2mL)并将混合物用氮气鼓泡10min。加入Pd(PPh3)4(32mg,0.03mmol)，将试管密封并将混合物在100℃加热16h。将混合物在室温冷却，在硅藻土上过滤，并在减压下浓缩。将残余物溶解在MeOH(3mL)中并用2N KF(1mL)处理30min。将混合物在减压下浓缩，用盐水(10mL)稀释，并用EtOAc(10mL)萃取。将有机相在减压下浓缩，并将残余物使用从5％至40％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速柱色谱法纯化，以提供作为无定形浅棕色固体的目标产物(2-(5-氨基吡啶-2-基)噻吩-3-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体N1,46mg,0.123mmol,44.％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):374(方法1)
1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δppm 8.08(d,J＝2.8Hz,1H),7.71–7.65(m,1H),7.57(d,J＝7.6Hz,1H),7.42(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),7.37(td,J＝7.6,1.4Hz,1H),7.35–7.25(m,2H),7.21(d,J＝5.5Hz,1H),7.11(dd,J＝8.6,2.8Hz,1H),6.21(q,J＝6.6Hz,1H),1.61(d,J＝6.6Hz,3H)
中间体O1
(5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)异噻唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯
向2-甲基-6-三丁基甲锡烷基吡啶-3-胺(676mg,1.7mmol)和(5-溴异噻唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体J27,581mg,1.55mmol)在甲苯(10mL)和DMF(1mL)中的溶液中加入Pd(PPh3)4(179mg,0.15mmol)，并将试管密封并在100℃加热16h。将混合物在室温冷却，在硅藻土上过滤，并在减压下浓缩。将残余物溶解在MeOH(3mL)中并用2NKF(1mL)处理30min。将混合物在减压下浓缩，用盐水(10mL)稀释，并用EtOAc(10mL)萃取。将有机相在减压下浓缩，并将残余物使用从20％至60％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速柱色谱法纯化，以提供作为黄色固体的目标产物(中间体O1,216mg,0.54mmol,35％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):403.11(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.14-9.35(m,1H)7.60-7.71(m,1H)7.47(br.s.,2H)7.25-7.42(m,2H)6.90(d,J＝8.36Hz,1H)6.00(d,J＝5.94Hz,1H)5.59(s,2H)2.28(s,3H)2.09-2.24(m,3H)1.56(d,J＝5.28Hz,3H)
中间体P1
(3-甲基-5-(5-(甲基氨基)吡啶-2-基)异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯吡啶-3-基)乙酯
向(5-(5-氨基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯吡啶-3-基)乙酯(中间体M9,80.0mg,0.21mmol)在THF(0.8mL)中的溶液中，加入甲醛(0.08mL,1.07mmol)、MeCN(1.7mL)和甲醇钠(57.8mg,1.07mmol)(从澄清至橙色溶液)。将反应混合物在25℃搅拌过夜(黄色溶液)，然后加入硼氢化钠(40.48mg,1.07mmol)(橙色溶液和气体产生)。将混合物在25℃搅拌3h(黄色溶液)，将溶剂在减压下除去，加入NaHCO3饱和溶液，并将混合物用EtOAc萃取。将溶液经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化，用0-85％的EtOAc在环己烷中的梯度洗脱，以提供作为淡橙色固体的标题化合物(43mg,0.111mmol,52％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):388.1(方法1)
1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.35(d,J＝3.52Hz,1H),8.07(d,J＝2.88Hz,1H),7.84(s,1H),7.68(d,J＝8.72Hz,1H),7.27(s,2H),6.98(dd,J＝8.63,2.99Hz,1H),6.14(q,J＝6.46Hz,1H),4.09(s,1H),2.96(d,J＝5.08Hz,3H),2.41(s,3H),1.64(d,J＝6.57Hz,3H)
中间体Q1
反式-2-((4-[5-((((1R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯
向N-[4-(4-氨基苯基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基]氨基甲酸(1R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体M3,149mg,0.4mmol)和(±)-反式-2-甲氧基羰基环己烷-1-甲酸(75mg,0.4mmol)在MeCN(2.5mL)中的溶液中加入1-甲基咪唑(0.11mL,1.41mmol)，随后加入HATU(135mg,0.48mmol)，并将混合物在室温搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，然后将水加入残余物中，并将混合物用EtOAc萃取。将溶剂经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化，用环己烷:EtOAc 1:1洗脱，以提供作为白色泡沫的标题化合物(146mg,0.27mmol,67％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):539.2(方法1)
通过使用与中间体Q1类似的方法，由下面报告的试剂制备下表中的中间体。
中间体R1
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯
向N-(2-(4-氨基苯基)噻吩-3-基)氨基甲酸(1R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体M4,250mg,0.67mmol)和(±)-顺式-2-甲氧基羰基环己烷-1-甲酸(125mg,0.67mmol)在MeCN(7mL)中的溶液中加入1-甲基咪唑(0.18mL,2.3mmol)，随后加入HATU(225mg,0.8mmol)，并将混合物在室温搅拌2h。将混合物在减压下浓缩，然后将水加入残余物中，并将混合物用EtOAc萃取。将溶剂经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用从10％至50％的EtOAc在环己烷中的梯度通过快速色谱法纯化，以提供作为白色固体的标题化合物(360mg,0.66mmol,99％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):541.3(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.87(s,1H),9.34–9.00(m,1H),7.61(d,J＝8.80Hz,2H),7.49–7.26(m,6H),7.05(d,J＝5.28Hz,1H),6.02–5.88(m,1H),3.55(s,3H),3.08–2.92(m,1H),2.79–2.69(m,1H),2.00(s,2H),1.87–1.61(m,3H)1.60–1.25(m,7H)
通过使用与中间体R1类似的方法，由下面报告的试剂制备下表中的中间体。
实施例1
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向(5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(2-氯苯基)乙酯(中间体L1,41mg,0.11mmol)在MeCN(1.23mL)中的溶液中加入(-)-反式-1,2-环己烷二甲酸酸酐(36mg,0.24mmol)。将混合物在室温搅拌18h。将溶剂在减压下除去，并将残余物使用从5％至70％的MeCN在酸性H2O(+0.1％HCOOH)中的梯度通过反相快速色谱法纯化，提供标题化合物(38mg,0.07mmol,66％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):541.3(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.60–11.59(m,1H),9.90–8.95(m,2H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H),7.71-7.55(m,1H),7.61-7.22(m,4H),6.17–5.82(m,1H),2.75-2.52(m,2H),2.42(s,3H),2.16(s,3H),1.60-1.25(m,3H),2.08–1.20(m,8H)
按照与实施例1类似的程序，从下面报告的试剂制备下表中的实施例。
实施例4和实施例5
向反式-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体Q1,146mg,0.27mmol)在THF(4mL)/水(4mL)中的溶液中加入LiOH(26mg,1mmol)，并将混合物在室温搅拌72h。将溶剂在减压下除去，并将残余物溶解在水中，然后加入6N HCl直到酸性pH。将沉淀物过滤，干燥并进行手性半制备型SFC。
条件：柱:Whelk 01(R,R)(25x2cm),10μm；调节剂:(甲醇+0.1％异丙胺)35％；流速45mL/min；紫外检测:220nm；环:350μl。
实施例4
反式-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2
LC-MS(ESI):m/z(M+1):525.2(方法1)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.04(br s,1H),9.92(s,1H),9.73-9.11(m,1H),7.64-7.83(m,1H),7.58-7.52(m,2H),7.38-7.31(m,2H),7.62-6.50(m,4H),6.11-5.77(m,1H),3.77-3.50(m,3H),2.59-2.52(m,2H),2.11-1.91(m,2H),1.84-1.68(m,2H),1.62-1.16(m,3H),1.41-1.13(m,4H)
实施例5
反式-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1
LC-MS(ESI):m/z(M+1):525.2(方法1)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.23-11.87(m,1H),10.05–9.80(m,1H),9.71–9.09(m,1H),7.77-7.65(m,1H),7.58-7.52(m,2H),7.37-7.29(m,2H),7.64-6.56(m,4H),6.11-5.81(m,1H),3.73-3.53(m,3H),2.58-2.52(m,2H),2.05-1.92(m,2H),1.81-1.71(m,2H),1.36-1.25(m,4H),1.61-1.17(m,3H)
实施例6
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体R1,360mg,0.66mmol)在MeOH(2.5mL)/水(2.5mL)中的溶液中加入LiOH(30mg,1.2mmol)，并将混合物在室温搅拌3h。加入1N HCl直到酸性pH，并将混合物用EtOAc萃取。将有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩，将残余物使用从0％至10％的MeOH在DCM中的梯度通过快速色谱法纯化，提供标题化合物(260mg,0.49mmol,78％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):527.2(方法1)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 11.97(br s,1H),10.20–9.65(m,1H),9.19(br d,J＝4.4Hz,1H),7.67–7.59(m,2H),7.59–7.14(m,7H),7.04(d,J＝5.5Hz,1H),5.94(br d,J＝4.7Hz,1H),2.95(q,J＝4.6Hz,1H),2.66–2.57(m,1H),2.19–2.06(m,1H),2.06–1.98(m,1H),1.83–1.58(m,3H),1.56–1.20(m,6H)
对实施例6进行半制备型SFC。
条件：柱:Chiralpak AD-H(25x0.46cm),5μm；调节剂:甲醇30％；流速2.5mL/min；紫外检测:220nm；环:20μl。
实施例7
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1
LC-MS(ESI):m/z(M+1):527.2(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.39–11.51(m,1H),10.89–9.64(m,1H),9.31–8.94(m,1H),7.68–7.58(m,2H),7.57–7.15(m,7H),7.12–6.92(m,1H),6.05–5.85(m,1H),2.93(br d,J＝4.6Hz,1H),2.64–2.55(m,1H),2.15–1.95(m,2H),1.79–1.59(m,3H),1.56–1.25(m,6H)
实施例8
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2
LC-MS(ESI):m/z(M+1):527.2(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.46–11.56(m,1H),10.67–9.83(m,1H),9.34–8.99(m,1H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.57–7.25(m,7H),7.04(d,J＝5.3Hz,1H),6.01–5.87(m,1H),2.92(br d,J＝4.6Hz,1H),2.63–2.54(m,1H),2.14–1.96(m,2H),1.78–1.59(m,3H),1.57–1.26(m,6H)
实施例9
反式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向反式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体Q2,318mg,0.58mmol)在THF(2.5mL)/MeOH(2.5mL)/水(2.5mL)中的溶液中加入LiOH(28mg,1.17mmol)，并将混合物在室温搅拌3h。加入1N HCl直到酸性pH，并将混合物用EtOAc萃取。将有机相经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用从0％至10％的MeOH在DCM中的梯度通过快速色谱法纯化，提供标题化合物(110mg,0.21mmol,36％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):527.4(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.09–10.87(m,1H),10.31–9.82(m,1H),9.46–8.79(m,1H),7.63(d,J＝8.6Hz,2H),7.59–7.26(m,7H),7.04(d,J＝5.5Hz,1H),6.16–5.75(m,1H),2.59–2.51(m,1H),2.10–1.18(m,8H),1.59-1.39(m,3H)
对实施例9进行半制备型SFC。
条件：柱:Chiralpak AD-H(25x2cm),5μm；调节剂:甲醇30％；流速45mL/min；紫外检测:220nm；环:500μl。
实施例10
反式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1
LC-MS(ESI):m/z(M+1):527.4(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 13.09–10.87(m,1H),10.31–9.82(m,1H),9.46–8.79(m,1H),7.63(d,J＝8.6Hz,2H),7.59–7.26(m,7H),7.04(d,J＝5.5Hz,1H),6.16–5.75(m,1H),2.59–2.51(m,1H),2.10–1.18(m,8H),1.59-1.39(m,3H)
实施例12
(1R,2R)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向反式-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体Q3,91.6mg,0.17mmol)在THF(1.5mL)和水(0.3mL)中的溶液中加入LiOH(8mg,0.33mmol)，并将混合物在40℃搅拌4h。加入1N HCl直到酸性pH，并将混合物用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用从0％至10％的MeOH在DCM中的梯度通过快速色谱法纯化，并然后进行半制备型SFC。
条件：柱:Chiralpak AD-H(25x0.46cm),5μm；调节剂:(乙醇+0.1％三氟乙酸)20％；流速2.5mL/min；紫外检测:220nm；环:20μl。通过将手性HPLC与实施例1对比，指定绝对立体化学(1R,2R)。
实施例12
LC-MS(ESI):m/z(M+1):541.4(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.60–11.59(m,1H),9.90–8.95(m,2H),7.95(d,J＝8.3Hz,1H),7.71-7.55(m,1H),7.61-7.22(m,4H),6.17–5.82(m,1H),2.75-2.52(m,2H),2.42(s,3H),2.16(s,3H),1.60-1.25(m,3H),2.08–1.20(m,8H)。
实施例13和实施例14
向顺式-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体R2,70mg,0.13mmol)在THF(3.3mL)/水(0.2mL)中的溶液中加入LiOH(6mg,0.25mmol)，并将混合物在室温搅拌12h。将挥发物在减压下除去，将残余物溶解在水中并加入3N HCl直到酸性pH。将溶剂在减压下除去，并将残余物使用从5％至70％的MeCN在酸性H2O(+0.1％HCOOH)中的梯度通过反相快速色谱法纯化，并然后进行半制备型SFC。
条件：柱:Chiralpak IC(25x0.46 cm),5μm；调节剂:甲醇25％；流速2.5mL/min；紫外检测:220nm；环:20μl。
实施例13
顺式-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2
LC-MS(ESI):m/z(M+1):541.4(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.57–11.64(m,1H),10.05–8.96(m,2H),7.93(brd,J＝8.3Hz,1H),7.73–7.24(m,5H),5.98(br d,J＝4.8Hz,1H),3.09–2.61(m,2H),2.42(s,3H),2.17(s,3H),2.05(br d,J＝4.8Hz,2H),1.83–1.24(m,9H)
实施例14
顺式--2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1
LC-MS(ESI):m/z(M+1):541.4(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.57–11.64(m,1H),10.05–8.96(m,2H),7.93(brd,J＝8.3Hz,1H),7.73–7.24(m,5H),5.98(br d,J＝4.8Hz,1H),3.09–2.61(m,2H),2.42(s,3H),2.17(s,3H),2.05(br d,J＝4.8Hz,2H),1.83–1.24(m,9H)
实施例18
(1S,2S)-2-((6-(4-(((1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1
对化合物(1S,2S)-2-((6-(4-(((1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(实施例17,108.3mg,0.21mmol)进行手性色谱法。
条件：柱:Chiralpak AD-H(25x0.46cm),5μm；调节剂:正己烷/(乙醇+0.1％三氟乙酸)60/40％v/v；流速1mL/min；紫外检测:220nm；环:20μl。
实施例18
LC-MS(ESI):m/z(M+1):512.2(方法1)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 12.68–11.81(m,1H),10.43(s,1H),9.22(br d,J＝1.3Hz,1H),8.80(br s,1H),8.37–7.92(m,3H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.57–7.17(m,1H),5.82(br d,J＝6.6Hz,1H),2.65–2.52(m,2H),2.06–1.93(m,2H),2.15(s,3H),1.86–1.71(m,2H),1.56(br s,3H),1.40–1.21(m,4H)
实施例20
(1S,2S)-2-((6-(4-(((-1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2
对化合物(1S,2S)-2-((6-(4-(((1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸(实施例19,85mg,0.16mmol)进行手性半制备型色谱法。条件：柱:Whelk O1(R,R)(25x0.46cm),10μm；调节剂:正己烷/(乙醇+0.1％三氟乙酸)65/35％v/v；流速1mL/min；紫外检测:220nm；环:20μl。
实施例20
LC-MS(ESI):m/z(M+1):526.2(方法1)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 13.00–11.11(m,1H),9.58(br s,1H),9.37–8.55(m,1H),8.29–7.97(m,2H),7.92(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.53–7.04(m,1H),6.05–5.63(m,1H),2.70(td,J＝11.2,3.2Hz,1H),2.57–2.52(m,1H),2.39(br s,3H),2.16(s,3H),2.08–1.94(m,2H),1.84–1.71(m,2H),1.41–1.23(m,4H),1.70–1.15(m,3H)
实施例24
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向冷却至0℃的2-((6-(4-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸叔丁酯(中间体J13,103mg,0.20mmol)在DCM(2.5mL)中的溶液中，逐滴加入4M的HCl在1,4-二氧杂环己烷中的溶液(0.89mL,3.60mmol)。在室温搅拌过夜以后，将溶剂蒸发并将产物通过pTLC(5％的MeOH在DCM中的溶液)纯化，以产生作为白色固体的标题化合物(70mg,0.13mmol,75％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):525(方法3)
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.26(bs,1H),10.04(s,1H),9.17(s,1H),8.13(d,J＝8.4Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.56–7.32(m,2H),7.32–7.07(m,2H),5.94(d,J＝7.1Hz,1H),2.72–2.64(m,1H),2.45(s,3H),2.40–2.30(m,1H),2.17(s,3H),2.09–1.98(m,1H),1.98–1.85(m,1H),1.74(s,2H),1.54(s,2H),1.47–1.30(m,2H),1.30–1.16(m,3H)
按照与实施例24类似的程序，由下面报告的试剂制备下表中的实施例。
实施例33
顺式-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向(5-(5-氨基-6-甲基吡啶-2-基)-3-甲基异噁唑-4-基)氨基甲酸(R)-1-(吡啶-3-基)乙酯(中间体L2,30mg,0.08mmol)在DMF(1mL)中的溶液中，加入顺式-1,2-环己烷二甲酸酸酐(0.039g,0.03mmol)，并将反应混合物在室温搅拌过夜。加入水，并将产物用DCM(3x5mL)萃取。将合并的有机层用盐水(3mL)洗涤，经硫酸钠干燥并蒸发以产生40mg粗制物。将粗制物通过pTLC(5％的MeOH在DCM中的溶液)纯化以提供标题化合物(13mg,0.03mmol,44％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):(方法3)508.21
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δppm 12.48(bs,1H),9.13(s,1H),8.63(s,1H),8.55–8.40(m,1H),8.30(d,J＝8.5Hz,1H),7.91–7.70(m,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.48–7.30(m,1H),5.90–5.69(m,1H),2.87–2.77(m,1H),2.46(s,3H),2.22–2.09(m,4H),1.91–1.44(m,9H),1.46–1.23(m,3H)
实施例53
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
向(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸甲酯(中间体J38,22mg,0.039mmol)在THF(1mL)和水(0.2mL)中的溶液中加入1NLiOH溶液(0.047mL,0.047mmol)，并将混合物在室温搅拌16h。加入1N HCl直到酸性pH，并将混合物用EtOAc萃取。将有机层经Na2SO4干燥并在减压下浓缩。将残余物使用5-60％的MeCN(1％HCOOH)在酸性水(1％HCCOH)中的梯度通过反相快速色谱法纯化，以提供标题化合物(4.8mg,0.009mmol,22％收率)。
LC-MS(ESI):m/z(M+1):545.1(方法1)
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 12.11(br s,1H),9.23-10.59(m,2H),8.50(br t,J＝9.0Hz,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,1H),6.60-7.73(m,4H),5.99(br s,1H),3.86(br s,3H),2.69-2.87(m,1H),2.39-2.49(m,1H),1.99-2.06(m,1H),1.92-1.98(m,1H),1.70-1.81(m,2H),1.57(br s,3H),1.22-1.39(m,4H)
本发明化合物的药理学活性
体外测定
使用384孔形式的FLIPR测定，可以确定本发明的化合物作为LPA1拮抗剂对在CHO细胞中表达的人重组LPA1的有效性。
在补充了10％的胎牛血清、1mM丙酮酸钠、11mM Hepes和1X青霉素/链霉素的含有2mM Glutamax的DMEM/F-12(1:1)混合物中，在5％CO2下在保湿培养箱中培养CHO-hLPA1细胞系。将CHO hLPA1细胞以7,500个细胞/孔的密度在50μl培养基中接种在黑色壁透明底384-孔平板(#781091,Greiner Bio-One GmbH)中，并在37℃控湿CO2-培养箱中培养过夜。在100％DMSO中以200倍终浓度进行化合物的系列稀释(1:3或1:4,11点CRC)。将化合物在实验前用测定缓冲液(20mM HEPES,145mM NaCl,5mM KCl,5.5mM葡萄糖,1mM MgCl2和2mMCaCl2,pH 7.4，含有0.01％Pluronic F-127)以1:50稀释，以获得对应于在测定中的终浓度的5倍的溶液(4X,2％DMSO)。在测定中DMSO的终浓度为每孔0.5％。通过抽吸除去培养基，并然后将细胞与30μl的负载溶液一起在37℃培养箱温育30min(细胞负载)，所述负载溶液含有在含2.5mM丙磺舒的测定缓冲液中的5μM的细胞质Ca2+指示剂Cal-520 AM。将负载的细胞平板转移进FLIPR仪器并在在线添加方案期间监测钙应答。为了测试化合物，在细胞负载后，将10μl/孔的4X拮抗剂溶液添加到细胞上。在30min预温育(在37℃)后，添加10μl/孔的5倍浓缩的LPAEC80，并在在线添加方案期间跟踪Ca2+动员应答。将减去基线荧光的细胞内峰荧光值输出并分析以分别确定IC50值。将钙应答表示为EC80激动剂应答的最大抑制百分比。
在未刺激的对照(DMSO，无LPA)中获得的原始数据被设置为“100％抑制”，而在阴性对照(即在没有化合物存在下和用LPAEC80刺激)中获得的原始数据被设置为“0％抑制”。
将原始数据(以相对荧光单位表示的峰高)归一化并转换为“抑制百分比”。使用XLfit软件用四参数逻辑模型进行曲线拟合和pIC50(-LogIC50)估计。
下表4中提供了各种化合物的结果，并表示为活性的范围。
表4
其中将化合物根据以下分类标准根据它们对LPA1受体的抑制活性的效能进行分类：
+:被包含在约600nM至250nM之间的LPA1 IC50
++:被包含在约250nM至50nM之间的LPA1 IC50
+++:小于约50nM的LPA1 IC50
可以理解，表4的所有化合物都显示出对LPA1受体的拮抗剂活性。实际上，可以认识到，符号+表示良好且足够的活性水平，其甚至可以增加到+++，从而证实了本发明的化合物的高活性受体LPA1。
BSEP抑制
使用在两个胶原层之间(夹心构型)培养5天的冷冻保存的人肝细胞(PlateableCryopreserved Human Hepatocytes,BIOIVT)，评价BSEP抑制。在这种培养条件下，肝细胞表达包括BSEP在内的相关转运体并保留胆小管结构。
在培养的第5天，肝细胞已准备好进行测定，可以在目标化合物存在和不存在的情况下估计牛磺胆酸(TCA)(一种已知的BSEP底物)的胆道清除率。
将试验化合物和TCA溶解在DMSO中来制备样品溶液，并然后在使用前在37℃温热的测定缓冲液(汉克氏平衡盐溶液(HBSS+))中稀释，以产生含有和不含50μM试验化合物的10μM TCA工作溶液。将肝细胞与这些工作溶液一起温育10分钟，使TCA排泄到胆汁中。在温育结束时，抽吸工作溶液，并通过加入不含Ca2+/Mg2+的改良HBSS(HBSS-)来收集胆汁内容物。Ca2+在缓冲液中的存在是维持紧密连接(即小管腔和细胞外空间之间的扩散屏障)的完整性所必需的。相反，在不含Ca2+的缓冲液中温育细胞会破坏紧密连接并打开胆管结构，从而使胆汁内容物被释放并被收集用于HPLC-MS/MS分析。
根据下式计算在有和没有试验化合物的情况下温育的TCA的体外胆汁清除率：
其中
Acc.胆汁＝(在HBSS(-)缓冲液样品中的TCA量(pmol/mg蛋白)*每种样品的体积(mL))/每孔的蛋白质含量(mg)
AUC＝温育时间(min)*T0浓度。T0浓度是在介质中的初始TCA浓度。
根据下式将BSEP的抑制计算为有目标化合物存在下TCA胆汁清除率的抑制百分比：
下表5提供了各种化合物的结果。
表5
渗透性
对Caco-2细胞单层(人结肠腺癌永生化细胞)进行测定，通过测量化合物在两个方向上的转运(吸收和分泌)来评价本发明的化合物的渗透性：在有和没有PgP抑制剂(依克立达)的情况下，顶端到基底外侧方向(A>B)和基底外侧到顶端(B>A)。
将从ReadyCell购买的96孔形式的细胞(Cod.KRECE-CCR50)由供应商在DMEM 1g/L葡萄糖培养基中的transwell支持物上培养21天，所述培养基补充了胎牛血清(10％)、谷氨酰胺200mM(1％)和青霉素10000U/ml-10mg/ml链霉素(1％)。
在培养的第21天，通过使用EVOM设备(Endohm,WPI，德国)测量跨上皮电阻(TEER)并研究参考化合物(舒必利和美托洛尔)的表观渗透性(Papp)来验证细胞单层完整性。此外，作为对照，使用在两个方向上有和没有依克立达的他林洛尔10uM(Pgp外排底物)。
以10mM的浓度将试验化合物溶解在DMSO中来制备样品溶液，并然后在使用前在37℃温热的测定缓冲液(汉克氏平衡盐溶液)中稀释，以产生含有和不含10μM依克立达的10μM化合物工作溶液。将这些工作溶液添加到供体隔室(A>B方向的顶部和B>A方向的基底外侧)，并将测定缓冲液(汉克氏平衡盐溶液)添加到受体隔室(A>B方向的基底外侧和B>A方向的顶部)。将平板在37℃温育120分钟，一式三份进行所有温育。在温育结束时，收集来自供体和受体隔室的样品用于HPLC-MS/MS分析。
使用以下方程式，以nm/秒为单位计算在有和没有PgP抑制剂(依克立达)的情况下在两个方向(即从顶端到基底外侧(A>B)和从基底外侧到顶端(B>A))的渗透系数(Papp)：
其中：
Cr＝在时间t时在接收孔中的测量浓度(表示为IS比率)
Vr＝接收孔的体积(ml)
t＝时间(秒)
A＝膜表面积(cm2)
C0＝初始供体浓度
被动Papp被认为是有PgP抑制剂依克立达的情况下的Papp A>B。
下表6提供了各种化合物的结果。
表6
对比实施例A
(1S,2S)-2-({4-[3-甲基-4-({[(1R)-1-(2-氯苯基)乙氧基]羰基}氨基)-1,2-噁唑-5-基]苯基}氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
已经在如上所述的用于确定对LPA1受体的活性的体外测定中以及用BSEP和渗透性测定测试了对比实施例A的活性。
与本发明的式(I)的化合物不同，对比实施例A显示出<15的被动渗透性，并因此不适于口服施用，并且在50μM的BSEP抑制大于70％，所述抑制不可以认为对于药物候选物而言是可接受的。
对比实施例B
2-((4-(3-甲基-4-((((R)-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸
已经在如上所述的用于确定对LPA1受体的活性的体外测定中试验了对比实施例B的活性。
与本发明的式(I)的化合物不同，对比实施例B显示出大于1μm的IC50，并因此该化合物对受体LPA1无活性。
上述结果表明，包含与异噁唑组合的吡啶部分的本发明的式(I)的化合物的骨架出乎意料地导致一系列具有活性的、具有非常好的BSEP和渗透性特性的化合物，因此适用于非常有前途的生物利用度特性。
Claims (12)
1.式(I)的化合物
其中X是CR5、-CH-或N，
A选自由以下成员组成的集合：
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、杂芳基和(C1-C4)烷基，其中这样的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和烷基中的任一个可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN、-O(C1-C4)烷基、-NR6R7；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、卤素和CN；
R6和R7在每次出现时独立地是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、(C1-C6)卤代烷基和卤素，或
R6和R7可以与它们所连接的氮原子一起形成4-6元饱和杂环系统，所述杂环系统任选地含有另一个选自N、S和O的杂原子，所述杂环系统可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和卤素，
前提条件是，当A是
时，X是N。
2.根据权利要求1所述的式(I)的化合物，
其中X是CR5、-CH-或N，
A选自由以下成员组成的集合：
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C4-C6)环烷基、杂环烷基和杂芳基，其中这样的芳基和杂芳基中的任一个任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN；
R2是(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或(C1-C4)烷基。
3.根据权利要求1所述的式I的化合物
其中A是
且X是N，所述化合物由式Ia代表
其中
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C3-C6)环烷基、杂环烷基、杂芳基和(C1-C4)烷基，其中这样的芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和烷基中的任一个可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN、-O(C1-C4)烷基、-NR6R7；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、卤素和CN；
R6和R7在每次出现时独立地是H或选自由以下成员组成的集合：(C1-C4)烷基、(C1-C6)卤代烷基和卤素，或
R6和R7可以与它们所连接的氮原子一起形成4-6元饱和杂环系统，所述杂环系统任选地含有另一个选自N、S和O的杂原子，所述杂环系统可以任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、(C1-C4)卤代烷基和卤素。
4.根据权利要求3所述的式Ia的化合物，其中
R1选自由以下成员组成的集合：芳基、(C4-C6)环烷基、杂环烷基和杂芳基，其中这样的芳基和杂芳基中的任一个任选地被一个或多个基团取代，所述基团选自(C1-C4)烷基、卤素、(C1-C4)卤代烷基、CN；
R2是H或(C1-C4)烷基；
R3是H或(C1-C4)烷基，
R4是H或(C1-C4)烷基，
R5是H或(C1-C4)烷基和卤素。
5.根据权利要求1-4所述的化合物，所述化合物选自以下至少一种：
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
反式-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2，
反式-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1，
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1，
顺式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2，
反式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
反式-2-((4-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1R,2R)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
顺式-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体2，
顺式-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸的单一非对映异构体1，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-(((1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((EN1)-1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-(((1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((EN2)-1-(2-氟吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(3-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)噻吩-2-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(噻唑-2-基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((4-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)苯基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(2-(三氟甲基)苯基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-环戊基乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-溴苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)(甲基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-5-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(邻甲苯基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
顺式-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-(吡啶-3-基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((2-氯苄基)氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(3-甲基-4-((((R)-1-(2-(三氟甲基)苯基)乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-甲氧基苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噁唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
顺式-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
顺式-2-((6-(3-甲基-4-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(3-甲基-4-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(4-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-3-甲基异噻唑-5-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(1-甲基-5-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(1-甲基-5-((((R)-1-苯基乙氧基)羰基)氨基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(1-甲基-5-((((R)-1-(2-(三氟甲基)苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-环戊基乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-乙基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(3-甲基-4-(((((R)-戊烷-2-基)氧基)羰基)氨基)异噁唑-5-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氟苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-环戊基乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-甲基吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((2-甲基-6-(1-甲基-5-(((((R)-戊烷-2-基)氧基)羰基)氨基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸，
(1S,2S)-2-((6-(5-((((R)-1-(2-氯苯基)乙氧基)羰基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,3-三唑-4-基)-2-氟吡啶-3-基)氨甲酰基)环己烷-1-甲酸。
6.一种药物组合物，其包含与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合的根据权利要求1-5中的任一项所述的化合物。
7.用于口服施用的根据权利要求6所述的药物组合物。
8.根据权利要求1-5中的任一项所述的式(I)的化合物或根据权利要求6和7所述的药物组合物，其用作药物。
9.根据权利要求8所述的式(I)的化合物或药物组合物，其用于治疗与溶血磷脂酸受体1(LPA1)的调节异常相关的疾病、障碍或病症。
10.根据权利要求8和9所述的式(I)的化合物或药物组合物，其用于预防和/或治疗纤维化和/或涉及纤维化的疾病、障碍或病症。
11.根据权利要求10所述的式(I)的化合物或药物组合物，其用于预防和/或治疗纤维化，所述纤维化包括肺纤维化、特发性肺纤维化(IPF)、肝纤维化、肾纤维化、眼纤维化、心脏纤维化、动脉纤维化和系统性硬化症。
12.根据权利要求11所述的式(I)的化合物或药物组合物，其用于预防和/或治疗特发性肺纤维化(IPF)。
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