CN115980341A - 一种新型胶体金法定量检测降钙素原pct免疫层析试纸条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条及其制备方法，所述试纸条结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，其特征在于，硝酸纤维素膜（NC膜）上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体M7413作为检测线；所述金标垫喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明试纸条检测灵敏度为0.01ng/ml，检出限更低，更为精确，15min快速读数。
Description
技术领域
本发明属于免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条。
背景技术
降钙素原(Procalcitonin，PCT)是由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞)表达的一类无激素活性的降钙素前肽物质。当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高。研究表明：PCT可能参与集体众多的生化过程，包括胚胎发育、细胞分化、炎症免疫应答、细胞凋亡、脂质代谢、肿瘤的发生发展等。PCT是诊断和监测细菌炎症疾病感染的一个参数。PCT作为一个急性诊断的参数的应用：(1)预示并鉴别诊断细菌性和非细菌性感染和炎症；(2)监测有感染危险的患者(如外科术后和器官移植后免疫抑制期，多处创伤后)以及需要重症监护患者，用来探测细菌感染的全身影响或检测脓毒性并发症；(3)评价严重炎症性疾病临床进程及预后，如腹膜炎、脓毒症、SIRS和MODS。目前，检测PCT的实验室方法有很多，不仅可以定性，也可以定量评测，包括放射免疫学分析法、化学发光法、胶体金比色法等方法，其中胶体金比色法检测速度快、受限小，便于基层快检与应用推广。
目前有大量商品化的降钙素原检测试剂盒或者试纸条，依然存在检出限问题，灵敏度不高，检测时间长等缺陷。
发明内容
本发明旨在开发一种降钙素原PCT胶体金法免疫层析定量测量试纸条，以实现快速定量检测降钙素原PCT，检测灵敏度为0.01ng/ml，检出限更低，更为精确，15min快速读数。
本发明的技术方案为：
一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，所述试纸条结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，硝酸纤维素膜(NC膜)上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体抗体M7413作为检测线；所述金标垫喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。
所述试纸条的检测线性范围为0.01ng/ml～600ng/ml。
本发明的试纸条的灵敏度高，主要原因是我们在现有多个配对批次中筛选出性能最优的配对组合如实施例3与实施例4所示。
所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在PVC底板上，固定贴合；
(2)将降钙素原单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体采用划膜机划在NC膜上固定，置于37℃的烘箱中烘干2h备用；
(3)标记金过程：取15ml金水，加入适量的K2CO3调节金水pH8.5-10.0，加入降钙素原PCT单克隆抗体M7413进行标记25～40min，之后再加入10％质量分数的BSA进行封闭25～40min，置于离心机8000～10000rmp离心25～40min，取出后去掉上清液，吸出标记好降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；加入80-100ul的PCT金标稀释液，测量OD，计算后并采用喷金仪喷在提前准备好的金标垫上，放烘箱37℃烘干1-2h备用；
(4)将吸水垫、喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金的金标垫与样品垫依次组成一起，再用胶带将样品垫与金标垫粘起来，压实，剪裁为合适大小密封保存。
步骤(3)中所述金水为氯金酸与柠檬酸三钠反应制备得到。所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
步骤2)中降钙素原单克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。
步骤2)中羊抗鼠IgG多克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。
步骤3)中调节金水pH为9.4。
步骤4)中剪裁为3mm*80mm。
降钙素原PCT单克隆抗体M7413的获取方法：培养、筛选细胞株，然后打到小鼠体内培养诱生，产生相应的腹水，进行纯化，测序得序列如SEQ ID No.1所示。
所述的降钙素原PCT单克隆抗体M7413在定量检测PCT中的应用。
检测原理：双抗体夹心法；检测时间为15min读数，检测线性范围为0.01ng/ml～600ng/ml。降钙素原PCT胶体金法免疫层析定量测量试纸条具体结构如图1所示。
有益效果
本项发明专利一种降钙素原PCT胶体金法免疫层析定量测量试纸条，其优点在于：(1)制作简单，体积小，成本较低，可批量化生产；(2)读数时间短，15min便可读数，完成检测，适用于临床快速诊断与现场的快检场合；(3)易于保存，只需放入含干燥剂的铝箔袋便可长时间保存，有利于基层医疗单位使用与推广。
附图说明
图1降钙素原PCT胶体金法免疫层析定量测量试纸条，其中：1-样品垫，2-硝酸纤维素膜(NC膜)，3-吸水纸，4-质控线(羊抗鼠IgG)，5-检测线(降钙素原单克隆抗体)，6-PVC底板，7-试纸条；
图2不同批次的灵敏度趋势；
图3不同OD值试纸条灵敏度；
图4不同OD值试纸条去本底低端灵敏度；
图5不同批次的低端(0～2.5ng/ml)趋势；
图6不同OD值试纸条低端线性相关度；
图7不同批次的低端灵敏度线性相关度。
具体实施方式
实施例1
一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫。样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，其中硝酸纤维素膜(NC膜)上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体抗体M7413作为检测线。
试纸条制作过程：
(1)将硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在PVC底板上，固定贴合；
(2)将降钙素原单克隆抗体M7413和羊抗鼠IgG多克隆抗体采用划膜机划在NC膜上固定，然后置于37℃的烘箱中烘干2h备用；抗体的固定量是1.0mg/ml；
(3)标记金过程为：取15ml金水，加入适量的K2CO3调节金水pH为9.4，加入降钙素原PCT单克隆抗体M7413 10ug/ml进行标记30min，之后再加入10％质量分数的BSA进行封闭30min，置于离心机10000rmp离心30min，取出后去掉上清液，吸出标记好降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金。加入100ul的PCT金标稀释液，测量OD，换算成OD30后并采用喷金仪喷在提前准备好的金标垫上，放烘箱37℃烘干2h备用。综合灵敏度和线性相关性(最好)曲线免疫金为OD27-30时较好。
(4)将大规格的吸水垫裁剪成宽度为3.5cm，长为30cm的小规格吸水垫备用，密封保存；
(5)将吸水垫、喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金的金标垫与样品垫依次组成一起，再用胶带将样品垫与金标垫粘起来，压实。
采用切割机将组装好的试纸条大卡切割为宽度为3mm宽的试纸条，这样新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条便制作完成，可以开始检测使用。试纸条日常保存在装有干燥机的铝箔袋密封保存。
准确性：抗原每个浓度梯度下重复测量三根试纸条，并采用检测仪器定量读数，并取三次读数结果的平均值，重复测量保证数据结果的准确性与可靠性。低端灵敏度与线性度，每个抗原浓度检测三次后取平均值。
检测条件：将试纸条置于台面上，加入65μl含抗原的样本，15分钟用仪器读数。
结果见图2-4所示：
图2.PCT免疫层析试纸条灵敏度趋势，表示PCT抗原含量为0～25ng/ml时整体信号值趋势，即是检测范围内的整体灵敏度趋势；图3.PCT免疫层析试纸条低端灵敏度趋势，表示PCT抗原含量为0～2.5ng/ml(低端浓度范围)灵敏度趋势；图4PCT免疫层析试纸条低端线性度，检测线性范围为0.01ng/ml～600ng/ml，表示我司原料PCT抗体的线性度为95.6％。检测灵敏度为0.01ng/ml。
实施例3不同批次的灵敏度
不同批次区别因素：不同批次试纸条的制备方法一样；影响较大工艺条件是免疫金用量，不同免疫金用量制备的试纸条的灵敏度以及线性相关度不同，OD27-30灵敏度与线性相关度最佳。
实施例4不同OD值对试纸条灵敏度的影响
试纸条制作过程：
(1)将硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在PVC底板上，固定贴合；
(3)将降钙素原单克隆抗体M7413和羊抗鼠IgG多克隆抗体采用划膜机划在NC膜上固定，然后置于37℃的烘箱中烘干2h备用；抗体的固定量是1.0mg/ml；
(3)标记金过程为：取15ml金水，加入适量的K2CO3调节金水pH为9.4，加入降钙素原PCT单克隆抗体M7413 10ug/ml进行标记30min，之后再加入10％质量分数的BSA进行封闭30min，置于离心机10000rmp离心30min，取出后去掉上清液，吸出标记好降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金。加入100ul的PCT金标稀释液，测量OD，换算成OD30后并采用喷金仪喷在提前准备好的金标垫上，放烘箱37℃烘干2h备用。OD值不同表示免疫金用量不同；OD值与标记过程操作有关；通过控制免疫金用量来控制OD值的不同范围，OD30与OD27是免疫金用量的浓度；检测范围内的整体灵敏度趋势，灵敏度越高说明产品活性越好；低端线性相关度与线性度越高，产品的性能越好。
不同免疫金用量的灵敏度以及线性相关度不同，OD27-30灵敏度与线性相关度最佳。如图3所示。
Claims (9)
1.一种新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，所述试纸条结构组成包括：PVC底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫；样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜(NC膜)与吸水垫依次按顺序粘贴固定在PVC底板上，其特征在于，硝酸纤维素膜（NC膜）上固定划膜羊抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线，降钙素原单克隆抗体M7413作为检测线；所述金标垫喷有降钙素原单克隆抗体M7413的标记金；所述抗体M7413的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条的检测线性范围为0.01ng/ml~600ng/ml。
3.根据权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条，其特征在于，所述试纸条中羊抗鼠IgG多克隆抗体的含量0.7-1.0mg/ml，降钙素原单克隆抗体M7413的含量0.5-1.2mg/ml。
4.权利要求1所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）将硝酸纤维素膜(NC膜)粘贴在PVC底板上，固定贴合；
（2）将降钙素原单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体采用划膜机划在NC膜上固定，置于37℃的烘箱中烘干2h备用；
（3）标记金过程：取15ml金水，加入适量的K2CO3调节金水pH 8.5-10.0，加入降钙素原PCT单克隆抗体M7413进行标记25~40min，之后再加入10%质量分数的BSA进行封闭25~40min，置于离心机8000~10000rmp离心25~40min，取出后去掉上清液，吸出标记好降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金；加入80-100ul的PCT金标稀释液，测量OD，计算后并采用喷金仪喷在提前准备好的金标垫上，放烘箱37℃烘干1-2h备用；
（4）将吸水垫、喷有降钙素原PCT单克隆抗体M7413的标记金的金标垫与样品垫依次组成一起，再用胶带将样品垫与金标垫粘起来，压实，剪裁为合适大小密封保存。
5.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述金水为氯金酸与柠檬酸三钠反应制备得到。
6.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤2）中降钙素原单克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。
7.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤2）中羊抗鼠IgG多克隆抗体在NC膜上固定量为1.0mg/ml。
8.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤3）中调节金水pH为9.4。
9.根据权利要求4所述的新型胶体金法定量检测降钙素原PCT免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，步骤4）中剪裁为3mm*80mm。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617230A (zh) * | 2007-02-28 | 2009-12-30 | B.R.A.H.M.S股份公司 | 用于诊断目的的选择性测定降钙素原1-116的方法、以及实施该方法的抗体和试剂盒 |
| CN202794178U (zh) * | 2012-08-07 | 2013-03-13 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 降钙素原快速定量免疫层析检测试剂盒 |
| CN103454425A (zh) * | 2013-08-24 | 2013-12-18 | 管义东 | 一种pct的检测试剂条及其制备方法 |
| CN104090109A (zh) * | 2014-07-25 | 2014-10-08 | 胡晓武 | 快速检测人血降钙素原胶体金免疫层析试纸及其检测方法 |
| RU169868U1 (ru) * | 2016-05-04 | 2017-04-04 | Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Производственное Объединение "Биотест" (Ооо Нпо "Биотест") | Тест-система для иммунохроматографического определения прокальцитонина в образцах цельной крови, сыворотке или плазме с целью экспресс-диагностики сепсиса |
| CN107490683A (zh) * | 2016-06-09 | 2017-12-19 | 常州博闻迪医药科技有限公司 | 一种唾液降钙素原胶体金检测方法 |
| CN108593935A (zh) * | 2018-05-08 | 2018-09-28 | 湖南汉康生物医药有限公司 | 一种炎症快速检测胶体金试纸条 |
| CN112305230A (zh) * | 2020-10-09 | 2021-02-02 | 桂林理工大学 | 一种定量检测降钙素原的免疫层析试纸条及其定量检测方法 |
| WO2022205774A1 (zh) * | 2021-04-02 | 2022-10-06 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种降钙素原的检测试剂盒及其制备方法 |
-
2022
- 2022-12-26 CN CN202211675641.8A patent/CN115980341A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101617230A (zh) * | 2007-02-28 | 2009-12-30 | B.R.A.H.M.S股份公司 | 用于诊断目的的选择性测定降钙素原1-116的方法、以及实施该方法的抗体和试剂盒 |
| CN202794178U (zh) * | 2012-08-07 | 2013-03-13 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 降钙素原快速定量免疫层析检测试剂盒 |
| CN103454425A (zh) * | 2013-08-24 | 2013-12-18 | 管义东 | 一种pct的检测试剂条及其制备方法 |
| CN104090109A (zh) * | 2014-07-25 | 2014-10-08 | 胡晓武 | 快速检测人血降钙素原胶体金免疫层析试纸及其检测方法 |
| RU169868U1 (ru) * | 2016-05-04 | 2017-04-04 | Общество С Ограниченной Ответственностью Научно-Производственное Объединение "Биотест" (Ооо Нпо "Биотест") | Тест-система для иммунохроматографического определения прокальцитонина в образцах цельной крови, сыворотке или плазме с целью экспресс-диагностики сепсиса |
| CN107490683A (zh) * | 2016-06-09 | 2017-12-19 | 常州博闻迪医药科技有限公司 | 一种唾液降钙素原胶体金检测方法 |
| CN108593935A (zh) * | 2018-05-08 | 2018-09-28 | 湖南汉康生物医药有限公司 | 一种炎症快速检测胶体金试纸条 |
| CN112305230A (zh) * | 2020-10-09 | 2021-02-02 | 桂林理工大学 | 一种定量检测降钙素原的免疫层析试纸条及其定量检测方法 |
| WO2022205774A1 (zh) * | 2021-04-02 | 2022-10-06 | 三诺生物传感股份有限公司 | 一种降钙素原的检测试剂盒及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| "GenBank Accession No. CAA24538", Retrieved from the Internet <URL:www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/CAA24538.1> * |
| M. R. EDBROOKE等: "Expression of the human calcitonin/CGRP gene in lung and thyroid carcinoma", THE EMBO JOURNAL, vol. 4, no. 3, 31 December 1985 (1985-12-31), pages 715 - 724, XP008003708 * |
| SUSAN G. AMARA等: "Alternative RNA processing in calcitonin gene experssion generates mRNAs encoding different polypeptide products", NATURE, vol. 298, 15 July 1982 (1982-07-15), pages 240 - 244 * |
| 李树英 等: "免疫学检验室间质评与室内质控", 北京医科大学 中国协和医科大学联合出版社, pages: 160 - 161 * |
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