CN113740543A - 一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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- G01N33/723—Glycosylated haemoglobin
Abstract
本发明公开了一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒及其制备方法，其特征在于：试剂盒包括底板、以及依次设在所述底板上样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，所述结合垫上包被有时间分辨荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；NC膜上设有T1检测区、T2检测区和质控区；T1检测区包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体，T2检测区包被有血红蛋白Hb2单克隆抗体；质控区包被兔抗鼠IgG抗体；在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割检测试纸，封装即得试剂盒；本发明的试剂盒只需要少量的血清样本，即可在短时间内实现定量检测糖化血红蛋白的含量，极大提高了筛查的速度，具有灵敏度高、操作简单、成本低、同时检测时间短；易于大规模生产等优点。
Description
技术领域
本发明涉及糖化血红蛋白检测技术领域，具体涉及一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒及其制备方法。
背景技术
糖化血红蛋白（HbA1C）的测定方法多种多样，总体来说可分为两大类：一类是基于HbA1C和Hb的电荷不同，如离子交换层析法、电泳法；另一类是基于Hb上糖化基团的结构特点，如亲和层析法、免疫法和酶法等；上述的几种方法，要么试剂、仪器成本高，要么操作复杂、要么准确度低，稳定性差，且均不适合社区及基层医院。
发明内容
本发明提出一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒及其制备方法，只需要微量的全血活末梢血样本，即可快速实现定量检测糖化血红蛋白的含量，极大提高了筛查的速度，具有供一种灵敏度高、操作简单、成本低、同时检测时间短。
为了实现上述发明目的，本发明的技术方案是这样实现的：一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括底板、以及依次设在所述底板上样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，所述结合垫上包被有时间分辨荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；优选的，在NC膜下缘于样品垫上方1～2mm处包被有荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；
NC膜上设有T1检测区、T2检测区和质控区；T1检测区包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体，T2检测区包被有血红蛋白Hb2单克隆抗体；质控区包被兔抗鼠IgG抗体；
在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割成宽度为3.5mm、长度为6.0cm检测试纸，封装即得试剂盒。
本发明还提供了上述一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒制备方法，包括以下步骤：
a、结合垫的制备：选用直径为50nm的荧光微球，将糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体标记到荧光微球上；将制备好的时间分辨荧光微球标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体按照1：1比例混合使用定量喷液装置喷涂于处理过的结合垫上；
b、结合垫的处理：用定量喷液装置将结合垫处理液喷涂于结合垫上后50℃烘干2小时；
c、NC膜的制备：使用包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体分别稀释到150mmol/L；兔抗鼠IgG抗体稀释到100mmol/L；使用定量喷液装置将上述抗体喷印到对应的T1检测区、T2检测区和质控区；避光，在42℃烘干12小时，加入干燥剂封存备用；
d、试剂盒的组装：在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割成宽度为3.5mm、长度为6.0cm检测试纸，封装即得试剂盒。
本发明的有益效果为：本发明的试剂盒只需要少量的血清样本，即可在短时间内实现定量检测糖化血红蛋白的含量，极大提高了筛查的速度，具有灵敏度高、操作简单、成本低、同时检测时间短；易于大规模生产。
附图说明
图1为本发明一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒的整体结构示意图；
图中1、底板；2、样品垫；3、结合垫；4、NC膜；5、质控区；6、棉浆板。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括底板、以及依次设在所述底板上样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，所述结合垫上包被有时间分辨荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；优选的，在NC膜下缘于样品垫上方1～2mm处包被有荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；
NC膜上设有T1检测区、T2检测区和质控区；T1检测区包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体，T2检测区包被有血红蛋白Hb2单克隆抗体；质控区包被兔抗鼠IgG抗体；
在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割成宽度为3.5mm、长度为6.0cm检测试纸，封装即得试剂盒。
【实施例1】
如图1所示，使用时，将80μL血清样样品滴入试剂盒样品垫上，进行免疫层析反应，并在荧光检测仪下进行检测读数。
反应原理：测试时，样本滴入检测试试剂盒后，其中，血红蛋白Hb1单克隆抗体能够捕获样品中的糖化血红蛋白与血红蛋白抗原，包被的糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体只与样品中的糖化血红蛋白抗原特异性结合，形成血红蛋白 Hb1单克隆抗体-糖化血红蛋白抗原-血红蛋白HbA1c单克隆抗体的三明治结构；并在包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体区域形成荧光强度；
包被的糖化血红蛋白Hb2单克隆抗体只与样品中的血红蛋白抗原特异性结合，样本中血红蛋白抗原跟荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体及检测区包被的血红蛋白Hb2单克隆抗体特异结合，形成血红蛋白单克隆抗体Hb1-血红蛋白抗原-血红蛋白Hb2单克隆抗体的三明治结构，并在包被糖化血红蛋白Hb2单克隆抗体区域形成荧光强度；
分别检测T1的荧光强度,T2的荧光强度，
经计算即可获得样本中糖化血红蛋白HbA1c和血红蛋白Hb的浓度，进而得到全血中的糖化血红蛋白比例。
【实施例2】
一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒制备方法，包括以下步骤：
a、结合垫的制备：选用直径为50nm的荧光微球，将糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体标记到荧光微球上；将制备好的时间分辨荧光微球标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体按照1：1比例混合使用定量喷液装置喷涂于处理过的结合垫上；
b、结合垫的处理：用定量喷液装置将结合垫处理液喷涂于结合垫上后50℃烘干2小时；
c、NC膜的制备：使用包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体分别稀释到150mmol/L；兔抗鼠IgG抗体稀释到100mmol/L；使用定量喷液装置将上述抗体喷印到对应的T1检测区、T2检测区和质控区；避光，在42℃烘干12小时，加入干燥剂封存备用；
d、试剂盒的组装：在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割成宽度为3.5mm、长度为6.0cm检测试纸，封装即得试剂盒。
本发明的试剂盒只需要微量的全血活末梢血样本，即可在短时间内实现定量检测糖化血红蛋白的含量，极大提高了筛查的速度，具有灵敏度高、特异性好和操作简便的优点；制备方法简单，易于大规模生产。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范。
Claims (3)
1.一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括底板（1）、以及依次设在所述底板（1）上样品垫（2）、结合垫（3）、NC膜（4）和棉浆板（6），所述结合垫上包被有时间分辨荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体；NC膜（4）上设有T1检测区、T2检测区和质控区（5）；T1检测区包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体，T2检测区包被有血红蛋白Hb2单克隆抗体；质控区（5）包被兔抗鼠IgG抗体；在底板（1）上依次粘贴样品垫（2）、结合垫（3）、NC膜（4）和棉浆板（6），切割成检测试纸，封装即得试剂盒。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒,其特征在于：在NC膜（4）下缘于样品垫（2）上方1～2mm处包被有荧光标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体。
3.根据权利要求1-2任一项所述的一种快速检测糖化血红蛋白比例的试剂盒制备方法,其特征在于：包括以下步骤：
a、结合垫的制备：选用直径为50nm的荧光微球，将糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体标记到荧光微球上；将制备好的时间分辨荧光微球标记的血红蛋白Hb1单克隆抗体按照1：1比例混合使用定量喷液装置喷涂于处理过的结合垫上；
b、结合垫的处理：用定量喷液装置将结合垫处理液喷涂于结合垫上后50℃烘干2小时；
c、NC膜的制备：使用包被糖化血红蛋白HbA1c单克隆抗体、血红蛋白Hb2单克隆抗体分别稀释到150mmol/L；兔抗鼠IgG抗体稀释到100mmol/L；使用定量喷液装置将上述抗体喷印到对应的T1检测区、T2检测区和质控区；避光，在42℃烘干12小时，加入干燥剂封存备用；
d、试剂盒的组装：在底板上依次粘贴样品垫、结合垫、NC膜和棉浆板，切割成宽度为3.5mm、长度为6.0cm检测试纸，封装即得试剂盒。
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