CN115976196A

CN115976196A - ErbB3作为肺动脉高压生物标志物和治疗靶点的应用

Info

Publication number: CN115976196A
Application number: CN202211622353.6A
Authority: CN
Inventors: 聂晓伟; 卞劲松; 谈建新; 陈员; 张俊庭
Original assignee: Shenzhen Peoples Hospital
Current assignee: Shenzhen Peoples Hospital
Priority date: 2022-12-16
Filing date: 2022-12-16
Publication date: 2023-04-18

Abstract

本发明公开了ErbB3作为肺动脉高压生物标志物和治疗靶点的应用。具体地公开了生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质在肺动脉高压诊断或制备用于肺动脉高压诊断的产品以及在制备预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压的药物中的应用。实验表明，敲除ErbB3基因，抑制其表达，可明显抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖，显著改善低氧诱导的PH。本发明进一步采用siRNA和单克隆抗体药物Seribantumab作为ErbB3抑制剂验证了其对肺动脉高压具有明显的预防及治疗作用。本发明用于诊断或辅助诊断肺动脉高压的生物标志物ErbB3和ErbB3抑制剂的开发对于肺动脉高压的预防和治疗，具有重要的临床应用价值。

Description

ErbB3作为肺动脉高压生物标志物和治疗靶点的应用

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体涉及ErbB3作为肺动脉高压生物标志物和治疗靶点的应用。

背景技术

肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)是指肺动脉压力升高超过一定界值的一种血流动力学和病理生理状态，其主要特征为肺血管阻力增加和肺血管压力持续升高，最终可导致右心衰竭而死亡。PH是一类恶性程度很高且确诊率很低的血管疾病,被称为“心血管病中的癌症”。有统计表明，我国由于肺动脉高压引起的右心衰竭保守估计有数百万人，该病确诊的平均年龄仅为36岁，如果不及时治疗，患者的生存时间平均只有2.8年，仅比肝癌预后好，比其他恶性肿瘤预后都差。因此，该病也被医学界称为是“比很多恶性肿瘤还恶性的疾病”，“至今仍困扰世界医学界的疾病”。尽早发现、及时治疗对于改善PH患者预后，提高临床治疗效果至关重要。然而目前临床尚没有可靠的肺动脉高压生物标志物。因此，研究和开发高敏感性和特异性的生物标志物及其检测方法来诊断或辅助诊断肺动脉高压，是临床上亟待解决的关键问题之一，将有利于肺动脉高压的预防和治疗，具有重要的临床应用价值。

肺动脉高压没有特效药物，现有肺动脉高压的治疗策略(前列环素类药物，内皮素受体拮抗剂及磷酸二酯酶-5抑制剂等)多数以改善症状及部分改善预后为主，并不能逆转疾病。随着分子生物学及肺动脉高压病因学的研究进展，基因治疗逐渐成为该疾病最有潜力的治疗方法。因此，寻找肺动脉高压新靶点，开发逆转肺血管重构、抗增殖、修复内皮功能的安全有效的治疗药物对于肺动脉高压治疗具有重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于肺动脉高压诊断、辅助诊断和/或筛查的生物标志物，和/或，提供一种肺动脉高压治疗靶点。所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

为了实现上述目的，本发明首先提供了生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质的下述任一种应用：

A1)在肺动脉高压诊断或制备用于肺动脉高压诊断的产品中的应用；

A2)在肺动脉高压辅助诊断或制备用于肺动脉高压辅助诊断的产品中的应用；

A3)在肺动脉高压筛查或制备用于肺动脉高压筛查的产品中的应用；

A4)在制备预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压的药物中的应用；

A5)在制备预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压的药物中的应用；

A6)在抑制肺动脉内皮细胞增殖或制备抑制肺动脉内皮细胞增殖的试剂中的应用；

所述生物标志物为ErbB3蛋白。

进一步地，所述ErbB3蛋白在肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)患者中的水平(含量)极显著高于健康人。所述ErbB3蛋白可以作为生物标志物用于肺动脉高压的诊断、辅助诊断或筛查。

进一步地，所述肺动脉高压(PH)可为低氧性肺动脉高压。

所述ErbB3为酪氨酸激酶受体家族成员，又称为人表皮生长因子受体3(HER3)，是膜结合蛋白。

进一步地，所述ErbB3蛋白可为下述任一种：

F1)氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；

F2)将SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经过氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与F1)所示的蛋白质具有80％以上的同一性且具有相同功能的蛋白质；

F3)在F1)或F2)的N端和/或C端连接标签得到的具有相同功能的融合蛋白质。

所述ErbB3蛋白的基因(ErbB3基因)的核苷酸序列为GenBank Accession No.NC_000012.12的第56080108-56103505位(Update Date2022-10-30)。

所述ErbB3蛋白及ErbB3基因可为人源的。

所述标签包括但不限于：GST(谷胱甘肽巯基转移酶)标签蛋白、His6标签蛋白(His-tag)、MBP(麦芽糖结合蛋白)标签蛋白、Flag标签蛋白、SUMO标签蛋白、HA标签蛋白、Myc标签蛋白、eGFP(增强型绿色荧光蛋白)、eCFP(增强型青色荧光蛋白)、eYFP(增强型黄绿色荧光蛋白)、mCherry(单体红色荧光蛋白)或AviTag标签蛋白。

本文中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如NCBI主页网站的BLAST网页。例如，可在高级BLAST2.1中，通过使用blastp作为程序，将Expect值设置为10，将所有Filter设置为OFF，使用BLOSUM62作为Matrix，将Gap existence cost，Per residue gap cost和Lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索以对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。

本文中，所述80％以上的同一性可为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。

上述应用中，所述检测所述生物标志物的物质可包括通过酶联免疫吸附试验、免疫荧光法、放射免疫测定法、免疫共沉淀法、免疫印迹法、高效液相色谱法、毛细管凝胶电泳法、近红外光谱法、质谱法、免疫化学发光法、胶体金免疫技术、荧光免疫层析技术、表面等离子共振技术、免疫-PCR技术或生物素-亲和素技术检测所述生物标志物的物质。

上述应用中，所述检测所述生物标志物的物质可为用于检测ErbB3蛋白含量(即ErbB3蛋白的浓度)的试剂。

上述应用中，所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂可包括结合ErbB3蛋白的物质。

上述应用中，所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂还可包括ErbB3蛋白。

上述应用中，所述结合ErbB3蛋白的物质可为抗体、多肽、蛋白质或核酸分子。

所述抗体可以是单克隆抗体、多克隆抗体、基因工程抗体，还可以是抗体可变区Fv、单链抗体ScFv、抗原结合片段Fab或Fab’、F(ab’)2、Fab’-SH等抗体片段，以及抗体衍生物等。

上述应用中，所述抗体可为ErbB3蛋白抗体。

进一步地，所述检测可为通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测待测样本中ErbB3蛋白的表达水平。

本发明所述生物标志物可适用于ELISA常规的蛋白检测实验。

本发明还提供了用于肺动脉高压诊断、辅助诊断或筛查的试剂盒，所述试剂盒可包括本文中任一所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂。

进一步地，所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂可为ErbB3蛋白抗体。

进一步地，所述试剂盒的检测样本可为体液样本(如全血、血浆、血清或唾液等)及组织样本等但不限于此。

进一步地，所述试剂盒还可包括ErbB3蛋白作为标准品。

所述试剂盒的各种试剂组分可以存在于分开的容器中，或者可以全部或部分预组合成试剂混合物。

进一步地，所述试剂盒可为蛋白免疫检测试剂盒。

进一步地，所述试剂盒可为ELISA试剂盒、免疫印迹检测试剂盒、免疫层析检测试剂盒、流式细胞分析试剂盒或免疫组化检测试剂盒但不限于此。

本文中，所述产品可为试剂、试剂盒、芯片或试纸。

本发明还提供了所述生物标志物作为靶点的下述任一种应用：

B1)在制备预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压的药物中的应用；

B2)在制备预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压的药物中的应用；

B3)在抑制肺动脉内皮细胞增殖或制备抑制肺动脉内皮细胞增殖的试剂中的应用。

本发明还提供了ErbB3抑制剂的下述任一种应用：

C1)在制备预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压的药物中的应用；

C2)在制备预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压的药物中的应用；

C3)在抑制肺动脉内皮细胞增殖或制备抑制肺动脉内皮细胞增殖的试剂中的应用；

所述ErbB3抑制剂可为抑制ErbB3基因表达、沉默或敲除ErbB3基因的物质，和/或，降低ErbB3蛋白含量和/或活性的物质。

进一步地，所述抑制ErbB3基因表达、沉默或敲除ErbB3基因可通过本领域技术人员所熟知的基因突变、基因沉默、基因敲除、基因编辑或基因敲减技术实现。如利用RNA干扰(RNAi)技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达；利用基因编辑技术的工具可以是CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶(ZFNs)或转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术等，但不限于此。

利用基因敲减(基因敲低，gene knock-down)技术从转录后水平或翻译水平使ErbB3基因表达失活或基因沉默的技术为本领域技术人员所熟知。所述基因敲减技术包括RNA干扰、Morpholino干扰、反义核酸、核酶或显性负抑制突变但不限于此。

利用病毒(如慢病毒、腺相关病毒)表达的shRNA或siRNA抑制ErbB3基因的表达，进行ErbB3基因的沉默是本领域技术人员所熟知的。

所述ErbB3抑制剂可为核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、基因编辑载体、慢病毒或腺相关病毒中的一种或多种。

所述核酸分子可为microRNA、siRNA、shRNA和/或反义寡核苷酸。进一步地，所述microRNA、siRNA、shRNA和/或反义寡核苷酸(如反义RNA)用于抑制ErbB3基因的表达。

所述抗体可为抗ErbB3蛋白的抗体或其功能性片段。

所述siRNA靶向干扰ErbB3基因的表达。

上述应用中，所述ErbB3抑制剂可为下述任一种：

D1)用于ErbB3基因沉默的siRNA；

D2)ErbB3蛋白抗体；

D3)siRNA，所述siRNA的正义链的核苷酸序列可为SEQ ID No.2，反义链的核苷酸序列可为SEQ ID No.3；

D4)ErbB3单克隆抗体药物Seribantumab(瑟瑞妥单抗，MM-121)。

本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物可包括所述ErbB3抑制剂，所述药物组合物具有下述至少一种用途：

E1)预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压；

E2)预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压；

E3)抑制肺动脉内皮细胞增殖。

进一步地，所述药物组合物还可包括一种或者是多种药学上可接受的载体。

所述药学上可接受的载体可为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂。

本文所述肺动脉高压(PH)可为低氧性肺动脉高压。

本文所述抑制肺动脉内皮细胞增殖可为抑制低氧引起(诱导)的肺动脉内皮细胞增殖。

上述应用和方法的目的可以是疾病诊断目的、疾病预后目的和/或疾病治疗目的，它们的目的也可以是非疾病诊断目的、非疾病预后目的和非疾病治疗目的；它们的直接目的可以是获取疾病诊断结果、疾病预后结果和/或疾病治疗结果的中间结果的信息，它们的直接目的可以是非疾病诊断目的、非疾病预后目的和/或非疾病治疗目的。

本发明人经过广泛而深入的研究，意外地发现ErbB3蛋白在肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)患者中的水平(含量)极显著高于健康人，并以此开发了用于肺动脉高压的诊断、辅助诊断或筛查的生物标志物，进一步以ErbB3为靶点研究ErbB3基因及其编码蛋白在预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压中的应用。本发明通过ErbB3基因敲除小鼠验证了ErbB3基因敲除可以明显预防和改善低氧诱导的PH。本发明还利用siRNA技术，设计了靶向ErbB3基因的siRNA作为ErbB3抑制剂，进一步验证了敲除ErbB3基因，抑制其表达，可明显抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖(而肺动脉内皮细胞增殖是导致肺动脉高压肺血管重构的重要因素)，显著改善PH。进一步利用单克隆抗体药物Seribantumab(MM-121)作为ErbB3抑制剂验证其在预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压中的应用，结果表明ErbB3蛋白抗体作为ErbB3抑制剂对肺动脉高压具有明显的预防及治疗作用。

综上，本发明用于诊断或辅助诊断肺动脉高压的生物标志物ErbB3和ErbB3抑制剂的开发对于肺动脉高压的预防和治疗，具有重要的临床应用价值。

附图说明

图1为ErbB3在低氧肺动脉高压病人肺组织中异常高表达。其中，A：低氧性肺动脉高压病人肺组织中ErbB3蛋白表达；B：肺动脉高压病人肺组织中ErbB3 mRNA表达。

图2为肺组织中ErbB3的表达同PH进展正相关；血清样本中ErbB3表达同PH严重程度正相关。其中，A-B：ELISA及Kaplan-Meier曲线显示肺动脉高压病人肺组织中ErbB3表达水平同PH进展正相关；C-D：肺动脉高压病人血清中ErbB3表达水平显著升高，肺动脉压力相关性分析显示ErbB3表达水平与PH严重程度正相关。

图3为ErbB3基因敲除明显预防低氧引起的小鼠PH。其中，A：肺组织H&E染色及α-SMA免疫荧光染色结果显示：低氧ErbB3基因敲除小鼠肺血管重构情况相比于低氧野生型小鼠明显减轻；B-C：右心室收缩压及右心肥厚指数检测发现低氧ErbB3基因敲除小鼠右心室收缩压及右心肥厚指数相比于低氧野生型小鼠明显降低。

图4为siRNA干扰ErbB3抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖。其中，A-B：CCK8实验检测敲低ErbB3对肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖的影响；C：EdU免疫荧光化学检测结果显示：敲低ErbB3抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖。

图5为ErbB3单克隆抗体MM-121对低氧及Sugen/低氧PH大鼠肺动脉高压的预防和治疗作用。其中，A：MM-121明显抑制由低氧引起的大鼠肺组织中ErbB3蛋白水平的升高；B：MM-121防止低氧引起的大鼠肺小血管肌化；C：MM-121明显降低由低氧引起的大鼠右心室收缩压及右心肥厚指数的升高；D：MM-121治疗对Sugen/低氧大鼠右心室收缩压及右心肥厚指数的改善作用。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中低氧诱导的小鼠和大鼠PH模型的构建方法如下：选取180～220g(约6～8周龄)Sprague-Dawley(SD)大鼠或18～22g(约4～5周龄)野生型及ErbB3基因敲除小鼠随机分组，置于10％氧气持续低氧饲养4周，建立PH模型。

Sugen5416/低氧诱导的小鼠和大鼠PH模型的构建方法如下：一次性腹腔注射20mg/kg Sugen5416后于低氧状态饲养3周，建立PH模型。

实施例1、肺动脉高压生物标志物的鉴定

临床样本采集：低氧PH患者(即低氧性肺动脉高压患者)的肺组织及血液学样本(简称PH样本)和匹配的健康对照样本来自南京医科大学附属无锡人民医院(中国无锡)。健康对照组收集自健康供体肺组织及血液样本。

本实施例对131例低氧PH患者(实验组)和62例健康人(对照组)的肺组织及125例PH患者和72例健康人血清学样本进行了如下表达检测分析。

1、Westernblot实验

肺组织蛋白提取，SDS凝胶电泳，转膜，封闭，免疫杂交，显影。

2、Real-timePCR检测

肺组织RNA提取，逆转录，定量分析。

3、免疫组织化学实验

肺组织进行PBS冲洗，4％多聚甲醛固定24小时后，石蜡包埋，切片，ErbB3抗体染色。

4、ELISA检测

肺组织于预冷PBS中清洗，称重，移入玻璃匀浆器，按1g样本加入5ml PBS比例加入预冷PBS，于冰上充分研磨，匀浆液超声破碎，5000×g离心5分钟，取上清进行ELISA试剂盒(Thermo Scientific公司产品，货号EHERBB3)检测；血清学样本直接取上清检测。

检测分析结果表明：与对照组相比，PH样本中的ErbB3表达上调(图1)。Westernblot(图1中A，p<0.00001)和Real-time PCR(图1中B，p<0.0001)分析证实，与对照组相比，PH患者的肺组织、肺动脉中ErbB3蛋白及基因表达水平明显上调。进一步免疫组化结果显示，ErbB3在PH患者远端肺动脉增厚的内膜高表达。然后，我们比较了从PH患者分离的三种主要人血管细胞的ErbB3水平。我们进一步分析了ErbB3在131个PH肺组织和62个对照肺组织中的表达情况(图2中A)。Kaplan-Meier曲线显示，较高的ErbB3水平预示着PH患者的不良预后(图2中B)。另外，血清样本中ErbB3表达同PH患者肺动脉压力呈明显正相关(图2中C和D)。上述结果表明，ErbB3是促进PH发生发展的潜在致病蛋白。

综上结果表明ErbB3蛋白可以作为生物标志物用于肺动脉高压的诊断。

ErbB3蛋白的氨基酸序列为

>AAH02706.1 ERBB3 protein[Homo sapiens]

MRANDALQVLGLLFSLARGSEVGNSQAVCPGTLNGLSVTGDAENQYQTLYKLYERCEVVMGNLEIVLTGHNADLSFLQWIREVTGYVLVAMNEFSTLPLPNLRVVRGTQVYDGKFAIFVMLNYNTNSSHALRQLRLTQLTEILSGGVYIEKNDKLCHMDTIDWRDIVRDRDAEIVVKDNGRSCPPCHEVCKGRCWGPGSEDCQTLTKTICAPQCNGHCFGPNPNQCCHDECAGGCSGPQDTDCFACRHFNDSGACVPRCPQPLVYNKLTFQLEPNPHTKYQYGGVCVASCPHNFVVDQTSCVRACPPDKMEVDKNGLKMCEPCGGLCPKAF(SEQ ID No.1)。

实施例2、肺动脉高压生物标志物ErbB3的检测方法

1、样本的采集与处理

1-1、样本详细信息和纳入标准

病人组选取临床上50±5岁，平均肺动脉压力在80±15mmHg，对照组来源于年龄、性别与病人组匹配的健康供体肺组织。

1-2、样本的处理

肺组织样本于预冷PBS中清洗，称重，移入玻璃匀浆器，于冰上充分研磨，匀浆液超声破碎，5000×g离心5分钟，取上清。

2、ELISA法检测ErbB3蛋白含量

取肺组织匀浆液上清进行ELISA检测。使用ELISA试剂盒(CUSABIO公司产品，货号CSB-EL007765HU)按照试剂盒说明书进行操作。检测抗体为ErbB3蛋白抗体。

3、结果判定

ErbB3用于肺动脉高压诊断的临界值为7.6435ng/mL。

实施例3、ErbB3蛋白用于肺动脉高压诊断的性能

按照实施例2中所述的方法，验证本发明的生物标志物(ErbB3蛋白)用于诊断肺动脉高压的诊断性能。对131例临床PH病人及62例对照肺组织中ErbB3含量进行检测，同时对125例PH病人及72例正常血清样本中ErbB3含量进行检测，结果表明肺组织中ErbB3的表达同PH进展正相关(p<0.00001)；血清样本中ErbB3表达同PH严重程度正相关(p<0.00001)。证明ErbB3蛋白可以作为肺动脉高压诊断的生物标志物。

实施例4、ErbB3蛋白在改善肺动脉高压和抑制肺动脉内皮细胞增殖中的应用

本实施例通过ErbB3基因敲除小鼠来验证ErbB3蛋白缺乏可改善低氧诱导的PH。具体步骤如下：

1、ErbB3基因敲除可以改善低氧诱导的PH

使用野生型小鼠组作为对照。采用低氧诱导的小鼠PH模型来评价PH的发展。在低氧诱导的PH模型中，6周龄小鼠暴露于低氧(10％O₂)或常氧(21％O₂)，持续4周；在Sugen/低氧模型中，大鼠/小鼠(6-8周龄)，通过单次皮下注射血管内皮生长因子受体拮抗剂(SU5416，20mg/kg)，随后3周低氧(10％O₂)。

为了反映PH的严重程度，我们检测了血流动力学参数，右心室肥厚指数及肺血管重构。首先将小鼠用10％水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉，将1.2F(小鼠)或1.4F(大鼠)压力导管插入右颈静脉，并进入右心室，测量右心室收缩压，并通过多通道生理记录仪(ADinstruments)记录。剥离小鼠心脏，完整去除心房组织，沿室间隔边缘剪下右心室，用滤纸吸干血液，分别称取右心室(right ventricle，RV)、左心室(left ventricle，LV)和室间膈(interventricular septum，S)重量(LV+S)，计算右心室/(左心室+室间隔)(RV/(LV+S))指数。离体肺组织在中性甲醛中固定24h后，石蜡包埋、切片，HE染色及α-Smooth muscleactin(α-SMA)染色观察HPH肺血管重构情况。结果(图3)表明，ErbB3基因敲除可明显预防低氧引起的小鼠PH。

2、ErbB3基因敲除抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖

肺动脉内皮细胞增殖是导致肺动脉高压肺血管重构的重要因素。我们分离肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞，构建并转染ErbB3 siRNA对ErbB3基因进行敲低，48小时后通过CCK8检测细胞活力，EdU染色实验检测细胞增殖。构建的siRNA序列如下：

siRNA正义链：5’-GCAACAUUGAUGGAUUUGUUU-3’(SEQ ID No.2)，

siRNA反义链：5’-ACAAAUCCAUCAAUGUUGCUU-3’(SEQ ID No.3)。

结果表明，使用ErbB3敲除(ErbB3^-/-)小鼠和对照组(ErbB3^+/+)小鼠来评价ErbB3在低氧诱导的PH中的作用。ErbB3^-/-小鼠在生理条件下未出现异常表型变化。相比之下，在低氧4周后，小鼠远端肺动脉中层厚度有显著差异。与这些形态学变化相一致的是，同ErbB3^+/+小鼠相比，ErbB3^-/-在低氧暴露后，小鼠右心室收缩压及右心肥厚指数明显降低，表明ErbB3在低氧诱导肺动脉高压发生发展中起着关键作用。CCK8细胞活力及EdU检测发现，siRNA敲除ErbB3基因可明显抑制肺动脉高压病人肺动脉内皮细胞增殖(图4)。

可见，ErbB3抑制剂(如用于ErbB3基因沉默的siRNA，具体如正义链核苷酸序列为5-’GCAACAUUGAUGGAUUUGUUU-3’(SEQ ID No.2)，反义链核苷酸序列为5-’ACAAAUCCAUCAAUGUUGCUU-3’(SEQ ID No.3)的siRNA)具有预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压和抑制肺动脉内皮细胞增殖的功能。通过siRNA方法下调ErbB3表达可以抑制低氧诱导的肺动脉内皮细胞增殖，显著改善PH。

3、单克隆抗体药物Seribantumab(MM-121)作为ErbB3抑制剂在预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压中的应用

ErbB3抑制剂可为抑制ErbB3基因表达、沉默或敲除ErbB3基因的物质，也可为抑制或降低ErbB3蛋白含量和/或活性的物质。通过ErbB3蛋白抗体如ErbB3单克隆抗体药物Seribantumab(MM-121)对PH大鼠进行治疗，发现其可预防或改善肺动脉高压。具体步骤如下：

1、实验步骤

1)预防模型：建立低氧大鼠PH模型：大鼠(6-8周龄)暴露于低氧(10％O₂)或常氧(21％O₂)，持续4周，周期内给与MM-121(10mg/kg)，腹腔注射，一周两次。分别检测右心室收缩压及右心肥厚指数。

2)治疗模型：建立Sugen/低氧大鼠PH模型：大鼠(6-8周龄)，通过单次皮下注射血管内皮生长因子受体拮抗剂(SU5416，20mg/kg)，随后3周低氧(10％O₂)。模型成功后，给与MM-121(10mg/kg)，腹腔注射，一周两次，持续4周。分别检测右心室收缩压及右心肥厚指数。

2、实验结果

低氧ErbB3单克隆抗体药物MM-121处理组同对照组相比，大鼠右心室收缩压及右心肥厚指数明显减轻；MM-121治疗4周后的Sugen/低氧大鼠右心室收缩压及右心肥厚指数明显低于对照组Sugen/低氧大鼠。

结果如图5所示，ErbB3单克隆抗体MM-121对低氧及Sugen/低氧PH大鼠肺动脉高压的改善作用，表明MM-121抑制ErbB3对肺动脉高压具有明显的预防及治疗作用。

以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims

1.生物标志物和/或检测所述生物标志物的物质的下述任一种应用：

所述生物标志物为ErbB3蛋白。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测所述生物标志物的物质为用于检测ErbB3蛋白含量的试剂。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂包括结合ErbB3蛋白的物质。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述结合ErbB3蛋白的物质为抗体、多肽、蛋白质或核酸分子。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抗体为ErbB3蛋白抗体。

6.用于肺动脉高压诊断、辅助诊断或筛查的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2-5中任一所述用于检测ErbB3蛋白含量的试剂。

7.权利要求1中所述生物标志物作为靶点的下述任一种应用：

8.ErbB3抑制剂的下述任一种应用：

所述ErbB3抑制剂为抑制ErbB3基因表达、沉默或敲除ErbB3基因的物质，和/或，降低ErbB3蛋白含量和/或活性的物质。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述ErbB3抑制剂为下述任一种：

D1)用于ErbB3基因沉默的siRNA；

D2)ErbB3蛋白抗体；

D3)siRNA，所述siRNA的正义链的核苷酸序列为SEQ ID No.2，反义链的核苷酸序列为SEQ ID No.3；

D4)ErbB3单克隆抗体药物Seribantumab。

10.药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求8或9中所述的ErbB3抑制剂，所述药物组合物具有下述至少一种用途：

E1)预防、治疗、缓解或改善肺动脉高压；

E2)预防、治疗、缓解或改善低氧性肺动脉高压；

E3)抑制肺动脉内皮细胞增殖。