CN115947831A - 一种抗hpv 68抗体及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药领域,特别是涉及一种抗HPV 68抗体及其制备方法和用途,所述抗HPV 68抗体具有如下技术特征:<1>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR‑H1;<2>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR‑H2;<3>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR‑H3;<4>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR‑L1;<5>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR‑L2;<6>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR‑L3。所述抗HPV 68抗体与其它16种亚型HPV无交叉反应,检测灵敏度高。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域,特别是涉及一种抗HPV 68抗体及其制备方法和用途。
背景技术
宫颈癌和宫颈癌前病变是威胁全世界妇女健康的一个重要因素。临床学、分子生物学和流行病学调查已经证明人乳头瘤病毒( human papillomavirus,HPV) 是宫颈癌和宫颈非典型增生的主要病因。目前HPV已经发现200多种亚型,根据致病性不同分为高危型包括HPV16、18、31、33、35、39、45等;低危型包括HPV6、11等。HPV 为无包膜的环状双链DNA病毒,其衣壳是由72 个主要衣壳蛋白Ll 蛋白五聚体构成的二十面体结构,1个病毒粒子上含有360 个Ll 蛋白单体。目前中国批准上市的宫颈癌疫苗有3种,包括:葛兰素史克(GSK)公司的HPV 2价疫苗Cervarix(亚型为HPV 16、18),默沙东公司HPV4价疫苗“佳达修®”(GARDASIL®)和9价疫苗GARDASIL® 9(亚型为HPV 6、11、16、18、31、33、45、52、58)。世界卫生组织国际癌症研究署已明确的13种能够导致宫颈癌和高度痛前宫颈上皮内病变的HR-HPV包括HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59和HPV68。其中仅HPV68在IARC致痛物分级中属于2A级,其余12种均属于I类致癌物。由于目前市售疫苗最多为9个亚型,因此越来越多的公司也在不断研发更多价型(如包括HPV68)的HPV疫苗。根据世界卫生组织(WHO)对HPV疫苗质量、安全性及有效性指导原则,以及国家食品药品监督管理局(CFDA)的相关规定,在多价HPV疫苗的研制和生产过程中,需要建立鉴别试验、抗原含量、吸附完全性和体外相对效力测定的方法,这些方法均可采用酶联免疫法(ELISA),因此ELISA法中单克隆抗体具有型别特别性以及较高中和活性对于HPV 疫苗的质量控制来说至关重要。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点,本发明的目的在于提供一种抗HPV 68抗体及其制备方法和用途,用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供一种抗HPV 68抗体,所述抗HPV 68抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述抗HPV 68抗体具有如下技术特征:
<1>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR-H1;
<2>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR-H2;
<3>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3;
<4>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1;
<5>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR-L2;
<6>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
本发明另一方面提供一种分离的多核苷酸,编码所述抗HPV 68抗体的重链可变区和/或轻链可变区或全长氨基酸。
本发明还提供一种核酸构建体,含有所述的分离的多核苷酸。
本发明还提供一种抗体的表达系统,所述表达系统含有所述的核酸构建体或基因组中整合有外源的所述的多核苷酸。
本发明还提供所述的抗HPV 68抗体的制备方法,包括如下步骤:在适合表达所述抗HPV 68抗体的条件下,培养所述的抗体的表达系统,从而表达出所述抗HPV 68抗体,分离出所述抗HPV 68抗体。
本发明另一方面提供一种用于检测HPV 68抗原的试剂盒,包含所述抗HPV 68抗体或其免疫偶联物。
本发明另一方面提供所述抗HPV 68抗体、所述试剂盒在制备肿瘤诊断药物、肿瘤治疗药物、肿瘤预防药物的筛选产品或质控产品中的用途,或在制备诊断或治疗药物中的用途。。
如上所述,本发明的抗HPV 68抗体及其制备方法和用途,具有以下有益效果:本发明的人乳头瘤病毒68型(HPV 68)特异性的单克隆抗体与其它16种亚型HPV无交叉反应,用于HPV疫苗的鉴别试验具有高特异性的优点,具有中和抗体活性,可以准确检测HPV多价疫苗中HPV 68型有中和活性的抗原含量和吸附完全性,具有检测灵敏度高的优点,HPV疫苗质量控制方面将会得到广泛应用。
附图说明
图1显示为本发明的HPV68L1中和活性检验中假病毒对照图。
图2显示为本发明的免疫印迹法测定HPV 68 L1单抗图。
图3显示为抗体的亚型之间的交叉特异性鉴定结果之一。
图4显示为抗体的亚型之间的交叉特异性鉴定结果之一。
图5显示为抗体的亚型之间的交叉特异性鉴定结果之一。
图6显示为细胞上清液中和抗体效价。
图7显示为测定HPV 68 L1体外相对效力筛选单克隆抗体。
图8显示为测定HPV 68 L1体外相对效力筛选单克隆抗体。
图9显示为测定HPV 68 L1体外相对效力筛选单克隆抗体。
图10显示为单克隆抗体的EC50值汇总表(单位:μg/ml)。
图11显示为HPV 68 L1原液抗原体外相对效力测定图。
具体实施方式
本发明提供一种抗HPV 68抗体,所述抗HPV 68抗体包括重链可变区和轻链可变区,所述抗HPV 68抗体具有如下技术特征中的一个或多个;
<1>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR-H1;
<2>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR-H2;
<3>重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3;
<4>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1;
<5>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR-L2;
<6>轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
所述抗HPV 68抗体识别人乳头瘤病毒68型L1蛋白。所述抗HPV 68抗体能够中和HPV 68型病毒。
CDR(互补决定区,complementarity determining region)通常指抗体中在空间结构上可以与抗原决定簇形成互补的区域。抗体中的可变性通常并不均匀地分布在整个抗体的可变区中,单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区通常均具有3 个超变区(hypervariable region,HVR),这些区域在空间结构上通常可以与抗原决定簇形成互补,所以超变区也被称为互补决定区(complementarity determining region,CDR),即重链可变区通常包括三个互补决定区,即CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3,轻链可变区通常包括三个互补决定区,即CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在本发明某些实施方式中,所述抗HPV 68抗体的重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQID No.2所示的CDR-H2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3。
在本发明某些实施方式中,所述抗HPV 68抗体的轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQID No.5所示的CDR-L2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
在本发明某些实施方式中,重链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR-H2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3,轻链可变区的互补决定区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQID No.5所示的CDR-L2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
所述抗HPV 68抗体为抗体片段,和/或单克隆抗体。进一步的,所述单克隆抗体为IgG1抗体。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分,优选包含其抗原结合区或可变区。例如,抗体片段包括单链抗体(scFv)、Fab、Fab'、F(ab')或F(ab')2。
在本发明某些实施方式中,所述抗HPV 68抗体为单链抗体(single chain Fv,scFv)。单链抗体通常可以为包括抗体的VH(重链可变区)和VL(轻链可变区)的多肽链。通常来说,单链抗体还可以包括连接肽(linker),连接肽通常位于VH和VL之间,以使scFv形成能与抗原结合的期望结构。例如,所述抗HPV 68抗体可以包括VH和VL,VH和VL之间可以设有连接肽,所述单链抗HPV 68抗体自N端至C端可以依次包括 VL、连接肽和VH,所述抗HPV 68单链抗体自N端至C端也可以依次包括VH、连接肽和VL。所述连接肽可以是本领域中各种适用于形成scFv的连接肽,例如,所述连接肽可以是G4S3 linker,所述G4S3 linker的选择或设计可以参考文献Michel Sadelain etc,Science Translational Medicine,2013;Carl H.Juneetc, Science Translational Medicine ,2015。
“Fab”片段包括轻链的可变区和恒定区,重链的可变区和第一恒定区(CH1)。一个F(ab’)抗体片段包括一对Fab片段,它们通常通过它们之间的铰链半胱氨酸在羧基末端附近共价连接。
在本发明某些实施方式中,所述抗HPV 68抗体为单克隆抗体,所述单克隆抗体包括恒定区,恒定区可以为天然序列恒定区(例如人天然序列恒定区)或其氨基酸序列变体。
本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质的抗体群体中获得的抗体,即构成该群体的各种抗体是相同的,除了通常以极少量存在的可能的天然存在的突变体。单克隆抗体具有高度特异性,即针对抗原上的单个表位。此外,不同于包含针对不同决定区(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂,每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定区。除了它们的特异性外,单克隆抗体的一个优点是,它们现在可以在合成时不受其他抗体的污染。修饰词“单克隆”表示从基本上同质的抗体群体中获得的抗体的性质,不应解释为需要任何特定的方法来产生抗体。
本文中的单克隆抗体明确地包括“嵌合”抗体,其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类型或亚型的相应序列相同或同源,剩余部分与衍生自另一特定物种或属于另一特定抗体类型或亚型的相应序列相同或同源,以及这些抗体的片段,只要它们表现出所需的生物活性即可。
在本发明某些实施方式中,所述抗HPV 68抗体从杂交瘤细胞株筛选得到,其重链可变区和轻链可变区核苷酸序列分别如SEQ ID No.7 和SEQ ID No.8所示,重链可变区和轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示。
在本发明某些实施方式中,重链可变区和轻链可变区中还可以包括框架区,所述框架区可以位于互补决定区之间,也可以位于互补决定区的两端。在本发明某些具体实施方式中,所述框架区的序列为人源单抗可变区,或为鼠源单抗可变区的框架区序列经过取代、缺失或者添加一个或多个(具体可以是1-50、1-30个、1-20个、1-10个、1-5个、或1-3个)氨基酸而得到的框架区序列,该框架区序列与人源单抗可变区序列的框架区序列可以具有80%、85%、90%、93%、95%、97%、或99%以上的同源性。
本发明另一方面提供一种分离的多核苷酸,编码所述抗HPV 68抗体的重链可变区和/或轻链可变区或全长氨基酸。
本发明还提供一种核酸构建体,含有所述的分离的多核苷酸。
本发明还提供一种抗体的表达系统,所述表达系统含有所述的核酸构建体或基因组中整合有外源的所述的多核苷酸。
本发明还提供所述的抗HPV 68抗体的制备方法,包括如下步骤:在适合表达所述抗HPV 68抗体的条件下,培养所述的抗体的表达系统,从而表达出所述抗HPV 68抗体,纯化分离出所述抗HPV 68抗体。
本发明另一方面提供一种用于检测HPV 68抗原的试剂盒,包含所述抗HPV 68抗体或其免疫偶联物。
所述试剂盒通常以HPV 68抗原作为靶标进行检测。所述试剂盒还可以包括抗HPV68抗体的标记物,所述抗HPV 68抗体的标记物通常可以用于标记抗HPV 68抗体,可选用的标记物的种类包括但不限于荧光标记物、放射性标记物、酶标标记物、化学发光性标记物等中的一种或多种的组合。根据试剂盒的检测原理,所述试剂盒通常还可包含检测所需的一种或多种试剂。此外,所述试剂盒中还可根据需要包括:容器、对照物(阴性或阳性对照)、缓冲剂、助剂等,本领域技术人员可根据具体情况对其进行选择。
在一种实施方式中,所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。
在一种实施方式中,所述试剂盒为双抗夹心酶联免疫试剂盒。在一种实施方式中,所述双抗夹心酶联免疫试剂盒中包被抗体为兔单克隆抗体,一抗为鼠单克隆抗体。
本发明另一方面提供所述抗HPV 68抗体、所述试剂盒在药物筛选、药物质控或制备诊断或治疗药物中的用途。
所述药物可以是以HPV 68抗原为作用靶标,结合或作用于所述HPV 68抗原,从而治疗和/或预防适应症的药物。
在本发明某些实施方式中,所述药物筛选、药物质控中的药物可以是肿瘤治疗药物、肿瘤诊断药物或肿瘤预防药物。所述肿瘤诊断、治疗或预防药物可以是以肿瘤细胞表面功能性表面的HPV 68抗原为靶标,结合或作用于HPV 68抗原,从而诊断、治疗和/或预防肿瘤的药物。所述肿瘤可以是宫颈癌或宫颈癌前病变等HPV68表达阳性的肿瘤。
在本发明某些实施方式中,所述肿瘤预防药物为疫苗。
所述药物筛选为体外筛选。
所述药物质控例如为药物的体外药效测定。
本发明还提供所述抗HPV 68抗体或所述试剂盒在检测HPV 68抗原含量中的用途。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前,应理解,本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案;还应当理解,本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案,而不是为了限制本发明的保护范围;在本发明说明书和权利要求书中,除非文中另外明确指出,单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时,应理解,除非本发明另有说明,每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义,本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外,根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载,还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
实施例1、免疫印迹法检测抗HPV 68抗体
实验步骤如下:配制10%凝胶,分别取300μl HPV 68L1原液加60μl 6×上样缓冲液混匀,100℃水浴煮沸5分钟,10000转/分离心5分钟,上样,浓缩胶电压100V,分离胶电压120V。SDS-PAGE湿法转膜条件:100V, 90min;5%奶粉封闭过夜;含有编号分别为1-18的不同单克隆抗体的细胞上清作为一抗,按1:20稀释,孵育温度为室温,时间为20h。羊抗小鼠HRP(BIO-RAD 批号L1706516)按1:1000稀释作为二抗,室温孵育3小时;显色:DAB显色,并用水终止。
如图2所示,结果表明:识别HPV68L1的26株单克隆抗体中均为空间表位。
实施例2、抗体的亚型之间的交叉特异性鉴定
HPV亚型种类多达200种以上,因为生产HPV 多价疫苗时需要对各亚型进行鉴别试验,这样各亚型抗原含量检验时不存在相互交叉的反应以保证每个亚型抗原含量检验结果的准确性。本实验对于HPV17种亚型进行鉴定,确定此单克隆抗体对HPV 68为阳性,而对于其它16种亚型均为阴性。
实验步骤:
包被:用碳酸盐包被液按稀释倍数稀释纯化兔抗HPV6L1、11L1、16L1、18L1、31L1、33L1、45L1、52L1、58L1、35L1、39L1、51L1、53L1、56L1、66L1、68L1,100μl/孔加入酶标板,2~8℃放置过夜。
封闭:300μl/孔洗涤液洗板5次,每孔加入200μl封闭液(5%脱脂奶粉-PBS),置37℃封闭2小时。
加样:300μl/孔洗涤液洗板5次;各亚型原液稀释至40μg/ml;100μl/孔加样;37℃温育1小时。
加一抗:300μl/孔洗涤液洗板5次。细胞上清分别用稀释液按1:100稀释后,100μl/孔分别加入酶标板37℃孵育1小时。
加酶标抗:300μl/孔洗涤液洗板5次。用稀释液5000倍稀释HRP-山羊抗小鼠lgG,100μl/孔加入酶标抗,37℃孵育1小时。
显色:300μl/孔洗涤液洗板5次,100μl/孔加入新鲜配制的显色液,37℃避光保温10min。
终止读数:将终止液以50μl/孔加至板内,稍振荡混匀后,用酶标仪读数,测定波长450nm,参比波长620nm。结果如图3、图4和图5所示。
结果表明:26株单克隆抗体,除去抗体编号为1、5、7、8、11、12、13、19、20、23、26的细胞上清与其它16种亚型存在交叉,其他15株单克隆抗体均与其它16种亚型无交叉。
实施例3、抗体的亚型鉴定
包被:用磷酸盐包被液按5μg/孔稀释HPV68L1原液,100μl/孔加入酶标板,2~8℃放置过夜。
封闭:300μl/孔洗涤液洗板5次,每孔加入200μl封闭液(5%脱脂奶粉-PBS),置37℃封闭2小时。
加样:300μl/孔洗涤液洗板5次,HPV68L1细胞上清编号:11、15、7、6、12、13、3、16、18、4、9、17、14、2;分别按1:10和1:100稀释。100μl/孔加样;37℃温育1小时。
加酶标抗:300μl/孔洗涤液洗板5次。用稀释液5000倍稀释HRP-山羊抗小鼠lgG,100μl/孔加入酶标抗;用稀释液2000倍稀释Goat anti-mouse-lgG1-HRP 、Goatanti-mouse-lgG2a-HRP、Goat anti-mouse-lgG2b-HRP ,100μl/孔加入酶标抗,37℃孵育1小时。
显色:300μl/孔洗涤液洗板5次,100μl/孔加入新鲜配制的显色液,37℃避光保温10min。
终止读数:将终止液以50μl/孔加至板内,稍振荡混匀后,用酶标仪读数,测定波长450nm,参比波长620nm。
结果表明:HPV 68L1的26株单克隆抗体中编号2、3、6、15、20、22、24、25单克隆抗体较偏重于lgG1。其它共18株较偏重于lgG2a;
实施例4、抗体的中和活性检测
通过假病毒中和法检测各株单克隆抗体的中和抗体效价。
细胞铺板:将293FT细胞按1.5×104/well的密度预铺于96孔细胞培养板中,每孔体积为100μl,37℃,5% CO2培养箱中培养至细胞贴壁。将含各株抗体的细胞上清液分别用完全培养基进行连续倍比稀释适当稀释倍数。
中和:在60μl血清稀释液中加入60μl假病毒稀释液,混匀后置于25±2℃恒温培养箱中孵育60±2分钟。
加样:准确吸取血清-假病毒混合液100μl,缓慢小心加入96孔预铺的细胞板中。
培养:于37℃,5% CO2培养箱中培养68~76小时后用倒置荧光显微镜观察结果。中和假病毒对照荧光数50%的最大稀释倍数即为中和抗体效价。
如图1和图6所示,结果表明:HPV 68L1的16株单克隆抗体中,中和滴度结果大小顺序为:编号16>3=6=18=24=25>2=4=5=9=14=22>10>15>17=21。
实施例5、HPV 68体外相对效力测定单克隆抗体的筛选
包被:用包被液按一定稀释倍数适当稀释HPV68L1兔抗,100μl/孔加入酶标板,4℃放置过夜或37±2℃2小时。
封闭:300μl/孔洗涤液洗板6次,每孔加入200μl封闭液,置37 ±2℃封闭2小时。
样品、参考品处理及加样:300μl/孔洗涤液洗板6次。重组人乳头瘤病毒68L1原液、参考品用稀释液预稀释适当倍数后,按2倍或适当倍数递增稀释9~11个稀释度,100μl/孔加入酶标板,每个稀释度供试品溶液测定双复孔,37±2℃孵育1小时。
加一抗:300μl/孔洗涤液洗板6次。重组人乳头瘤病毒6L1原液测定:用稀释液按适当稀释倍数稀释HPV68单抗,100μl/孔加入酶标板,37±2 ℃孵育1小时。
加酶标二抗:300μl/孔洗涤液洗板6次。用稀释液适当倍数稀释辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L),100μl/孔加入酶标板,37±2℃孵育1小时。
显色:300μl/孔洗涤液洗板6次,100μl/孔加入新鲜配制的显色液,37±2℃显色5~20分钟。
终止读数:将终止液以50μl/孔加至板内,稍振荡混匀后,用酶标仪读数,测定波长为450nm,参比波长620 nm。
数据分析:使用软件SoftMax Pro 软件分析,选择四参数拟合(4-parameter)浓度为X轴,吸光度值做Y轴拟合曲线,拟合方程为Y=(A-D)/(1+(X/C)∧B)+D,C 值即为供试品EC50。
如图7~图10所示,图10中68-1、68-2、68-3代表3块不同的酶标板号,每块酶标板上最多做6个单克隆抗体、结果表明:HPV68L1的26株单克隆抗体中,编号为9、4、10、25、24、6单克隆抗体的EC50值较低,适合用于抗原的体外相对效力测定。
综合以上所有实验,选择编号为6的单克隆抗体应用于体外相对效力测定试剂盒。
实施例6、HPV 68编号为6单克隆抗体的序列测定
HPV 68编号为6单克隆抗体记为代号:68H6,细胞培养后分别提取mRNA进行可变区序列测定(送检至第三方公司检测),并将获得的序列翻译成蛋白质的氨基酸序列如下:
CDRH1 序列:Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Gly(SEQ ID NO:1)
CDRH2 序列:Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys(SEQ ID NO:2)
CDRH3 序列:Ala His Gly Ser Ser Ser Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr(SEQ ID NO:3)
CDRL1 序列:Gln Ser Val Ser Thr Ser Arg Tyr Ser Tyr(SEQ ID NO:4)
CDRL2 序列:Tyr Ala Ser(SEQ ID NO:5)
CDRL3 序列:Gln His Ser Trp Glu Ile Pro Tyr Thr(SEQ ID NO:6)
68H6 VH:
CAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGGGATGATGACAAGCGCTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAGAAACCAGGTATTCCTCAAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCACGGTAGTAGCTCTTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCACAGGTTACTCTGAAAGAGTCTGGCCCTGGGATATTGCAGCCCTCCCAGACCCTCAGTCTGACTTGTTCTTTCTCTGGGTTTTCACTGAGCACTTCTGGTATGGGTGTGAGCTGGATTCGTCAGCCTTCAGGAAAGGGTCTGGAGTGGCTGGCACACATTTACTGGGATGATGACAAGCGCTATAACCCATCCCTGAAGAGCCGGCTCACAATCTCCAAGGATACCTCCAGAAACCAGGTATTCCTCAAGATCACCAGTGTGGACACTGCAGATACTGCCACATACTACTGTGCTCACGGTAGTAGCTCTTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCCTCA(SEQ ID NO:7)
68H6 VL:
GACATTGTGCTGACACAGTCTCCTACTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCCAAAGTGTCAGTACATCTAGGTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCAAGTATGCATCCGACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATACTGCAACATATTACTGTCAACACAGTTGGGAGATTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATAAAAGACATTGTGCTGACACAGTCTCCTACTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATGCAGGGCCAGCCAAAGTGTCAGTACATCTAGGTATAGTTATATGCACTGGTACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAAACTCCTCATCAAGTATGCATCCGACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATACTGCAACATATTACTGTCAACACAGTTGGGAGATTCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATAAAA(SEQ ID NO:8)
68H6 VH 的氨基酸序列 :
QVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVFLKITSVDTADTATYYCAHGSSSYYAMDYWGQGTSVTVSSQVTLKESGPGILQPSQTLSLTCSFSGFSLSTSGMGVSWIRQPSGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVFLKITSVDTADTATYYCAHGSSSYYAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO:9)
68H6 VL的氨基酸序列 :
DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASQSVSTSRYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASDLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPYTFGGGTKLEIKDIVLTQSPTSLAVSLGQRATISCRASQSVSTSRYSYMHWYQQKPGQPPKLLIKYASDLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDTATYYCQHSWEIPYTFGGGTKLEIK(SEQ ID NO:10)
以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案,并不能理解为对本发明的限制。此外,本文所列出的各种修改以及发明中方法的变化,在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述,但应当理解,本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上,各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。
Claims (12)
1.一种抗HPV 68抗体,所述抗HPV 68抗体包括重链可变区和轻链可变区,其特征在于,所述抗HPV 68抗体具有如下技术特征:
<1> 重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR-H1;
<2> 重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR-H2;
<3> 重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3;
<4> 轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1;
<5> 轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR-L2;
<6> 轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的抗HPV 68抗体,其特征在于,所述抗HPV 68抗体的重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR-H1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR-H2和 氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR-H3;
和/或,所述抗HPV 68抗体的轻链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR-L1、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR-L2和 氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR-L3。
3.根据权利要求1所述的抗HPV 68抗体,其特征在于,所述抗HPV 68抗体的重链可变区的氨基酸序列包括如SEQ ID No.9所示的氨基酸序列;
和/或,
所述抗HPV 68抗体的轻链可变区的氨基酸序列包括如SEQ ID No.10所示的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的抗HPV 68抗体,其特征在于,所述抗HPV 68抗体为单链抗体和/或单克隆抗体。
5.一种分离的多核苷酸,其特征在于,编码如权利要求1-4任一所述的抗HPV 68抗体的重链可变区和/或轻链可变区或全长氨基酸。
6.一种核酸构建体,其特征在于,含有如权利要求5所述的分离的多核苷酸。
7.一种抗体的表达系统,其特征在于,所述表达系统含有如权利要求6所述的核酸构建体或基因组中整合有外源的如权利要求5所述的多核苷酸。
8.如权利要求1-4任一所述的抗HPV 68抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:在适合表达所述抗HPV 68抗体的条件下,培养如权利要求6所述的抗体的表达系统,从而表达出所述抗HPV 68抗体,分离出所述抗HPV 68抗体。
9.一种用于检测HPV 68抗原的试剂盒,其特征在于,包含如权利要求1-4任一所述的抗HPV 68抗体和/或其免疫偶联物。
10.如权利要求9所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为酶联免疫试剂盒。
11.如权利要求1-4任一所述的抗HPV 68抗体、如权利要求9所述的试剂盒在制备肿瘤诊断药物、肿瘤治疗药物、肿瘤预防药物的筛选产品或质控产品中的用途,或在制备诊断或治疗药物中的用途。
12.如权利要求11所述的用途,其特征在于,所述肿瘤为宫颈癌或宫颈癌前病变。
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