CN115927347A - 特异性结合利培酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明公开了特异性结合利培酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合利培酮的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合利培酮的核苷酸序列。本发明提供了一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合利培酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。

Description

特异性结合利培酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸适配体，尤其涉及特异性结合利培酮的核酸适配体及衍生物、应用、试剂盒。

背景技术

利培酮(Risperidone)是苯丙异噁唑衍生物，分子式为C23H27FN4O2，分子量为410.484，化学名称为3-[2-[4-(6-氟-1,2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6,7,8,9-四氢-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-α]嘧啶-4-酮，为一种精神科药物，用于治疗急性和慢性精神分裂症。特别是对阳性及阴性症状及其伴发的情感症状(如焦虑、抑郁等)有较好的疗效，也可减轻与精神分裂症有关的情感症状。对于急性期治疗有效的患者，在维持期治疗中，利培酮可继续发挥其临床疗效。

但由于利培酮药物在患者之间具有广泛的药代动力学变化，监测血中的药物浓度并调节至目的水平对于提高药物有效性和最小化毒性是有用的。据报道，受到众多因素的影响，利培酮及其衍生物在不同的个体内和个体间的药代动力学变化为13倍，这些差异导致的结果是，在不同的个体中，等量的相同药物可以导致显著不同的临床结果。根据患者中个体药物的清除率和最终的血中药物浓度，相同剂量的利培酮效果也显著不同。因此，建立专一性强、灵敏度高的利培酮的检测方法，对制定利培酮个体化剂量方案,评价其临床疗效及安全性,有十分重要的意义。

目前，利培酮的血浓度测定多采用放射免疫法，高效液相色谱法以及免疫学检测法。但是放射免疫法具有成本高、易造成放射污染、仪器普及率低的缺点。高效液相色谱法则是需要多次重复提取,具有操作繁琐、复杂、费时费力、通量低等缺点，无法实现快速便捷的检测，不利于临床推广。免疫学检测法都是依赖于抗体做的检测试剂盒，虽然有一些可以做到快速简单的检测，但是抗体制备过程比较复杂，批次之间有差异，所以存在一定的缺陷。

主要缺陷在于：其他方法成本高，仪器贵，而以抗体为识别元件的免疫学检测法存在一定的缺点。比如，抗体生产依赖动物，存在批次差异大、成本高、对温度、pH值以及盐浓度依赖性强、不可逆变性等缺点，导致抗体存在价格昂贵、难以重复使用，难以保证稳定的结果和检测成本高等问题。

核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(SELEX)筛选分离得到的DNA或者RNA分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面具有广阔的前景。

核酸适配体与抗体相比，分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。

基于SELEX的方法，筛选出结合特定小分子的核酸适配体，并将该核酸适配体用于小分子的检测，目前也被广泛研究。但是对于利培酮的核酸适配体，还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对利培酮有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合利培酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法，试剂盒与应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了特异性结合利培酮的核酸适配体，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合利培酮的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合利培酮的核苷酸序列。

作为本发明的一种优选方案，所述具有高同源性是指与SEQ ID Nos.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。

作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持所述亲和力。

作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持所述亲和力。

作为本发明的一种优选方案，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。

本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可对上述核酸适配体的核苷酸序列上的某一位置进行修饰，例如，磷酸化、甲基化、氨基化、巯基化、用硫取代氧、用硒取代氧或连接同位素化等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合利培酮的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。

作为本发明的一种优选方案，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持所述亲和力。

作为本发明的一种优选方案，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、siRNA标记物或酶标记物。

本领域技术人员应该理解，作为对上述技术方案的改进，可在上述核酸适配体的核苷酸序列上连接荧光物质，放射性物质、治疗性物质、生物素、地高辛、纳米发光材料、小肽、siRNA或酶标记等，条件是这样修饰后得到的核酸适配体序列具有合乎需要的性质，例如，可以具有与修饰前的母体核酸适配体序列相等或更高的结合利培酮的亲和力，或虽然亲和力没有明显提升但是具有更高的稳定性。

换言之，以上不论是经部分取代或经过修饰后的核酸适配体序列，都具有原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能，都可应用于与利培酮的结合。

作为一个总的技术构思，本发明所述的核酸适配体也可以包含以下三种序列中的任意一种：

(1)与前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列的同源性在60％以上的核苷酸序列(例如可将前述核酸适配体序列删除或增加部分互补的核苷酸)，优选地，与SEQID Nos.1所示的核苷酸序列的同源性可以为70％以上，80％以上，85％以上，90％以上，95％以上，或者99％以上；

(2)能够与前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列在严格条件下杂交的核苷酸序列；

(3)由前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列转录的RNA序列；

其中，上述(1)-(3)中的核苷酸序列均能够特异性结合利培酮。

第二方面，本发明还提供核酸适配体衍生物，所述衍生物是由前述所有技术方案中所述核酸适配体的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是前述所有技术方案中所述核酸适配体改造成的相应肽核酸。

第三方面，本发明还提供了一种前述核酸适配体或者核酸适配体衍生物的应用。例如，本发明的核酸适配体或其衍生物可以用于利培酮的检测，可以使用本发明的核酸适配体或其衍生物来检测受试者血液中的利培酮的含量。

以上不论是衍生出的核酸适配体还是衍生出的其他衍生物，都具有与原核酸适配体基本相同或类似的分子结构、理化性质和功能。

第四方面，本发明提供一种检测利培酮的试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的核酸适配体。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1)核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程，因此核酸适配体是一种非常理想的分子探针。针对于利培酮的核酸适配体还没有人公布且没有人应用该适配体，因此，本领域对针对利培酮有高结合亲和力的核酸适配体存在需求。

2)核酸适配体相较于抗体，更稳定，由于是化学合成，批间差异几乎没有；并将该核酸适配体成功用于利培酮小分子的检测。

3)本发明提供了一种具有高度特异性、化学性质稳定、易于保存和标记的能够结合利培酮的核酸适配体及其衍生物，还相应提供所述核酸适配体的筛选方法与应用。

附图说明

图1是本发明的SEQ ID No.1所示序列的模拟二级结构。

图2是本发明核酸适配体的序列的ITC滴定图。

图3是本发明对照序列的ITC滴定图。

图4是本发明的荧光检测图。

图5是本发明拟合的线性曲线。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

特异性结利培酮的ssDNA核酸适配体的筛选：

1.合成以下序列所示的随机单链DNA文库和对应引物：

随机单链DNA文库：5’-GTTGGCACTCCACGCATAGG(36N)CCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’。

其中，“36N”表示36个任意的核苷酸碱基连接而成的序列。该文库由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。

引物信息如表1，由通用生物公司合成。

表1.引物及其序列

其中，引物名称中的S代表正向引物，引物名称中A代表反向引物，S1的complementary sequences，记为S1CS，-biotin为链霉亲和素修饰，序列中的20个A表示由20个腺苷酸(A)组成的polyA尾，“Spacer 18”表示18原子的六乙二醇间臂。“Spacer 18”的结构式如下式I所示。在上述A2-ployA引物中所用的“Spacer 18”结构式如式I所示。

引物分别用DPBS缓冲液(NaCl：8g/L，KCl：0.2g/L，Na2HPO4：1.15g/L，KH2PH4:0.2g/L，CaCl2:0.1g/L，MgCl2·6H2O:0.1g/L；PH7.4)配制成100μM的贮存液，于-20℃保存备用。

2.磁珠与氧化石墨烯固定文库筛选利培酮

采用磁珠与氧化石墨烯固定文库，用小分子竞争结合的方法筛选，共计筛选10轮，其中1-7轮采用磁珠固定文库的方法筛选，8-10轮采用氧化石墨烯固定文库的方法筛选，具体筛选方法如下,以第一轮和第八轮为例。

2.1文库溶解：取出生工生物合成的文库干粉，用12000rpm离心10min。加入DPBS缓冲液，将文库稀释成10000nM 130μL，涡旋混匀，然后12000rpm离心5min。从用DPBS溶解好的S1CS引物中吸取100μM 26μL加入到稀释好的文库中，充分混匀引物和文库后12000rpm离心2min。

2.2.文库与引物匹配：将文库与互补引物的混合液分装到PCR管中，放入PCR仪进行缓慢变复性。使用PCR仪设置如下变复性程序，95℃10min，缓慢降温到60℃，降温速率0.1℃/s；60℃1min；缓慢降温至25℃，降温速率0.1℃/s。将变复性好的文库与互补引物混合液，室温放置5min后，取少许用紫外(A260)测定浓度为C1。

2.3.吸取1000μL链霉亲和素磁珠(SA磁珠，购买自Invitrogen,Dynabeads^TMMyOne^TM Streptavidin，货号：65001)，使用DPBS清洗磁珠4遍，每次使用DPBS体积为500μL，具体为用磁铁垂钓磁珠，去除上清，加入DPBS缓冲液清洗，最后一遍清洗时将磁珠暂时保存于少量DPBS中，防止磁珠干燥。(此后，第二轮-第七轮采用的文库量缩小至800nM 100μL，磁珠用量为100μL，清洗磁珠使用的DPBS体积缩小至200μL)。

2.4.将变复性完成后的文库与互补引物混合液加入2.3去上清的磁珠中，混匀，室温旋转仪上摇晃60min，磁铁垂钓磁珠，回收上清，取少许上清测定紫外(A260)浓度得到数值C2。根据测定的浓度，计算出文库偶联到磁珠上的固定效率。文库固定效率＝(C1-C2)/C1，为保证筛选的成功率，第一轮文库固定效率大于50％，之后第二轮-第七轮文库固定效率大于85％，才能继续筛选。

2.5.文库的洗涤：将上一步中得到的磁珠进行漂洗，每次往磁珠中加入500μL漂洗缓冲液(DPBS)，混匀悬浮磁珠后室温静置1分钟，然后强磁铁吸附磁珠，去上清，重复该漂洗操作4遍，并注意每一遍清洗磁珠时，需要更换新的EP管。紧接着对磁珠进行一次长时间漂洗，即加入200μL漂洗缓冲液，将磁珠悬浮后室温摇床孵育20分钟，然后强磁铁吸附磁珠，去上清。(从第二轮-第七轮筛选开始此步漂洗缓冲液也只使用200μL。)

2.6.靶标洗脱：将利培酮(分子式为C23H27FN4O2，分子量为410.484，分子结构如式Ⅱ所示)用甲醇溶解到5mM，并吸取4μL加入到196μL的DPBS中，即稀释了50倍到100μM，混匀后全部加入到2.5得到的SA磁珠中，室温摇床孵育20min。磁铁垂钓磁珠，回收上清到EP管中，记为Elution。

3.次级文库制备

3.1扩增双链：以Elution中的核酸分子为模板，用PCR(ePCR)进行扩增。方法如下：将全部模板Elution加入2mL PCR mix中混匀，再将该混合液分成100μL/管加入到PCR管中，放入PCR仪(Bio-Rad，梯度PCR仪T100)中进行扩增，扩增条件如下：95℃预变性2分钟，95℃变性30秒，60℃退火30秒，72℃延伸30秒，共25个循环，4℃保存。

PCR mix的配方见表2。

表2.ePCR mix配方

试剂	总体积1000μL
		ddH2O	866μL
10*pfμ酶bμffer	100μL
		dNTPmix(10mM)	20μL
正向引物S1-FAM(100μM)	5μL
		反向引物A2-polyA(100μM)	5μL
Pfμ酶	4μL(20U)

3.2扩增产物用正丁醇浓缩：收集所有的ePCR产物，放入15mL尖底离心管中，加入2倍体积的正丁醇，在旋涡混合器上震荡以充分混匀；台式离心机，9000rpm(转/分钟)室温离心10分钟；离心后，得到分层的液体，移弃上相(正丁醇)，得到浓缩的PCR扩增产物。

3.3制备单链：将浓缩的PCR产物按体积比1：1加入TBE/尿素变性缓冲液，混匀后煮沸变性10分钟，使DNA变性，随后将该样品进行尿素变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，400V电压下电泳至溴酚蓝到达胶底部，使加长的FAM标记的链与反向的链分开，7M尿素变性聚丙烯酰胺凝胶配方如表3。

表3.变性聚丙烯酰胺凝胶配方

成分	用量
		尿素	3.78g
40％聚丙烯酰胺	1.8mL
		5*TBE	1.8mL
ddH2O	2.25mL
		10％APS	60μL
TEMED	15μL

切胶回收FAM标记的链：将凝胶取出放在塑料膜上，Ex(nm)：495，Em(nm)：517检测我们需要的带有FAM标记的ssDNA；用干净的刀片将目的条带直接切下，将胶条转移至1.5mLEP管中并捣碎，加入1.2mL缓冲液后沸水浴15分钟，将胶中的ssDNA转移到溶液中，即12000rpm离心2分钟，回收上清，转移到15mL的离心管中，再取1mL缓冲液至碎胶中，重复煮沸离心一次，将上清全部转移至同一个15mL离心管中。再向15mL离心管中，补充12mL正丁醇，上下剧烈颠倒混匀后离心，9000rpm离心5min。离心后，溶液出现分层，去除上层液，将下层带有荧光的FAM单链文库回收。得到的DNA单链用3.5KD的透析袋于4℃透析过夜，即可作为下一轮筛选的文库。

4.多轮筛选：接下来的2～7轮筛选中，每次操作均以前一次操作中得到的次级文库为起始核酸文库，文库的固定都采用了如下的浓度和体积：文库为800nM，100μL；互补引物CS-biotin为：1600nM，100μL；SA磁珠为100μL。

5.筛选到第七轮后将所得单链核酸产物作为第八轮文库进行筛选，采用氧化石墨烯固定文库筛选，进一步的富集文库。氧化石墨烯可以通过π-π堆叠作用吸附ssDNA，但不易吸附与靶分子结合而产生构象折叠后的ssDNA，基于此原理，使用氧化石墨烯固定文库筛选8-10轮，如下以第八轮为例：

5.1将第七轮筛选得到的单链核酸产物作为文库，稀释文库至500nM*100μL,将文库进行快速变复性，使用PCR仪设置如下变复性程序，95℃，10min；4℃，5min，降温速率4℃/s。

5.2用DPBS缓冲液将利培酮稀释至50uM，100μL,并加入上一步变复性后的文库，混匀，室温孵育2h。

5.3吸取1000μL氧化石墨烯，12000rpm(转/分钟)4℃离心5分钟，去上清，使用DPBS清洗氧化石墨烯3遍，每次使用DPBS体积为500μL，离心去上清。

5.4将5.2的靶标文库混合液加入到5.3去上清的氧化石墨烯中，混匀，室温避光孵育30min，12000rpm(转/分钟)4℃离心10分钟，取上清装入EP管中，标记为Elution+，以Elution+中的核酸分子为模板，用PCR(ePCR)进行扩增。按照3步骤制备单链，作为下一轮筛选的文库。在对氧化石墨烯的处理中，离心取上清时，注意不要吸取到氧化石墨烯，离心去上清时，也是如此。

6.多轮筛选：接下来的9-10轮筛选中，每次操作均以前一次操作中得到的次级文库为起始核酸文库，文库使用量，氧化石墨烯和利培酮投入量一致，筛选方法一致。

7.筛选到第10轮后将所得的产物经高通量测序分析，最终挑选得到核酸适配体。

所述筛选方法中，可逐轮增加筛选压力，以增进筛选核酸适配体的富集程度，缩短筛选进程。所述增加筛选压力包括减少投入的单链DNA文库的量、利培酮和固定了文库的磁珠孵育时间，增加步骤2.5中的清洗时间，清洗次数。

8.将得到的富集文库产物经高通量测序分析后，经同源性比对，挑选若干条序列，再由通用生物公司合成，检测验证亲和力。

在后续检测中，确定了1条具有很强的结合能力的序列，将它命名为利培酮5号(LPT-5)。

具体序列为SEQ ID No.1：

5’-GTTGGCACTCCACGCATAGGGGCGATGGCACGATCAGCACGCATTGGCTATCGCTGCCTATGCGTGCTACCGTGAA-3’。其模拟二级结构如图1所示。

实施例2

等温滴定微量热仪(ITC)检测利培酮适配体和利培酮的亲和力：

ITC基于热量检测的原理，检测相互作用

基本实验模型：“配体”放在滴定针中，“大分子”放入样品池中，测量反应热。用利培酮稀释液分别滴定试验组溶液和对照组溶液，并检测滴定过程中热量的变化情况，使用的仪器为英国马尔文仪器有限公司的PEAQ-ITC。

1.将通用生物公司合成的核酸适配体(LPT-5)和对照序列(LPT-CTL)分别用DPBS稀释成20μM，200μL，然后分别加入192μL DPBS和8μL甲醇，充分混匀，适配体的终浓度为10μM。

LPT-CTL(SEQ ID No.5)的序列(对照序列)：

5’-ATTGAAACTCCACGCATAGGGCCACAAGGAACACCCGCACGAGTGATCATACAGCACCTATGCGTGCTACCCCGAC-3’。

2.将利培酮用DBPS稀释成109μM，稀释方法为2μL 5.45mM利培酮(甲醇溶解)加到98μL DPBS中，充分混匀。

3.进行滴定，将稀释好的溶液放入仪器中开始滴定，利培酮滴定核酸适配体。

如图3所示，对照序列LPT-CTL与利培酮之间滴定过程，热量低且没有明显的热量变化，仪器不能拟合参数；如图2所示，LPT-5与利培酮之间滴定过程有明显的热量变化，二者确定有结合，具体的结合得到的参数由PEAQ-ITC仪器根据滴定的热量自动拟合。

实施例3

利培酮适配体的应用：

氧化石墨烯不但可以吸附ssDNA，同时拥有非常好的荧光淬灭作用，可以将吸附到其表面的荧光基团淬灭。可以将高特异性、高亲和力的利培酮适配体进行FAM荧光修饰，用氧化石墨烯吸附后，荧光淬灭，加入利培酮靶标后，因为适配体和靶标结合，导致适配体构象发生变化，不能吸附到氧化石墨烯表面，从而氧化石墨烯的荧光淬灭作用失活，FAM荧光显现。为了让适配体和靶标更好的结合，可以先让FAM修饰的适配体和靶标结合，再加入氧化石墨烯孵育，孵育结束后，进行荧光检测。

具体步骤：

1.在通用生物公司合成以下所示的FAM修饰的单链DNA序列：

5’-FAM-SEQ ID No.1具体序列：

FAM-GTTGGCACTCCACGCATAGGGGCGATGGCACGATCAGCACGCATTGGCTATCGCTGCCTATGCGTGCTACCGTGAA。

2.溶解：取出通用生物公司合成的修饰引物干粉，12000rpm离心10min。加入DPBS缓冲液溶解，再用DPBS将其稀释到终浓度为500nM 500μL，涡旋混匀，待用。

3.变复性处理：将2得到的适配体稀释液放入pcr仪中进行变复性，pcr程序设置为：95℃10min，4℃5min；从而将适配体形成所需要的结构，将变复性后的适配体混匀后分装成100μL/管，分成5管，分别标记为0nM，50nM，125nM，250nM，500nM待用。

4.用含10％血清的DPBS缓冲液稀释不同浓度的利培酮：0nM，50nM，100nM，200nM，400nM各100μL。

5.将上一步稀释得到的不同浓度的利培酮，分别对应加入步骤3的5管适配体中，室温避光摇床孵育1h。

6.向上一步得到的混合液中分别加入1000μL清洗好的氧化石墨烯，用来吸附并淬灭未结合到的荧光标记的核酸适配体，室温避光摇床孵育30min后将混合液体进行荧光检测。

7.使用F-7000荧光光谱仪，在激发波长为490nm，发射波长为520nm，光电倍增压800V的条件下检测荧光强度，测定每个靶标浓度的孵育混合液。将数据汇总，结果如图4所示。

所得数据符合实验预计，将荧光信号和利培酮的投入量拟合线性，如图5所示，线性良好，R²趋向1，符合实验预期。本实施例利用利培酮的标准品，并将实施例1的适配体修饰荧光与其反应，随后将反应产物加入到氧化石墨烯中，利用氧化石墨烯的特性，淬灭没有结合到利培酮的适配体荧光，从而将利培酮浓度转化成荧光信号。主要目的是将该核酸适配体用于小分子的检测，为后续应用试剂盒作为模板。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims (10)

1.特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，包括SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或者，与SEQ ID No.1核苷酸序列具有高同源性并且能够特异性结合利培酮的核苷酸序列；或者由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列衍生的能够特异性结合利培酮的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述具有高同源性是指与SEQ ID Nos.1所示的核苷酸序列至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。

3.根据权利要求1或2所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体包含与所述核苷酸序列互补的核苷酸序列并且保持亲和力。

4.根据权利要求1或2所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含碱基修饰并且保持亲和力。

5.根据权利要求4所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述碱基修饰为硫代修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、氨基化修饰、巯基化修饰、硒取代氧修饰或连接同位素修饰。

6.根据权利要求1或2所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述核酸适配体的核苷酸序列包含标记物并且保持亲和力。

7.根据权利要求6所述的特异性结合利培酮的核酸适配体，其特征在于，所述标记物为荧光标记物，放射性标记物、治疗性标记物、生物素标记物、地高辛标记物、纳米发光材料标记物、小肽标记物、siRNA标记物或酶标记物。

8.特异性结合利培酮的核酸适配体衍生物，其特征在于，所述核酸适配体衍生物是由权利要求1-7任一项所述核酸适配体的核苷酸序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架，或者是由权利要求1-7任一项所述核酸适配体改造成的相应肽核酸。

9.权利要求1-7任一项所述的特异性结合利培酮的核酸适配体或权利要求8所述的核酸适配体衍生物的应用，其特征在于，利用所述核酸适配体或者所述核酸适配体衍生物检测利培酮。

10.检测利培酮的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-7任一项所述的特异性结合利培酮的核酸适配体或者权利要求8所述的核酸适配体衍生物。

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