CN115925832A - 一种乳酸菌素及其在防控畜禽细菌感染的应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及微生物领域,具体公开了一种乳酸菌素及其在防控畜禽细菌感染的应用。所述乳酸菌素由乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)经发酵产生,所述菌株被命名为乳酸乳球菌5019,于2021年01月13日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:中国,北京,保藏编号为CGMCC NO.21607。本申请的乳酸乳球菌产生的乳酸菌素可用于防控畜禽细菌感染,其具有耐温性高以及抑菌活性强的优点。
Description
技术领域
本申请涉及微生物技术领域,更具体地说,它涉及一种乳酸菌素及其在防控畜禽细菌感染的应用。
背景技术
由于抗生素在人类和动物中的过量和不正确使用,导致细菌的多重耐药性日益严重,除了医院重症监护室成为超级耐药菌滋生的集中地以外,还有很多报道称从动物源性食品中分离出多重耐药菌。为了应对上述问题,全球科研队伍都在研发新型抗菌药物,以期或协同作用增强抗生素的杀菌效果,或代替抗生素达到杀菌治疗细菌感染性疾病的效果。在人类公共卫生意义重大的今天,对抗生素的使用需要尤为严谨的科学方法指导和严厉的法律监管,所以在动物饲养、食品来源、食品储存等环节都需要开发新型抗菌成分,确保公共卫生安全和食品防腐的有效性。
在食品领域里,有一类乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)发挥着重要的作用,这是能够发酵糖类产生乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。乳酸菌是一类益生菌,可以激活巨噬细胞、NK细胞等免疫细胞以消灭体内的有害菌和癌细胞。研究资料表明,乳酸菌能促进动物生长,调节胃肠道正常菌群、维持微生态平衡,从而改善胃肠道功能、提高食物消化率和生物效价、降低血清胆固醇、控制内毒素、抑制肠道内腐败菌生长以及提高机体免疫力等。然而,益生菌活菌也存在一定问题,例如乳酸菌极其不稳定,其存在抗逆性较差、不耐贮存、胃肠道存活率低、难以定植以及增殖耗能的问题。
研究发现益生菌的无生命菌体和(或)其代谢产物也具有明显益生作用,并且不同组分的益生功能不尽相同。乳酸菌通过发酵产生的有机酸、特殊酶系、乳酸菌素等代谢产物同样具有一定的杀菌、抑菌作用。然而目前乳酸菌的发酵代谢产物仍然存在高温条件下抑菌活性明显下降的问题,导致其应用范围受到限制。
发明内容
为了解决上述问题,本申请提供一种乳酸菌素及其在防控畜禽细菌感染的应用。
本申请的目的通过下述技术方案实现:
第一方面,本申请提供一种乳酸菌素,采用如下的技术方案:
一种乳酸菌素,所述乳酸菌素由乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)经发酵产生,所述菌株被命名为乳酸乳球菌5019,于2021年01月13日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:中国,北京,保藏编号为CGMCC NO.21607。
通过采用上述技术方案,本申请涉及的乳酸菌素是由乳酸乳球菌5019发酵产生的具有抑菌活性的小分子多肽,它通过在靶细胞上穿孔、抑制肽聚糖合成,与核糖体或tRNA相互作用抑制蛋白质合成,直接降解靶细胞DNA,从而起到抑菌效果。
本申请的乳酸菌素耐酸,在pH为2.0的条件下能保持稳定的生物活性;并且其耐性温高,在150℃的温度下处理5min后,并不会明显影响其效价,可以结合实际生产开发出适合多种应用场景的制剂,可防治养殖端受到病原菌的感染。
可选的,所述乳酸菌素的抑菌谱为葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、巴氏杆菌、副鸡嗜血杆菌、副溶血弧菌、鸭疫里默氏菌。
通过采用上述技术方案,本申请的乳酸菌素广谱性强,其能够裂解革兰氏阳性细菌,如葡萄球菌、魏氏梭菌等,并且可裂解多种革兰氏阴性细菌,如大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里默氏菌、巴氏杆菌、副溶血弧菌、副鸡嗜血杆菌等。鉴于乳酸菌素对多种病原菌有裂解作用,本申请开发了更多的应用领域,如在养殖场内防控多种病原菌的水平传播、辅助或代替抗生素杀菌防治细菌感染、作为饲料添加剂促进肉鸡的生长性能,从而减少食源性动物体内抗生素的蓄积以及降低因超级耐药菌引起的公共卫生安全隐患。
第二方面,本申请提供一种药物制剂,采用如下的技术方案:
一种药物制剂,包含所述的乳酸菌素。
第三方面,本申请提供一种乳酸菌素的制备方法,采用如下的技术方案:
一种乳酸菌素的制备方法,包括如下步骤:
S1、乳酸菌种子的准备:将乳酸乳球菌5019接种于培养基中,静置培育,使其增殖活化,得到乳酸乳球菌种子液;
S2、乳酸菌放大培养:将乳酸乳球菌种子液接种于培养基中,静置培育,使其增殖活化,得到乳酸乳球菌发酵液;
S3、乳酸菌素的制备:将乳酸乳球菌发酵液用浓盐酸调节pH为2-3后,进行灭活处理;然后取上清液即为乳酸菌素。
通过采用上述技术方案,在S3中将乳酸乳球菌发酵液用浓盐酸进行酸处理,可以促进乳酸菌素从细胞壁上解离,提高其在发酵液中的溶解度;然后经过灭活处理,使得细胞壁破裂,有利于乳酸菌素的充分释放,从而提高乳酸菌素的提取率。
优选的,所述S3中,灭活处理的条件为:在100-110℃的温度下加热3-10min。
优选的,所述S3中,采用离心的方法得到上清液,离心条件为:在8000-12000rpm的转速下离心3-8min。
第四方面,本申请提供一种乳酸菌素的应用,采用如下的技术方案:
一种乳酸菌素的应用,所述乳酸菌素用于防控畜禽细菌感染。
可选的,所述乳酸菌素在畜禽体内裂解细菌、预防细菌感染以及制备畜禽饲料中的应用。
可选的,所述乳酸菌素在畜禽饲料中的添加量为50-200ppm。
综上所述,本申请具有以下有益效果:
1.本申请的乳酸菌素耐酸,在pH为2.0的条件下能保持稳定的生物活性;并且其耐性温高,在150℃的温度下处理5min后,并不会明显影响其效价,可以结合实际生产开发出适合多种应用场景的制剂,可防治养殖端受到病原菌的感染。
2.本申请的乳酸菌素广谱性强,其能够裂解革兰氏阳性细菌,如葡萄球菌、魏氏梭菌等,并且可裂解多种革兰氏阴性细菌,如大肠杆菌、沙门氏菌、鸭疫里默氏菌、巴氏杆菌、副溶血弧菌、副鸡嗜血杆菌等。
3.本申请的乳酸菌素对多种病原菌有裂解作用,本申请开发了更多的应用领域,如在养殖场内防控多种病原菌的水平传播、辅助或代替抗生素杀菌防治细菌感染、作为饲料添加剂促进肉鸡的生长性能,从而减少食源性动物体内抗生素的蓄积以及降低因超级耐药菌引起的公共卫生安全隐患。
附图说明
图1是本申请实施例一中乳酸乳球菌5019的菌落形态图。
图2是本申请实施例一中乳酸乳球菌5019的细胞形态图。
图3是本申请实施例四中高温处理后的乳酸菌素的抑菌作用对比图。
图4是本申请实施例四中高温处理(110℃、120℃)后的乳酸菌素对大肠杆菌、葡萄球菌和ML菌的抑菌效果图。
图5本申请实施例四中高温处理(130℃、140℃、150℃)后的乳酸菌素对葡萄球菌的抑菌效果图。
图6是本申请实施例五中的肝脏病变评分对比图。
图7是本申请实施例五中的每羽鸡的肝脏载菌量对比图。
图8是本申请实施例七中的各组肉鸡平均日增重量对比图。
图9是本申请实施例七中的各组肉鸡平均日采食量对比图。
图10是本申请实施例七中的各组肉鸡料肉比对比图。
图11是本申请实施例七中的各组肉鸡血清IgA含量对比图。
图12是本申请实施例七中的各组肉鸡血清IgG含量对比图。
图13是本申请实施例七中的各组肉鸡血清IgM含量对比图。
图14是本申请实施例七中的各组肉鸡血清SOD含量对比图。
图15是本申请实施例七中的各组肉鸡血清MDA含量对比图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。
实施例一:乳酸乳球菌的分离培养和生物学特性
1.乳酸乳球菌的分离、培养
使用无菌取样器采集新疆传统酸奶样品,低温运输至实验室环境。将样品溶入无菌水中,混匀。取100μL样品溶液进行10倍梯度系列稀释,然后取100μL稀释液涂布在GM17培养基琼脂平板上,倒置平板30℃培养24小时,挑取白色、圆形、过氧化氢酶阴性的菌落,显微镜观察为球状或椭球状,反复划线确定纯菌落。
上述GM17培养基的配方:葡萄糖5g/L,蛋白胨5.0g/L,酵母提取物5.0g/L,聚蛋白胨5.0g/L,抗坏血酸0.5g/L,牛肉浸膏2.5g/L,β-甘油磷酸二钠19g/L,0.02g/L MgSO4·7H2O;加入蒸馏水溶解后,调节pH7.0,固体培养基需加入1.5%(重量)的琼脂粉,115℃灭菌30分钟。
2.乳酸乳球菌的筛选和鉴定
对上述获得的菌株进行生化鉴定,其具有如下形态特征和生理生化特性:
(1)宏观形态:如图1所示,所筛选的菌落在GM17培养基30℃培养24h,菌落白色,圆形,表面湿润,不透明,边缘整齐。
(2)微观形态:如图2所示,所筛选的菌株在GM17培养基30℃静置培养24h,菌体呈椭球状,0.7-0.9μm×0.8-1.2μm,单个、成对或呈链状排列,革兰氏阳性。
(3)主要的生理生化特征如表1所示:
表1菌株生理生化特征表
符号说明:“+”,阳性;“-”,阴性。
(4)分子生物学鉴定结果:
提取分离菌株的基因组DNA,对其进行扩增和测序,得到该菌株的16S rDNA片段,其序列为:SEQ ID NO:1。
将16S rDNA基因序列提交NCBI进行在线比对,结合菌株的形态学特征、生理生化鉴定,确定该筛选的菌株为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),将其命名为5019。
实施例二:乳酸菌素的制备
一种乳酸菌素,采用如下方法制备而成:
S1、乳酸菌种子的准备
挑取乳酸乳球菌5019冻存菌液在GM17培养基上三区划线,于30℃恒温箱中静置培养24h。挑取单菌落,接种于5mL GM17液体培养基中,于30℃恒温箱中静置培养中增殖12h进行活化,得到增殖的乳酸乳球菌种子液。
S2、乳酸菌放大培养
取1mL乳酸乳球菌种子液,按照2%接种量加入50mL GM17液体培养基中,于30℃恒温箱中静置培养中增殖12h,在发酵过程中不通气,每隔4h按照80rpm搅拌一次,每次搅拌3min,得到乳酸乳球菌发酵液。
S3、乳酸菌素的制备
发酵结束后,将乳酸乳球菌发酵液利用浓盐酸调节pH至2.5,再经100℃煮沸5min进行灭活处理,冷却后,10000rpm离心5分钟,除去菌体,取上清即为乳酸菌素提取液。
实施例三:乳酸菌素的广谱抑菌活性
将实施例二制得的乳酸菌素提取液作为样品,对其抑菌性能进行测试。
(一)多种待检细菌的增殖
选取来源地域差别大、多种动物来源的菌株进行试验。挑取各种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌冻存菌液分别在各自的鉴别培养基平板上三区划线,于37℃恒温箱中静置培养过夜。再挑取单菌落,分别接种于5mL适宜的液体培养基中,于37℃恒温振荡培养箱中增殖过夜,得到单一的菌悬液。各种细菌对应的培养基见表2。
表2待检细菌及培养基
菌种 | 培养基 | 菌种 | 培养基 |
葡萄球菌 | MSA | 魏氏梭菌 | TSA |
沙门氏菌 | SS | 巴氏杆菌 | NA |
大肠杆菌 | MAC | 副鸡嗜血杆菌 | TSA+8%血清 |
副溶血弧菌 | TCBS | 鸭疫里默氏菌 | TSA+5%血清 |
(二)乳酸菌素的裂解谱检测
利用双层平板法检测乳酸菌素的裂解谱。
(1)将2%含量的水琼脂融化并冷却至50℃,倒入无菌的培养皿中,静置几分钟待其凝固,得到下层平板。
(2)向半固体培养基肉汤(营养肉汤中添加0.7%的琼脂粉后制得)中添加0.5%的琼脂和1%的磷酸氢二钠,高压灭菌,待软琼脂温度降到50℃,添加2%的待检细菌和1%的吐温-20,迅速混匀,倒入已凝固的下层平板培养基上,静置30min,得到上层平板。
(3)在平板中央摆放牛津杯,放置20min,然后取50μL样品加入牛津杯中。将平板在冷藏放置3.5h后,37℃培养12h,观查是否产生抑菌圈,统计抑菌圈直径,判断裂解情况。乳酸菌素的抗菌谱结果见表3。
表3乳酸菌素的抗菌谱检测结果
注:上述葡萄球菌菌株均由山东某猪场患仔猪油皮病的仔猪皮肤病灶分离得到,沙门氏菌、大肠杆菌、魏氏梭菌、副鸡嗜血杆菌、巴氏杆菌从全国多省市肉鸡、蛋鸡养殖场病死鸡肝脏、肠道分离得到,鸭疫里默氏菌由山东某鸭场分离得到。其中,ATCC25922、ATCC25923、CVCC533和CVCC536购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。
结果分析:
根据表3数据可以看出,采用120株不同来源的致病菌作为本实验的待检指示菌,对于乳酸菌素的抑菌活性来说,本申请的乳酸乳球菌5019乳酸菌素对20株葡萄球菌的裂解率为100%,对20株沙门氏菌的裂解率为100%,对20株大肠杆菌的裂解率为100%,对20株副溶血弧菌的裂解率为95%,对10株魏氏梭菌的裂解率为100%,对10株巴氏杆菌的裂解率为90%,对10株副鸡嗜血杆菌的裂解率为70%,对10株鸭疫里默氏菌的裂解率为100%;乳酸菌素对120株指示菌显示阳性的比例为115/120(95.8%)。此外,本申请的乳酸菌素对30株革兰氏阳性指示菌中的25株(83.3%)菌的抑菌圈直径大于25mm,说明本申请的乳酸菌素对革兰氏阳性菌具有极强的抑菌活性。本申请的乳酸菌素对90株革兰氏阴性指示菌中的72株(80%)菌的抑菌圈直径大于15mm,说明本申请的乳酸菌素对革兰氏阴性菌也具有较强的抑菌活性。
实施例四:乳酸菌素的耐温实验
(一)试剂与耗材
添加0.5%的琼脂和1%的磷酸氢二钠的半固体培养基、牛津杯。
(二)实验菌株
实验菌株选用葡萄球菌(革兰氏阳性菌)、大肠杆菌(革兰氏阴性菌),同时选取敏感性较强的藤黄微球菌作为阳性对照。
(三)实验方法
(1)为了便于热处理以及后期的应用,将实施例二制备的乳酸菌素提取液经过喷雾干燥制得乳酸菌素粉末,将乳酸菌素粉末作为本实验的样品进行热处理,处理条件为在110℃/10min、120℃/10min、130℃/2min、130℃/5min、140℃/2min、140℃/5min、150℃/2min;150℃/5min。
(2)标记下层培养基平板,按照实验样品分组划分区域,牛津杯垂直放入各区域中心,做好标记。
(3)取新鲜培养的待检菌液(终浓度为106CFU/mL)200μL,加入提前融化的添加0.5%的琼脂和1%的磷酸氢二钠的半固体培养基中,手动搓匀加入带有牛津杯的下层平板中,等待冷却凝固。
(4)将热处理后的样品5倍稀释溶解于生理盐水中,取200μL稀释样品,加入冷却凝固的牛津杯双层平板中,4℃预扩散3.5h,37℃过夜培养12h。统计抑菌圈直径,结果见表4以及表5。
表4高温(110℃/120℃)处理后抑菌圈直径(mm)
注:上述菌株均由全国多地猪、鸡养殖场患病畜禽病灶处分离得到。
表5高温(130℃、140℃、150℃)处理后抑菌圈直径(mm)
注:DB398和DB400为葡萄球菌,由青岛某猪养殖场猪渗出性皮炎病灶处分离得到。
结果分析:
根据表4、表5数据以及图4-图5可以看出,本申请的乳酸菌素在经过110℃、120℃处理10min后仍有明显的抑菌作用,抑菌圈直径相比于乳酸菌素原粉末稍有下降;在经过150℃/5min后,菌圈直径相比于乳酸菌素原粉末稍有下降,但并不会明显影响其效价,说明本申请的乳酸乳球菌5019产生的乳酸菌素具有优异的耐高温的特性,该高温条件已经远超出饲料生产的高温条件,因此本申请中的乳酸菌素可以开发作为饲料添加剂使用。
实施例五:乳酸菌素的体内抑菌实验
(一)菌株与实验动物
检验菌株为沙门氏菌标准菌株CVCC533,购自中国兽医药品检查所,实验动物为普通肉鸡雏60羽,每组10羽,共6组。
(二)乳酸菌素体内抑菌实验
本实验设置空白对照组、攻毒对照组、(空白对照+乳酸菌素)组以及其他不同效价的乳酸菌素实验组,具体分组见表6。经口灌服攻毒剂量为2×108CFU/羽,0.2mL/羽,攻毒后0.5h每羽灌服0.2mL乳酸菌素溶液。
表6乳酸菌素体内抑菌实验分组及处理信息
处理后观察临床症状,以无菌饲料和水饲喂,7天后剖检各组鸡,观察肝脏病变,记录病灶数并依据表7评分标准进行评分。同时检测肝脏载菌量,分析乳酸菌素在体内杀菌效果,以判断乳酸菌素防止沙门氏菌的水平传播作用。
表7肝脏病变评分标准
(三)肝脏病变结果统计
肝脏病变评分结果如图6,每羽鸡的肝脏载菌量检测结果如表8和图7所示。
表8肝脏平均载菌量
结合图6-图7以及表8数据可以看出,使用乳酸菌素后,鸡只肝脏病变情况较攻毒组有所改善,且与攻毒对照组相比,加入乳酸菌素原液试验组肝脏平均载菌量降低了87.38%,乳酸菌素10倍稀释试验组降低76.07%,乳酸菌素100倍稀释试验组降低了86.08%。空白加乳酸菌素原液后,肝脏基本没有菌生长,仅为攻毒组细菌含量的2.03%,且比空白对照组菌含量低4.71%,说明乳酸菌素能有效抑制鸡体内的沙门氏菌定殖,阻止其水平转移。
综上,各实验组均能够显著降低鸡肝脏沙门氏菌载菌量(P<0.05)。说明本申请的乳酸菌素能够有效抑制沙门氏菌在鸡体内的定殖与水平传播,可以为养殖场的饲养环境提供预防性保护,降低因沙门氏菌污染而导致的经济损失,提高养殖场经济价值。
实施例六:乳酸菌素预防细菌性疾病实验
(一)菌株与实验动物
检验菌株为大肠杆菌D18和魏氏梭菌999,其分别由养殖场病死鸡只肝脏及肠道分离而来;实验动物为普通AA肉鸡200羽,每组50羽,共4组。
(二)乳酸菌素预防细菌性传染病实验
本实验设置空白对照组、攻毒组、乳酸菌素高剂量组以及乳酸菌素低剂量组,具体分组见表9。按照分组样品处理要求进行拌料,在3日龄时按分组饲喂混合乳酸菌素的饲料和正常饲料,在14日龄时,攻毒组、乳酸菌素高剂量组、乳酸菌素低剂量组,经口灌服攻毒剂量为2×108CFU/羽,1.5mL/羽,空白对照组经口灌服NB培养基,1.5mL/羽。
表9乳酸菌素预防性试验分组及处理信息
攻毒后观察临床症状,出现腹泻、糊肛等异常情况,即为发病症状,每天记录发病动物数量及死亡数量,计算发病率和死亡率,将结果记录于表10。
表10肉鸡发病情况统计表
分组 | 处理方法 | 发病率 | 死亡率 |
1 | 乳酸菌素高剂量组 | 6% | 0 |
2 | 乳酸菌素低剂量组 | 4% | 0 |
3 | 攻毒对照组 | 16% | 12% |
4 | 空白对照组 | 2% | 0 |
根据表10数据可以看出,与攻毒对照组相比,乳酸菌素高剂量组与低剂量组的发病率分别降低了10%和12%,而死亡率方面,攻毒对照组为12%,其余各组为0。说明在饲料中加入乳酸菌素饲喂动物后,可以起到预防细菌传染的作用,在攻毒后可降低鸡群的发病率和死亡率,从而起到有效的保护作用。
实施例七:乳酸菌素作为饲料添加剂的应用研究
(一)实验动物与分组设置
实验动物为AA品种肉鸡雏240羽,每组60羽,共4组,每组3个重复,每个重复20羽。分组设置以及饲喂方式如表11所示。
表11乳酸菌素作为饲料添加剂的应用研究分组
(二)实验方法
按照各组添加剂量,将乳酸菌素粉末均匀拌料,饲喂期间自由采食。
实验分为2个阶段,第一阶段1~21d饲喂雏鸡饲料,第二阶段22~42d饲喂成鸡料,整个饲养周期为6周。每周对每组肉鸡空腹称重,每天记录每组的耗料量,计算平均日增重、平均采食量,同时记录实验动物健康和死亡情况。
6周后每组称重,对比增重,计算料肉比。同时随机选取10羽鸡采血,制备血清,检测IgA、IgG、IgM含量,以及SOD、MDA含量,对比各组免疫因子的水平与抗氧化水平。
(三)实验结果将乳酸菌素拌料饲喂进行6周后,统计各组肉鸡增重及采食量数据,经统计分析,当乳酸菌素添加量为50ppm时,试验组的平均日增重、平均日采食量,料肉比能够与对照组产生显著差异(p<0.05)。平均日增重对比图、平均日采食量对比图、料肉比对比图见图8~10。说明乳酸菌素能够有效促进肉鸡的生长性能,可作为饲料添加剂应用于禽类养殖。
试剂盒检测IgA、IgG、IgM含量,抗体含量对比图见图11~13,以及SOD、MDA含量对比图见图14、15。由上图可知,添加乳酸菌素实验组的平均抗体水平显著高于空白对照组,其中以IgM升高最为显著;且添加乳酸菌素后,动物体抗氧化水平明显提高。
以上结果说明本申请中的乳酸菌素能够有效促生长、调节动物机体免疫水平和抗氧化水平,可以作为饲料添加剂应用于畜禽养殖,提高畜禽的养殖报酬。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释,其并不是对本申请的限制,本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改,但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种乳酸菌素,其特征在于:所述乳酸菌素由乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)经发酵产生,所述菌株被命名为乳酸乳球菌5019,于2021年01月13日被保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址:中国,北京,保藏编号为CGMCC NO.21607。
2.一种如权利要求1所述的乳酸菌素,其特征在于,所述乳酸菌素的抑菌谱为葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、巴氏杆菌、副鸡嗜血杆菌、副溶血弧菌、鸭疫里默氏菌。
3.一种药物制剂,其特征在于:包含如权利要求1所述的乳酸菌素。
4.权利要求1所述的乳酸菌素的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
S1、乳酸菌种子的准备:将乳酸乳球菌5019接种于培养基中,静置培育,使其增殖活化,得到乳酸乳球菌种子液;
S2、乳酸菌放大培养:将乳酸乳球菌种子液接种于培养基中,静置培育,使其增殖活化,得到乳酸乳球菌发酵液;
S3、乳酸菌素的制备:将乳酸乳球菌发酵液用浓盐酸调节pH为2-3后,进行灭活处理;然后取上清液即为乳酸菌素。
5.根据权利要求4所述的一种乳酸菌素的制备方法,其特征在于:所述S3中,灭活处理的条件为:在100-110℃的温度下加热3-10min。
6.根据权利要求4所述的一种乳酸菌素的制备方法,其特征在于:所述S3中,采用离心的方法得到上清液,离心条件为:在8000-12000rpm的转速下离心3-8min。
7.权利要求1所述的乳酸菌素的应用,其特征在于:所述乳酸菌素用于防控畜禽细菌感染。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述乳酸菌素在畜禽体内裂解细菌、预防细菌感染以及制备畜禽饲料中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用,其特征在于,所述乳酸菌素在畜禽饲料中的添加量为50-200ppm。
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CN202211221529.7A CN115925832A (zh) | 2022-09-30 | 2022-09-30 | 一种乳酸菌素及其在防控畜禽细菌感染的应用 |
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2022
- 2022-09-30 CN CN202211221529.7A patent/CN115925832A/zh active Pending
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CN115386523A (zh) * | 2022-09-30 | 2022-11-25 | 北京诺安百汇医药科技有限公司 | 一株乳酸乳球菌及其在抗幽门螺杆菌感染的应用 |
CN115386523B (zh) * | 2022-09-30 | 2024-01-30 | 北京诺安百汇医药科技有限公司 | 一株乳酸乳球菌及其在抗幽门螺杆菌感染的应用 |
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