CN115894675B - 新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新冠病毒SARS‑CoV‑2核衣壳蛋白单克隆抗体，其重链可变区包含具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH1、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH3；轻链可变区包含具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL1、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL2和SEQ IDNO:8所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL3。该抗体可用于新冠病毒SARS‑CoV‑2检测技术和试剂盒的开发，用以有效提高病毒检测速度和检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测或免疫学技术领域，尤其涉及一种新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体及其应用。
背景技术
新型冠状病毒SARS-CoV-2,属于冠状病毒科(Corornaviridae)，正冠状病毒亚科(Orthocoronavirinae)的β冠状病毒属(Coronavirus)，与严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征相关冠状病毒(MER-CoV)近缘。该病毒经飞沫、接触等途径传播，潜伏期患者及患者在病程早期，症状轻微的时候就有着极强的传染性，危害性极大。
SARS-CoV-2病毒直径为75-160纳米，基因组为连续线性单链RNA，其基因组依次编码核衣壳蛋白(nucleoprotein，又称N蛋白)、包膜蛋白(envelope protein)、膜蛋白(membrane protein)及棘突蛋白(spike protein，又称S蛋白)，其中N蛋白在冠状病毒中含量丰富，是一种高度免疫原性蛋白，参与基因组复制和细胞信号通路调节。而棘突蛋白的主要功能为决定病毒的宿主范围和特异性，与宿主细胞细胞膜受体结合并融合，实现对细胞的感染。棘突蛋白与人类受体血管紧张素转化酶II(ACE2)结合，实现病毒与细胞的融合。因此S蛋白的人源单克隆抗体理论上可以阻断病毒跟细胞的结合，具有减弱病毒传染的能力，可以作为抗体药物用于治疗新冠病毒患者。而N蛋白因其含量高，在病毒的检测中具有重要作用。
在获得初始病毒基因组信息后，逆转录定量聚合酶链式反应(RT-PCR)技术首次被用作SARS-CoV-2诊断测试的标准。RT-PCR的高灵敏度高，可以检测到每毫升中含有10个拷贝的SARS-CoV-2RNA。但基于RT-PCR的诊断测试需要昂贵的实时荧光定量PCR仪和大于60min的反应时间，这对于快速测试来说并不理想。用于检测SARS-CoV-2病毒的另外一个技术，逆转录环介导的等温扩增(RT-LAMP)测定消除了对专用仪器的需要，但仍需要30min的反应时间，其灵敏度也比RT-PCR低。除了靶向病毒RNA的检测技术外，SARS-CoV-2抗原免疫测定为公众提供了在早期感染阶段进行快速检测的手段。用于检测SARS-CoV-2核衣壳蛋白(N蛋白)的侧向流动免疫胶体金分析(LFA)在这场持续的新冠病毒大流行中被广泛使用，它向公众展示了抗原免疫检测作为非处方自测的便利性。标准LFA需要10-20min可以得出结果，报告的针对N蛋白的视觉检测限在不使用免疫层析读取器的情况下从数百pM到个位数nM水平，使用专用阅读器可将检测灵敏度提高至14-65pM(0.65-3ng/mL)。对于胶体金快速检测及酶联免疫检测来说，高亲和力的抗体成为检测成功与否的关键。
发明内容
(一)要解决的技术问题
鉴于现有技术的上述缺点、不足，本发明提供一种新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体及其在检测新冠病毒SARS-CoV-2中的应用。
(二)技术方案
为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
一方面，本发明提供一种新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体，其包括：重链可变区和轻链可变区；
所述重链可变区包含具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH1、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列的重链互补决定区CDRH3；
所述轻链可变区包含具有SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL1、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL2和SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL3。
根据本发明的较佳实施例，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:1至少约90％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区具有与SEQ IDNO:5至少约90％相同的氨基酸序列。
根据本发明的较佳实施例，所述重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区具有SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
第二方面，本发明提供一种核酸分子，所述核酸分子包括编码上述任一实施例所述的抗体的核苷酸序列。
第三方面，本发明提供一种新冠病毒SARS-CoV-2检测试剂盒，其包括上述实施例所述的单克隆抗体。
第四方面，本发明涉及上述任一实施例所述的抗体在制备检测新冠病毒SARS-CoV-2产品中的应用。
优选地，所述检测方法为胶体金快速检测或酶联免疫检测。
优选地，所述产品为检测新冠病毒SARS-CoV-2的试剂盒、抗原检测卡、抗原检测试纸、芯片或探针。
(三)有益效果
本发明的有益效果是：
本发明提供的抗体与新冠病毒SARS-CoV-2的N蛋白呈特异性且高亲和力结合作用，而新冠病毒SARS-CoV-2的N蛋白在冠状病毒中含量丰富，具有高度免疫原性，因此该抗体可用于检测新冠病毒SARS-CoV-2，检测方法为各种SARS-CoV-2抗原免疫测定方法，包括胶体金快速检测或酶联免疫等，可以有效提高病毒检测速度和检测灵敏度。实验证明，使用本发明的N蛋白抗体进行酶联免疫吸附试验时，与新冠病毒N蛋白能够特异性结合且具有高亲和性，而使用该抗体基于酶联免疫吸附试验检测N蛋白时，吸光度与蛋白质浓度具有很好的正相关线性关系(R2＝0.9954)，说明本发明的抗体确实具有很好的应用前景，可用于新冠病毒N蛋白的快速检测及试剂盒的组装。
附图说明
图1为实施例2中淘筛各步所的多克隆抗体酶联免疫吸附试验结果；
图2为实施例3中基于酶联免疫吸附试验的阳性单克隆抗体的鉴定结果；
图3为实施例4中NPF7 IgG全长抗体的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果；
图4为实施例5中酶联免疫吸附试验检测NPF7全长抗体的抗原特异性的原理及方法图；
图5为实施例5中酶联免疫吸附试验检测NPF7全长抗体的抗原特异性的结果图；
图6为实施例6中基于NPF7抗体的酶联免疫吸附试验检测N蛋白的原理及方法图；
图7为实施例6中基于NPF7抗体的酶联免疫吸附试验检测N蛋白的结果。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，下面结合附图，通过具体实施方式，对本发明作详细描述。
抗体是一个糖蛋白分子，在哺乳动物免疫系统中具有重要作用。抗体分子的一个基本构造由两条重链(Heavy chain)和两条轻链(Light chain)组成，其中重链又分为可变区(Variable region of heavy chain,VH)和三个恒定区(Constant region of heavychain；CH1，CH2，CH3)，而轻链则由一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)组成。可变区具有跟抗原结合的功能，而抗体的恒定区则因抗体的种属及亚型不同而不同，因此可变区决定了抗体的结合性能。抗体的可变区又分为4个框架区(Framework；FR1,FR2,FR3,FR4)和三个互补决定区(Complementarity-determining regions；CDR1,CDR2,CDR3)，即抗体重链可变区的结构为HFR1-CDRH1-HFR2-CDRH2-HFR3-CDRH3-HFR4,抗体轻链可变区的结构为LFR1-CDRL1-LFR2-CDRL2-LFR3-CDRL3-LFR4。互补决定区又称为高可变区，互补决定区是直接与抗原的表位相结合的功能区。
抗体的噬菌体展示技术是把外源的抗体基因插入噬菌体编码外壳蛋白的基因中，使外源抗体基因对应的表达产物融合在噬菌体的外壳蛋白中形成融合蛋白，呈现在噬菌体表面。噬菌体展示技术的显著优点是:建立了基因型和表型之间直接的物理联系，从而使筛选简便高效。本发明从合成抗体库Tomlinson J噬菌体展示抗体库中筛选到了一株能够跟新冠病毒SARS-CoV-2的N蛋白结合的单克隆抗体，并对该抗体的特性及该抗体在病毒检测中的应用进行了研究。以下是本发明获得该抗体的详细说明。
实施例1
本实施例为扩增噬菌体展示抗体文库的方法：将冷冻保存的0.5mL噬菌体展示抗体库大肠杆菌TG-1冻存液融化后，加入到25mL含有100μg/mL氨苄青霉素及1％葡萄糖2YT培养基(1.6％Tryptone，1％Yeast Extract，0.5％NaCl；2YTAG)中培养至OD600为0.4，加入109cfu辅助噬菌体KM13(购自NEB)，37℃感染1h后，3000g离心30min，弃上清，用含有100μg/mL氨苄青霉素、50μg/mL卡那霉素及0.1％葡萄糖的2YT培养基(2YTAKG)50mL悬浮菌体，30℃，250rpm的速度摇菌16h，次日以5000×g离心力，30min离心培养液，分离回收上清40mL，在上清液中加入10mL的PEG/NaCl溶液，混合均匀后在冰上放置30min，在5000×g的速度下离心30min，弃上清，用2mL灭菌PBS溶液将沉淀溶解，作为噬菌体展示抗体库溶液,利用大肠杆菌对噬菌体展示抗体库进行滴定，所制备抗体库的浓度为1013cfu/mL。
实施例2
本实施例为利用实施例1制备的抗体库，对SARS-CoV-2病毒N蛋白单克隆抗体进行淘筛，方法如下：
在96孔微孔板的16个孔内分别加入100μL含有10μg/mL重组SARS-CoV-2病毒N蛋白的PBS溶液，4℃过夜孵育，次日弃抗原溶液，每孔加入200μL含有2％脱脂奶粉的PBS溶液，25℃孵育2h，对酶标板进行封闭，用PBST对酶标板洗涤3次后，每孔加入100μL的原始噬菌体溶液(R0；每孔含有109cfu的噬菌体)，室温下孵育2h，用PBST洗涤后，每孔加入100μL的胰蛋白酶将结合到病毒N蛋白的噬菌体洗脱。
培养大肠杆菌TG-1至OD600为0.4后，取4mL大肠杆菌菌液，将500μL溶出的噬菌体溶液加入到菌液中，37℃感染30min，5000×g离心20min，弃上清，用2YTAKG培养基(A:氨苄青霉素，100μg/ml；K:卡那霉素，50μg/ml；G:葡萄糖，2％)悬浮菌体，30℃，250rpm摇菌16h；次日以5000×g，30min离心培养液，分离回收上清，在上清溶液中加入1/5容积的PEG/NaCl溶液，混合均匀后在冰上放置30min，5000×g，30min离心，弃上清，加入200μL的灭菌PBS溶液，作为第一次富集后的噬菌体溶液(R1)；重复以上步骤，分别获得噬菌体溶液R2和R3；执行酶联免疫吸附试验，验证淘筛过程中获得的噬菌体展示抗体库新冠病毒N蛋白的结合特异性及结合性能。
酶联免疫吸附试验的结果如图1所示，比较噬菌体淘筛过程中获得的噬菌体库R0(原始噬菌体溶液)、R1、R2及R3跟N蛋白的结合能力时发现，第三轮淘筛时所得噬菌体溶液R3与N蛋白的结合能力显著增加，而对BSA(牛血清白蛋白)的结合性能非常微弱且没有变化。这说明，噬菌体展示抗体库R3中抗新冠病毒N蛋白的抗体得以富集。
实施例3
本发明在噬菌体展示抗体库R3中对N蛋白单克隆抗体的进一步筛选和分离，方法如下：培养大肠杆菌TG-1至OD600为0.4，取100μL噬菌体溶液R3，加到200μL的大肠杆菌菌液中，混合均匀后，37℃孵育30min后，将菌液涂布到含有100μg/mL氨卞青霉素、50μg/mL卡那霉素及1％葡萄糖的2YT培养基平板上，37℃过夜培养；次日挑96个菌落一对一地接种到含有2YTAG培养基的96孔的培养板孔内，37℃培养至OD600为0.4,每个孔内加入适量的KM13噬菌体，感染后5000×g离心20min，去除上清，每孔加入200μL 2YTAKG培养基,悬浮菌体，30℃，250rpm的速度培养16h；次日以5000×g，30min离心培养液，分离回收上清，执行酶联免疫吸附试验，验证各单克隆抗体跟N蛋白的结合特异性及结合性能。
酶联免疫吸附试验的操作如下：在96孔酶标板内加入100μL含有重组病毒N蛋白(1μg/mL)的PBS溶液，4℃过夜，次日弃抗原溶液，加入200μL含有2％脱脂奶粉的溶液，在25℃下孵育2h，对酶标板进行封闭。用含有0.1％吐温20的PBS溶液洗涤酶标板3次，加入噬菌体溶液，25℃孵育1h，用PBST溶液洗涤酶标板，加入辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)标记的小鼠抗M13抗体，孵育1h后，用PBST洗板，加入HRP底物四甲基联苯胺溶液(用pH6.0的乙酸钠溶液配制，含1/10000稀释的30％H2O2)，显色后用酶标仪测450nm的吸光度，绘制柱状图，比较利用各克隆制作的噬菌体抗体与N蛋白及牛血清蛋白的结合性能。实验结果如图2显示，多个克隆显示出了与N蛋白结合的特异性。
以图2中多个克隆为候选抗体，抽取质粒并依次进行基因测序，获得1株阳性抗体F7，并将该抗体命名为NPF7，通过与抗体基因库中登录的抗体序列进行比对后，确认NPF7抗体基因为新的抗体。
抗体的氨基酸序列详细情况如下表：
NPF7抗体的重链可变区的三个互补决定区依次为SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的重链互补决定区CDRH1、SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的重链互补决定区CDRH2和SEQ IDNO:4所示氨基酸序列的CDRH3；而重链可变区NPF7-VH的全序列为SEQ ID NO:1所示氨基酸序列，其中带下划线的部分对应三个互补决定区，其余部分为框架区。
NPF7抗体的轻链可变区的三个互补决定区依次为SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL1、SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL2和SEQ IDNO:8所示氨基酸序列的CDRL3；而轻链可变区NPF7-VL的全序列为SEQ ID NO:2所示氨基酸序列，其中带下划线的部分对应三个互补决定区，其余部分为框架区。
由于单克隆抗体的特异性结合能力主要是由其重链可变区的互补决定区以及轻链可变区的互补决定区所决定的，因此可合理推定当某抗体的重链可变区具有与SEQ IDNO:1至少约90％相同的氨基酸序列且具有SEQ ID NO:2-4所示的三个重链互补决定区、同时轻链可变区具有与SEQ ID NO:5至少约90％相同的氨基酸序列且具有SEQ ID NO:6-8所示的三个轻链互补决定区时，该抗体也具有基本相似的N蛋白抗体作用。
实施例4
本实施例根据前面获得的NPF7抗体的氨基酸序列，构建用于表达重链的载体以及用于表达轻链的载体，通过共转染HEK293F细胞并培养使其表达NPF7抗体后，对抗体进行纯化。
具体方法如下：以淘筛所得的含有NPF7抗体基因的质粒为模板，用引物InfuEcoRINPF7VHbackward和InfuNheIXhoINPF7Vhforward为引物，执行PCR扩增NPF7抗体重链可变区基因。
其中，InfuEcoRINPF7Vhbackward的序列为：
gtcttgcacttgtcacgaattcggaggtgcagctgttggagt；
InfuNheIXhoINPF7Vhforward的序列为：
gatgggcccttggtgctagcgctcgagacggtgaccagggtt。
PCR使用KOD-Plus-Neo酶(日本东洋纺织生物科技有限公司)，条件为94℃变性2min后，执行30次循环反应，每个循环包含94℃变性2min，55℃退火30s，68℃扩增1min。PCR产物经纯化后与使用限制内切酶EcoRI和NheI处理的表达载体pDongIgG1HChn(该表达载体由康复大学抗体药物实验室提供，载体内含有抗体重链恒定区，将抗体重链可变区克隆至载体后可表达抗体的重链)混合，使用Infusion酶37℃下反应2h。铺板过夜培养后，执行菌落PCR筛选含有抗体基因的菌落，培养后测序鉴定，构建成功了用于表达重链的载体，命名为pDongIgG1HChn-NPF7。
以淘筛所得含有NPF7抗体基因的质粒为模板，以InfuEcoRINPF7Vlbackward和OverlapBsiWINPF7VLforward为引物，使用KOD-Plus-Neo DNA聚合酶，执行PCR扩增NPF7抗体轻链可变区基因。
其中，InfuEcoRINPF7Vlbackward的序列为：
tcttgcacttgtcacgaattcagacatccagatgaccca；
OverlapBsiWINPF7VLforward的序列为：
gcagccaccgtacgtttgatttccaccttggtccctt。
以pFUSE2-CLIg-hk(InvivoGen)为模板，使用引物OverlapCKBackward(序列为：aaatcaaacgtacggtggctgcaccatctgt)和InfusionNheICKForward(序列为：tcatgtcgagctagctccctctaacactctcccct)和KOD-Plus-Neo聚合酶Ck基因，通过执行overlap PCR将VL与CK连接。使用EcoRI/NheI处理表达载体pDongIgG1LChn(该载体由康复大学抗体药物实验室提供，主要用于基于哺乳动物细胞的抗体轻链的表达),采用Infusion法将VL-Ck基因克隆至该载体，至此成功构建了表达NPF7轻链的载体，命名为pDongIgG1LChn-NPF7。
将冻存的HEK293F细胞融化后，加入到5mL无血清培养基，接种密度为0.3x106cells/mL，在37℃、8％CO2培养箱中以120rpm的速度震荡培养，细胞密度3x106cells/mL时进行传代。细胞处于对数生长期，用无血清培养基将细胞密度调整为1.5x106cells/mL，震荡培养2h。将表达抗体重链和轻链的载体各10μg、Lipo8000转染试剂40μL加入到1mL无血清培养基中，用移液器轻轻吹打混匀，37℃静置15min。将转染试剂-DNA混合物匀速滴加到293F细胞培养液中(20mL)，边加边轻轻摇动培养瓶，使转染试剂-DNA混合物均匀分散到细胞培养液中,继续培养细胞24-48h，收集培养液，1000rpm离心5min，上清即为含有NPF7全长抗体IgG的溶液。
将Protein A磁珠摇匀，取100μL置于干净的1.5mL离心管中，用磁力架收集磁珠、弃上清，在离心管中加入1mL纯化缓冲液，将离心管颠倒几次混匀，用磁力架收集磁珠、弃上清，重复2次。将Protein A磁珠重悬于100μL纯化缓冲液，与含有目标IgG的样品混合、混匀。将装有混合液体的离心管置于旋转器上，室温下旋转30-60min；用磁力架收集磁珠、弃上清，向离心管中加入1mL纯化缓冲液并混匀，用磁力架收集磁珠、弃上清，重复洗涤3次。向离心管中加入100μL洗脱液并混匀，室温孵育5min，期间颠倒混匀数次；用磁力架收集磁珠，将含有洗脱IgG的上清转移到新的离心管中，取10μL洗脱液采用十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行分析。
实验结果：电泳结果如图3所示，其中泳道M为蛋白Marker(北京索莱宝生物技术有限公司)，泳道N-R为收集的抗体在非还原条件下的分离结果，结果显示在150kDa处有一条清晰的条带，为抗体NPF7 IgG。泳道R为收集的抗体在还原条件下的分离结果，可以观察到两条清晰的条带，在50kDa处有一条清晰的条带，为抗体NPF7 IgG的重链，在25kDa处的条带为抗体NPF7 IgG的轻链。该结果表明，根据前面确定的抗体序列所构建的质粒载体转染293F细胞后，可使抗体NPF7 IgG得以成功表达，且能够通过磁珠法进行纯化。
实施例5
本实施例采用酶联免疫吸附试验检测NPF7全长抗体的抗原特异性，试验原理和方法如图4所示。分别在酶标板上包被N蛋白(2μg/mL，诺维赞生物技术有限公司)及BSA(2μg/mL)，4℃下孵育过夜，次日将包被溶液倒掉，加入溶解于PBS的2％的脱脂奶粉，对酶标板进行封闭。封闭2h后洗板，每个孔内先加入纯化的NPF7-IgG抗体溶液，室温下孵育1h后，再次洗涤酶标板，然后加入HRP标记的兔抗人抗体溶液(上海生工)，室温下浮育1h，洗板后加入底物显色，测450nm波长下的吸光度。
实验结果如图5所示，NPF7抗体与实验组(N蛋白质)反应后显色，其吸光度为1.3,而对照组(牛血清蛋白BSA)在450nm处的吸光度仅为0.05,吸光度存在显著差异，由此证明NPF7抗体能够与新冠病毒N蛋白特异性结合，且与N蛋白表现出极高的亲和力。
实施例6
本实施例是利用NPF7抗体进行基于酶联免疫吸附试验的N蛋白检测，试验原理及方法如图6所示。分别在酶标板上包被鼠源抗N蛋白抗体F1(康复大学抗体药物实验室提供)，4℃下孵育过夜，次日将包被溶液倒掉，加入溶解于PBS的2％的脱脂奶粉，对酶标板进行封闭。封闭2h后洗板，实验组的每个孔内先加入不同浓度的N蛋白与纯化的NPF7抗体溶液，室温下孵育1h后，再次洗涤酶标板，洗板后加入HRP标记的兔抗人抗体(上海生工)，室温下浮1h，洗板后加入底物显色，测450nm时的吸光度。
实验结果如图7所示，随着加入检测溶液的SARS-CoV-2N蛋白浓度的增加，吸光度也逐渐增加，获得一条R2为0.9954的标准曲线，该标准曲线表明N蛋白的浓度与吸光度呈现正向线性相关性。由此说明，本发明的单克隆抗体NPF7可用于新冠病毒N蛋白的检测及检测试剂盒的组装。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (7)
1.一种新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体，其特征在于，其包括：重链可变区和轻链可变区；
所述重链可变区具有如SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的重链互补决定区CDRH1、如SEQID NO:3所示氨基酸序列的重链互补决定区CDRH2以及如SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的重链互补决定区CDRH3；
所述轻链可变区具有如SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL1、如SEQID NO:7所示氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL2以及如SEQ ID NO:8所示氨基酸序列的轻链互补决定区CDRL3。
2.根据权利要求1所述的新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区具有与SEQ ID NO:1至少90％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区具有与SEQ ID NO:5至少90％相同的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区具有SEQ IDNO:5所示的氨基酸序列。
4.一种核酸分子，所述核酸分子包括编码权利要求1-3任一所述的新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体的核苷酸序列。
5.一种新冠病毒SARS-CoV-2检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-3任一所述的新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体。
6.权利要求1-3任一所述的新冠病毒SARS-CoV-2核衣壳蛋白单克隆抗体在制备检测新冠病毒SARS-CoV-2产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述产品为检测新冠病毒SARS-CoV-2的试剂盒、抗原检测卡、抗原检测试纸、芯片或探针。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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