CN115887562B - 一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物：人参4‑10份、肉苁蓉6‑12份、丹参4‑10份、远志6‑12份、石菖蒲4‑10份、生地黄6‑12份和茯苓8‑16份。制备方法：(1)称取；(2)醇提；(3)挥发油的提取和包合；(4)水提；(5)醇沉；(6)浓缩干燥；(7)成品制备。本发明结合药材自身特性，将各有效成分进行了充分提取。利用体外生物效应优选处方和工艺，我们发明了一种有效治疗阿尔茨海默症的药物。

Description

一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物及其制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物制备技术领域，更具体的说是涉及一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物及其制备方法。
背景技术
阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease，AD)是一种以认知功能退化、渐进性记忆障碍为主要特征，伴随着社会行为能力与日常生活能力严重下降的一种中枢神经系统退行性疾病。临床表现为记忆减退、语言与情感障碍、思维迟钝以及人格改变等。该病起病隐匿，病程缓慢，发病率与年龄增长相关，已成为当代社会严重危害人类健康特别是老年人生存质量的一项重大疾病。
中医里没有阿尔茨海默症的病名，多归属于“痴呆”、“健忘”、“呆病”范畴。从中医角度分析，阿尔茨海默症的病因病机为正虚标实，以脏虚精亏为之本，痰瘀阻窍为其标，故补虚治标是治疗阿尔茨海默症的基础。中医辨证论治常将其心、肝、脾、肾相联系，认为气血亏虚，则神明失养；淤血阻窍，则脑脉痹阻；痰浊上蒙，则清窍被阻；肾精不足，则髓海失养。但AD发病机制尚不明确，上市的药物也很少，均以改善AD临床症状为主。
目前，临床上治疗AD的生物药物分为五类：第一类抗胆碱酯酶药物：加兰他敏、多奈哌齐(安理申)、石杉碱甲和重酒石酸卡巴拉汀；第二类兴奋性氨基酸拮抗剂：美金刚；第三类抗β淀粉样蛋白：阿杜单抗；第四类M1受体拮抗剂、抗氧化剂；第五类肠道菌群、神经炎症：GV971。但是，这些药物也只是减缓病情的发展，并不能根治AD，而用于治疗AD的中成药还未上市。
因此，如何提供一种用于治疗AD的中药复方提取物及其制备方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物及其制备方法，以解决现有技术中的不足。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物，包括以下重量份的原料：人参4-10份、肉苁蓉6-12份、丹参4-10份、远志6-12份、石菖蒲4-10份、生地黄6-12份和茯苓8-16份。
优选为：人参6份、肉苁蓉10份、丹参6份、远志10份、石菖蒲6份、生地黄10份和茯苓12份。
本发明中药复方提取物的配伍原则：以生地黄、肉苁蓉、远志补肾精之本，以人参、茯苓，健脾气，以菖蒲祛痰开窍，以丹参活血通络、凉血，全方配伍精当，共奏益气健脾、补肾填髓、活血化瘀之功。
《神农本草经》是现存最早的中药学专著，记载着中国4000年前就已经形成的人参药用的精髓：“人参，味甘微寒，主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，除邪气，明目，开心益智。久服，轻身延年”。
肉苁蓉在我国已有两千多年的使用历史，现代药理学研究表明，肉苁蓉除能补肾壮阳外，更兼有抗衰老、增强记忆力、提高免疫力等多种功能，而在抗老防衰类方剂中仅次于人参。
丹参首载于《神农本草经》，被列为上品药材，历代本草均有收载。现代药理研究表明，丹参可以用于多种疾病的治疗，包括脑血管疾病，冠心病、帕金森、阿尔茨海默症、肾虚、肝硬化，骨质疏松和癌症等。
远志配伍石菖蒲常用在中医治疗老年痴呆的中药方剂基本结构中，药对中主要药效成分为远志中所含的远志皂苷及石菖蒲的挥发油类成分。远志与石菖蒲属相须为用，石菖蒲善宜祛痰，开窍醒神；远志长于祛痰开窍，安神益智。石菖蒲偏辛以宜祛痰湿，远志偏苦降以泄上逆之痰窒。二药伍用，通心窍、交心肾，益肾健脑聪智，开窍启闭宁神之力增强。
《神农本草经》载地黄“味甘，寒。主折跌绝筋，伤中，逐血痹，填骨髓，长肌肉，作汤，除寒热积聚，除痹，生者尤良。久服，轻身、不老”。
茯苓也具有益智作用：《本草纲目》记载：茯苓“开心益智，止健忘”的功效。《证类本草》记载：茯苓能“长阴益气力，保神守中，久服安魂养神，不饥延年”。
以上几味中药，在治疗上具有多途径、多靶点和多层次的特点。
治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量份数称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入质量浓度为50％-80％的乙醇并进行加热回流提取1-3h，每次1-3次，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液浓缩，得到醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加水浸泡1-4h，然后进行挥发油提取1-10h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，球磨或胶体磨，减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入水并进行加热回流提取1-3h，每次1-3次，收集水提药液，加上石菖蒲提取液一起浓缩，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇进行醇沉，冷藏，离心，取上清液，再次浓缩，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)浓缩干燥
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩，减压干燥或喷雾干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，加辅料制成制剂，即得治疗阿尔兹海默症的药物；
制剂类型为丸剂、片剂、颗粒剂、汤剂等相关中药类型制剂。
进一步，上述步骤(2)中，乙醇的质量浓度为60％；加热回流提取的次数为2次，每次乙醇的加入量均为8倍重量，每次时间为2h；浓缩的温度为55-75℃，浓缩至浓缩液比重为1.05-1.10/50℃。
进一步，上述步骤(3)中，水的加入量为8倍重量；浸泡的时间为2h；挥发油提取的时间为6h；石菖蒲挥发油和乙醇的体积比为1:1；羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨或胶体磨的时间为1h；减压干燥的温度为40℃。
进一步，上述步骤(4)中，加热回流提取的次数为2次，每次水的加入量均为6倍重量，每次时间为1h；浓缩的温度为60-90℃，浓缩至浓缩液比重为1.05-1.10/60℃。
进一步，上述步骤(5)中，乙醇加入至含醇量为60％；继续浓缩至浓缩液比重为1.05-1.10/60℃；冷藏的时间为24h。
进一步，上述步骤(6)中，继续浓缩至浓缩液比重为1.10-1.15/60℃；减压干燥的温度为40-50℃，所述喷雾干燥的加热管温度为120-130℃。
进一步，上述步骤(7)中，本发明治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的药物剂型为丸剂、片剂、颗粒剂、汤剂等相关中药类型制剂；优选为颗粒剂。具体的，取适量中药复方提取物，加入一定量的糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，得成品。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1、本发明结合药材自身特性，将各有效成分进行了充分提取。利用体外生物效应优选处方和工艺，我们发明了一种有效治疗阿尔茨海默症的药物。通过实验发现，本发明中药复方提取物对AchE有明显的抑制作用。
2、本发明利用乙酰胆碱酯酶(AchE)抑制剂体外筛选模型筛选工艺过程中各关键工艺参数。例如设计四因素三水平的正交试验，考察溶媒浓度、溶媒倍量、提取次数、提取时间对醇提部分的工艺影响。利用酶标仪检测其吸光度值并计算抑制率，通过正交试验计算，得出最优工艺参数水平。
3、本发明利用学习记忆三联(Morris水迷宫+物体识别+跳台实验)小鼠行为模型，观测中药复方提取物对其改善认知功效。
附图说明
图1为人参皂苷Rg1、Re、Rb1的色谱图；
图2为丹参酮IIA和丹酚酸B的色谱图；
图3为松果菊苷和3，6-二芥子蔗糖的色谱图；
图4为梓醇的色谱图；
图5为指纹谱图；
图6为不同提取工艺下各组AchE的抑制率(注：与本发明药物组比较，#p<0.05)；
图7为不同药材量下各组AchE的抑制率(注：与本发明药物组比较，#p<0.05)；
图8为不同组方下各组AchE的抑制率(注：与本发明药物组比较，#p<0.05)；
图9为不同药品下各组AchE的抑制率(注：与本发明药物组比较，#p<0.05)；
图10为本发明药物对小鼠物体识别行为的影响(注：与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)；
图11为本发明药物对小鼠跳台实验中潜伏期的影响(注：与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)；
图12为本发明药物对小鼠跳台实验中错误次数的影响(注：与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)
图13为本发明药物对小鼠水迷宫实验中训练期逃避潜伏期的影响；
图14为本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期逃避潜伏期的影响(与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)；
图15为本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期目标象限停留时间的影响(注：与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)；
图16为本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期目标象限路程的影响；
图17为本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期穿越平台次数的影响(注：与对照组比较，*p<0.05；与模型组比较，#p<0.05)。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中，人参为人参片，肉苁蓉为管花肉苁蓉片。
实施例1
治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物，包括以下重量的原料：人参4g、肉苁蓉12g、丹参4g、远志12g、石菖蒲4g、生地黄12g和茯苓8g；
上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入8倍重量、质量浓度为60％的乙醇并进行加热回流提取2次，每次提取2h，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液在55-75℃浓缩，得到比重为1.05/50℃的醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加8倍重量的水浸泡2h，然后进行挥发油提取6h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入等体积乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨1h后在40℃温度下进行减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入6倍重量的水并进行加热回流提取2次，每次提取1h，收集水提药液，加入石菖蒲提取液一起在60-90℃浓缩至浓缩液比重为1.05/60℃，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇至含醇量为60％进行醇沉，密闭冷藏24h，离心，取上清液，再次浓缩至浓缩液比重为1.05/60℃，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)混合
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩至浓缩液比重为1.10/60℃，在50℃下减压干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方颗粒剂。
实施例2
治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物，包括以下重量的原料：人参6g、肉苁蓉10g、丹参6g、远志10g、石菖蒲6g、生地黄10g和茯苓12g；
上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入8倍重量、质量浓度为60％的乙醇并进行加热回流提取2次，每次提取2h，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液在55-75℃温度下浓缩，得到比重为1.08/50℃的醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加8倍重量的水浸泡2h，然后进行挥发油提取6h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入等体积乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨1h后在40℃温度下进行减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入6倍重量的水并进行加热回流提取2次，每次提取1h，收集水提药液，加入石菖蒲提取液一起在60-90℃浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇至含醇量为60％进行醇沉，密闭冷藏24h，离心，取上清液，再次浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)混合
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩至浓缩液比重为1.12/60℃，在50℃下减压干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方颗粒剂。
实施例3
治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物，包括以下重量的原料：人参10g、肉苁蓉6g、丹参10g、远志6g、石菖蒲10g、生地黄6g和茯苓16g；
上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入8倍重量、质量浓度为60％的乙醇并进行加热回流提取2次，每次提取2h，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液在55-75℃浓缩，得到比重为1.10/50℃的醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加8倍重量的水浸泡2h，然后进行挥发油提取6h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入等体积乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨1h后在40℃温度下进行减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入6倍重量的水并进行加热回流提取2次，每次提取1h，收集水提药液，加入石菖蒲提取液一起在60-90℃下浓缩至浓缩液比重为1.10/60℃，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇至含醇量为60％进行醇沉，密闭冷藏24h，离心，取上清液，再次浓缩至浓缩液比重为1.10/60℃，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)混合
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩至浓缩液比重为1.15/60℃，在50℃下减压干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方颗粒剂。
实施例4
与实施例2的区别仅在于，将步骤(3)中的“球磨1h”替换为“胶体磨1h”，将步骤(6)中的“在50℃下减压干燥”替换为“在125℃下喷雾干燥”。
实施例5
与实施例2的区别仅在于，将步骤(7)替换为“将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，加入0.5％硬脂酸镁，混匀，压制成片，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方片”。
性能测试
一、质量标准
1、建立提取物的质量标准
1.1含量
人参选择人参皂苷Rg1、Re和Rb1；肉苁蓉选择松果菊苷；丹参选择丹参酮IIA和丹酚酸B；远志选择松果菊苷和3，6-二芥子酰基蔗糖；生地黄选择梓醇。
以上的含量测定均采用高效液相法，通过方法开发及方法学验证，确实了检测方法。检测谱图如图1-4所示。
1.2指纹图谱
采用高效液相法，建立指纹图谱检测条件。主要优选松果菊苷、3，6-二芥子酰基蔗糖、毛蕊花糖苷和远志口山酮III为定性成分，建立指纹图谱主要为了将来商业生产时作为快速检测提取物的质控手段之一。指纹谱图如图5所示。
二、药效
1、不同提取工艺的样品对乙酰胆碱酯酶的体外抑制作用
1.1材料
本发明药物(实施例2步骤(6)制得的混合提取物)，水提样，醇提样，乙酰胆碱酯酶(AchE，上海源叶)，石杉碱甲(HPLC≧98％，上海源叶)等。
1.2样品的制备
1.2.1水提物
将人参6g、肉苁蓉10g、丹参6g、远志10g、石菖蒲6g、生地黄10g和茯苓12g放入圆底烧瓶，加入8倍量水，提取2次，每次2h，收集提取液，将提取液浓缩至1.10-1.15/60℃，50℃下进行减压干燥得提取物，即水提样。
1.2.2醇提物
将人参6g、肉苁蓉10g、丹参6g、远志10g、石菖蒲6g、生地黄10g和茯苓12g放入圆底烧瓶，加入8倍量60％乙醇，提取2次，每次2h，收集提取液，将提取液浓缩至1.10-1.15/50℃，50℃下进行减压干燥得提取物，即醇提样。
1.2.3本发明药物
实施例2步骤(6)制得的混合提取物。
1.2.4样品浓度
体系终浓度为1mg/mL。
1.3试验方法
改良的Ellman法。基本原理是以碘化乙酰硫代胆碱(ATCI)为底物，加入AChE后，ATCI会在AChE作用下水解，生成硫代胆碱，其与DTNB反应生成2-硝基苯甲酸-5-巯基硫代胆碱和2-硝基-5-巯基苯甲酸(TNB)，且可在412nm处检测到黄色离子(TNB)的吸光度值。在测定植物样品对AChE的抑制活性中，如果植物样品对AChE有抑制作用，则会使得ATCI参加反应的量减少，导致产生的产物(硫代胆碱)减少。而产物与DTNB反应的量也会相应减少，最终导致TNB的生成减少，则吸光度值在412nm处降低；反之，吸光度值在412nm处增加。
1.4测量指标
每个复孔的吸光度值。
1.5试验结果
所得结果以均数±标准差表示，采用SPSS26.0进行统计学分析，组间采用单因素方差分析(ANOVA)，以p<0.05为差异有显著性意义。结果如表1和图6所示。
表1不同提取工艺下各组AchE的抑制率
组别 平行样1 平行样2 平行样3 均值
石杉碱甲组 34.70％ 33.50％ 32.94％ 33.7％±0.9％
本发明药物组 32.50％ 33.10％ 33.46％ 33.0％±0.5％
水提物 26.02％ 25.47％ 25.69％ 25.7％±0.3％
醇提物 22.13％ 23.10％ 22.54％ 22.6％±0.5％
1.6讨论
在胆碱能突触间，乙酰胆碱酯酶能降解乙酰胆碱，终止神经递质在突触后膜的兴奋作用，保证神经信号在生物体内的正常传递。有研究表明，AD患者的基底前脑的胆碱神经细胞缺失，AchE的活性升高，而作为神经递质的乙酰胆碱含量下降，因此针对该假说以AchE为靶点通过抑制AchE的活性是治疗AD的经典策略。
本次实验结果中，本发明药物对AchE的抑制作用明显优于水提物和醇提物，且具有显著性差异。说明本发明药物采用的工艺要优于传统的水提工艺和醇提工艺。
2、不同药材量的样品对乙酰胆碱酯酶的体外抑制作用
2.1材料
本发明药物(实施例2步骤(7)制得的中药复方颗粒剂)，样品1(实施例1步骤(7)制得的中药复方颗粒剂)，样品2(实施例3步骤(7)制得的中药复方颗粒剂)，乙酰胆碱酯酶(AchE，上海源叶)，石杉碱甲(HPLC≧98％，上海源叶)等。
2.2样品浓度
体系终浓度为1mg/mL。
2.3试验方法
改良的Ellman法。基本原理是以碘化乙酰硫代胆碱(ATCI)为底物，加入AChE后，ATCI会在AChE作用下水解，生成硫代胆碱，其与DTNB反应生成2-硝基苯甲酸-5-巯基硫代胆碱和2-硝基-5-巯基苯甲酸(TNB)，且可在412nm处检测到黄色离子(TNB)的吸光度值。在测定植物样品对AChE的抑制活性中，如果植物样品对AChE有抑制作用，则会使得ATCI参加反应的量减少，导致产生的产物(硫代胆碱)减少。而产物与DTNB反应的量也会相应减少，最终导致TNB的生成减少，则吸光度值在412nm处降低；反之，吸光度值在412nm处增加。
2.4测量指标
每个复孔的吸光度值。
2.5试验结果
所得结果以均数±标准差表示，采用SPSS26.0进行统计学分析，组间采用单因素方差分析(ANOVA)，以p<0.05为差异有显著性意义。结果如表2和图7所示。
表2不同药材量下各组AchE的抑制率
组别 平行样1 平行样2 平行样3 均值
石杉碱甲组 38.15％ 39.24％ 38.53％ 38.6％±0.6％
本发明药物组 39.11％ 39.34％ 38.47％ 39.0％±0.5％
样品1组 21.02％ 20.49％ 21.98％ 21.2％±0.8％
样品2组 29.15％ 29.72％ 30.60％ 29.8％±0.7％
2.6讨论
经过制备相同饮片，不同用量的三种样品，比较三者对AchE的抑制作用，从结果看，本发明药物对AchE的抑制作用明显优于样品1组和2组，而且这三种样品之间对AchE的抑制作用均有显著性差异，说明在不同的组方条件下，本发明药物组方优于其他组方。
3、不同组方对乙酰胆碱酯酶的体外抑制作用
3.1材料
本发明药物(实施例2步骤(6)制得的混合提取物)，样品1(自制)，样品2(自制)，样品3(自制)，乙酰胆碱酯酶(AchE，上海源叶)，石杉碱甲(HPLC≧98％，上海源叶)等。
3.2样品的制备
3.2.1本发明药物
来自实施例2步骤(6)制得的混合提取物。
3.2.2样品1
将人参60g、远志100g、石菖蒲60g、茯苓120g、生地黄100g分别按照实施例2中进行提取及制剂，得样品1。
3.2.3样品2
将人参60g、远志100g、丹参60g、石菖蒲60g、茯苓120g、生地黄100g分别按照实施例2中进行提取及制剂，得样品2。
3.2.4样品3
将人参60g、远志100g、肉苁蓉100g、石菖蒲60g、茯苓120g、生地黄100g分别按照实施例2中进行提取及制剂，得样品3。
3.2.5样品浓度
体系终浓度为1mg/mL。
3.3试验方法
改良的Ellman法。基本原理是以碘化乙酰硫代胆碱(ATCI)为底物，加入AChE后，ATCI会在AChE作用下水解，生成硫代胆碱，其与DTNB反应生成2-硝基苯甲酸-5-巯基硫代胆碱和2-硝基-5-巯基苯甲酸(TNB)，且可在412nm处检测到黄色离子(TNB)的吸光度值。在测定植物样品对AChE的抑制活性中，如果植物样品对AChE有抑制作用，则会使得ATCI参加反应的量减少，导致产生的产物(硫代胆碱)减少。而产物与DTNB反应的量也会相应减少，最终导致TNB的生成减少，则吸光度值在412nm处降低；反之，吸光度值在412nm处增加。
3.4测量指标
每个复孔的吸光度值。
3.5试验结果
所得结果以均数±标准差表示，采用SPSS26.0进行统计学分析，组间采用单因素方差分析(ANOVA)，以p<0.05为差异有显著性意义。结果如表3和图8所示。
表3不同组方下各组AchE的抑制率
组别 平行样1 平行样2 平行样3 均值
石杉碱甲组 39.41％ 39.78％ 38.83％ 39.3％±0.5％
本发明药物组 39.56％ 39.84％ 39.17％ 39.5％±0.3％
样品1组 19.02％ 19.96％ 20.11％ 19.7％±0.6％
样品2组 23.64％ 23.10％ 22.85％ 23.2％±0.4％
样品3组 32.26％ 30.89％ 31.74％ 31.6％±0.7％
3.6讨论
在胆碱能突触间，乙酰胆碱酯酶能降解乙酰胆碱，终止神经递质在突触后膜的兴奋作用，保证神经信号在生物体内的正常传递。有研究表明，AD患者的基底前脑的胆碱神经细胞缺失，AchE的活性升高，而作为神经递质的乙酰胆碱含量下降，因此针对该假说以AchE为靶点通过抑制AchE的活性是治疗AD的经典策略。
在本次实验中，石杉碱甲终浓度为70μg/L，本发明药物、样品1、样品2和样品3终浓度均为1mg/mL，石杉碱甲为胆碱酯酶抑制剂，对乙酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用，易通过血脑屏障。具有促进记忆再现，增强记忆保持和加强肌肉收缩强度的作用。从对AchE抑制的结果来看，石杉碱甲效果明显，本发明药物对AchE抑制作用明显优于样品1、样品2和样品3，差异有显著性意义。而且这4种样品之间对AchE的抑制作用均有显著性差异，说明在不同的组方条件下，本发明药物组方优于其他组方。
4、本发明药物、开心散和琼玉膏对乙酰胆碱酯酶的体外抑制作用
4.1材料
本发明药物(实施例2步骤(7)制得的中药复方颗粒剂)，开心散(自制)，琼玉膏(自制)，乙酰胆碱酯酶(AchE，上海源叶)，石杉碱甲(HPLC≧98％，上海源叶)等。
4.2样品的制备
4.2.1开心散
将远志60g，人参60g，茯苓120g，石菖蒲60g，加入没过饮片量的水，放在一起进行煎煮，第一次煎煮45min，滤过，煎煮液备用，第二次向药渣中加入等量的水，煎煮30min，滤过，得二煎煎煮液，将两次煎煮液合并进行减压浓缩，待适量，进行减压干燥，粉碎，得样品。
4.2.2琼玉膏
生地250g，茯苓100g，回流提取，加水量分别为8倍量、6倍量，每次2h，过滤药渣，获取滤液备用，人参饮片50g，回流提取，加水倍量为8倍量、6倍量，每次2h，获取滤液，再与生地、茯苓滤液合并，静置24h，取上清液浓缩成比重：1.23g/mL的原液1L，备用。取350g蜂蜜炼至中蜜，加入1L原液，继续浓缩至1L，浓缩比重：1.4g/mL。
4.2.3本发明药物
实施例2步骤(7)制得的中药复方颗粒剂。
4.2.4样品浓度
体系终浓度为1mg/mL。
4.3试验方法
改良的Ellman法。基本原理是以碘化乙酰硫代胆碱(ATCI)为底物，加入AChE后，ATCI会在AChE作用下水解，生成硫代胆碱，其与DTNB反应生成2-硝基苯甲酸-5-巯基硫代胆碱和2-硝基-5-巯基苯甲酸(TNB)，且可在412nm处检测到黄色离子(TNB)的吸光度值。在测定植物样品对AChE的抑制活性中，如果植物样品对AChE有抑制作用，则会使得ATCI参加反应的量减少，导致产生的产物(硫代胆碱)减少。而产物与DTNB反应的量也会相应减少，最终导致TNB的生成减少，则吸光度值在412nm处降低；反之，吸光度值在412nm处增加。
4.4测量指标
每个复孔的吸光度值。
4.5试验结果
所得结果以均数±标准差表示，采用SPSS26.0进行统计学分析，组间采用单因素方差分析(ANOVA)，以p<0.05为差异有显著性意义。结果如表4和图9所示。
表4不同药品下各组AchE的抑制率
4.6讨论
在本次实验中，石杉碱甲浓度为70μg/L，开心散、琼玉膏和本发明药物浓度均为1mg/mL，石杉碱甲为胆碱酯酶抑制剂，对乙酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用，易通过血脑屏障。具有促进记忆再现，增强记忆保持和加强肌肉收缩强度的作用。从对AchE抑制的结果来看，石山碱甲对AchE抑制作用，本发明药物对AchE抑制作用明显优于开心散和琼玉膏组，差异有显著性意义。
5、学习记忆三联(Morris水迷宫+物体识别+跳台实验)小鼠行为模型
物体识别是利用小鼠喜欢接近和探索陌生物体的天性来检测小鼠的短时记忆能力的行为学方法。
5.1材料
5.1.1仪器与耗材：
物体识别实验系统：上海欣软信息科技有限公司；
SuperMaze动物行为分析系统：上海欣软信息科技有限公司；
水迷宫实验系统：上海欣软信息科技有限公司；
跳台实验系统：济南益延科技发展有限公司；
电子天平：德国赛多利斯集团；
小鼠灌胃器：济南益延科技发展有限公司。
5.1.2药物
待试药：本发明药物(实施例2步骤(7)制得的中药复方颗粒剂)；
石杉碱甲片：河南太龙药业股份有限公司，规格：50μg/片(24片/盒)，批号：210902；
氢溴酸东莨菪碱片：北京百灵威科技有限公司，规格：1g(瓶)，批号：LI10Q53。
5.1.3动物
动物：140只雄性SPF级C57小鼠，体质量20±2g，适应性饲养7天后，每组15只，共120只。由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供，许可证号：SCXK(鲁)2018-0003。
按照随机区组设计方法(根据体质量)分为6组：正常对照组；模型组；阳性药组；开心散组；琼玉膏组；本发明药物低剂量组；本发明药物中剂量组；本发明药物高剂量组。
5.2给药方式及周期
每天固定时间，正常对照组和模型组灌胃等体积的蒸馏水(灌胃体积为0.1mL/10g)；开心散组(灌胃体积为0.1mL/10g，给药剂量为2.5g/kg)；琼玉膏组(灌胃体积为0.1mL/10g，给药剂量为2.5g/kg)；低中高剂量组给予不同给药浓度的本发明药物(低剂量为1.25g/kg，中剂量为2.5g/kg，高剂量为5g/kg)，阳性药组给予石杉碱甲片(灌胃体积为0.1mL/10g，给药剂量为26μg/kg)连续给药7天。最后一次灌胃给药60min后除正常对照组注射等体积的0.9％生理盐水外，其余4组腹腔注射氢溴酸东莨菪碱2mg/kg(预实验摸索拟定剂量)，注射体积为0.1mL/10g，直至实验结束。物体识别、跳台、水迷宫测试前1h给药，前15-20min腹腔注射氢溴酸东莨菪碱和生理盐水。
5.3实验方法
5.3.1新奇物体识别实验
新奇物体识别实验(novelobjectrecognitiontest，NOR)是利用小鼠喜欢接近和探索新奇物体的天性来检测小鼠的短时记忆能力的行为学方法。实验操作流程如下。
适应期：第1天，先将小鼠置于测试房间进行1h的环境适应和熟悉，再将小鼠放入旷场箱内适应20min(箱内无物体)，以消除旷场箱对受试小鼠的影响。每只小鼠实验结束后，用30％乙醇清洗旷场箱。
熟悉期：第2天(适应期24h后)，先将小鼠置于测试房间进行1h的环境适应和熟悉，再在旷场箱内同侧左右两端放置两个大小和质地完全相同的黄色柱形瓶作为熟悉物体，然后将小鼠背朝物体放入箱内，记录5min内小鼠对物体探究的情况(计时标准：小鼠鼻或口距离物体2cm范围内探究的时间，其趴在物体上或只是在物体附近走动不计入)。每只小鼠实验结束后，用75％乙醇清洗旷场箱。
测试期：熟悉期2h后，先随机将旷场箱内的一个黄色柱形瓶换为大小相同的绿色锥形瓶作为新奇物体，再将小鼠背朝物体放入箱内，记录5min内小鼠对新奇物体的探索时间(The Total Exploration Time ofNovel Object，Tn)和熟悉物体的探索时间(TheTotal Exploration Time ofFamiliar Object，Tf)。计算识别指数。每只小鼠实验结束后，用30％乙醇清洗旷场箱。
5.3.2小鼠跳台实验
物体识别实验结束后1d，进行跳台训练，适应3min，然后通电训练300s。24h后进行测试。将小鼠放到跳台上，记录第一次跳下平台潜伏期及300s内错误(从跳台上下来)次数。如果300s内小鼠仍未跳下平台，错误次数记为0次，潜伏期记为300s。
5.3.3小鼠水迷宫实验
跳台实验结束后1d进行水迷宫实验。水迷宫实验分为两部分，共连续测试5d。第一部分为定位航行实验对小鼠进行测试4d，第二部分为空间探索实验，进行测试1d。将黑色素食用色粉以温水冲开以隐藏平台，并令其摄像时与小鼠颜色保持鲜明对比，便于追踪。平台位于水面下0.8cm，水深高21cm，定位于NW象限，水迷宫内的水温用加热棒保持恒温22-24℃。
定位航行实验：每只小鼠训练4次/d，每次训练时间间隔15-20min。测试时每次以半随机方式选择入水点，实验者将小鼠以手托起令其面向池壁，轻轻放入水中。每次训练中，小鼠60s内能寻找到平台，平台上停留时间超过2s作为寻台成功标志，把小鼠从入水到寻台成功所用时间记为潜伏期。若小鼠60s内未能找到平台，则由实验者用手将其引导至平台，潜伏期记为60s。小鼠登上平台后，让其平台上停留10s，以让其根据4个象限的参照物进行空间学习和记忆，并减少小鼠紧张。计算每天潜伏期平均值，以评价动物空间记忆的获得能力。
空间探索实验：撤去平台，每只小鼠测试1次，时间为60s。选择SE象限将小鼠面向池壁边缘轻放入水中，通过动物60s内穿过原平台位置的次数，鼠游泳轨迹，原平台象限游程比率及时间比率(即动物原平台象限的游程及时间占总游程及总时间的比率)来评价动物的空间记忆能力。
5.4统计方法
数据采用GraphPad Prism 8.02软件(Graph Pad Software，Inc.，San Diego，California，USA)进行分析。所有组别测试进行参数检验前数据进行了正态性检验(Kolmogorov-Smirnov检验)和方差齐性检验(Levene检验)。除水迷宫训练期逃避潜伏期外所有检验参数应用非成对T检验(单尾)进行组间两两比较，检验水准设定为p<0.05。水迷宫训练期逃避潜伏期应用双因素方差分析，事后检验应用Bonferroni's multiplecomparisons test，检验水准设定为p<0.05。
5.5实验结果
5.5.1物体识别实验
表5-1本发明药物对小鼠物体识别行为的影响(x±SE)
组别 剂量 动物数/只 识别指数
对照组 - 15 0.5814±0.06147
模型组 - 14 0.422±0.02834*
阳性药组 26μg/kg 15 0.5443±0.03220#
开心散组 2.5g/kg 15 0.5012±0.03547#
琼玉膏组 2.5g/kg 15 0.4831±0.03112#
低剂量组 1.25g/kg 15 0.5081±0.04122#
中剂量组 2.5g/kg 15 0.5378±0.04617#
高剂量组 5.0g/kg 15 0.5411±0.03555#
由表5-1和图10可知，模型组识别指数较正常对照组显著下降，阳性药、低剂量组、中剂量组、高剂量组灌胃给药后识别指数则显著上升。表明模型组小鼠陈述记忆(Declarative memory)能力下降，阳性药、开心散、琼玉膏、低剂量组、中剂量组、高剂量组用药后可改善应激小鼠的陈述记忆能力，而且相同剂量下，本发明药物中剂量组的识别指数高于开心散、琼玉膏，差异有显著性意义。
5.5.2跳台实验
表5-2-1本发明药物对小鼠跳台实验中潜伏期的影响(x±SE)
组别 剂量 动物数/只 潜伏期(秒)
对照组 - 15 117.45±30.35
模型组 - 14 43.43±10.32*
阳性药组 26μg/kg 15 114.96±28.74#
开心散组 2.5g/kg 15 84.41±24.43
琼玉膏组 2.5g/kg 15 72.63±25.73
低剂量组 1.25g/kg 15 106.53±22.911#
中剂量组 2.5g/kg 15 103.37±27.12#
高剂量组 5.0g/kg 15 123.53±10.50#
表5-2-2本发明药物对小鼠跳台实验中错误次数的影响(x±SE)
组别 剂量 动物数/只 错误次数
对照组 - 15 1.1783±0.1975
模型组 - 14 2.8467±0.3057**
阳性药组 26μg/kg 15 1.7417±0.2836#
开心散组 2.5g/kg 15 2.3132±0.2143
琼玉膏组 2.5g/kg 15 2.5147±0.2981
低剂量组 1.25g/kg 15 2.3350±0.4528
中剂量组 2.5g/kg 15 1.8407±0.3571#
高剂量组 5.0g/kg 15 1.7190±0.5535#
由表5-2-1、表5-2-2和图11-12可知，模型组较对照组潜伏期显著缩短，错误次数则显著增多；灌胃给药后，阳性药、低剂量组、中剂量组、高剂量组潜伏期叫模型组明显延长，且有剂量依赖性。而开心散和琼玉膏与模型组相比，无差异显著性。阳性药、中剂量组和高剂量组出错的次数较模型组明显减少。表明模型组小鼠跳台实验记忆能力受损，阳性药、中剂量组和高剂量组可改善跳台实验记忆功能缺损。
5.5.3水迷宫实验
表5-3-1本发明药物对小鼠水迷宫实验中训练期逃避潜伏期的影响(x±SE)
表5-3-2本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期逃避潜伏期的影响(x±SE)
组别 剂量 动物数/只 逃避潜伏期(秒)
对照组 - 15 22.06±3.87
模型组 - 14 43.41±4.16*
阳性药组 26μg/kg 15 25.10±3.89#
开心散组 2.5g/kg 15 36.12±3.24
琼玉膏组 2.5g/kg 15 39.57±2.83
低剂量组 1.25g/kg 15 34.48±3.58#
中剂量组 2.5g/kg 15 26.96±4.15#
高剂量组 5.0g/kg 15 25.10±4.23#
表5-3-3本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期目标象限停留时间的影响(x±SE)
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表5-3-4本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期目标象限路程的影响(x±SE)
组别 剂量 动物数/只 目标象限路程(mm)
对照组 - 15 2934±172.1
模型组 - 14 2641±208.0
阳性药组 26μg/kg 15 2956±191.4
开心散组 2.5g/kg 15 2727±202.1
琼玉膏组 2.5g/kg 15 2136±198.4
低剂量组 1.25g/kg 15 2758±156.7
中剂量组 2.5g/kg 15 2503±173.2
高剂量组 5.0g/kg 15 2904±137.9
表5-3-5本发明药物对小鼠水迷宫实验中探索期穿越平台次数的影响(x±SE)
由表5-3-1、5-3-2、5-3-3、5-3-4、5-3-5和图13-17可知，水迷宫训练期第4天逃避潜伏期模型组较对照组显著延长，提示模型组小鼠记忆存储能力缺损。
水迷宫探索期，逃避潜伏期模型组较对照组显著延长，目标象限停留时间和穿越平台次数模型组较对照组显著减少，提示模型组小鼠记忆提取能力缺损；灌胃给药后，阳性药、中剂量组、高剂量组逃避潜伏期较模型组显著缩短；穿越平台次数较模型组显著增加，提示阳性药、中剂量组和高剂量组用药后可改善小鼠空间记忆提取能力缺损。
5.6结论
通过学习记忆三联(Morris水迷宫+物体识别+跳台实验)小鼠行为模型，初步了解了本发明药物的中剂量组和高剂量组再一定程度上能提高因东莨菪碱造成的记忆损伤，而且在相同剂量下，改善效果优于开心散和琼玉膏。
6、典型病例
典型病例1：
李某，女，72岁，失眠多年，夜间睡眠时间3-4小时，近两年短期记忆明显下降，话语重复，看目人光呆滞。2021年3月18日就诊，诊断为阿尔茨海默症早期，临床痴呆评定表CDR值0.8；认知功能轻度损害MMSE22。每天服用本发明药物(实施例2(7)颗粒剂)2袋，每袋10g，每天2次。服用2个月后，患者家属代诉：表情较之前丰富，精神状态较好，睡眠也明显好转，睡眠时间能睡到5-7小时，记忆力较之前有所改善。
典型病例2：
史某，男，76岁，急躁易怒，多梦早醒，迷路走失，言语不清，2021年4月20日就诊，诊断为阿尔茨海默症中期，临床痴呆评定表CDR值2.0；认知功能轻度损害MMSE16。每天服用本发明药物(实施例2(7)颗粒剂)2袋，每袋10g，每天2次。服用3个月后，患者家属代诉：精神状态较好，急躁易怒次数减少，睡眠情况好转，大体知道回家的路，表达较之前有所改善。
7、结论
结合体外药效试验、体内动物实验和典型病例，我们可以预测本发明药物对阿尔茨海默症具有良好的治疗效果。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (2)

1.一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物，其特征在于，由以下重量份的原料制得：人参6g、肉苁蓉10g、丹参6g、远志10g、石菖蒲6g、生地黄10g和茯苓12g；
所述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入8倍重量、质量浓度为60%的乙醇并进行加热回流提取2次，每次提取2h，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液在55-75℃温度下浓缩，得到比重为1.08/50℃的醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加8倍重量的水浸泡2h，然后进行挥发油提取6h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入等体积乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨1h后在40℃温度下进行减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入6倍重量的水并进行加热回流提取2次，每次提取1h，收集水提药液，加入石菖蒲提取液一起在60-90℃浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇至含醇量为60%进行醇沉，密闭冷藏24h，离心，取上清液，再次浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)混合
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩至浓缩液比重为1.12/60℃，在50℃下减压干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方颗粒剂。
2.一种治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，其特征在于，由以下重量份的原料制得：人参6g、肉苁蓉10g、丹参6g、远志10g、石菖蒲6g、生地黄10g和茯苓12g；
所述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的制备方法，具体包括以下步骤：
(1)称取
按上述治疗阿尔兹海默症的中药复方提取物的重量称取各原料；
(2)醇提
将人参、肉苁蓉、丹参和远志混合后加入8倍重量、质量浓度为60%的乙醇并进行加热回流提取2次，每次提取2h，分别收集醇提药液和醇提药渣，并将醇提药液在55-75℃温度下浓缩，得到比重为1.08/50℃的醇提浓缩液，备用；
(3)挥发油的提取和包合
将石菖蒲加8倍重量的水浸泡2h，然后进行挥发油提取6h，分别收集石菖蒲挥发油、石菖蒲提取液和石菖蒲药渣，备用；将石菖蒲挥发油加入等体积乙醇中溶解，得到油醇混合物，备用；将羟丙基-β-环糊精加入水中混合均匀，然后向其中缓慢滴加油醇混合物，羟丙基-β-环糊精、水和油醇混合物的质量比为15:7.5:1；球磨1h后在40℃温度下进行减压干燥，得到石菖蒲包合物，备用；
(4)水提
将醇提药渣、石菖蒲药渣、生地黄和茯苓混合后加入6倍重量的水并进行加热回流提取2次，每次提取1h，收集水提药液，加入石菖蒲提取液一起在60-90℃浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，放置室温，得到水提浓缩液；
(5)醇沉
将水提浓缩液加乙醇至含醇量为60%进行醇沉，密闭冷藏24h，离心，取上清液，再次浓缩至浓缩液比重为1.08/60℃，得到水提醇沉浓缩液，备用；
(6)混合
将醇提浓缩液和水提醇沉浓缩液混合，继续浓缩至浓缩液比重为1.12/60℃，在50℃下减压干燥，得到混合提取物，备用；
(7)成品制备
将石菖蒲包合物和混合提取物混合均匀，粉碎，过筛，得到中药复方提取物；然后加入糊精，用乙醇进行喷洒，制成软材，软材以“捏之成团，松之即散”为度，整粒，干燥，过筛，即得治疗阿尔兹海默症的中药复方颗粒剂。
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