CN115887480B - Mxi1-0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医学技术领域，公开了一种Mxi1‑0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途。本发明提供了一种小干扰RNA或短发夹RNA在制备Mxi1‑0抑制剂中的应用，并进一步发现通过小干扰RNA或短发夹RNA敲低Mxi1‑0可以抑制低氧诱导的PASMCs增殖并促进其凋亡。由此说明Mxi1‑0在低氧导致的PASMCs增殖与凋亡失衡和肺血管重构中发挥重要作用。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及抑制Mxi1-0在低氧性肺动脉高压治疗作用中的应用，尤其涉及一种Mxi1-0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途。
背景技术
低氧性肺动脉高压(Hypoxic pulmonary hypertension，HPH)的主要特点是各种形式的慢性肺部疾病所引发的慢性缺氧，进而使肺血管重构，肺血管阻力和肺动脉压力持续性升高，最终导致右心衰竭。由于我国具有庞大的慢性肺部疾病人群，HPH有较高的发生率，但是慢性肺病合并HPH后，患者的3年生存率仅为44％，而且根据目前的治疗指南尚无有效的药物推荐。故而，研究HPH的发生机制有重要的临床意义。
HPH的发病机制至今尚未完全清楚。普遍认为，低氧性肺血管收缩和低氧性肺血管重构为其主要的病理机制。根据既往研究，我们知道，肺动脉平滑肌细胞(Pulmonaryarterial smooth muscle cells，PASMCs)是肺血管壁的重要组织结构之一，是其维持张力的主要成分，它既可以作为效应细胞引起肺血管的收缩，同时也是造成肺动脉结构重建的重要细胞基础。在低氧情况下一系列信号分子促进PASMCs的过度增殖和凋亡受挫，导致血管壁增厚和肺小动脉肌肉化，即所谓的“平滑肌远端延伸”，最终形成肺血管重构。因此，我们积极寻找低氧条件下作用于肺动脉平滑肌细胞的关键基因。
Max作用蛋白1-0(Max interacting protein 1,Mxi1-0)是一种转录因子，为Mxi1基因的剪接体之一，属于Myc-Max-Mad网络。与其它Mxi1基因剪接体不同的是，Mxi1-0在氨基末端具有一个由92个氨基酸组成的外显子，即外显子0。外显子0除了在第62至92位氨基酸可编码与Max蛋白结合的SID区域外，另有一个由61位氨基酸组成的额外的富含脯氨酸的肽段(Proline rich domain，PRD)。这一独特的结构域导致Mxi1-0虽同样能与Max蛋白结合，但并不能抑制Myc依赖性转录，反而能对c-Myc启动子产生活化效应，而c-Myc是公认的与细胞增殖相关的基因。
Mxi1-0可以在心、脑、肺等全身多个组织表达，主要表达于细胞质。既往研究发现，Mxi1-0可以影响细胞周期，与肿瘤密切相关。但是，目前关于Mxi1-0对低氧性肺动脉高压(HPH)的具体作用及其分子机制尚未见报道。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种Mxi1-0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途，解决了现有的药物中不能抑制低氧肺血管重构的问题。
本发明的研究证实Mxi1-0是低氧刺激下的主要效应分子，其功能主要是促进低氧后的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖并抑制其凋亡，因此我们可以合理推测减少Mxi1-0表达可以抑制肺血管重构发生，进而治疗HPH，这是本发明的目的及意义所在。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供了一种小干扰RNA或短发夹RNA在制备Mxi1-0抑制剂中的应用。
优选地，所述小干扰RNA选自小干扰RNA1和小干扰RNA2；
所述小干扰RNA1的靶序列如SEQ ID NO.1所示、碱基序列如SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.3所示；
所述小干扰RNA2的靶序列如SEQ ID NO.4所示、碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示。
优选地，所述小干扰RNA为小干扰RNA1。
优选地，所述小干扰RNA的有效剂量为25nmol～200nmol，更优选有效剂量为50nmol～200nmol，最优选有效剂量为200nmol。
优选地，所述短发夹RNA选自短发夹RNA2和短发夹RNA3；
所述短发夹RNA2的靶序列如SEQ ID NO.11所示、碱基序列如SEQ ID NO.12所示；
所述短发夹RNA3的靶序列如SEQ ID NO.13所示、碱基序列如SEQ ID NO.14所示。
优选地，所述短发夹RNA为短发夹RNA3。
第二方面，本发明提供了一种Mxi1-0抑制剂，包括小干扰RNA或短发夹RNA；所述小干扰RNA选自小干扰RNA1和小干扰RNA2；所述短发夹RNA选自短发夹RNA2和短发夹RNA3。
优选地，所述小干扰RNA1的靶序列如SEQ ID NO.1所示、碱基序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示；
所述小干扰RNA2的靶序列如SEQ ID NO.4所示、碱基序列如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示；
所述短发夹RNA2的靶序列如SEQ ID NO.11所示、碱基序列如SEQ ID NO.12所示；
所述短发夹RNA3的靶序列如SEQ ID NO.13所示、碱基序列如SEQ ID NO.14所示。
第三方面，本发明提供了一种根据前述的Mxi1-0抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的用途。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1)本发明通过实验研究发现小干扰RNA1和小干扰RNA2可敲低HPASMCs中的Mxi1-0，使其表达量显著下降。
2)本发明通过设计合成短发夹RNA2和短发夹RNA3，并首次发现其可敲低HPASMCs中的Mxi1-0，使其表达量显著下降。
3)本发明还发现低氧可促进肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖(图6A)并抑制其凋亡(图6B)，而通过本发明的小干扰RNA或短发夹RNA敲低低氧诱导的PASMCs中的Mxi1-0，可抑制PASMCs的增殖并促进其凋亡。由此说明Mxi1-0在低氧导致的PASMCs增殖与凋亡失衡和肺血管重构中发挥重要作用，通过抑制Mxi1-0的表达可治疗低氧性肺动脉高压。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为2种小干扰RNA(siRNA)干扰Mxi1-0基因表达结果；
图2为不同剂量的小干扰RNA1(siRNA1)干扰Mxi1-0基因表达结果；
图3为2种小干扰RNA(siRNA)干扰Mxi1-0蛋白表达结果；其中图3A为电泳图像结果；图3B为Mxi1-0蛋白/β-actin蛋白的相对表达量结果；
图4为3种短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0基因表达结果；
图5为3种短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0蛋白表达结果；其中图5A为电泳图像结果；图5B为Mxi1-0蛋白/β-actin蛋白的相对表达量结果；
图6为敲低Mxi1-0对HPASMCs增殖和凋亡的影响结果；其中图6A为不同实验组细胞活力检测结果；图6B为不同实验组的细胞凋亡率结果；图6C为不同实验组的流式检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
以下实施例均采用统计学方法：数据采用均数±标准差表示。各组比较采用方差分析和q检验，检验水准α＝0.05，p＜0.05为差异有统计学意义。
实施例1
本实施例考察了小干扰RNA(siRNA)干扰Mxi1-0表达，具体步骤如下：
1)细胞培养：将原代人肺动脉平滑肌细胞(Human pulmonary arterial smoothmuscle cells，HPASMCs，购自ScienCell，Inc(#3110))培养于37℃、21％O2、74％N2和5％CO2的平滑肌细胞培养基(SMCM，ScienCell)中。细胞在培养至第4～7代时使用。
2)转染小干扰RNA(siRNA)：将步骤1)培养的HPASMCs以2.5×105/孔，接种于6孔板中，待细胞贴壁，长至70～90％融合度时开始使用小干扰RNA对HPASMCs进行转染，操作按照脂质体转染试剂(LipofectamineTM 3000，Invitrogen,USA)说明进行。具体为：使用Opti-MEMTM 125μL分别稀释脂质体转染试剂(LipofectamineTM 3000，Invitrogen,USA)5μL和小干扰RNA，然后将稀释的脂质体转染试剂与稀释的小干扰RNA两者混合，室温孵育10～15min后，加入6孔板中，置于37℃、5％CO2孵箱中孵育6h，然后更换为完全培养基。每个实验组设置3个复孔，实验重复3次。并以阴性对照组进行对照实验。
本实施例采用的小干扰RNA(siRNA)包括小干扰RNA1(siRNA1)和小干扰RNA2(siRNA2)。小干扰RNA1的靶序列为CAGCGAGAACTCGATGGAGAA(SEQ ID NO.1)，小干扰RNA1碱基序列：正义链5’CAGCGAGAACUCGAUGGAGAAdTdT3’(SEQ ID NO.2)，反义链5’UUCUCCAUCGAGUUCUCGCUGdTdT3’(SEQ ID NO.3)。小干扰RNA2的靶序列为CACTTTTCTGCAGAACGTGCA(SEQ ID NO.4)，小干扰RNA2碱基序列：正义链5’CACUUUUCUGCAGAACGUGCAdTdT3’(SEQ ID NO.5)；反义链5’UGCACGUUCUGCAGAAAAGUGdTdT3’(SEQ ID NO.6)。
阴性对照组(NC)采用的序列为：正义链5’UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT3’(SEQ IDNO.7)，反义链5’ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT3’(SEQ ID NO.8)。
上述小干扰RNA1和小干扰RNA2的靶序列和碱基序列、阴性对照组(NC)采用的序列均由上海吉玛制药技术有限公司合成并提供。
3)qRT-PCR(quantitative real-time PCR)技术检测mRNA水平：首先，使用Trizol试剂从步骤2)获得的各细胞中提取总RNA。随后，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit(TOYOBO,Japan)将RNA逆转录为cDNA。使用Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(Yeasen,Shanghai,China)扩增和检测cDNA。PCR引物如下：5'-GGACCTGACTGACTACCTCAT-3'(SEQ ID NO.15)和5'-CGTAGCACAGCTTCTCCTTAAT-3'(SEQ ID NO.16)用于β-肌动蛋白(β-actin)，5'-GAGACCGACACACACTCCCATA-3'(SEQ ID NO.17)和5'-CGAAAAGCC GGCCTGACT-3'(SEQ IDNO.18)用于Mxi1-0。最后，使用2^-ΔΔCt法(Livak法)计算各样品基因的mRNA相对表达量，标准化为β-actin表达。
图1所示的结果为采用剂量为100nmol的siRNA1和siRNA2对HPASMCs进行转染后，Mxi1-0基因的相对表达量结果。该结果显示：转染小干扰RNA(siRNA1和siRNA2)的HPASMCs实验组Mxi1-0基因的表达量明显低于阴性对照组(NC)。进行统计学分析，siRNA1和siRNA2与阴性对照组的差异显著(p＜0.05)。从基因的相对表达量数据能清楚地看出，转染siRNA1的实验组对Mxi1-0基因表达的干扰优于转染siRNA2的实验组。图1中，*为转染小干扰RNA的实验组与转染NC的对照组比较p<0.05。
图2所示的结果为采用剂量分别为200nmol、100nmol、50nmol、25nmol的siRNA1对HPASMCs进行转染后，Mxi1-0基因的相对表达量结果。该结果显示：转染各剂量的siRNA1的HPASMCs实验组的Mxi1-0基因的表达量明显低于阴性对照组，且转染200nmol的siRNA1的HPASMCs实验组对Mxi1-0基因表达的干扰最佳，优于其他剂量组，差异有统计学意义。图2中，*为两组间比较p<0.05，**为两组间比较p<0.01，***为两组间比较p<0.001。
4)Western Blot技术检测：将步骤2)获得的各细胞按照常规方法提取蛋白，用BCA法蛋白定量后将蛋白变性。SDS-PAGE蛋白电泳分离蛋白，转移至NC膜，5％脱脂奶粉室温封闭1h后，分别用Mxi1-0一抗、β-actin一抗4℃孵育过夜。次日，TBST洗涤3次，室温孵育二抗1h；TBST洗涤3次后用ECL化学发光法成像，获取图像后进行分析。
图3所示的结果为采用剂量为200nmol的siRNA1和siRNA2对HPASMCs进行转染后，Mxi1-0蛋白的表达结果。图3A为电泳图像结果，图3B为Mxi1-0蛋白/β-actin蛋白的相对表达量结果。结果显示：与阴性对照组(NC)相比，转染小干扰RNA1(siRNA1)和小干扰RNA2(siRNA2)的实验组的Mxi1-0蛋白的表达量均显著降低(p<0.001)，且从蛋白的相对表达量数据能清楚的看出，转染小干扰RNA1的实验组对Mxi1-0蛋白表达的干扰最佳。图3B中，***为转染小干扰RNA的实验组与转染NC的对照组比较p<0.001。
本实施例的结果显示，小干扰RNA1和小干扰RNA2可抑制Mxil-0的表达，因此，小干扰RNA1和小干扰RNA2可作为Mxi1-0抑制剂。
实施例2
本实施例考察了短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0表达，具体步骤如下：
1)短发夹RNA(shRNA)的构建：
本实施例设计并构建了3个短发夹RNA:短发夹RNA1(shRNA1)、短发夹RNA2(shRNA2)和短发夹RNA3(shRNA3)。短发夹RNA1的靶序列为：ACGAGCTCATCTGCGCCTTTGTTTA(SEQ ID NO.9)，短发夹RNA1碱基序列：5’GATCCACGAGCTCATCTGCGCCTTTGTTTATTCAAGAGATAAACAAAGGCGCAGATGAGCTCGTTTTTTTG3’(SEQ ID NO.10)；短发夹RNA2的靶序列为：CACACAACACTTGGTTTGCTCAACA(SEQ ID NO.11)，短发夹RNA2碱基序列：5’GATCCCACACAACACTTGGTTTGCTCAACATTCAAGAGATGTTGAGCAAACCAAGTGTTGTGTGTTTTTTG3’(SEQ ID NO.12)；短发夹RNA3的靶序列为：CCAGCTCGAGAATTTGGAACGAGAA(SEQ ID NO.13)，短发夹RNA3碱基序列：5’GATCCCCAGCTCGAGAATTTGGAACGAGAATTCAAGAGATTCTCGTTCCAAATTCTCGAGCTGGTTTTTTG3’(SEQ ID NO.14)。
阴性对照组(NC)采用的碱基序列为：5’GATCCTTCTCCGAACGTGTCACGTTTCAAGAGAACGTGACACGTTCGGAGAATTTTTG3’(SEQ ID NO.19)。
上述短发夹RNA1、短发夹RNA2和短发夹RNA3的靶序列和碱基序列、阴性对照组(NC)采用的序列均由金斯瑞生物科技有限公司合成并提供。
2)慢病毒转染短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0表达：首先，将步骤1)构建的短发夹RNA(shRNA)克隆到慢病毒表达质粒载体(pCDH-CMV-MCS-EF1-PURO)中，扩增后，跑胶回收目的质粒并验证。随后，将目的质粒和包装载体(pMD2.0G和psPAX)按以下质量比混合：目的质粒:pAX2:pMD2G＝3:2:1，使用Opti-MEMTM稀释，同时将脂质体转染试剂LipofectamineTM3000用等体积Opti-MEMTM稀释。以LipofectamineTM3000(μL):质粒质量(μg)＝3:1，将两者混合，室温孵育30min后，在HEK293细胞中进行病毒包装。最后，使用得到的病毒液与10μg/mL聚凝胺(Sigma，MO，USA)混合侵染60％融合的HPASMCs(采用实施例1中步骤1)方法培养的HPASMCs细胞)，同时加入无双抗的平滑肌细胞培养基(SMCM，ScienCell)，8h后更换为完全培养基，然后用嘌呤霉素(1μg/mL)筛选病毒稳转细胞株用于进一步的实验。并以阴性对照组(NC)进行对照实验。
3)qRT-PCR(quantitative real-time PCR)技术检测mRNA水平：首先，使用Trizol试剂从步骤2)筛选获得的病毒稳转细胞株中提取总RNA。随后，使用ReverTra Ace qPCR RTKit(TOYOBO,Japan)将RNA逆转录为cDNA。使用Hieff qPCR SYBR Green Master Mix(Yeasen,Shanghai,China)扩增和检测cDNA。PCR引物如下：5'-GGACCTGACTGACTACCTCAT-3'(SEQ ID NO.15)和5'-CGTAGCACAGCTTCTCCTTAAT-3'(SEQ ID NO.16)用于β-肌动蛋白(β-actin)，5'-GAGACCGACACACACTCCCATA-3'(SEQ ID NO.17)和5'-CGAAAAGCCGGCCTGACT-3'(SEQ ID NO.18)用于Mxi1-0。最后，使用2^-ΔΔCt法(Livak法)计算各样品基因的mRNA相对表达量，标准化为β-actin表达。
图4为3种短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0基因表达结果，结果显示：转染短发夹RNA2(shRNA2)和短发夹RNA3(shRNA3)的HPASMCs实验组Mxi1-0基因的表达量明显低于对照组(p＜0.001)，而转染短发夹RNA1的HPASMCs实验组Mxi1-0基因的表达量明显高于对照组。从基因的相对表达量数据能清楚的看出，转染短发夹RNA3的实验组对Mxi1-0基因表达的干扰最佳。其中，***为转染短发夹RNA的实验组与转染NC的对照组比较p<0.001。
4)Western Blot技术检测：将筛选获得的病毒稳转细胞株按照常规方法提取蛋白，用BCA法蛋白定量后将蛋白变性。SDS-PAGE蛋白电泳分离蛋白，转移至NC膜，5％脱脂奶粉室温封闭1h后，分别用Mxi1-0一抗、β-actin一抗4℃孵育过夜。次日，TBST洗涤3次，室温孵育二抗1h；TBST洗涤3次后用ECL化学发光法成像，获取图像后进行分析。
图5为3种短发夹RNA(shRNA)干扰Mxi1-0蛋白表达结果，其中图5A为电泳图像结果，图5B为Mxi1-0蛋白/β-actin蛋白的相对表达量结果。结果显示：与对照组(NC)比较，转染短发夹RNA2(shRNA2)和短发夹RNA3(shRNA3)的实验组的Mxi1-0蛋白的表达量均显著降低(p<0.001)，而转染短发夹RNA1(shRNA1)的实验组的Mxi1-0蛋白的表达量却明显上升。进一步从蛋白的相对表达量数据(图5B)能清楚的看出，转染短发夹RNA3(shRNA3)的实验组对Mxi1-0蛋白表达的干扰最佳。图5B中，***为转染短发夹RNA的实验组与转染NC的对照组比较p<0.001。
实施例3
本实施例考察了敲低Mxil-0表达在抑制低氧后的HPSAMCs增殖中的作用。具体步骤如下：
1)细胞培养：将原代人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs，购自ScienCell，Inc(#3110))培养于37℃、21％O2、74％N2和5％CO2的平滑肌细胞培养基(SMCM，ScienCell)中。细胞在培养至第4～7代时使用。
2)细胞增殖检测：采用CCK-8法检测细胞增殖活力。将步骤1)获得的细胞悬液以3000个/孔接种于96孔板中培养。分别予以常氧或1％的低氧刺激，以及采用小干扰RNA或阴性对照(NC)干扰。具体分成四个实验组：常氧+NC干扰组(Normoxia-si-Control，细胞在21％O2、74％N2和5％CO2条件下培养且采用实施例1的方法转染NC)；常氧+小干扰RNA1干扰组(Normoxia-si-Mxi1-0，细胞在21％O2、74％N2和5％CO2条件下培养且采用实施例1的方法转染小干扰RNA1 200nmol)；低氧+NC干扰组(Hypoxia-si-Control，细胞在1％O2、94％N2和5％CO2条件下培养且采用实施例1的方法转染NC)；低氧+小干扰RNA1干扰组(Hypoxia-si-Mxi1-0，细胞在1％O2、94％N2和5％CO2条件下培养且采用实施例1的方法转染小干扰RNA1200nmol)。各实验组分别于0h，24h，48h，72h，加入CCK-8继续培养4h，然后选择450nm波长检测各孔吸光度值。使用(各时间点测得的吸光度值-0h吸光度值)/0h吸光度值表示细胞的增殖活力。
结果如图6A所示，低氧+NC干扰组的细胞增殖活力明显高于常氧+NC干扰组；常氧+NC干扰组和常氧+小干扰RNA1干扰组的细胞活力相比基本无差异；而低氧+小干扰RNA1干扰组的细胞活力明显低于低氧+NC干扰组。由此说明，低氧可促进HPASMCs增殖，而通过小干扰RNA1敲低Mxi1-0可抑制低氧诱导的HPASMCs增殖(*为Hypoxia-si-Control与Normoxia-si-Control比较p<0.05，**为Hypoxia-si-Control与Normoxia-si-Control比较p<0.01；#为Hypoxia-si-Mxi1-0与Hypoxia-si-Control比较p<0.05，###为Hypoxia-si-Mxi1-0与Hypoxia-si-Control比较p<0.001)。
3)细胞凋亡检测：将步骤1)获得的细胞以2.5×105/孔，接种于6孔板中，待细胞贴壁，长至70～90％融合度时采用小干扰RNA或阴性对照(NC)干扰，并分别予以常氧或1％的低氧刺激。具体处理分组与步骤2)相同，分成常氧+NC干扰组、常氧+小干扰RNA1干扰组、低氧+NC干扰组、低氧+小干扰RNA1干扰组。培养24小时后收集所有细胞，离心，重悬为1ⅹ106/ml，将100μL重悬液中加入5μL Annexin V-PE和10μL 7-ADD，室温避光孵育15min，1小时内流式检测。
图6B为凋亡细胞占比情况，-代表常氧，+代表1％的低氧刺激24小时。
结果如图6B所示，低氧+NC干扰组的细胞凋亡率明显低于常氧+NC干扰组；小干扰RNA1干扰后，无论是常氧+小干扰RNA1干扰组，还是低氧+小干扰RNA1干扰组的细胞凋亡率均有明显升高。由此说明，低氧可抑制HPASMCs凋亡，而通过小干扰RNA1敲低Mxi1-0可促进HPASMCs凋亡(***为两组间比较p<0.001)。
图6C为各实验组的流式检测结果，其中纵坐标为7-AAD，横坐标为Annexin V-PE，将流式检测结果图划分为四个象限，左下象限为Annexin V-PE-/7-AAD-，代表活细胞；右下象限为Annexin V-PE+/7-AAD-，代表早期凋亡细胞；右上象限为Annexin V-PE+/7-AAD+，代表晚期凋亡细胞和坏死细胞。
本发明具体应用途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式。应当指出，以上实施例仅用于说明本发明，而并不用于限制本发明的保护范围。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进，这些改进也应视为本发明的保护范围。
Claims (3)
1.一种短发夹RNA作为抑制剂在制备治疗低氧性肺动脉高压的制剂中的应用，其特征在于，所述短发夹RNA选自短发夹RNA2和短发夹RNA3；
所述短发夹RNA2的靶序列如SEQ ID NO.11所示、碱基序列如SEQ ID NO.12所示；
所述短发夹RNA3的靶序列如SEQ ID NO.13所示、碱基序列如SEQ ID NO.14所示。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述短发夹RNA为短发夹RNA3。
3.一种Mxi1-0抑制剂，其特征在于，包括短发夹RNA；所述短发夹RNA选自短发夹RNA2和短发夹RNA3；
所述短发夹RNA2的靶序列如SEQ ID NO.11所示、碱基序列如SEQ ID NO.12所示；
所述短发夹RNA3的靶序列如SEQ ID NO.13所示、碱基序列如SEQ ID NO.14所示。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Mxi1-0 Promotes Hypoxic Pulmonary Hypertension Via ERK/c-Myc-dependent Proliferation of Arterial Smooth Muscle Cells;Liang Dong等;Frontiers in Genetics;摘要，第2页右栏第4段 * |
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