CN115887446A - 包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途，本发明的组合物中由于主药为右硫辛酸赖氨酸盐，使得杂质A控制在≤0.2％的范围内，甚至是控制在≤0.05％的范围内，并且未知单杂以及总杂含量均能控制在较低范围内，具有较好的稳定性，并且具有药效学和毒理学优势，安全性良好，具有良好成药性，局部刺激性小，副作用少。

Description

包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途

本申请要求申请号为202111338359.6专利申请的优选权(在先申请的申请日为2021年11月12日，发明名称为包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途)。——应用于优先权

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途。

背景技术

硫辛酸化学名为(±)-1,2-二硫戊环-3-戊酸，是一种内源性抗氧剂，能消除加速老化和致病等自由基，螯合金属离子，再生其他抗氧化剂等作用。自然界动植物组织中，硫辛酸常与蛋白质分子中的赖氨酸残基ε-氨基共价结合，以酰胺键形式存在。在治疗DPN(糖尿病周围神经病变)领域，其通过阻抑神经内氧化应激状态，增加神经营养血管的血流量，加快神经传导速度，增加神经的钠钾ATP酶活性等机制，改善糖尿病周围神经病变症状。

从硫辛酸的化学结构分析，二硫戊环的3号碳原子有不对称中心的存在，产生了两种相应的R型(右旋)和S型(左旋)对映异构体，与消旋硫辛酸、左旋硫辛酸相比，在治疗II型糖尿病促进骨骼肌摄取葡萄糖；减少血浆胰岛素和游离脂肪酸水平；改善胰岛素作用下的糖原合成以及葡萄糖氧化作用；增加动物血流含氧量等方面右旋硫辛酸更具有活性。右旋硫辛酸(英文名R(+)Alpha Lipoic Acid)，结构式如下：

虽然右旋硫辛酸在药效功能方面强于左旋体，是硫辛酸发挥功效的主要成分。但其熔点较低约40℃左右，需要低温保存；水溶性差，难以制成液体制剂；稳定性差，对光和热不稳定，在较低的温度下就可以发生聚合和降解，影响了其临床治疗的疗效及安全性；因此，在用药安全性、稳定性、治疗效果及患者依从性等方面都有待深入研究。

发明内容

为了改善上述技术问题，本发明提供一种包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物及其制备方法和用途。

为了提高右旋硫辛酸的成药性，本发明在右旋硫辛酸的基础上成盐，一方面提高熔点，一方面增加主药的溶解度。通过氨丁三醇、精氨酸和赖氨酸盐的筛选，最终成功制备了右硫辛酸赖氨酸盐。

如下是对于盐型筛选的结果：

右硫辛酸赖氨酸盐的结构式如下：

本发明提供一种包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物，以右硫辛酸计，所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物的给药日剂量为100～900mg(例如100mg、150mg、200mg、300mg、400mg、500mg、600mg、700mg、800mg或900mg)，优选为200～600mg。

在本发明的组合物中包含的是右硫辛酸赖氨酸盐，其为右旋结构，本发明的组合物能够使得杂质A控制在更低的范围内，并且未知单杂以及总杂含量均能控制在较低范围内。

在本发明的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物中，所述右硫辛酸赖氨酸盐为无定型或多晶型的形式存在于组合物中。

CN105001195A公开了一种包含右硫辛酸赖氨酸盐的新晶型R(+)-硫辛酸-L-赖氨酸盐的新晶型Ⅰ，该晶型可应用于本发明的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物开发中。

根据本发明优选实施方案，所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物中还包含药学上可接受的辅料。

根据本发明的实施方案，所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物的给药途径包括但不限于胃肠道给药或非胃肠道给药；其中，所述胃肠道给药可以是口服给药，所述非胃肠道给药可以是注射给药，如静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射等。

根据本发明优选实施方案，当给药途径选自上述注射给药中的一种时，滴注速度可以为100ml/30-60min，例如100ml/30min、100ml/40min、100ml/50min、100ml/60min。

根据本发明优选实施方案，给药次数为一日一次、一日两次或更多次，优选一日一次，以符合所述日剂量的需要。

根据本发明优选实施方案，本发明所述组合物的剂型为注射剂或注射用冻干制剂。

根据本发明优选实施方案，所述注射剂为右硫辛酸赖氨酸盐注射剂，包含药物活性成分和药用辅料，其中，所述药物活性成分为右硫辛酸赖氨酸盐，以右硫辛酸计含量为15mg/mL～80mg/mL；所述注射剂中不含防腐剂和抗氧剂。

本发明所述的注射剂是在惰性气体氛围下和避光条件下制备和保存的。

根据本发明优选实施方案，本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，药物活性成分以右旋硫辛酸计含量为20mg/mL～30mg/mL。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，所述注射剂为pH在7.5至8.5范围内的含水溶液。本发明的注射剂选择pH在7.5至8.5范围，可以保证注射剂在的灭菌前后pH值几乎没有变化，有关物质变化幅度较小，而且可以保证注射剂在灭菌前后总杂含量控制在较低的范围内，进一步保证了药品的质量，促进用药的安全性。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，所述惰性气体是氮气，在线检测其残氧值，保证注射剂溶液的溶氧值不大于1ppm，优选注射剂溶液的溶氧值不大于0.2ppm。

本发明制剂原料药为右硫辛酸赖氨，前期研究发现氧气、高温和光照条件下对原料药溶液状态下均有影响，杂质变化大，药液易氧化。因此，本发明在研究制剂处方工艺过程中采取了灌封充氮气保护，严格控制注射剂溶液灌装前后容器内残氧量，包材选用棕色安瓿避光；本发明也重点考察了制剂过程中氧气、温度和光照对制剂的稳定性影响。

实验发现氧气和光照的共同作用下可加速药液的氧化，而实施避光、充氮气操作后药液稳定性明显提高。因此在配液过程中采用避光、充氮气的操作方式来配液。从前期理化性质的研究中，得知右硫辛酸赖氨制备成盐后，溶解度大大提高，药物的亲水性变强，提高了药物在配液过程中的溶解速率，而溶解速度加快，有利于药物溶解，降低了药物在整个配制过程中发生降解的风险。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，所述药用辅料为赖氨酸、精氨酸、氨丁三醇或葡甲胺中的一种或至少两种的组合；优选精氨酸或/和赖氨酸。精氨酸或赖氨酸做药用辅料，使得灭菌前后的pH值均未下降、有关物质只是略有增加，推测可能是赖氨酸及精氨酸有增加原料药的稳定性的作用，考虑精氨酸在药剂学上作为药用辅料比赖氨酸更普遍，本发明更进一步优选采用精氨酸来调节本制剂的pH。

在本发明中，药用辅料的选择以方便用于调节注射剂溶液的pH在7.5至8.5范围内，另一方面，本发明的药用辅料使得药物即使在高湿条件下也能控制药物吸湿增重幅度较小(在≤11.98％范围)，最大单杂、杂质A以及总杂均控制在较低的水平，药用辅料的选择增强了组合物制剂的稳定性，增强药物安全性。

而利用本发明中提到的奥力宝(对照药)，辅料为乙二胺。辅料乙二胺的选择，使得具有一定的毒性和刺激性，会造成比较明显的注射部位疼痛，造成用药的依从性很差，给患者带来较大的痛苦，而本发明辅料的选择为人体必须氨基酸，有生理活性，可参与人体内代谢。在临床2期试验中发现，我公司的产品比对照药给药刺激性小，注射部位疼痛发生率低，用药安全性增强。

进一步地，所述药用辅料为精氨酸，所述精氨酸是L-精氨酸、D-精氨酸或者二者的混合物，优选为L-精氨酸。

优选地，所述组合物中右硫辛酸赖氨酸盐以右硫辛酸计，其与精氨酸的质量比为20:1～20:1.5，例如20:1,20:1.1、20:1.2、20:1.3、20:1.4、20:1.5，优选为20:1.2。

所述精氨酸是常见氨基酸的一种，本领域技术人员知晓多数的氨基酸均有D或者L两种构型，同样的精氨酸也有D-精氨酸和L-精氨酸两种，二者的区别仅在于光学上的左手性和右手性，并不影响其药学理化性质，因此应用于本发明的精氨酸可以是D-精氨酸、L-精氨酸或者二者的混合物。基于生产和原料来源的考虑，本发明优选采用L-精氨酸。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，通过加入精氨酸起到稳定的效果并使溶液环境达到合适的碱性，从而使本发明注射剂溶液澄明并显著改善其在氯化钠注射液或葡萄糖注射液中的稳定性，长时间不析出。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂中，渗透压为270～320mOsmol/kg，例如270mOsmol/kg、280mOsmol/kg、290mOsmol/kg、300mOsmol/kg、310mOsmol/kg或320mOsmol/k，优选为280～300mOsmol/kg。本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂渗透压均等渗，工艺重现性好，

渗透压为偏低渗，从临床用药安全性考虑，本发明的等渗注射剂更为安全。

本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂经加速(考察条件：40℃±2℃，相对湿度75％±5％)、长期(考察条件：25℃±2℃，相对湿度60％±10％)试验研究，能有效控制杂质A的含量≤0.2％，左硫辛酸的含量≤0.5％，聚合物杂质B的含量≤2.0％。

进一步地，本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂经加速、长期试验研究，能有效控制杂质A的含量≤0.1％，左硫辛酸的含量≤0.2％，聚合物杂质B的含量≤1.0％。

更进一步地，本发明右硫辛酸赖氨酸盐注射剂经加速、长期试验研究，能有效控制杂质A的含量≤0.05％，左硫辛酸的含量≤0.1％，聚合物杂质B的含量≤0.5％。

其中，左硫辛酸、杂质A、聚合物杂质B结构式如下：

左硫辛酸

杂质A

聚合物杂质B。

另一方面，本发明提供一种所述的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

在氮气保护下，将处方量的右硫辛酸赖氨酸盐与药用辅料混合，制备成相应的制剂类型，得到所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物。

优选地，所述组合物为注射剂，所述制备方法包括以下步骤：

氮气保护下，将处方量的右硫辛酸赖氨酸盐与药用辅料一起搅拌溶解在注射用水中，并通过膜滤器过滤，灌装，灭菌，得到所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物。

根据本发明优选实施方案，上述制备方法，具体包括以下步骤：

(1)在配液罐中加入50％～90％处方量的注射用水，在氮气保护下，加入处方量的药用辅料；

(2)再加入处方量的右硫辛酸赖氨酸盐，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH在7.5至8.5范围内；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，中间体检测含量合格后，灌装；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌12-15min后，灯检合格后分装即得成品。

其中，步骤(1)加入注射用水的温度应≤40℃，并对罐内注射用水进行充氮，保证注射剂溶液的溶氧值不大于1ppm。

步骤(1)中所述药用辅料为精氨精、赖氨酸或葡甲胺中的一种或至少两种的组合，用于调节注射剂溶液的pH在7.5至8.5范围内。

进一步地，所述药用辅料为精氨酸，所述精氨酸是L-精氨酸、D-精氨酸或者二者的混合物，优选为L-精氨酸。

优选地，所述注射剂中右硫辛酸与精氨酸的质量比为20:1～20:1.5，优选为20:1.2。

由于辅料精氨酸显碱性，先加入可以使溶液的碱性提高，有利于药物的溶解，于是，本发明调整了处方的加入顺序，先加入精氨酸，再加入主药右硫辛酸赖氨酸盐，可以进一步优化溶解工艺。

由于产品为注射剂，生产工艺主要包括药液的配制、除菌过滤、灌装、熔封、灭菌等参数，本发明具体实施方案中进一步针对上述工艺参数进行了研究。依据前期原料药光、热、氧稳定性试验得出的结论，主要对药液配制过程的：配制温度、配液环境、pH调节剂方式、充氮气方式等；药液灌封过程中的中间体药液存放稳定性等；药液灭菌过程中的灭菌条件等参数进行了研究。通过pH值、有关物质等指标的测定最终确定合理的工艺。

另一方面，本发明还提供所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物用于改善药物安全性的用途。

本发明的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物可以改善药物安全性，可以减少注射部位局部刺激性，减少副作用的发生等。

另一方面，本发明还提供所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物用于改善药物稳定性的用途。

另一方面，所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物在制备治疗神经病变药物中的应用。

优选地，所述神经病变为糖尿病周围神经病变。

糖尿病周围神经病变(DNP)是指在排除其他原因的情况下，糖尿病患者出现与周围神经功能障碍相关的症状。临床呈对称性疼痛和感觉异常，下肢症状较上肢多见。

感觉异常有麻木、蚁走、虫爬、发热、触电样感觉，往往从远端脚趾上行可达膝上，患者有穿袜子与戴手套样感觉。感觉障碍严重的病例可出现下肢关节病及溃疡。痛呈刺痛、灼痛、钻凿痛，似乎在骨髓深部作痛，有时剧疼如截肢痛呈昼轻夜重。有时有触觉过敏，甚则不忍棉被之压，须把被子支撑起来。当运动神经累及时，肌力常有不同程度的减退，晚期有营养不良性肌萎缩。周围神经病变可双侧，可单侧，可对称，可不对称，但以双侧对称性者多见。

高血糖是导致周围神经病变的主要原因，DPN确切发病机制尚不完全清楚，是多因素共同作用的结果，包括代谢紊乱，血管损伤，神经营养因子缺乏，细胞因子异常，氧化应激和免疫因素等均发挥作用。还有葡萄糖自动氧化使反应性氧化产物形成，导致细胞氧化应激和线粒体功能障碍。

本发明通过药效学研究发现右硫辛酸赖氨酸中剂量组(10mg/kg)和高剂量组(20mg/kg)大鼠对外界刺激的反应时间小于模型组，坐骨神经传导速度大于模型组，外周神经密度增加，坐骨神经缺氧程度降低，表明右硫辛酸赖氨酸可改善糖尿病模型大鼠外周神经损伤。

本发明通过对右硫辛酸赖氨酸盐注射液的药效学、药代动力学及安全性评价试验，证明右硫辛酸与消旋硫辛酸、左硫辛酸相比，具有药效学和毒理学优势，安全性良好，具有良好成药性。

本发明对右硫辛酸赖氨注射剂的处方前研究、处方设计、处方筛选、处方确定等内容进行了研究；工艺开发重点对右硫辛酸赖氨注射液的配制、过滤、灌封、灭菌工序的工艺参数进行了研究，通过上述的研究最终确定了较合理的处方与工艺。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物中由于主药为右硫辛酸赖氨酸盐，使得杂质A控制在≤0.2％的范围内，甚至是控制在≤0.05％的范围内，并且未知单杂以及总杂含量均能控制的较低范围内，具有较好的稳定性，并且具有药效学和毒理学优势，安全性良好，具有良好成药性。

本发明中通过对于药用辅料的选择，可以进一步增强组合物制剂(尤其是注射剂)的稳定性，增强药物安全性，减少注射部位局部刺激性，减少副作用的发生，而且本发明的注射剂为等渗注射剂，更为安全。

附图说明

图1为本发明注射剂配伍稳定性考察(不带铝箔)趋势图。

图2为本发明注射剂配伍稳定性考察(带铝箔)趋势图。

图3为大鼠泪腺对刺激反应程度测定比较图。

图4为大鼠坐骨神经传导速度测定比较图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围，如无特别说明，所用原料均可通过市售或自制获得。

试验例1硫辛酸及其盐理化性质比较

本发明对硫辛酸原料药进行拆分得到右硫辛酸，并进一步成盐后得到右硫辛酸赖氨酸盐。针对消旋硫辛酸、右硫辛酸及右硫辛酸赖氨酸盐的理化性质进行了对比研究，数据汇总如下表1所示。

表1硫辛酸及其盐理化性质汇总比较

从上述汇总结果来看，右硫辛酸成盐后溶解度大大提高，熔点也相应提升，logP值＜1认为是亲水性的，而logp值＞4是亲酯性，以此看出，成盐后药物的极性发生改变，亲水性变强。原料药的亲水性越高其溶解度越大，更有利于开发成注射剂。

右硫辛酸是采取的手性拆分的方法将硫辛酸进行拆分得到的化合物，右硫辛酸赖氨是将右硫辛酸与赖氨酸成盐得到的化合物，三个化合物的结构分别如下：

试验例2原辅料相容性研究

国内部分已上市硫辛酸注射液制剂处方组成汇总如下表2所示：

表2处方组成汇总

查询已上市硫辛酸注射液辅料碱性pH调节剂有氨丁三醇、乙二胺，并与硫辛酸专利申请(申请号：201210167054.8)中碱性pH调节剂选择的精氨酸、赖氨酸、葡甲胺一起考察。

实验设计如下：

实验条件：将主药、辅料按如下表格中比例进行混合，放样于光照4500±500Lx、高温60℃、相对湿度75±5％，于0天、10天取样，检查混合物料的性状和有关物质的变化。实验结果见表3。

表3原辅料相容性实验结果

注：乙二胺为液体、且易挥发不易考察固体混合；氢氧化钠作为常用的碱调节剂，由于容易吸湿，故均未对其进行放样检测。

由上述实验结果可知，原料药在高温条件下最大单杂略有变化，光照条件下杂质A略有变化，高湿条件下有关物质无明显变化。数据看出所选用的辅料与原料均具有较好的相容性。因此，主要对上述筛选的辅料开展处方的筛选。

试验例3 pH值调节剂的筛选

从前期原料药溶液的稳定性试验得知pH值在7和9时没有明显差异，且消旋的硫辛酸注射液测定pH值为8.2左右，本试验分别用液体乙二胺、固体的赖氨酸、精氨酸、氨丁三醇、葡甲胺、1M氢氧化钠溶液作为碱调节剂，进行筛选，检测性状、灭菌前后的有关物质等指标，试验结果见表4。

表4不同pH值调节剂的筛选

试验结果表明精氨酸、赖氨酸做pH调节剂灭菌前后的pH值均未下降、有关物质只是略有增加，推测可能是碱性助溶剂赖氨酸及精氨酸有增加原料药的稳定性的作用，考虑精氨酸在药剂学上作为药用辅料比赖氨酸更普遍，本发明优选采用精氨酸来调节本制剂的pH，并进一步设计试验筛选精氨酸的用量以确定合理的pH值范围。

试验例4 pH值的确定

为了进一步确定pH值的调节范围，结合大生产的可操作性，在过程中控制本制剂的质量。我们设计如下处方，筛选合适的pH值范围，试验数据见表5。

表5 pH值调节范围筛选

上述结果表明，在pH7.5～8.5的范围内溶液的灭菌前后pH值几乎没有变化，有关物质变化幅度较小。所以本发明拟定本制剂pH调节范围为7.5～8.5，优选pH为8.0。

试验例5 pH调节剂用量的确定

从pH值范围的考察确定了pH调节范围为7.5～8.5，为了操作的可控性将pH调至8.0±0.1左右，精氨酸作为药用辅料，多次试验基本可以确定其用量，为了保证以后生产操作的控制精度，拟定以固体的方式加入精氨酸，分别设计8mg、10mg、12mg、15mg、20mg的用量，测定中间体溶液的pH值，试验结果见表6。

表6精氨酸用量的确定比例

实验结果：从上述的数据可以得出，处方1中间体pH略低，处方5中间体pH略高，不利于中间体控制，而处方2～4中间体的pH落在7.5～8.5范围内，且有关物质变化幅度较小，因此，将精氨酸的用量定为10～15mg/8ml。

实施例1

1、处方：规格：8ml:0.20g(以C₈H₁₄O₂S₂计)

2、工艺：

(1)在烧杯中加入80％处方量的注射用水，加入注射用水的温度约为25℃，并对注射用水进行充氮，控制溶氧值约为0.2ppm，加入处方量的L-精氨酸；

(2)再加入处方量的右硫辛酸赖氨酸盐，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH至8.2；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，灌装成8ml每支；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌12min后，灯检合格后分装即得成品。

实施例2

1、处方：规格：10ml:0.3g(以C₈H₁₄O₂S₂计)

2、工艺：

(1)在烧杯中加入70％处方量的注射用水，加入注射用水的温度约为27℃，并对烧杯内注射用水进行充氮，控制溶氧值约为0.2ppm，加入处方量的L-精氨酸；

(2)再加入处方量的右硫辛酸赖氨酸盐，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH至8.2；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，灌装成8ml每支；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌12min后，灯检合格后分装即得成品。

实施例3

1、处方：规格：10ml:0.2g(以C₈H₁₄O₂S₂计)

2、工艺：

(1)在烧杯中加入90％处方量的注射用水，加入注射用水的温度约为25℃，并对烧杯内注射用水进行充氮，控制溶氧值约为0.2ppm加入处方量的L-精氨酸；

(2)再加入处方量的右硫辛酸赖氨酸盐，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH至8.2；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，灌装成8ml每支；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌15min后，灯检合格后分装即得成品。

对比例1原研制剂

生产厂家：德国史达德大药厂，商品名：奥力宝，规格：12ml:0.3g

药品名称：硫辛酸注射液

对比例2左硫辛酸注射剂

1、处方：规格：8ml:0.20g

2、工艺：

(1)在烧杯中加入80％处方量的注射用水，加入注射用水的温度约为25℃，并对烧杯内注射用水进行充氮，控制溶氧值约为0.2ppm，加入处方量的L-精氨酸；

(2)再加入处方量的左硫辛酸，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH在8.2范围内；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，灌装成8ml每支；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌12min后，灯检合格后分装即得成品。

表7实施例1～3右硫辛酸赖氨注射液样品的检测数据汇总

数据分析：上述样品的含量稳定、异构体限度较低，pH值符合规定，本发明自制样品渗透压均等渗，工艺重现性好，奥力宝渗透压为偏低渗，从临床用药安全性考虑自制样品渗透压优于奥力宝制剂。

此外，本发明选择实施例1制备的右硫辛酸赖氨注射液的进行影响因素试验的考察。

试验例6影响因素试验

通过包材相容性试验考察的结果，发现只有棕色安瓿瓶的内包装形式下的样品在光照放样10天后含量下降约2％，有关物质略有增加，可见本品对包装的要求较高。因此影响因素放样时，光照条件下将实施例1制得样品以含外包装(白盒)与不含外包装(白盒)的两种包装形式分别进行放样。40℃、60℃及光照条件下样品分别于5天、10天取样，考察外观性状、含量、有关物质及异构体变化，结果见表8。

表8右硫辛酸赖氨注射液影响因素考察

由结果可以看出，右硫辛酸赖氨注射液0天、5天、10天相比外观性状、异构体均无明显变化。不带白盒包装的样品光照条件下10天与0天相比含量下降明显，带白盒包装的样品光照条件下10天与0天相比含量、有关物质无明显变化，40℃、60℃5天、10天与0天相比有关物质略有增加，但均符合规定。在光照条件下不带白盒包装含量下降明显、有关物质有增加，通过加入外包装(白盒)后含量未下降，有关物质无明显变化，因此提示样品存放过程中应置于盒内避光保存。

试验例7低温、冻融研究

对实施例1制得的右硫辛酸赖氨注射液样品进行低温、冻融试验的考察。

8.1低温考察

取注射液，在2-8℃冰箱中放置两天，然后在40℃烘箱条件下放置两天，循环三次，考察样品的外观，测定pH、含量和有关物质，并与未经处理的样品(样品放置在室温)相对比，结果见表9。

表9低温考察的试验结果

上述试验结果表明，本品经低温实验稳定性考察有关物质、含量、pH值变化趋势不大，说明本品在低温下是稳定的。

8.2冻融考察

取注射液，在-10～-20℃冰箱中放置两天，然后在40℃烘箱条件下放置两天，循环三次，考察样品的外观，并测定pH、含量和有关物质，并与未经处理的样品(样品放置在室温)相对比，结果见表10。

表10反复冻融的试验结果

上述试验结果表明，本品在经反复冻融后，经冻融稳定性考察与0天相比有关物质、含量、pH值变化趋势不大，说明本品储存中能耐受较低温度的变化。

试验例8配伍实验考察

参考奥力宝使用说明书中使用方法：“选择0.9％生理盐水静脉滴注30min，用铝箔纸保护溶液以避光，避光保护后，溶液可以稳定大约6小时。”本发明也选择了0.9％生理盐水对右硫辛酸赖氨注射液进行配伍，配伍时设计输液袋上加上一层软质铝箔和不加软质铝箔两种形式来考察配伍的稳定性情况，分别于0、2、4、6、8、10h取样观察性状，测定含量、有关物质、pH值。结果见表11～12，变化趋势见图1～2。

表11 0.9％氯化钠注射液配伍不带铝箔稳定性情况

结果表明：本品在0.9％的氯化钠注射液中，不带铝箔室温条件下放置2小时有关物质开始增加、含量下降。因此在临床使用中，本品配伍后不带软质铝箔使用稳定性难以保证。

表12 0.9％氯化钠注射液配伍带铝箔稳定性情况

结果表明：本品在0.9％的氯化钠注射液中，室温条件加铝箔下放置8小时内是稳定的。溶液外观、pH值都没有明显变化，含量没有下降，10h有关物质与0h相比增加0.076％。因此在临床使用中，本品可选择与0.9％的氯化钠生理盐水配伍稀释使用，滴注时需要外包一层软质铝箔后使用，溶液稳定大约8h，因此，右硫辛酸赖氨注射液在0.9％氯化钠配伍中的稳定性质量不低于奥力宝。

试验例9加速、长期试验结果

本发明制备的右硫辛酸赖氨酸盐注射剂，其稳定性加速实验(考察条件：40℃±2℃，相对湿度75％±5％)结果见表13，稳定性长期实验(考察条件：25℃±2℃，相对湿度60％±10％)结果见表14。

表13加速试验数据汇总

表14长期试验数据汇总

试验例11临床前研究

硫辛酸主要包括DL-硫辛酸(混旋体)、R-硫辛酸(右旋)和S-硫辛酸(左旋)。研究发现，经口给予R或S-硫辛酸，R-硫辛酸的生物利用度高于S-硫辛酸。此外，R-硫辛酸也是更接近于自然、毒性更低和更有效的形式，提示R-硫辛酸可能是临床使用的最适当的形式。本试验分别以实施例1、对比例1、对比例2注射液进行临床前研究，具体方案如下：

一、药效学研究

1、在药效学试验中，以SD大鼠为试验对象，连续给予10周高脂高糖饲料(10％猪油和20％的蔗糖)后，采用腹腔注射STZ制成糖尿病模型。对此造模成功大鼠，连续6周分别静脉注射给予硫辛酸(20mg/kg)、左硫辛酸(20mg/kg)及右硫辛酸赖氨酸(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)，各组体重及血糖值均无显著性差异。

2、对热板法检测大鼠热疼痛刺激反应时间的影响

采用上述造模成功的大鼠为实验对象，各组大鼠连续尾静脉给药6周。用热板法测检测各组动物对热疼痛刺激的反应时间。实验结果如图3及表15所示。

表15各组大鼠疼痛反应时间比较

注：与模型组比较：*p<0.05；与左硫辛酸组比较：#p<0.05

3、对大鼠坐骨神经传导速度的影响

采用上述造模成功大鼠为实验对象，连续尾静脉给药6周后，在实验终点时，在体分离大鼠右侧坐骨神经，使用生物机能实验系统测定大鼠坐骨神经传导速度。实验结果如图4及表16所示。

表16各组大鼠坐骨神经传导速度比较

注：与模型组比较：**p<0.01，***p<0.001；与左硫辛酸组比较：##p<0.01，###p<0.001。

实验结果表明，右硫辛酸赖氨酸中剂量组(10mg/kg)和高剂量组(20mg/kg)大鼠对外界刺激的反应时间小于模型组，坐骨神经传导速度大于模型组，外周神经密度增加，坐骨神经缺氧程度降低，表明右硫辛酸赖氨酸可改善糖尿病模型大鼠外周神经损伤。此外，硫辛酸(20mg/kg)与右硫辛酸赖氨酸中剂量(10mg/kg)作用相当，右硫辛酸赖氨酸药效作用显著高于同剂量左硫辛酸和消旋硫辛酸。

二、药代动力学研究

在大鼠及比格犬进行的右硫辛酸血药浓度经时过程研究结果表明：右旋硫辛酸在大鼠及比格犬体内药代动力学基本符合线性动力学特征；右旋硫辛酸在体内消除较快；在比格犬和SD大鼠体内药代动力学性质无明显性别差异；左右旋硫辛酸在比格犬和大鼠体内未发生转化；无论单独给药或消旋硫辛酸给药，左硫辛酸在大鼠和比格犬体内的暴露水平明显低于右硫辛酸。

右硫辛酸在大鼠组织分布试验结果表明：大鼠给予右硫辛酸赖氨酸注射液后，右硫辛酸主要分布在肾脏、坐骨神经和肝脏组织中；静脉给予右硫辛酸赖氨酸注射液后，右硫辛酸在SD大鼠组织分布无明显性别差异；注射液尾静脉给药后，在SD大鼠组织中硫辛酸对映体无相互转化现象。

三、毒理学研究

为了评价右硫辛酸赖氨酸盐注射液的安全性，本发明还对注射液进行了大鼠和比格犬的28天的多次重复给药毒性试验，并进行了消旋硫辛酸注射液及左旋硫辛酸注射液的对比毒性研究。

重复给药毒性试验：

采用大鼠及比格犬分别进行了28天重复给药毒性试验。给药周期为28天，恢复期为28天。大鼠一个月静脉注射给予本发明注射液后，其最大无毒性反应剂量(NOAEL)为40mg/kg。大鼠重复给药毒性试验中，80mg/kg注射液、80mg/kg消旋对照及80mg/kg左旋对照均可引起受试动物肝功能轻微损害并引起肝细胞变性，其中左旋对照组肝细胞变性程度较重。停药28天后肝脏损害均有减轻。

比格犬一个月静脉注射给予本发明注射液后，其最大无毒性反应剂量(NOAEL)应7.5mg/kg。并且犬高剂量组的毒副反应与消旋对照组相当，左旋体对比格犬的毒性作用强于右旋对映体，毒性靶器官为肝脏和心脏。

结果表明右硫辛酸赖氨酸盐注射液在大鼠及比格犬的28天多次重复给药毒性试验证明了右硫辛酸毒性反应低于左旋对映体-左旋硫辛酸、及消旋硫辛酸，与已上市药物消旋硫辛酸毒性靶器官相同为肝脏和心脏。并且毒代试验结果表明右硫辛酸在大鼠及比格犬体内没有蓄积。遗传毒性试验显现为阴性，且局部刺激性、溶血性及过敏性试验结果均为阴性。毒理研究证明，右旋硫辛酸比左旋硫辛酸毒性更低，具有毒理学优势。

试验例12临床药效研究

本发明所述的右硫辛酸赖氨注射可用于预防和治疗糖尿病及糖尿病慢性并发症等疾病。

试验目的：

1、探索静脉滴注不同剂量的右硫辛酸赖氨注射液在糖尿病周围神经病变引起的感觉异常患者中的有效性，并与硫辛酸注射液(

)进行对比研究。

2、探索静脉滴注不同剂量的右硫辛酸赖氨注射液在糖尿病周围神经病变引起的感觉异常患者中的安全性，并与硫辛酸注射液(

)进行对比研究。

采用前瞻性、随机、双盲、安慰剂与阳性药对照设计，随机入组200例糖尿病周围神经病变患者。受试者年龄范围为18-75周岁(包括临界值)，性别不限，为符合糖尿病诊断标准(WHO1999)诊断的1型或2型糖尿病及远端对称性多发性神经病变(DSPN)诊断的患者(症状和体征同时存在)。共分为五组，其中试验药物分为低、中、高三个剂量组，对照组包括阳性对照药组及安慰剂组，各组受试者例数均为40例。试验药低剂量组每日用药200mg，中剂量组每日用药400mg，高剂量组每日用药600mg。

剂量选择依据：我司I期临床试验人体药代动力学研究结果显示，200mg(以右硫辛酸计)右硫辛酸赖氨注射液右硫辛酸暴露量相当于300mg硫辛酸注射液，400mg(以右硫辛酸计)右硫辛酸赖氨注射液相当于600mg硫辛酸注射液。右硫辛酸赖氨注射液与硫辛酸注射液单次给药试验主要药代动力学参数比较见下表17。

表17

根据上表中提供的数据，比值按0.75计算，200mg右硫辛酸赖氨注射液相当于300mg硫辛酸注射液，400mg右硫辛酸赖氨注射液相当于600mg硫辛酸注射液。

主要疗效指标结果：

对于基线TSS≥9分的人群(98例)，主要疗效指标D15糖尿病周围神经病变总症状评分(TSS)较基线的变化值由高到低依次为：试验药中剂量组、试验药高剂量组、试验药低剂量组、阳性对照药组、安慰剂组。具体试验数据如表18所示。

表18

安全性结果：

注射部位局部反应发生情况：试验药低剂量组和安慰剂组未发生注射部位局部反应，其他各组受试者注射部位局部反应发生率由低到高依次为：试验药高剂量组5.00％、试验药中剂量组7.50％、阳性对照药组17.50％。

与药物相关的不良事件发生情况：受试者不良事件发生率由低到高依次为：试验药低剂量组0％，试验药中剂量组5.00％，试验药高剂量组7.50％，安慰剂组17.50％，阳性对照药组22.50％。安慰剂组与药物相关的不良事件发生率高的原因有可能与受试者既往疾病和饮食习惯有关，也可能是因为安慰剂没有治疗作用，受试者糖尿病周围血管病变症状加重导致。

如表19所示。

表19

研究结论：

由主要疗效指标分析中可以得出，在糖尿病周围神经病变引起的感觉异常的受试者中，试验药各组的疗效均优于安慰剂组，试验药中剂量组(400mg/d)的疗效最优。中剂量组与高剂量组之间疗效差异不大，可见药物疗效随剂量增加有一定的平台效应。通过探索性分析得出，试验药中剂量组在糖尿病周围神经病变的总症状评分较高的人群中(基线TSS≥9分)及血糖控制不佳的人群中(基线HbA1c≥6％)的症状改善情况更为明显，显示出比安慰剂更明显的药物疗效，也更适合注射剂型的临床应用规范。

从安全性结果可以得出，药物整体上安全性较好，药物组间的安全性差异，主要体现在局部毒性，试验药各组比阳性对照药组改善较为明显，这与药物改良的立题目的是相符的。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物，其特征在于，以右硫辛酸计，所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物的给药日剂量为100～900mg。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述给药日剂量为200～600mg。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述右硫辛酸赖氨酸盐为无定型或多晶型的形式存在于组合物中；

优选地，所述组合物为注射剂或注射用冻干制剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其特征在于，所述注射剂中以右硫辛酸计含量为15mg/mL～80mg/mL；

优选地，所述注射剂中以右硫辛酸计含量为20mg/mL～30mg/mL；

优选地，所述注射剂为pH在7.5至8.5范围内的含水溶液；

优选地，所述注射剂中不含防腐剂和抗氧剂。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含药用辅料；

优选地，所述药用辅料为赖氨酸、精氨酸、氨丁三醇或葡甲胺中的一种或至少两种的组合，优选精氨精、赖氨酸或葡甲胺中的一种或至少两种的组合。

优选地，所述药用辅料为精氨酸；

优选地，所述精氨酸为L-精氨酸、D-精氨酸或者二者的混合物；

优选地，所述组合物中右硫辛酸赖氨酸盐以右硫辛酸计，其与精氨酸的质量比为20:1～20:1.5，优选为20:1.2；

优选地，所述注射剂的渗透压为270～320mOsmol/kg，优选为280～300mOsmol/kg；

优选地，所述注射剂在避光条件下制备和保存。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物的杂质A的含量≤0.2％，左硫辛酸的含量≤0.5％，聚合物杂质B的含量≤2.0％；

优选地，杂质A的含量≤0.1％，左硫辛酸的含量≤0.2％，聚合物杂质B的含量≤1.0％；

优选地，杂质A的含量≤0.05％，左硫辛酸的含量≤0.1％，聚合物杂质B的含量≤0.5％；

其中，左硫辛酸、杂质A、聚合物杂质B结构式如下：

7.根据权利要求1-6中任一项所述的包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

在氮气保护下，将处方量的右硫辛酸赖氨酸盐与药用辅料混合，制备成相应的制剂类型，得到所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述组合物为注射剂，所述制备方法包括以下步骤：

在氮气保护下，将处方量的右硫辛酸赖氨酸盐与药用辅料一起搅拌溶解在注射用水中，并通过膜滤器过滤；灌装，灭菌，得到所述包含右硫辛酸赖氨酸盐的组合物。

优选地，所述制备方法具体包括以下步骤：

(1)在配液罐中加入50％～90％处方量的注射用水，在氮气保护下，加入处方量的药用辅料；

(2)再加入处方量的右硫辛酸赖氨酸盐，搅拌溶解，加入剩余注射用水定容，调节pH在7.5至8.5范围内；

(3)将上述溶液通过0.22μm的滤膜精滤，检测含量合格后，灌装；

(4)将灌装得到的半成品至于灭菌柜中121℃灭菌12-15min后，灯检合格后分装即得成品；

优选地，所述制备过程在避光条件下进行。

9.根据权利要求1～6任一项所述的组合物用于改善药物安全性和/或改善药物稳定性的用途。

10.权利要求1～6任一项所述的组合物在制备治疗神经病变药物中的应用；

优选地，所述神经病变为糖尿病周围神经病变。

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