CN115886136A - 一种菜籽蛋白源保健饲料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种菜籽蛋白源保健饲料及其制备方法，属于动物饲料领域。本发明中的菜籽蛋白源保健饲料包括以下重量份数的原料：无毒菜籽蛋白15～25份，L‑胱氨酸0.1～0.5份，玉米淀粉35～45份，麦芽糖糊精10～16份，蔗糖5～15份，纤维素3～7份，大豆油5～9份，叔丁基对二苯酚0.001～0.002份，S10022M混合矿物质2～5份，V10037混合维生素0.5～2份，酒石酸氢胆碱1～4份。本发明中的菜籽蛋白源保健饲料营养搭配均衡，并且动物食用后能产生饱腹感，进而达到减肥、降脂的功效。

Description

一种菜籽蛋白源保健饲料及其制备方法
技术领域
本发明涉及动物饲料技术领域，尤其涉及一种菜籽蛋白源保健饲料及其制备方法。
背景技术
在动物中，食用高质量(通常是能量密集的)食物会导致肥胖，引起相关的生理和健康问题。近年来，氨基酸介导的饱腹感机制备受关注，已有研究表明氨基酸能够作用于脑室膜细胞，激发细胞内钙离子，释放ATP，进一步放大钙离子信号，从而将“饱腹感”信号传递给大脑实质，这为有效缓解肥胖提供了新的途径，而不同的蛋白源由于氨基酸组成的不同也已被证实在预防或诱导肥胖的能力上有所不同。
菜籽蛋白是一种可与牛奶和鸡蛋蛋白质相媲美的优质蛋白质，其能提供所有营养必需氨基酸和平衡的氨基酸结构，是一种潜在的优质减肥、降脂蛋白源。然而，由于菜籽蛋白中存在多种非蛋白质化学成分(抗营养因子)，极大的限制了其功能化应用。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种菜籽蛋白源保健饲料及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种菜籽蛋白源保健饲料，包括以下重量份数的原料：无毒菜籽蛋白15～25份，L-胱氨酸0.1～0.5份，玉米淀粉35～45份，麦芽糖糊精10～16份，蔗糖5～15份，纤维素3～7份，大豆油5～9份，叔丁基对二苯酚0.001～0.002份，S10022M混合矿物质2～5份，V10037混合维生素0.5～2份，酒石酸氢胆碱1～4份。
优选的，所述无毒菜籽蛋白中，植酸含量≤0.23％、总酚含量为0.23％～0.35％，不含有硫甙。
本发明还提供了一种菜籽蛋白源保健饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：将脱脂后的菜籽粕、缓冲液和植酸酶混合进行酶解，得酶解液；
S2：从步骤S1所述酶解液中分离菜籽蛋白；
S3：用乙醇洗涤分离出来的菜籽蛋白2～4次，得到无毒菜籽蛋白；
S4：将无毒菜籽蛋白、L-胱氨酸、玉米淀粉、麦芽糖糊精、蔗糖、纤维素、大豆油、叔丁基对二苯酚、S10022M混合矿物质、V10037混合维生素和酒石酸氢胆碱混合，搅拌得混合物1；
S5：将混合物1与水混合，得混合物2；
S6：对混合物2进行挤压造粒，然后烘干至水分为5～8％，获得菜籽蛋白源保健饲料。
优选的，步骤S1中，每1g脱脂后的菜籽粕添加植酸酶0.8～1.5U，所述酶解时间为0.5～1.5h，所述酶解温度为50～55℃。
优选的，步骤S2的具体操作步骤为：将酶解液离心，取沉淀1，将沉淀溶用亚硫酸钠水溶液溶解得溶液1，调节溶液1pH至10.5～11.5，45～55℃搅拌1～3h得溶液2，将溶液2离心取上清液；调节所述上清液的pH为4～5，离心取沉淀2，即为分离出的菜籽蛋白。
优选的，步骤S3中，所述乙醇的体积分数为85～100％，所述乙醇与菜籽蛋白的体积比为4～8:1。
优选的，步骤S4中的搅拌时间为0.2～0.3h。
优选的，步骤S5中水的重量为原料总重量的8-11％。
优选的，步骤S6中的烘干温度为50～55℃。
通过采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明所采用的植物源营养类无毒菜籽分离蛋白，不含有硫甙，植酸含量为≤0.23％，总酚含量为0.23～0.35％，抗营养因子含量全面低于目前国内外已有报道，经急性经口毒性试验(参照国标：GB 15193.3-2014)，证实所得菜籽分离蛋白无毒性，且易消化；
(2)本发明饲料具有均衡的氨基酸结构，营养搭配均衡，能够满足动物正常生理需求；
(3)本发明饲料能够提高肥胖啮齿类动物血液中的氨基酸(赖氨酸、精氨酸和丙氨酸)水平，高脂饮食诱导的肥胖啮齿类动物进食后，血液中升高的氨基酸(赖氨酸、精氨酸和丙氨酸)通过血脑屏障进入脑脊液，然后作用于下丘脑室管膜细胞，从而调节下丘脑内氨基酸作用的细胞内介质——mTOR，并通过mTOR信号传导的机制直接影响Agrp基因的表达，来产生饱腹感以达到减肥、降脂的功效。
附图说明
图1为不同处理组对小鼠体重的影响，其中脱毒菜籽分离蛋白组即为无毒菜籽分离蛋白组；
图2为不同蛋白源饲料对SD大鼠食物摄入量(A)、体重(B)和Lee’指数(C)的影响；
图3为不同蛋白源饲料对SD大鼠血浆中主要氨基酸赖氨酸(A)、精氨酸(B)和丙氨酸(C)含量的影响；
图4为不同蛋白源饲料干预后GT1-7细胞中p70S6K(A)、p-p70S6K(B)和pACC(C)的表达；
图5为不同蛋白源饲料对SD大鼠血清中主要生化指标TC(A)、TG(B)、LDL-C(C)、HDL-C(D)、NPY(E)和Leptin(F)的影响。
具体实施方式
本发明提供了一种菜籽蛋白源保健饲料，包括以下重量份数的原料：无毒菜籽蛋白15～25份，L-胱氨酸0.1～0.5份，玉米淀粉35～45份，麦芽糖糊精10～16份，蔗糖5～15份，纤维素3～7份，大豆油5～9份，叔丁基对二苯酚0.001～0.002份，S10022M混合矿物质2～5份，V10037混合维生素0.5～2份，酒石酸氢胆碱1～4份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括无毒菜籽蛋白15～25份，优选为18～22份，进一步优选为20份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括L-胱氨酸0.1～0.5份，优选为0.2～0.4份，进一步优选为0.3份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括玉米淀粉35～45份，优选为38～42份，进一步优选为40份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括麦芽糖糊精10～16份，优选为12～14份，进一步优选为13份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括蔗糖5～15份，优选为8～12份，进一步优选为10份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括纤维素3～7份，优选为4～6份，进一步优选为5份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括大豆油5～9份，优选为6-8份，进一步优选为7份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括叔丁基对二苯酚0.001～0.002份，优选为0.0013～0.0018份，进一步优选为0.0015份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括S10022M混合矿物质2～5份，优选为3～4份，进一步优选为3.5份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括V10037混合维生素0.5～2份，优选为1～1.5份，进一步优选为1.3份。
在本发明中，所述菜籽蛋白源保健饲料包括酒石酸氢胆碱1～4份，优选为2～3份，进一步优选为2.5份。
本发明还提供了一种菜籽蛋白源保健饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：将脱脂后的菜籽粕、缓冲液和植酸酶混合进行酶解，得酶解液；
S2：从步骤S1所述酶解液中分离菜籽蛋白；
S3：用乙醇洗涤分离出来的菜籽蛋白2～4次，得到无毒菜籽蛋白；
S4：将无毒菜籽蛋白、L-胱氨酸、玉米淀粉、麦芽糖糊精、蔗糖、纤维素、大豆油、叔丁基对二苯酚、S10022M混合矿物质、V10037混合维生素和酒石酸氢胆碱混合，搅拌得混合物1；
S5：将混合物1与水混合，得混合物2；
S6：对混合物2进行挤压造粒，然后烘干至水分为5～8％，获得菜籽蛋白源保健饲料。
在本法明中，所述菜籽粕由菜籽脱脂、干燥获得，所述菜籽优选为脱壳双低菜籽，所述脱脂在含有正己烷的浸出器中进行，将脱脂后的菜籽干燥，得菜籽粕。
在本发明中，步骤S1每100g脱脂后的菜籽粕添加植酸酶15～25mg，优选为18～22mg，进一步优选为20mg；所述植酸酶优选的购自源叶生物科技有限公司，产品货号：9001-89-2，酶活：5U/mg。
在本发明中，步骤S1每100g脱脂后的菜籽粕添加缓冲液800～1200mL，优选为1000mL；所述缓冲液优选为浓度为0.1M、pH 4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液。
在本发明中，步骤S1中的酶解时间为50～55℃，优选为51～54℃；进一步优选为53℃；酶解时间为0.5～1.5h，优选为1.8～1.2h，进一步优选为1h。
在本发明中，酶解结束后还包括灭酶的步骤，具体操作为：在酶解液中加入50mL质量百分浓度10％的三氯乙酸水溶液，搅拌5min，灭酶活后，得到酶解液。
在本发明中，将所述酶解液离心，取沉淀1；所述离心的转速为8000～12000r/min，优选为10000r/min；所述离心的温度为3～6℃，优选为4℃，离心时间为25～35min，优选为30min。
在本发明中，将所述沉淀1用亚硫酸钠水溶液溶解，所述亚硫酸钠水溶液的质量百分浓度为0.03％～0.07％，优选为0.05％；所述亚硫酸钠水溶液的体积为800～1200mL，优选为1000mL，得溶液1；
在本发明中，还包括用氢氧化钠水溶液调节溶液1的pH。
在本发明中，所述氢氧化钠水溶液浓度为1.5～2.5M，优选为2M，调节pH至10.5～11.5，优选为11。
在本发明中，在调节溶液1pH的过程中，维持温度在45～55℃，优选为50℃，磁力高速搅拌1.5～2.5h，优选为2h，搅拌期间每隔5min使用上述氢氧化钠水溶液调节pH至11，得溶液2。
在本发明中，将溶液2离心，过滤取上清，所述离心的转速为3500～4500r/min，优选为4000r/min；所述离心的时间为20～40min，优选为30min。
在本发明中，在所述上清液中滴加盐酸调节pH，过夜酸沉，离心，得沉淀2；所述盐酸的浓度为0.5～1.5M，优选为1M；调节pH至4～5，优选为4.4；所述酸沉优选在冷藏柜中进行；所述离心的转速为8000～12000r/min，优选为10000r/min；离心时间为25～35min，优选为30min。
在本发明中，在沉淀2中加入乙醇溶液，振荡，离心取沉淀，重复2～4次，得无毒菜籽蛋白；所述乙醇溶液中，乙醇的体积份数为80％～90％，优选为85％；加入乙醇溶液与沉淀2的体积比为3～5:1，优选为4:1；振荡的时间为3～7min，优选为5min；离心的转速为3000～5000r/min，优选为4000r/min；离心时间为20～40min，优选为30min。
在本发明中，步骤S4中的搅拌时间为0.2～0.3h，优选为0.25h。
在本发明中，步骤S5中水的重量为原料总重量的8-11％，优选为9％。
在本发明中，步骤S6中的烘干温度为50～55℃，优选为53℃，所述烘干优选在烘箱中进行。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将脱壳双低菜籽置于含有正己烷的浸出器中脱脂，将脱脂后的菜籽干燥，得双低菜籽粕。在100g双低菜籽粕中加入1000mL的浓度为0.1M、pH4.8的乙酸-乙酸钠缓冲液，维持温度在50℃，加入20mg植酸酶(购自源叶生物技术有限公司，产品货号是9001-89-2，酶活：5U/mg)，在搅拌状态下酶解0.5h。然后，加入50mL质量百分浓度为10％的三氯乙酸水溶液，搅拌5min，灭酶活，得到酶解后的菜籽粕。将酶解后的菜籽粕在10000r/min，4℃离心下30min，取沉淀1。在沉淀1中加入1000mL、质量百分浓度位0.05％的亚硫酸钠水溶液中，用2M氢氧化钠水溶液调节pH到11，维持温度在50℃，磁力高速搅拌2h，搅拌期间每隔5min调节pH至11。将上述溶液于4000r/min的条件下，离心30min，过滤后，取上清液，滴加1M盐酸调节pH至4.4，随后置冷藏柜中过夜酸沉。在10000r/min的条件下离心30min，取沉淀2，将沉淀2用85％乙醇水溶液洗涤两次，冷冻干燥后得脱毒菜籽分离蛋白。每次洗涤的具体方法如下：在沉淀2中加入沉淀体积四倍的85％乙醇水溶液，摇床震荡5min，随后于4000r/min的条件下，离心30min，取沉淀，得无毒菜籽分离蛋白。
实施例2
称取实施例1制备获得的无毒菜籽蛋白15份，L-胱氨酸0.1份，玉米淀粉35份，麦芽糖糊精10份，蔗糖5份，纤维素3份，大豆油5份，叔丁基对二苯酚0.001份，S10022M混合矿物质2份，V10037混合维生素0.5份，酒石酸氢胆碱1份；将称量好的原料倒入搅拌机中充分搅拌，在搅拌均匀的原料中加入原料重量8％的清水，搅拌0.2h后，将搅拌机中调好水分的原料送入挤压机中进行挤压；挤压完成后，将饲料送入烘箱中，50℃烘干至水分为5％。
实施例3
称取实施例1制备获得的无毒菜籽蛋白25份，L-胱氨酸0.5份，玉米淀粉45份，麦芽糖糊精16份，蔗糖15份，纤维素7份，大豆油9份，叔丁基对二苯酚0.002份，S10022M混合矿物质5份，V10037混合维生素2份，酒石酸氢胆碱4份；将称量好的原料倒入搅拌机中充分搅拌，在搅拌均匀的原料中加入原料重量11％的清水，搅拌0.3h后，将搅拌机中调好水分的原料送入挤压机中进行挤压；挤压完成后，将饲料送入烘箱中，55℃烘干至水分为8％。
实施例4
称取实施例1制备获得的无毒菜籽蛋白18份，L-胱氨酸0.2份，玉米淀粉38份，麦芽糖糊精12份，蔗糖8份，纤维素4份，大豆油6份，叔丁基对二苯酚0.0013份，S10022M混合矿物质3份，V10037混合维生素0.8份，酒石酸氢胆碱2份；将称量好的原料倒入搅拌机中充分搅拌，在搅拌均匀的原料中加入原料重量9％的清水，搅拌0.25h后，将搅拌机中调好水分的原料送入挤压机中进行挤压；挤压完成后，将饲料送入烘箱中，52℃烘干至水分为6％。
实施例5
称取实施例1制备获得的无毒菜籽蛋白22份，L-胱氨酸0.3份，玉米淀粉42份，麦芽糖糊精14份，蔗糖12份，纤维素5份，大豆油8份，叔丁基对二苯酚0.0018份，S10022M混合矿物质2份，V10037混合维生素0.5份，酒石酸氢胆碱3份；将称量好的原料倒入搅拌机中充分搅拌，在搅拌均匀的原料中加入原料重量10％的清水，搅拌0.2h后，将搅拌机中调好水分的原料送入挤压机中进行挤压；挤压完成后，将饲料送入烘箱中，50℃烘干至水分为7％。
对比例1
与实施例5不同的是，将无毒菜籽蛋白替换为酪蛋白，其它组分与制备方法与实施例5相同。
对比例2
与实施例5不同的是，将无毒菜籽蛋白替换为商业大豆分离蛋白，其它组分与制备方法与实施例5相同。
实验例1无毒性菜籽分离蛋白的制备及安全性评价
1.无毒性菜籽分离蛋白和未脱毒处理菜籽分离蛋白的制备方法
无毒性菜籽分离蛋白的制备方法与实施例1相同。
未脱毒处理菜籽分离蛋白的制备方法：在100g双低菜籽粕中加入1000mL、质量百分浓度为0.05％的亚硫酸钠水溶液，用2M氢氧化钠水溶液调节pH到11，维持温度在50℃，磁力高速搅拌2h，搅拌期间每隔5min调节pH至11。将上述溶液于4000r/min的条件下离心30min，取上清液过滤，取滤液，滴加1M盐酸调节pH至4.4，随后置冷藏柜中过夜酸沉。在10000r/min的条件下离心30min，取出沉淀，直接冷冻干燥，得未脱毒处理菜籽分离蛋白。
2.无毒性菜籽分离蛋白安全性评价
检测上述方法得到的无毒性菜籽分离蛋白组分、含量的变化。采用氯化钯比色法检测硫甙含量，福林酚法检测总酚含量，过滤法测定蛋白消化率，三氯化铁比色法测定植酸含量，结果如表1所示。
表1菜籽分离蛋白各组分含量
Figure BDA0003961653870000081
表1中NA：表示未检测到；*：与未处理菜籽分离蛋白比较具有显著差异。**：与未处理菜籽分离蛋白比较具有极显著差异。
由表1可以看出，与未处理菜籽分离蛋白相比，无毒性菜籽分离蛋白中的抗营养因子：植酸、硫甙和总酚显著下降，硫甙未检测出，蛋白质消化率得到显著提升，高达94.53％，远高于已报道的大豆分离蛋白的消化率。无毒性菜籽分离蛋白中的蛋白含量相比于未处理菜籽分离蛋白，提升近10％。
基于急性经口毒性试验(参照国标：GB 15193.3-2014)，采用限量法评估本实验例制备的未脱毒处理菜籽分离蛋白和无毒菜籽分离蛋白的安全性，以大豆分离蛋白(购自秦皇岛金海食品工业有限公司)为对照。具体步骤如下：将C57小鼠(每只20g左右)适应性饲养1周，随后随机分成5组：对照组、无毒菜籽分离蛋白两个剂量组(蛋白给予剂量分别为10g/kg和20g/kg)、大豆分离蛋白组(蛋白给予剂量为10g/kg)和未处理菜籽分离蛋白组(蛋白给予剂量为10g/kg)，每组10只小鼠，雌雄各半。禁食12h后(不禁水)，按照各组小鼠的蛋白给予剂量，将各蛋白样品分别溶解于0.5mL生理盐水中，得到各蛋白溶液。各组灌胃对应的蛋白溶液，一次性灌胃给予每只小鼠0.5mL蛋白溶液，对照组灌胃相同体积生理盐水，正常饲养15天。从灌胃后第1天开始，每2天观察1次，至第15天结束。观察动物毒性表征(动物行为，皮肤毛色有无异常)，如有死亡，记录死亡时间。每2天记录实验小鼠体重，结果如图1所示。观察期结束，检查眼部(角膜、晶状体、球结膜、虹膜)，处死小鼠，眼部取血，进行血液学检查，计算平均值，结果见表4。取血结束后，对主要脏器进行称重，计算脏器指数，计算平均值，结果见表2和表3。
表2不同处理组对小鼠脏器(心脏、肝脏、脾脏、肺)指数的影响
Figure BDA0003961653870000091
Figure BDA0003961653870000101
表3不同处理组对小鼠脏器(肾脏、胸腺、甲状腺、甲状旁腺)指数的影响
Figure BDA0003961653870000102
表3中的*：与对照组比较具有显著差异。
表4不同处理组对小鼠血常规指标(白细胞)和血清中促甲状腺激素(TRH)的影响
Figure BDA0003961653870000103
Figure BDA0003961653870000111
表4中的*：与对照组比较具有显著差异。
15天观察期结束后，所有实验组小鼠眼部无异常，皮肤和被毛正常，观察期内小鼠无死亡。与对照组和大豆分离蛋白组相比，所有菜籽分离蛋白组对小鼠体重无明显影响(图1)。但脏器指数结果发现，未处理菜籽分离蛋白组中甲状腺指数显著低于对照组，说明甲状腺可能产生炎症性萎缩(表3和4)。小鼠血常规和血清THR的检测发现，未处理菜籽分离蛋白组中的白细胞数要显著高于其他组，THR含量也高于其他组，这从侧面进一步说明小鼠甲状腺产生了炎症。这一结果产生的原因与未处理菜籽分离蛋白中的含有较多的抗营养因子有关，尤其与高含量硫甙密切相关。无毒菜籽分离蛋白即使在剂量高达20g/kg时也未对小鼠的产生任何影响，说明本实验例制备的无毒菜籽分离蛋白无毒性作用。
实验例2无毒菜籽蛋白源保健饲料减肥降脂功能分析
基于大鼠肥胖模型实验，选取雄性SD大鼠18只，体重200～250g，6～8周龄，饲养至少1周后开始实验，其中分别饲喂实施例4(无毒菜籽分离蛋白含量20％)、对比例1(酪蛋白含量20％)、对比例2(商业大豆分离蛋白含量为20％)中的饲料。具体步骤如下：将18只大鼠物随机分为3组，每组6只。实验前2周分别饲喂45％高脂日粮(购自江苏省协同医药生物工程有限公司)，随后各自替换不同饲料继续喂养24d。水和食物是随意供应的。每3天监测体重，观察体重增加情况。于第1、7、14、21天，每组6只大鼠在每日采样大约相同的时间(中午12点到1点)，颈静脉采集血液，分析血浆中的游离氨基酸。24d结束时，每组6只大鼠颈静脉采集血液，分析血清生化参数取平均值，并在解刨处理前4～6h禁食，用氯胺酮(50mg/kg)和美托咪定(1mg/kg)混合麻醉，异氟醚维持。同时，处死大鼠，分别解剖肝、肾、胴体、附睾、腹膜后、肠系膜和皮下的白色脂肪组织称重，精确至0.01g，计算平均值；不同处理组SD大鼠主要器官白色脂肪组织重量的脏体比，结果如表5所示；同时对不同蛋白源饲料对SD大鼠食物摄入量(A)、增重率(B)和Lee’指数(C)的影响进行了研究，结果如图2所示。
表5不同处理组SD大鼠主要器官白色脂肪组织重量的脏体比(％)
Figure BDA0003961653870000121
表5中：字母不同表示差异显著(p<0.05)。
24天观察期结束后，与对照组和大豆分离蛋白组相比，无毒菜籽蛋白源饲料组大鼠食物摄入量、增重率、Lee’指数(图2)和主要器官的脏体比(表5)明显较低。在整个研究期间，各组的摄食量和体重均呈总体增加趋势，但无毒菜籽蛋白源饲料组的增重率一直低于其他两组，且观察结束后所测得的Lee’指数也是最低值，且显著低于其他两组。作为评价和衡量肥胖的重要指标的增重率和Lee’指数显著降低，这很好的说明了无毒菜籽蛋白源饲料具有一定的减肥作用。
细胞总蛋白提取：将GT1-7细胞接种于6孔板中，当细胞达40％融合时，分别用含有2.70mg/mL无毒菜籽分离蛋白、1.52mg/mL商业大豆分离蛋白和1.28mg/mL酪蛋白完全培养液进行16h的细胞培养(大鼠肥胖模型实验中得出的最高干预浓度)。培养结束后，用细胞裂解液进行细胞总蛋白的提取。
蛋白印迹实验：将上述细胞实验中所提取的总蛋白进行SDS-PAGE分离，并转移到聚偏二氟乙烯膜上。膜在1×TBS-T中洗涤，并放入含0.5％BSA的封闭液中，室温下摇床上摇动1～2h。然后，用p70S6K(1:1000稀释)、p-p70S6K(1:1000稀释)和pACC(1:1000稀释)的一抗进行4℃过夜孵育。孵育结束后，将膜洗涤并与相应的二抗孵育。最后，在膜的蛋白面滴加适量发光试剂反应5min，置于Image QuantLAS4000凝胶成像系统仪中曝光显影。结果如图4所示。由图4可知，无毒菜籽蛋白源组中下丘脑内氨基酸作用的细胞内介质——mTOR的下游信号分子p-p70S6K和p70S6K得到明显的上调，从而导致厌食反应；而磷酸化乙酰辅酶a羧化酶(pACC)的下调也进一步说明无毒菜籽蛋白源饲料组可以抑制下丘脑AMP激活蛋白激酶(AMPK)信号转导，来控制食物摄入并以消耗能量的过程为代价，开启产生能量的途径。
SD大鼠血浆中的游离氨基酸检测：使用LA8080自动氨基酸分析仪(日立高科技公司，日本)，在570nm和440nm下分析SD大鼠血浆中的游离氨基酸。色谱柱为磺酸型阳离子树脂。流动相的流速为0.4mL/min，柱温为135±5℃，进样量为20μL。在氨基酸分析之前对样品进行适当的预处理。为了测定游离氨基酸的含量，将样品在0.02M盐酸中水解。使用标准氨基酸混合物获得校准曲线，并基于标准化合物的保留时间和峰面积对样品中游离氨基酸进行定量。SD大鼠血浆游离氨基酸的检测中发现，无毒菜籽蛋白源饲料组中赖氨酸(0.0077g/100mL)，精氨酸(0.0041g/100mL)和丙氨酸(0.0086g/100mL)明显高于对照组和大豆分离蛋白组(图3)。其中血浆中升高的赖氨酸、精氨酸和丙氨酸将通过血脑屏障进入脑脊液作用于下丘脑室管膜细胞，激活细胞内钙离子，释放ATP并进一步放大钙离子信号，从而将“饱腹”信号传递到脑实质，导致产生饱腹感，达到减肥、降脂的效果。
SD大鼠的血清生化参数检测：利用总胆固醇(TC)含量检测和甘油三酯(TG)含量检测参考试剂盒说明书(北京索莱宝科技有限公司)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量检测和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量检测参考试剂盒说明书(上海晶抗生物工程有限公司)，Neuropeptide(NPY)含量检测参考试剂盒说明书(南京赛泓瑞生物科技有限公司)，瘦素(Leptin)含量检测参考试剂盒说明书(Abcam公司)对SD大鼠血清中的TC、TG、LDH-C、NPY和LEP含量进行检测，在SD大鼠的血清生化参数检测中，发现无毒菜籽蛋白源饲料组的TC、TG、LDH-C、NPY和LEP水平均最低，这也进一步证明无毒菜籽蛋白源饲料具有减肥、降脂的功效(图5)。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种菜籽蛋白源保健饲料，其特征在于，包括以下重量份数的原料：无毒菜籽蛋白15～25份，L-胱氨酸0.1～0.5份，玉米淀粉35～45份，麦芽糖糊精10～16份，蔗糖5～15份，纤维素3～7份，大豆油5～9份，叔丁基对二苯酚0.001～0.002份，S10022M混合矿物质2～5份，V10037混合维生素0.5～2份，酒石酸氢胆碱1～4份。
2.根据权利要求1所述的菜籽蛋白源保健饲料，其特征在于，所述无毒菜籽蛋白中，植酸含量≤0.23％、总酚含量为0.23％～0.35％，不含有硫甙。
3.权利要求1或2所述菜籽蛋白源保健饲料的制备方法，包括以下步骤：
S1：将脱脂后的菜籽粕、缓冲液和植酸酶混合进行酶解，得酶解液；
S2：从步骤S1所述酶解液中分离菜籽蛋白；
S3：用乙醇洗涤分离出来的菜籽蛋白2～4次，得到无毒菜籽蛋白；
S4：将无毒菜籽蛋白、L-胱氨酸、玉米淀粉、麦芽糖糊精、蔗糖、纤维素、大豆油、叔丁基对二苯酚、S10022M混合矿物质、V10037混合维生素和酒石酸氢胆碱混合，搅拌得混合物1；
S5：将混合物1与水混合，得混合物2；
S6：对混合物2进行挤压造粒，然后烘干至水分为5～8％，获得菜籽蛋白源保健饲料。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S1中，每100g脱脂后的菜籽粕添加植酸酶15～25mg，所述酶解时间为0.5～1.5h，所述酶解温度为50～55℃。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2的具体操作步骤为：将酶解液离心，取沉淀1，将沉淀溶用亚硫酸钠水溶液溶解得溶液1，调节溶液1pH至10.5～11.5，45～55℃搅拌1～3h得溶液2，将溶液2离心取上清液；调节所述上清液的pH为4～5，离心取沉淀2，即为分离出的菜籽蛋白。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S3中，所述乙醇的体积分数为85～100％，所述乙醇与菜籽蛋白的体积比为4～8:1。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S4中的搅拌时间为0.2～0.3h。
8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S5中水的重量为原料总重量的8-11％。
9.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S6中的烘干温度为50～55℃。
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