CN115873664A - 一种用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法，其用于核酸提取磁珠的清洗液部分包括如下步骤：S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。本发明所公开的用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法，通过向清洗液中加入盐离子和高分子聚合物，对核酸提取磁珠进行清洗后，核酸提取磁珠放置30天不挂壁，且保证了核酸的提取效率。
Description
技术领域
本发明涉及核酸提取磁珠技术领域，尤其涉及一种用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法。
背景技术
磁珠是一种包被有生物活性基团的功能化载体，可分散于基液中形成磁性液体材料，生物活性基团可以与多种生物活性物质发生偶联，兼具有液体的流动性和固体磁性颗粒材料的双重特点。磁珠因其优异的特性使其应用也较为广泛，目前核酸分离提取已成为磁珠最主要的用途之一，即核酸提取磁珠，其是对具有超顺磁性的微粒表面进行化学修饰，形成核壳结构，然后在一定的环境下与核酸结合，并利用纳米微球的超顺磁性，在外加磁场作用下，从血液、组织、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在临床诊断、法医鉴定、微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。磁珠清洗在核酸提取磁珠制备过程中不是反应步骤，但却是决定方案成败的关键，核酸提取磁珠清洗的目的是将反应液中未包被在磁珠上的生物原料及反应过程中非特异性吸附于磁珠表面的干扰物质清洗掉。目前在核酸提取磁珠制备过程中，各原料反应结束，对其进行清洗时常用的清洗液主要为去离子水、蒸馏水或纯水，核酸提取磁珠经这些清洗液清洗后即保存使用。
然而在实际应用中发现，核酸提取磁珠经放置后容易发生粘挂容器壁的现象，这样不仅影响核酸提取磁珠的使用外观，更严重影响了磁珠的核酸提取效率和效果，且在一定程度上限制了核酸提取磁珠的应用和推广。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法。
本发明所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液，包括如下步骤：
S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；
S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。
优选的，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
优选的，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙、氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
优选的，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述高分子聚合物为聚乙二醇4000；所述溶剂为纯水；所述聚乙二醇4000在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为氯化钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为柠檬酸三钠；所述溶剂为纯水；所述柠檬酸三钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为醋酸钠；所述溶剂为纯水；所述醋酸钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠和次氯酸钠；所述高分子聚合物为聚乙二醇4000；所述溶剂为纯水；所述氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠、次氯酸钠和聚乙二醇4000在所述混合液中的重量千分比均为5；所述纯水的重量千分比为975。
优选的，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，还包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
优选的，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
优选的，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为0.2；所述纯水的重量千分比为999.8。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为999。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为2；所述纯水的重量千分比为998。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为4；所述纯水的重量千分比为996。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为8；所述纯水的重量千分比为992。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为16；所述纯水的重量千分比为984。
优选的，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，还包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
优选的，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙或氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
优选的，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0.003-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.004；所述纯水的重量千分比为999.996。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.004；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.996。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.008；所述纯水的重量千分比为999.992。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.008；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.992。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.016；所述纯水的重量千分比为999.984。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.016；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.984。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.003；所述纯水的重量千分比为999.997。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.003；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.997。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.006；所述纯水的重量千分比为999.994。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.006；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.994。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.009；所述纯水的重量千分比为999.991。
优选的，本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.009；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.991。
本发明所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液的使用方法，包括如下步骤：
S1用于将核酸提取磁珠转移至清洗容器中的步骤；
S2用于将如前所述的用于核酸提取磁珠清洗液加入清洗容器中进行充分搅拌混匀的步骤；
S3用于对清洗容器进行外加磁场作用，使核酸提取磁珠与清洗液分离，形成核酸提取磁珠沉淀和上清液的步骤；
S4用于去除清洗容器中的上清液的步骤；
S5用于清洗后的核酸提取磁珠沉淀，定容为工作浓度并摇匀的步骤。
本发明所提供的一种用于核酸提取磁珠的清洗液及其使用方法，与现有技术相比具有的有益效果为：
1)通过本发明提供的清洗液清洗的核酸提取磁珠，在放置30天后，仍然光滑不挂壁；
2)通过本发明提供的清洗液清洗的核酸提取磁珠，核酸提取产量及效率并未降低；
3)在核酸提取磁珠清洗过程中，一价盐次氯酸钠可除去核酸提取磁珠反应液中未被包覆的铁及游离氨等杂离子，使得核酸提取磁珠被清洗的更彻底，故用该清洗液清洗后的核酸提取磁珠经放置后不易出现粘壁现象，同时，清洗液中次氯酸钠的加入还能够防止核酸提取磁珠中微生物滋生，避免了外源核酸的引入，避免了外源微生物影响磁珠的使用；
4)核酸提取磁珠用清洗液中的高分子量的表面活性剂通过对核酸提取磁珠的多次清洗浸润，降低核酸提取磁珠的表面张力的同时，对核酸提取磁珠粒子间起到了空间位阻的分散作用，同时表面活性剂还可以增加溶液的粘度，综合结果使得核酸提取磁珠能够分散均匀，溶液对核酸提取磁珠更容易润湿浸润，从而不易挂壁。
附图说明
图1为本发明所述的用于核酸提取磁珠的清洗液流程示意图；
图2为本发明实施例一采用不同清洗剂混合形成清洗液的组成对照图；
图3为本发明实施例一核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后的挂壁状态对照图；
图4为本发明实施例一核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置1天的状态对照图；
图5为本发明实施例一核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置30天的挂壁状态对照图；
图6为本发明实施例一中核酸提取磁珠经方案7清洗液清洗后和经方案4清洗液清洗后放置30天后倒扣桌面挂壁状态对照图；
图7为本发明实施例一中核酸提取磁珠经方案7清洗液清洗后和经方案4清洗液清洗后放置30天后平放桌面挂壁状态对照图；
图8为本发明实施例一中所述方案4和方案7清洗液清洗后的核酸提取磁珠放置30天后的核酸提取效率结果对比图；
图9为本发明实施例二中所述采用不同清洗剂混合形成清洗液的组成对照图；
图10为本发明实施例二中核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后的挂壁状态对照图；
图11为本发明实施例二核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置1天的状态对照图；
图12为本发明实施例二核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置25天的挂壁状态对照图；
图13为本发明实施例二中所述方案0和方案5清洗液清洗后的核酸提取磁珠放置25天后的核酸提取效率结果对比图；
图14为本发明实施例三中所述采用不同清洗剂混合形成清洗液的组成对照图；
图15为本发明实施例三中核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后的挂壁状态对照图；
图16为本发明实施例三核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置1天的状态对照图；
图17为本发明实施例三核酸提取磁珠经不同清洗剂混合形成清洗液清洗后，放置25天的挂壁状态对照图；
图18为本发明实施例三中所述方案0和方案3-1、方案6-1清洗液清洗后的核酸提取磁珠放置25天后的核酸提取效率结果对比图；
图19为本发明实施例四所述的S5用于核酸提取磁珠的清洗液的使用方法的步骤示意图。
具体实施
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
如图1-8所示，本实施例所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液，包括如下步骤：
S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；
S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。
进一步，所述清洗剂包括一价盐、二价盐或高分子聚合物中的一种或多种。
进一步，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
进一步，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙、氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
进一步，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
本领域技术人员可以理解，混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20时，核酸提取磁珠经清洗后，更加不易挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述高分子聚合物为聚乙二醇4000；所述溶剂为纯水；所述聚乙二醇4000在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
本领域技术人员可以理解，方案1，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后轻微挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为氯化钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
本领域技术人员可以理解，方案2，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为柠檬酸三钠；所述溶剂为纯水；所述柠檬酸三钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
本领域技术人员可以理解，方案3，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
本领域技术人员可以理解，方案4，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后不挂壁。经放置30天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为108.21,纯化回收率为98.14％。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为醋酸钠；所述溶剂为纯水；所述醋酸钠在所述混合液中的重量千分比为5；所述纯水的重量千分比为995。
本领域技术人员可以理解，方案5，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠和次氯酸钠；所述高分子聚合物为聚乙二醇4000；所述溶剂为纯水；所述氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠、次氯酸钠和聚乙二醇4000在所述混合液中的重量千分比均为5；所述纯水的重量千分比为975。
本领域技术人员可以理解，方案6，核酸提取磁珠清洗三遍后，取样第一天不挂壁，放置30天后不挂壁。
本领域技术人员可以理解，本实施例还设有一对照方案7，所述溶剂为纯水；所述纯水的重量千分比为1000。核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，取样第一天不挂壁，放置30天后挂壁、结块。经放置30天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为105.8,纯化回收率为97.21％。
本领域技术人员可以理解，经分析一价盐次氯酸钠可去除核酸提取磁珠反应液中未被包覆的铁及游离氨等杂离子，使得清洗更加彻底，使核酸提取磁珠放置后不易挂壁。磁珠产品放置后出现团聚挂壁现象，通常是因为在运输过程中磁珠自然沉降或粘壁后，固液相分离，使得磁珠无溶液浸润而干燥成团，再加上溶液难以重悬分散。核酸提取磁珠用清洗液中的高分子量的表面活性剂通过对核酸提取磁珠的多次清洗浸润，降低核酸提取磁珠的表面张力的同时，对核酸提取磁珠粒子间起到了空间位阻的分散作用，最后表面活性剂还可以增加溶液的粘度，综合结果使得核酸提取磁珠能够分散均匀，沉淀后更容易重悬分散和润湿，从而不容易出现挂壁现象。
本领域技术人员可以理解，通过对猪全血基因组DNA提取效率的测试结果显示，与对照方案7相比，加了次氯酸钠的清洗液清洗的核酸提取磁珠放置30天后对核酸的提取效率并未受到影响，反而有一定的提高。
实施例二
如图9-13所示，本实施例所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液，包括如下步骤：
S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；
S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。
进一步，所述清洗剂包括一价盐、二价盐或高分子聚合物中的一种或多种。
进一步，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
进一步，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙、氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
进一步，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
本领域技术人员可以理解，混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20时，核酸提取磁珠经清洗后，更加不易挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为0.2；所述纯水的重量千分比为999.8。
本领域技术人员可以理解，方案1：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后轻微挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为999。
本领域技术人员可以理解，方案2：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为2；所述纯水的重量千分比为998。
本领域技术人员可以理解，方案3：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为4；所述纯水的重量千分比为996。
本领域技术人员可以理解，方案4：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为8；所述纯水的重量千分比为992。
本领域技术人员可以理解，方案5：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后不挂壁。经放置25天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为109.525，纯化回收率为98.33％。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为16；所述纯水的重量千分比为984。
本领域技术人员可以理解，方案6：核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后不挂壁。
本领域技术人员可以理解，本实施例还设有对照方案0，所述对照方案0清洗液成分为纯水，核酸提取磁珠清洗四遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后挂壁；经放置25天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为108.21,纯化回收率为98.14％。清洗4遍后，方案0清洗的核酸提取磁珠放置25天后挂壁，方案1清洗液清洗的核酸提取磁珠轻微挂壁，但方案2到方案6的清洗液清洗后的核酸提取磁珠均不挂壁。分析为一价钠盐次氯酸钠可除去核酸提取磁珠反应液中未被包覆的铁及游离氨等杂离子，清洗更彻底，使核酸提取磁珠放置后不易挂壁。本实施例对方案0和方案5清洗的核酸提取磁珠进行了核酸提取产量和效率的测试，经对比，加了次氯酸钠的清洗液清洗的核酸提取磁珠放置25天后核酸的提取产量及效率并未受到影响。
实施例三
如图14-18所示，本实施例所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液，包括如下步骤：
S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；
S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。
进一步，所述清洗剂包括一价盐、二价盐或高分子聚合物中的一种或多种。
进一步，所述S1用于制备核酸提取磁珠混合液的步骤，包括：
取一价盐、二价盐和高分子聚合物加入到溶剂中形成混合液，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
进一步，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙、氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000或聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
进一步，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0.003-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.004；所述纯水的重量千分比为999.996。
本领域技术人员可以理解，方案1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.004；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.996。
本领域技术人员可以理解，方案1-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.008；所述纯水的重量千分比为999.992。
本领域技术人员可以理解，方案2：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.008；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.992。
本领域技术人员可以理解，方案2-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.016；所述纯水的重量千分比为999.984。
本领域技术人员可以理解，方案3：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化钙；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化钙在所述混合液中的重量千分比为0.016；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.984。
本领域技术人员可以理解，方案3-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。经放置25天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为108.42，纯化回收率为98.26％。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.003；所述纯水的重量千分比为999.997。
本领域技术人员可以理解，方案4：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.003；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.997。
本领域技术人员可以理解，方案4-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.006；所述纯水的重量千分比为999.994。
本领域技术人员可以理解，方案5：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.006；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.994。
本领域技术人员可以理解，方案5-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.009；所述纯水的重量千分比为999.991。
本领域技术人员可以理解，方案6：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后挂壁。
进一步，本实施例所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，所述二价盐为氯化镁；所述一价盐为次氯酸钠；所述溶剂为纯水；所述氯化镁在所述混合液中的重量千分比为0.009；所述次氯酸钠在所述混合液中的重量千分比为1；所述纯水的重量千分比为998.991。
本领域技术人员可以理解，方案6-1：核酸提取磁珠清洗3遍后，经记录，清洗完放置1天不挂壁，放置25天后不挂壁。经放置25天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为108.02，纯化回收率为98.15％。
本领域技术人员可以理解，在本实施例中，清洗液的配置包括二价盐、一价盐和溶剂，其中二价盐包括氯化镁、氯化钙；一价盐包括次氯酸钠，溶剂为纯水，经分析得出，在加了二价盐的清洗液清洗后的核酸提取磁珠，放置25天后均有挂壁，但在加了二价盐的基础上又添加少量次氯酸钠的清洗液，清洗后的核酸提取磁珠放置25天后光滑不挂壁，这仍归因于次氯酸钠较好的清洗效果。本实施例还设有对照方案0，所述对照方案0清洗液成分为纯水，核酸提取磁珠清洗三遍后，经记录，清洗完放置1天，不挂壁，放置25天后挂壁；经放置25天后对猪全血基因组DNA提取测试，结果显示，提取产量(ng/ul)为105.85,纯化回收率为97.21％。清洗3遍后，方案0、方案1、方案2、方案3、方案4、方案5及方案6清洗的核酸提取磁珠放置25天后挂壁，方案1-1、方案2-1、方案3-1、方案4-1、方案5-1和方案6-1清洗液清洗的核酸提取磁珠放置25天后均不挂壁。分析为一价钠盐次氯酸钠可除去核酸提取磁珠反应液中未被包覆的铁及游离氨等杂离子，清洗更彻底，使核酸提取磁珠放置后不易挂壁。本实施例对方案0和方案3-1、方案6-1清洗的核酸提取磁珠进行了核酸提取产量和效率的测试，经对比，加了一价盐次氯酸钠和二价盐氯化钙或氯化镁的清洗液清洗的核酸提取磁珠放置25天后核酸的提取产量及效率并未受到影响。
实施例四
如图19所示，本实施例所提供的用于核酸提取磁珠的清洗液的使用方法，包括如下步骤：
S1用于将核酸提取磁珠转移至清洗容器中的步骤；
S2用于将如实施例一至实施例三中任一项所述的用于核酸提取磁珠的清洗液加入清洗容器中进行充分搅拌混匀的步骤；
S3用于对清洗容器进行外加磁场作用，使核酸提取磁珠与清洗液分离，形成核酸提取磁珠沉淀和上清液的步骤；
S4用于去除清洗容器中的上清液的步骤；
S5用于取出如前所述的用于核酸提取磁珠的清洗液的使用方法清洗后的核酸提取磁珠沉淀，定容为工作浓度并摇匀的步骤。
本领域技术人员可以理解，通过上述处理后，可以直观的观察出上述实施例中提供的核酸提取磁珠的清洗液的综合效果。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (7)
1.一种用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，包括如下步骤：
S1用于将清洗剂加入溶剂中制备核酸提取磁珠混合液的步骤；
S2用于将核酸提取磁珠混合液进行混匀即得核酸提取磁珠清洗液的步骤。
2.如权利要求1所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，所述清洗剂包括一价盐、二价盐或高分子聚合物中的一种或多种。
3.如权利要求2所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，所述一价盐包括氯化钠、柠檬酸三钠、醋酸钠或次氯酸钠中的一种或多种；所述二价盐包括氯化钙或氯化镁中的一种或多种；所述高分子聚合物包括聚丙烯酰胺、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇8000中的一种或多种；所述溶剂包括乙醇或纯水中的一种或多种。
4.如权利要求3所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.001-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-50。
5.如权利要求4所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
6.如权利要求3所述的用于核酸提取磁珠的清洗液，其特征在于，还包括：所述混合液中一价盐的重量千分比为0.02-20；所述混合液中二价盐的重量千分比为0.003-1；所述混合液中高分子聚合物的重量千分比为0-20。
7.一种用于核酸提取磁珠的清洗液的使用方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1用于将核酸提取磁珠转移至清洗容器中的步骤；
S2用于将如权利要求1-6中任一项所述的用于核酸提取磁珠的清洗液加入清洗容器中进行充分搅拌混匀的步骤；
S3用于对清洗容器进行外加磁场作用，使核酸提取磁珠与清洗液分离，形成核酸提取磁珠沉淀和上清液的步骤；
S4用于去除清洗容器中的上清液的步骤
S5用于取出清洗后的核酸提取磁珠沉淀，定容为工作浓度并摇匀的步骤。
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