CN115872915A - 利拉鲁肽侧链单晶及其培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种利拉鲁肽侧链单晶及其培养方法。所述具体方法包括：将利拉鲁肽侧链粗品与重结晶良溶剂进行第一混合处理，以便获得第一混合液；将所述第一混合液与不良溶剂进行第二混合处理，以便获得式(1)所示化合物单晶；其中，所述重结晶良溶剂为乙腈，所述不良溶剂为丙酮。本发明方法获得的式(1)所示化合物的晶体无色透明、形状规则，适合应用于利拉鲁肽侧链立体构型研究。
Description
技术领域
本发明涉及药物晶型领域，具体地，本发明涉及式5-(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)1-(苯基甲基)N-(1-氧代十六烷基)-L-谷氨酸酯)单晶及其单晶培养方法。
背景技术
利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，其用于治疗糖尿病。式(I)所示化合物是合成利拉鲁肽的重要中间体，在本文中称为利拉鲁肽侧链(CAS号：294855-89-3；名称：5-(2,5-二氧代-1-吡咯烷基)1-(苯基甲基)N-(1-氧代十六烷基)-L-谷氨酸酯)。
利拉鲁肽侧链经三步合成，第一步：以N-羟基丁二酰亚胺与棕榈酸为原料进行反应；第二步：以第一步反应后得到的产品和L-谷氨酸α苄酯为原料进行反应；第三步：以第二步反应后得到的产品和N-羟基丁二酰亚胺为原料进行反应，得到所述的利拉鲁肽侧链。得到的利拉鲁肽侧链样品分子中存在手性碳，质量研究中需要进行构型确认，因此，需要提供优质的单晶来确定其构型。而利拉鲁肽侧链具有较长的柔性烷基链，其在大部分常规有机溶剂中溶解度较低，只在二氯甲烷、三氯甲烷、四氢呋喃等溶剂中有一定的溶解度，而其较长的柔性烷基链使得难以通过常规方式重结晶方法得到符合X-射线单晶衍射质量要求的单晶，大部分实验中只能获得絮状固体，由于上述单晶培养的技术难度，目前尚未见有成功获得X-射线单晶衍射测试的报道。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明提出一种简单易操作的利拉鲁肽侧链的单晶培养方法，该方法所得晶体无色透明，规整，质量较好，适合进行X-射线单晶衍射，确定其立体构型。
在本发明的第一方面，本发明提出了一种利拉鲁肽侧链单晶培养方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将利拉鲁肽侧链样品与重结晶良溶剂进行第一混合处理，以便获得第一混合液；将所述第一混合液与不良溶剂进行第二混合处理，以便获得式(1)所示化合物单晶；其中，所述重结晶良溶剂为乙腈，所述不良溶剂为丙酮，
根据本发明实施例的方法获得的利拉鲁肽侧链晶体无色透明、形状规则，适于进行利拉鲁肽侧链立体构型研究。
根据本发明的实施例，上述方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述利拉鲁肽侧链样品与重结晶良溶剂的质量比为1：(80～200)，优选为1：(100～160)，更优选1：(104～158)。发明人发现，上述固液比有利于利拉鲁肽侧链的溶解和单晶的生长。
根据本发明的实施例，所述式(I)所示化合物与不良溶剂的质量比为1：(10～80)，优选为1：(20～60)，更优选1：(26～53)。发明人发现，上述固液比有利于利拉鲁肽侧链的单晶的生长。
根据本发明的实施例，所述不良溶剂与良溶剂的质量比为1:(1～10)，优选为1：(1.5～4.0)，更优选1:(1.9～4.0)，如1：1.95。发明人发现，所述不良溶剂与良溶剂在上述配比下，更有利于利拉鲁肽侧链的单晶的生长。
根据本发明的实施例，所述第一混合处理是在温度为20～40℃的条件下进行的，优先地，在温度为25～35℃的条件下进行。该温度可避免利拉鲁肽侧链热分解，有利于利拉鲁肽侧链晶体的形成。
根据本发明的实施例，所述第二混合处理是在室温下进行的。该温度可避免利拉鲁肽侧链热分解，有利于利拉鲁肽侧链晶体的形成。
根据本发明的实施例，第一混合处理后，第二混合处理前，进一步包括将第一混合处理产物进行过滤处理，以便获得滤液，所述滤液构成所述第一混合液。以除去未溶解的利拉鲁肽侧链，有利于后续利拉鲁肽侧链单晶的生长。
根据本发明的实施例，将第二混合处理产物进行薄膜封口处理，封口后，置于第二混合处理产物上方的薄膜部分具有3～10个直径为0.5～0.9毫米的圆孔，优选地，具有均匀分布的3～10个直径为0.7毫米的圆孔。所述针头的大小和针孔的数量有利于控制晶体的生长，避免晶体的爆发析晶导致质量较差无法测试，又方便试验实际操作和控制。
根据本发明的实施例，将第二混合处理产物进行薄膜封口处理，封口后，置于第二混合处理产物上方的薄膜部分具有3、4、5、6、7、8、9或10个直径为0.5～0.9毫米的圆孔。根据本发明的实施例，将第二混合处理产物进行薄膜封口处理，封口后，置于第二混合处理产物上方的薄膜部分具有3、4、5、6、7、8、9或10个直径为0.7毫米的圆孔。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种式(I)所示化合物单晶。根据本发明的实施例，所述单晶是将式(I)所示化合物利用前面所述的方法进行培养处理后获得。根据本发明实施例的单晶无色透明、形状规则，适于进行利拉鲁肽侧链立体构型研究。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种式(I)所示化合物晶体。根据本发明的实施例，其X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°,9.1°±0.2°,14.8°±0.2°,15.6°±0.2°,°18.7°±0.2°，23.0°±0.2°和24.1°±0.2°的衍射峰。。
根据本发明的实施例，上述晶体还可以进一步具有如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述的式(I)所示化合物晶体的X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°,9.1°±0.2°,14.3°±0.2°，14.8°±0.2°,15.6°±0.2°,18.7°±0.2°，22.1°±0.2°，22.7°±0.2°，23.0°±0.2°,和24.1°±0.2°的衍射峰。
根据本发明的实施例，所述的式(I)所示化合物晶体的X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°，9.1°±0.2°，9.9°±0.2°，11.8°±0.2°，14.3°±0.2°，14.8°±0.2°，15.6°±0.2°，18.7°±0.2°，19.3°±0.2°，19.7°±0.2°，20.6°±0.2°，21.0°±0.2°，21.5°±0.2°，22.1°±0.2°，22.7°±0.2°，23.0°±0.2°，24.1°±0.2°衍射峰。
根据本发明的实施例，所述的式(I)所示化合物晶体的X-射线粉末衍射图谱与图1实质上相同。
根据本发明的实施例，所述的式(I)所示化合物晶体的具有以下的单位晶胞参数：
晶胞规格：
α＝90°，β＝94.6120(10)°，γ＝90°；
空间群：单斜晶系，P21空间群；
晶胞体积：
晶胞内不对称单位数Z：8。
根据本发明的实施例，所述的式(I)所示化合物晶体具有如图2所示的单晶结构。
本发明的创新点：
1.利拉鲁肽侧链因其分子量较大，柔性烷基链较长，难以通过常规的结晶手段获得合适单晶测试的晶体，发明人经过大量的实验和创造性劳动获得一种简单容易的结晶方法得到利拉鲁肽侧链的晶体，该晶体质量较好，适合进行结构测试。
2.本发明提供利拉鲁肽侧链的单晶结构晶体参数，准确的分子构型构象、键长键角等信息，以帮助利拉鲁肽侧链的构型确证等质量研究。
3.本发明提供利拉鲁肽侧链的单晶培养方法，简单易行，用时短，方便观察，且用该方法得到的晶体无色透明，形状规则，适于利拉鲁肽侧链立体构型的研究。
附图说明
图1为本发明制备的利拉鲁肽侧链晶体的X-射线粉末衍射(XRPD)图谱。
图2为本发明制备的利拉鲁肽侧链晶体的单晶解析结构图。
图3为本发明制备的利拉鲁肽侧链晶体的偏光显微镜(PLM)图。
图4为对比例所制备的利拉鲁肽侧链晶体的偏光显微镜(PLM)图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，本发明实施例旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
定义和一般术语
现在详细描述本发明的某些实施方案，其实例由随附的结构式和化学式说明。本发明意图涵盖所有的替代、修改和等同技术方案，它们均包括在如权利要求定义的本发明范围内。本领域技术人员应认识到，许多与本文所述类似或等同的方法和材料能够用于实践本发明。本发明绝不限于本文所述的方法和材料。在所结合的文献、专利和类似材料的一篇或多篇与本申请不同或相矛盾的情况下(包括但不限于所定义的术语、术语应用、所描述的技术，等等)，以本申请为准。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。
术语“包含”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
本发明中“室温”指的是温度由10℃到40℃。在一些实施例中，“室温”指的是温度由20℃到30℃；在另一些实施例中，“室温”指的是温度由25℃到30℃。
晶型在本发明中可认为由图表“描绘”的图形数据表征。这些数据包括，例如X-射线粉末衍射图谱、拉曼光谱、傅立叶变换-红外光谱、DSC曲线和固态NMR光谱。技术人员将理解，这类数据的图形表示可发生小的变化(例如峰相对强度和峰位置)，原因是诸如仪器响应变化和样品浓度及纯度变化的因素，这对于技术人员是公知的。尽管如此，技术人员能够比较本文图中的图形数据和对未知晶型产生的图形数据，并可确认两组图形数据是否表征相同的晶型。
“XRPD”指X-射线粉末衍射。
可用熟知的技术检测、鉴定、分类和定性晶型物，这些技术例如但不限于：差示扫描量热法(DSC)、热重分析法(TGA)、X-射线粉末衍射法(XRPD)、X-射线单晶衍射法、振动光谱法、溶液量热法、固态核磁共振(SSNMR)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR spectrum)法、拉曼光谱(Raman spectrum)法、热载台光学显微术、扫描电镜术(SEM)、电子晶体学、以及定量分析、粒度分析(PSA)、表面区域分析、溶解度和溶出速度。可以将晶型(Polymorphism)描绘成具体的化合物以不同晶体变化形式结晶同时维持相同化学结构式的能力。给定物质的多晶型物为化学等同的，其含有以相同方式互相键合的相同原子，但它们的晶体变化形式不同，这会影响一种或多种物理性质，诸如溶出速率(dissolution rate)、熔点、堆积密度(bulkdensity)、稳定性、流动性质等等。这类数据的图形表示可发生小的变化(例如峰相对强度和峰位置)，原因是诸如仪器响应变化和样品浓度及纯度变化的因素，这对于本领域技术人员是公知的。尽管如此，本领域技术人员能够比较本文图中的图形数据和对未知晶型产生的图形数据，并可确认两组图形数据是否表征相同的晶型。
除非另有说明，当文中提及光谱或以图形形式出现的数据(例如，XRPD、红外、拉曼和NMR谱)时，术语“峰”是指本领域的普通技术人员可识别的非背景噪音造成的峰或其它特殊特征。术语“有效峰”是指至少为光谱或数据中其它峰的中间大小(例如高度)或至少为光谱或数据中其它峰的中间大小的1.5、2或2.5倍的峰。
正如在X-射线粉末衍射(XRPD)领域中所熟知的，对任何指定的晶型而言，获得X-射线粉末衍射(XRPD)图时所用装置、湿度、温度、粉末晶体的取向以及其它参数均可能引起衍射图中峰的外观、强度和位置的一些变异性。例如，参见The United StatesPharmacopeia#23,National Formulary#18,1843-1844页，1995。在目前的情况中，±0.2°2θ峰位的变异性考虑到了这些可能的变化，而不会妨碍所示晶型的明确鉴定。晶型的鉴别可以基于任意独特的差别峰(以°2θ单位计)或其组合，典型地是更显著的峰。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有某些峰位置的XRPD图，具有与本发明附图中提供的XRPD图实质上相同的特征。根据本试验所用仪器状况，衍射峰位置存在±0.2°的误差容限。与本文提供的图1基本一致的X-射线粉末衍射图可与附图中的XRPD图相同，或更可能其可稍微不同。这样的XRPD图可不必要显示本文所呈现的衍射图的每个峰，和/或可显示由于在获得数据时涉及的条件差异而导致的所述峰的外观、强度或位移的轻微变化。本领域技术人员通过比较它们的XRPD图，能够确定结晶化合物的样品是否具有与本文公开的晶型相同的晶型或不同的晶型。类似地，本领域技术人员能够确定给出的得自XRPD图的衍射峰位置(以°2θ表示)是否在与本文呈现的数值大致相同的位置。在本发明的上下文中，X-射线粉末衍射图中的2θ值均以度(°)为单位。
同样，正如差示扫描量热(DSC)领域中所熟知的，DSC曲线的熔融峰高取决于与样品制备和测试仪器条件等许多有关的因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有特征峰位置的DSC图，具有与本发明附图中提供的DSC图实质上相同的性质。根据本试验所用仪器状况和/或样品的制备情况，熔融峰位置存在±3℃、±4°或±5℃的误差容限。
正如拉曼光谱领域中所熟知的，拉曼光谱的吸收峰位置和形状取决于样品分子与光相互作用发生散射光的频率。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有特征峰位置和形状的拉曼光谱图，具有与本发明附图中提供的拉曼光谱图实质上相同的性质。根据本试验所用仪器状况，吸收峰存在±1cm-1的误差容限。
正如傅立叶变换-红外光谱领域中所熟知的，红外光谱的吸收峰位置和形状取决于样品分子中共价键运动能级的跃迁。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有特征峰位置和形状的傅立叶变换-红外光谱图，具有与本发明附图中提供的傅立叶变换-红外光谱图实质上相同的性质。根据《中国药典》(2010版)附录IV C-红外分光光度法，以及本试验所用仪器状况，吸收峰在3000cm-1附近存在±5cm-1的误差容限，在1000cm-1附近存在±2cm-1的误差容限。
X-射线粉末衍射、DSC曲线图、拉曼光谱图和傅立叶变换-红外光谱图“实质上相同”是指X-射线粉末衍射图、DSC曲线图、拉曼光谱图和傅立叶变换-红外光谱图中至少有50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少99％的峰显示在图中。
当提及谱图或/和出现在图中的数据时，“峰”指本领域技术人员能够识别的不会归属于背景噪音的一个特征。
在本发明的上下文中，当使用或者无论是否使用“大约”或“约”等字眼时，表示每一个数字的数值有可能会出现1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％或20％等差异。
“相对强度”是指X-射线粉末衍射图(XRPD)的所有衍射峰中第一强峰的强度为100％时，其它峰的强度与第一强峰的强度的比值。
每当公开一个具有N值的数字时，任何具有N±0.01，N±0.02，N±0.03，N±0.05，N±0.07，N±0.08，N±0.1，N±0.15，N±0.2，N±1，N±1.5，N±2，N±3，N±4，N±5，N±6，N±7，N±8，N±9，N±10，值的数字会被明确地公开，其中“±”是指加或减。每当公开一个数值范围中的一个下限，RL，和一个上限，RU，时，任何处于该公开了的范围之内的数值会被明确地公开。
详细技术方案
单晶培养的方法多种多样，如溶剂缓慢挥发法、溶剂热发、扩散法等，且影响物质的单晶生长条件也复杂多样，无固定方法，发明人通过大量的试验针对的单晶培养发现，常规条件下难以获得利拉鲁肽侧链其适合单晶测试的晶体，无法满足单晶测试的条件；本发明创新性地成功培养了利拉鲁肽侧链的单晶，从而顺利解决解决了其立体构型确认的问题；同时，本发明还通过大量的试验发现，利拉鲁肽侧链只能在特定的合适的溶剂体系并配以合适的工艺参数才能获得适合单晶测试的晶体，析晶溶剂中丙酮的添加量将影响利拉鲁肽侧链的析出，添加量过大和过小均无法获得理想的单晶效果；且丙酮和乙腈溶剂的比例也对利拉鲁肽侧链晶体的析出产生影响，较大的比例差值将无法获得理想的单晶。最终发明人发现以本申请的结晶配方及方法，可以实现利拉鲁肽侧链单晶的生长，获得了利拉鲁肽侧链的成功简单高效快速的培养方法，并通过单晶衍射测试，获得其立体构型信息，为利拉鲁肽侧链的质量控制提供依据。
作为一种优选实施方式：本发明所述方法包括：以乙腈作为结晶良溶剂，利拉鲁肽侧链与所述重结晶溶剂的固液质量比为1：(80～200)，更优选固液质量比为1：(100～160)；所述固液比有利于利拉鲁肽侧链的溶解和单晶的生长；以丙酮作为不良溶剂，利拉鲁肽侧链与所述不良溶剂的固液质量比为1：(10～80)，更优选固液质量比为1：(20～60)；所述固液比有利于利拉鲁肽侧链的单晶的生长；所述不良溶剂和良溶剂的质量配比为1：(1～10)，更优选质量比为1：(1.5～4)；
本发明所述方法包括，将利拉鲁肽侧链与所述混合后加热至20～40℃溶解，所述良溶剂为乙腈，更优选加热至25～35℃溶解，至溶清后过滤至小烧杯中，并缓慢加入不良溶剂，所述不良溶剂为丙酮，随后使用薄膜封口，使用0.7毫米的针头扎3～10孔，随后于室温下静置，所述针头的大小和针孔的数量有利于控制晶体的生长，避免晶体的爆发析晶导致质量较差无法测试，又方便试验实际操作和控制。以该方法获得的晶体无色透明，形状规则，为利拉鲁肽侧链的单晶测试构型确认提供了晶体质量保障。
测试结果数值
所述利拉鲁肽侧链单晶的晶胞参数为
α＝90°，β＝94.6120(10)°，γ＝90°；单斜晶系，P21空间群，晶胞体积为/>
晶胞内不对称单元数z为8。
在阅读以下详细描述后，本领域普通技术人员可更容易地理解本发明的特征和优点。应理解，出于清楚原因，在上面及以下单独实施方案的上下文中所述的本发明某些特征也可组合以形成单一实施方案。相反，出于简洁原因，在单一实施方案的上下文中描述的本发明的不同特征也可组合形成它们的子组合。本公开进一步通过以下实施例说明，这些实施例不应解释为将本发明的范围或精神限于其中所述的具体步骤。
下面所描述的实施例，除非其他方面表明，所有的温度定为摄氏度(℃)。除非其他方面表明，试剂购买于商品供应商如Aldrich Chemical Company,Arco Chemical Companyand Alfa Chemical Company，使用时都没有经过进一步纯化。一般的试剂从汕头西陇化工厂，广东光华化学试剂厂，广州化学试剂厂，天津好寓宇化学品有限公司，青岛腾龙化学试剂有限公司和青岛海洋化工厂购买得到。
本发明所制备得到的晶型按照以下方法进行鉴定：
发明所用X-射线粉末衍射(XRPD)分析方法为：Empyrean衍射仪，所用辐射源为(Cu，kα，
1.540598；/>
1.544426；Kα2/Kα1强度比例：0.50)，其中电压设定在45KV，电流设定在40mA。在单晶硅样品架上将粉末状样品制备成薄层，放在旋转样品台上，在3°～40°的范围内以0.0167°步长进行分析。使用Data Collector软件收集数据，HighScore Plus软件处理数据，Data Viewer软件读取数据。
(2)本发明所用傅里叶红外(FT-IR)分析方法为：采用德国布鲁克TENSOR27红外光谱仪测试，OPUS软件进行数据分析。KBr压片，扫描次数：16次，波数范围：4000～400cm-1，分辨率：2cm-1。
(3)。偏光显微镜图(PLM)：使用德国Leica DM1000正置显微镜，2.5倍物镜，LeicaMC170 HD显微镜头，拍摄得到图片。
具体实施方式
下面的实施例可以对本发明做进一步的描述，然而，这些实施例不应作为对本发明的范围的限制。
实施例1
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入4ml(约3.14g)乙腈，并于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后再缓慢加入1ml(约0.79g)的丙酮，使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔3个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置3天可以得到形状规则、无色透明的长块状晶体(如图3所示)，所得晶体适合X-射线单晶测试解析。
单晶经X-射线单晶衍射仪分析，所得X-射线粉末衍射(XRPD)图谱如图1所示，用CryAlisPro程序还原和吸收校正，并精修其晶胞参数，得到数据用于结构解析，用SHELXTL程序通过直接发得到初始结构，通过差值傅里叶法找出全部非氢原子位置，并做各向异性精修和作图，最终得到X-射线单晶结构图(如上图2所示)。
实施例2
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入4ml(约3.14g)乙腈，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后再缓慢加入2ml(约1.6g)的丙酮，使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔3个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置3天可以得到形状规则、无色透明的长块状晶体，适合X-射线单晶测试解析。
单晶经X-射线单晶衍射仪分析，用CryAlisPro程序还原和吸收校正，并精修其晶胞参数，得到数据用于结构解析，用SHELXTL程序通过直接发得到初始结构，通过差值傅里叶法找出全部非氢原子位置，并做各向异性精修和作图，最终得到X-射线单晶结构图(如上图2所示)。
实施例3
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入6ml(约4.71g)乙腈，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后再缓慢加入2ml(约1.6g)的丙酮，使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔5个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置3天可以得到形状规则、无色透明的长块状晶体，适合X-射线单晶测试解析；
单晶经X-射线单晶衍射仪分析，用CryAlisPro程序还原和吸收校正，并精修其晶胞参数，得到数据用于结构解析，用SHELXTL程序通过直接发得到初始结构，通过差值傅里叶法找出全部非氢原子位置，并做各向异性精修和作图，最终得到X-射线单晶结构图(如上图2所示)。
对比例1
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入6ml(约4.71g)乙腈于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔5个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置5天析出絮状固体(如图4所述)，形貌较差，不适合X-射线单晶测试解析。
对比例2
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入4ml(约3.16g)甲醇，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔5个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置5天析出絮状固体，形貌较差，不适合X-射线单晶测试解析。
对比例3
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入4ml(约5.3g)二氯甲烷，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔1个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置2天析出絮状固体，形貌较差，不适合X-射线单晶测试解析。
对比例4
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入6ml(约4.71g)乙腈，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后再缓慢加入2ml(约1.6g)的丁酮，使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔5个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置3天析出絮状固体，形貌较差，不适合X-射线单晶测试解析。
对比例5
室温下称取30mg利拉鲁肽侧链样品加入至10ml西林瓶中，加入4ml(约3.14g)乙腈，于25℃下搅拌溶清，过滤，得到澄清溶液置于10ml小烧杯中，随后再缓慢加入4ml(约3.16g)的丙酮，使用薄膜封口，使用外径为0.7毫米的针头扎孔3个；随后于室温环境下静置，缓慢挥发，静置5天析出絮状固体，形貌较差，不适合X-射线单晶测试解析。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
Claims (10)
1.一种利拉鲁肽侧链单晶的培养方法，其特征在于，包括：
将利拉鲁肽侧链样品与重结晶良溶剂进行第一混合处理，以便获得第一混合液；
将所述第一混合液与不良溶剂进行第二混合处理，以便获得式(1)所示化合物单晶；
其中，所述重结晶良溶剂为乙腈，所述不良溶剂为丙酮，
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利拉鲁肽侧链样品与重结晶良溶剂的质量比为1：(80～200)，优选为1：(100～160)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利拉鲁肽侧链样品与不良溶剂的质量比为1：(10～80)，优选为1：(20～60)。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不良溶剂与良溶剂的质量比为1:(1～10)，优选为1：(1.5～4.0)。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一混合处理是在温度为20～40℃的条件下进行的，优先地，在温度为25～35℃的条件下进行；
任选地，所述第二混合处理是在室温下进行的。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一混合处理后，第二混合处理前，进一步包括将第一混合处理产物进行过滤处理，以便获得滤液，所述滤液构成所述第一混合液；
优选地，将第二混合处理产物进行薄膜封口处理，封口后，置于第二混合处理产物上方的薄膜部分具有3～10个直径为0.5～0.9毫米的圆孔，优选地，具有均匀分布的3～10个直径为0.7毫米的圆孔。
7.一种利拉鲁肽侧链单晶，其特征在于，所述单晶为权利要求1～6任一项所述的方法进行培养处理后获得。
8.一种式(I)所示化合物晶体，其特征在于，其X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°,9.1°±0.2°,14.8°±0.2°,15.6°±0.2°,°18.7°±0.2°，23.0°±0.2°和24.1°±0.2°的衍射峰。
9.根据权利要求8所述的晶体，其X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°,9.1°±0.2°,14.3°±0.2°，14.8°±0.2°,15.6°±0.2°,18.7°±0.2°，22.1°±0.2°，22.7°±0.2°，23.0°±0.2°,和24.1°±0.2°的衍射峰；
任选地，其X-射线粉末衍射图谱包含2θ角为8.1°±0.2°，9.1°±0.2°，9.9°±0.2°，11.8°±0.2°，14.3°±0.2°，14.8°±0.2°，15.6°±0.2°，18.7°±0.2°，19.3°±0.2°，19.7°±0.2°，20.6°±0.2°，21.0°±0.2°，21.5°±0.2°，22.1°±0.2°，22.7°±0.2°，23.0°±0.2°，24.1°±0.2°的衍射峰。
10.根据权利要求8所述的晶体，其具有以下的单位晶胞参数：
晶胞规格：
α＝90°，β＝94.6120(10)°，γ＝90°；
空间群：单斜晶系，P21空间群；
晶胞体积：6289.08(11)
晶胞内不对称单位数Z：8。
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