CN115824980A - 一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 - Google Patents
一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115824980A CN115824980A CN202211494975.5A CN202211494975A CN115824980A CN 115824980 A CN115824980 A CN 115824980A CN 202211494975 A CN202211494975 A CN 202211494975A CN 115824980 A CN115824980 A CN 115824980A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- micro
- ring resonator
- resonant cavity
- igg protein
- urine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 10
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 claims abstract description 8
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000013307 optical fiber Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 24
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 24
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 22
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 15
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 11
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 9
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 5
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002558 medical inspection Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 12
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N pentanedial;hydrate Chemical compound O.O=CCCCC=O BHTJEPVNHUUIPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002120 nanofilm Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 2
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- JJLJMEJHUUYSSY-UHFFFAOYSA-L Copper hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Cu+2] JJLJMEJHUUYSSY-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005750 Copper hydroxide Substances 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 208000022435 Light chain deposition disease Diseases 0.000 description 1
- 208000020647 Light chain disease Diseases 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 206010060880 Monoclonal gammopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 206010029164 Nephrotic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 208000002774 Paraproteinemias Diseases 0.000 description 1
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001147 anti-toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 1
- 229910001956 copper hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 208000025750 heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000001948 isotopic labelling Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 230000000625 opsonophagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明属于分析传感技术领域,主要涉及一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法。所述微环谐振器是采用纳米生物功能膜与微环谐振器相结合的方法制备。首先选用抗免疫球蛋白G抗体、聚酰胺胺、丁二酸酐、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐、(3‑氨基丙基)三乙氧基硅烷、N‑羟基琥珀酰亚胺等试剂,通过共价偶联的方式,在微环谐振器的谐振腔表面制备对IgG具有特异识别性能的纳米生物功能膜,再与光纤阵列进行封装制得对IgG具有特异性识别功能的微环谐振器。本发明的微环谐振器能无需标记、无放射性危害地直接检测IgG蛋白,有望在临床医学检验、医疗和生化分析领域发挥重要作用。
Description
技术领域
本发明属于分析传感技术领域,涉及一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法。
背景技术
IgG也叫免疫球蛋白G,它是由浆细胞合成分泌的一类具有抗体活性的球蛋白,是抗细菌、抗毒素和抗病毒抗体的主要组成部分,是人体免疫反应的最重要的物质基础,具有抵抗病毒侵入体内的能力。而且IgG也是唯一能通过胎盘屏障的免疫球蛋白,在机体免疫防护中起着主要的作用。此外,IgG还具有调理吞噬、ADCC和结合SPA等作用。IgG升高与结缔组织病、IgG型多发性骨髓瘤、原发性单克隆丙种球蛋白血症、肝脏病、传染病、类肉瘤病等多种疾病有关,IgG降低与非IgG型多巴性骨髓瘤、重链病、轻链病、肾病综合征、恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、原发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷病等疾病有关。因此,IgG的检测能为许多疾病的诊断对相关疾病的及时治疗提供依据。尿液中IgG的检测具有无需穿刺取用血样、无痛检测、取样方便的优点,具有重要意义。
目前测定IgG的方法主要有放射免疫法、酶联免疫法、单向免疫扩散法、免疫透射比浊法、速率散射免疫比浊法、时间分辨荧光免疫分析法等,但这些方法均存在一些不足。
放射免疫法通常需要加入标记的同位素示踪物,由于同位素示踪物具有放射性,会引起辐射损伤;且该方法有时会出现交叉反应、假阳性反应。与放射免疫技术相比,虽然ELISA酶联免疫吸附法操作简便,对环境没有污染,避免了对环境和人体的危害,但实验所用的抗体一般要用酶标记,费用相对提高,且酶的纯度和反应过程容易受环境因素的影响,结果稳定性不好,及该测定方法的灵敏度不够、重复性差,易造成漏检和假阳性。
此外,虽然免疫透射比浊法操作简便,但灵敏度和精密度均不够理想,所需的抗血清量大,检测的周期较长。而散射比浊法的缺点是试剂成本较高。虽然单向免疫扩散试验操作简便,不需特殊设备,但耗时长,灵敏度较低。因此,有必要对现有检测尿液中IgG蛋白的方法和设备加以改进。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的就是针对上述检测IgG方式的不足而提供一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器。
为了实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器,所述微环谐振器是通过共价键的方式将纳米生物功能膜修饰在微环谐振器的谐振腔表面;其中,
所述的纳米生物功能膜是对IgG蛋白具有特异识别性能的纳米生物功能膜。
本发明还请求上述检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法,具体包括如下步骤:
1)将谐振腔芯片浸入浓硫酸与双氧水中,随后冲洗、氮气吹干,再放入由3-氨基丙基三乙氧基硅烷和95%乙醇组成的混合液(体积比为1:50)中反应,经冲洗、氮气吹干后干燥,备用;
2)将经步骤1)处理后干燥的谐振腔芯片浸入10%戊二醛水溶液中,冲洗、氮气吹干,并放入聚酰胺胺溶液中搅拌,经冲洗、氮气吹干后置于丁二酸酐、三乙胺和四氢呋喃的混合液中反应,依次用四氢呋喃、乙醇、水对反应后的谐振腔芯片冲洗,并用氮气吹干,备用;
3)将经步骤2)处理的谐振腔芯片放入含有200mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和50mM的N-羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液中反应,经冲洗、氮气吹干后备用;
4)在经步骤3)处理得谐振腔芯片的谐振腔表面滴加抗免疫球蛋白G抗体的磷酸盐缓冲液,在4℃下孵育,偶联抗免疫球蛋白G抗体,经冲洗后加入1mg/ml的BSA溶液,室温反应,随后将所述谐振腔芯片放入微环谐振器传感系统,与光纤阵列进行封装,即得所述检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器。
需要说明的是,所述微环谐振器的制备及检测机理如下:
首先通过亚胺键共价反应的方式在谐振腔表面制备纳米薄膜,再通过酰胺键共价反应的方式在纳米薄膜表面修饰免疫球蛋白G抗体,制得纳米生物功能膜,继而通过纳米生物功能膜表面的免疫球蛋白G抗体与IgG蛋白之间的特异性反应所引起的微环谐振器的光谱变化,来检测尿液中的IgG蛋白。
可选的,步骤1)中,所述浓硫酸与双氧水的体积比为7:3,浸入温度为60~90℃,浸泡时间为1h~3h;在由3-氨基丙基三乙氧基硅烷和95%乙醇组成的混合液中的反应时间为0.5h~4h;且干燥温度为100~130℃,干燥时间为0.5h~2h。
可选地,步骤2)中,所述浸入10%戊二醛水溶液中的时间为30min~2h,聚酰胺胺溶液中聚酰胺胺的含量为0.001mg/L~100g/L、在聚酰胺胺溶液中的搅拌时间为1h~12h;
且,丁二酸酐-三乙胺-四氢呋喃混合液中丁二酸酐的含量为0.005g~0.5g,三乙胺的含量为10μL~2mL,四氢呋喃的含量为200μL~10mL,在丁二酸酐-三乙胺-四氢呋喃混合液中的反应温度为60~130℃,反应时间为0.5~36h。
可选地,所述步骤3)中的反应时间为30min~4h,所述步骤4)中的室温反应时间为0.5h~4h。
此外,本发明还请求保护上述微环谐振器在医疗、生化分析领域中的应用。
经由上述的技术方案可知,与现有技术相比,本发明提供的一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用,具有如下优异效果:
1)本发明所述的检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器具有无需酶的标记、可以直接测量、操作简便、更快速、更灵敏的优点;且无需使用同位素标记、避免了对人体的辐射危害。
2)采用本发明所述方法制备的微环谐振器,用于检测尿液中IgG蛋白时,可以实时检测IgG蛋白的浓度变化,简化了操作步骤,有望在临床医学检验、医疗、生化分析等领域发挥巨大的作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为实施例1制备的微环谐振器在不同浓度的IgG蛋白中的响应变化曲线图。
图2为IgG蛋白浓度与实施例1制备的微环谐振器的谐振波长之间的关系图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例及说明书附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法。
为更好地理解本发明,下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述,但不可理解为对本发明的限定,对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整,也视为落在本发明的保护范围内。
下面,将结合具体实施例,对本发明的技术方案作进一步的说明。
实施例1
(1)将谐振腔芯片浸入体积比为7:3的浓硫酸与双氧水中在80℃下处理1小时;
(2)取出谐振腔芯片,用去离子水超声清洗15min,再用去离子水冲洗,氮气吹干;
(3)将谐振腔芯片放入0.04mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和2mL的95%的乙醇溶液组成混合液(体积比为1:50)中反应3h;
(4)取出谐振腔芯片,用去离子水冲洗,氮气吹干;
(5)将谐振腔芯片在130℃条件下干燥0.5小时;
(6)将谐振腔芯片置于10%戊二醛水溶液中1小时;
(7)取出谐振腔芯片,用去离子水冲洗,氮气吹干;
(8)将谐振腔芯片放入5g/L聚酰胺胺溶液中搅拌5h;
(9)用去离子水充分冲洗谐振腔芯片,并用氮气吹干;
(10)将谐振腔芯片置于0.025g丁二酸酐、250ul三乙胺、4.75ml四氢呋喃的混合液中在100℃下反应6h;
(11)依次用四氢呋喃、乙醇、水对谐振腔芯片冲洗,并用氮气吹干;
(12)将谐振腔芯片放入含有200mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和50mM的N-羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液中反应30分钟;
(13)用二次去离子水对谐振腔芯片充分冲洗,并用氮气吹干;
(14)在芯片的谐振腔表面滴加3mg/mL抗免疫球蛋白G抗体的磷酸盐缓冲液,在4℃下孵育12h;
(15)用磷酸盐缓冲液对谐振腔芯片充分冲洗;
(16)加入1mg/mL的BSA溶液,室温反应1小时;
(17)用磷酸盐缓冲液对谐振腔芯片充分冲洗;
(18)将谐振腔芯片放入微环谐振器传感系统,与光纤阵列进行封装,制得可以检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器。
测试时,依次通过微流控进样器将不同浓度的IgG蛋白浓度充入微环谐振器,并且在每一浓度的IgG蛋白与微环谐振器表面的抗免疫球蛋白G抗体反应之后用磷酸盐缓冲液冲洗,再加入下一浓度的IgG蛋白进行测试,相应的微环谐振器的响应信号和数据通过光谱仪显示和计算机读取。
图1显示了制备的微环谐振器在0.15625μg/mL与10μg/mLIgG蛋白浓度范围内的响应变化;图2是IgG蛋白浓度与微环谐振器的谐振波长之间的关系。从图1和图2可以看出,随着IgG蛋白浓度的增加,谐振波长移动的程度逐渐增加。而且在0.15625μg/mL~1.25μg/mL浓度范围内,谐振波长增加幅度较大。在1.25μg/mL~10μg/mL浓度范围内,谐振波长移动的幅度较小,表明在10μg/mL时微环谐振器结合IgG蛋白的量逐渐接近饱和。这些结果表明实施例1制作的微环谐振器性能良好,对IgG蛋白有良好的识别能力,其对IgG蛋白的检测范围为0.15625μg/mL~10μg/mL。
实施例2
(1)将谐振腔芯片浸入体积比为7:3的浓硫酸与双氧水中在70℃下处理2小时;
(2)取出谐振腔芯片,用去离子水超声清洗15min,再用去离子水冲洗,氮气吹干;
(3)将谐振腔芯片放入0.2mL的3-氨基丙基三乙氧基硅烷和10mL的95%的乙醇溶液组成混合液(体积比为1:50)中反应1h;
(4)取出谐振腔芯片,用去离子水冲洗,氮气吹干;
(5)将谐振腔芯片在120℃条件下干燥1小时;
(6)将谐振腔芯片置于10%戊二醛水溶液中2小时;
(7)取出谐振腔芯片,用去离子水冲洗,氮气吹干;
(8)将谐振腔芯片放入1g/L聚酰胺胺溶液中搅拌6h;
(9)用去离子水充分冲洗谐振腔芯片,并用氮气吹干;
(10)将谐振腔芯片置于0.05g丁二酸酐、600ul三乙胺、9.6ml四氢呋喃的混合液中在90℃下反应10h;
(11)依次用四氢呋喃、乙醇、水对谐振腔芯片冲洗,并用氮气吹干;
(12)将谐振腔芯片放入含有200mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和50mM的N-羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液中反应1小时;
(13)用二次去离子水对谐振腔芯片充分冲洗,并用氮气吹干;
(14)在芯片的谐振腔表面滴加1mg/mL抗免疫球蛋白G抗体的磷酸盐缓冲液,在4℃下孵育18h;
(15)用磷酸盐缓冲液对谐振腔芯片充分冲洗;
(16)加入1mg/mL的BSA溶液,室温反应2小时;
(17)用磷酸盐缓冲液对谐振腔芯片充分冲洗;
(18)将谐振腔芯片放入微环谐振器传感系统,与光纤阵列进行封装,制得可以检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器。
此外,为了进一步验证所述制备方法相较现有技术存在的优异性,发明人还进行了下述工艺参数优选实验,具体实验内容如下:
实验一:
经实验,经体积比为7∶3的H2SO4-H2O2混合液清洗后,谐振腔芯片的接触角变为5°;在3-氨基丙基三乙氧基硅烷与乙醇的混合液中浸泡10分钟干燥后接触角变为20°,浸泡20分钟取出干燥后接触角变为35°,浸泡30分钟取出干燥后接触角变为45°,浸泡1小时取出干燥后接触角变为50°,浸泡2小时、3小时、4小时取出干燥后接触角均为50°。因此,为了使3-氨基丙基三乙氧基硅烷在谐振腔芯片表面充分反应,3-氨基丙基三乙氧基硅烷与乙醇的混合液中的浸泡时间为0.5-4小时。
实验二:
经实验,浸入10%戊二醛水溶液中分别反应10分钟、20分钟、30分钟、1小时、1.5小时、2小时后,将芯片冲洗,通过在芯片表面与氢氧化铜的反应,发现10分钟的有非常少的砖红色沉淀,20分钟的砖红色沉淀增加,30min后砖红色沉淀继续增加,1小时、1.5小时、2小时的砖红色沉淀的量与30min的量基本一样。因此,谐振腔芯片在10%戊二醛水溶液中的反应时间为30min~2h。
实验三:
经实验,浓度为0.0005mg/L的聚酰胺胺溶液与谐振腔芯片反应,并经过后续的几步反应后,用于检测IgG蛋白,谐振腔的光谱不变化;而当使用浓度为0.001mg/L的聚酰胺胺溶液及后续的几步反应后,用于检测IgG蛋白时,谐振腔的光谱有微小的变化;当使用浓度为50mg/L的聚酰胺胺溶液及后续的几步反应后,用于检测IgG蛋白时,检测范围为0.325-2.5ug/ml;当使用浓度为10g/L的聚酰胺胺溶液及后续的几步反应后,用于检测IgG蛋白时,检测范围为0.325-10ug/mL;当分别使用浓度为80g/L、100g/L的聚酰胺胺溶液及后续的几步反应后,用于检测IgG蛋白时,检测范围均为0.039-250ug/mL。因此,所配制的聚酰胺胺溶液中聚酰胺胺的含量为0.001mg/L~100g/L。
对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (6)
1.一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器,其特征在于,所述微环谐振器是通过共价键的方式将纳米生物功能膜修饰在微环谐振器的谐振腔表面;其中,
所述的纳米生物功能膜是对IgG蛋白具有特异识别性能的纳米生物功能膜。
2.一种如权利要求1所述检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:
1)将谐振腔芯片浸入浓硫酸与双氧水中,随后冲洗、氮气吹干,再放入由3-氨基丙基三乙氧基硅烷和95%乙醇按照体积比1:50组成的混合液中反应,经冲洗、氮气吹干后干燥,备用;
2)将经步骤1)处理后干燥的谐振腔芯片浸入10%戊二醛水溶液中,冲洗、氮气吹干,并放入聚酰胺胺溶液中搅拌,经冲洗、氮气吹干后置于丁二酸酐-三乙胺-四氢呋喃的混合液中反应,依次用四氢呋喃、乙醇、水对反应后的谐振腔芯片冲洗,并用氮气吹干,备用;
3)将经步骤2)处理的谐振腔芯片放入含有200mM 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和50mM的N-羟基琥珀酰亚胺的磷酸盐缓冲液中反应,经冲洗、氮气吹干后备用;
4)在经步骤3)处理得谐振腔芯片的谐振腔表面滴加抗免疫球蛋白G抗体的磷酸盐缓冲液,在4℃下孵育,偶联抗免疫球蛋白G抗体,经冲洗后加入1mg/ml的BSA溶液,室温反应,随后将所述谐振腔芯片放入微环谐振器传感系统,与光纤阵列进行封装,即得所述检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器。
3.根据权利要求2所述的一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法,其特征在于,步骤1)中,所述浓硫酸与双氧水的体积比为7:3,浸入温度为60~90℃,浸泡时间为1h~3h;在混合液中的反应时间为0.5h~4h;且干燥温度为100~130℃,干燥时间为0.5h~2h。
4.根据权利要求2所述的一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法,其特征在于,步骤2)中,所述浸入10%戊二醛水溶液中的时间为30min~2h,聚酰胺胺溶液中聚酰胺胺的含量为0.001mg/L~100g/L、在聚酰胺胺溶液中的搅拌时间为1h~12h;
且,丁二酸酐-三乙胺-四氢呋喃混合液中丁二酸酐的含量为0.005g~0.5g,三乙胺的含量为10μL~2mL,四氢呋喃的含量为200μL~10mL,在丁二酸酐-三乙胺-四氢呋喃混合液中的反应温度为60~130℃,反应时间为0.5~36h。
5.根据权利要求2所述的一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器的制备方法,其特征在于,所述步骤3)中的反应时间为30min~4h,所述步骤4)中的室温反应时间为0.5h~4h。
6.一种如权利要求1所述检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器或如权利要求2所述方法制备的检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器在医疗、生化分析领域中的应用。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211494975.5A CN115824980A (zh) | 2022-11-26 | 2022-11-26 | 一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211494975.5A CN115824980A (zh) | 2022-11-26 | 2022-11-26 | 一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115824980A true CN115824980A (zh) | 2023-03-21 |
Family
ID=85531808
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211494975.5A Pending CN115824980A (zh) | 2022-11-26 | 2022-11-26 | 一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115824980A (zh) |
-
2022
- 2022-11-26 CN CN202211494975.5A patent/CN115824980A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN108279309B (zh) | 一种pla2r抗体的检测试纸条及检测方法 | |
WO2018120855A1 (zh) | 检测myo的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法 | |
CN102998467B (zh) | β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
CN104597232B (zh) | 一种可扩展检测范围的捕获抗体竞争夹心免疫检测方法及生物传感器 | |
KR20110096739A (ko) | 항원고정화 면역형광 슬라이드의 제조방법 및 그에 의해 제조되는 면역형광 슬라이드 | |
CN203405464U (zh) | 定量检测胃蛋白酶原ii的时间分辨免疫层析试纸条及使用其的试纸卡 | |
CN108152512A (zh) | 肝素结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 | |
CN106018347A (zh) | 一种表面等离子体共振传感芯片及其制备方法和应用 | |
CN110058013B (zh) | 一种提高微流控芯片检测准确度的方法 | |
CN106959372A (zh) | 血清淀粉样蛋白a和c‑反应蛋白二合一测定试剂盒及制法 | |
KR20200073259A (ko) | 대칭 디메틸아르기닌의 검출 | |
CN105785041A (zh) | 用于定量检测钙卫蛋白的试纸条及其制备方法和钙卫蛋白浓度的测定方法 | |
JP6810055B2 (ja) | イムノアッセイにおける試験プローブおよび試薬の再利用方法 | |
CN109444412A (zh) | 一种用于微型化学发光免疫分析系统的宠物d-二聚体检测试剂盒 | |
CN220690951U (zh) | 一种检测心肌肌钙蛋白i的试剂盒 | |
CN110398590B (zh) | 传感芯片及应用 | |
JPS63127160A (ja) | 特異的蛋白質の検出方法 | |
CN115824980A (zh) | 一种检测尿液中IgG蛋白的微环谐振器及其制备方法与应用 | |
WO2021193682A1 (ja) | 免疫学的分析方法及び免疫学的分析試薬キット | |
KR101195253B1 (ko) | 항원고정화 면역형광 슬라이드의 제조방법 및 그에 의해 제조되는 면역형광 슬라이드 | |
CN101692080B (zh) | 一种检测乳品中多种抗生素残留的方法 | |
CN104897654B (zh) | 一种微流控生物芯片检测装置及制备方法 | |
US20110312104A1 (en) | Immunoassay method | |
JPH03272466A (ja) | 多重免疫評価分析方式 | |
CN113588960A (zh) | 一种比率荧光法免疫层析检测试条及其检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |