CN220690951U - 一种检测心肌肌钙蛋白i的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，包括外壳和试剂条，所述试剂条收容于所述外壳内，且包括底板以及沿左右向依次连接设置于所述底板上的样品垫、结合物垫、检测垫和吸水垫，所述结合物垫上包被有耦联鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体的时间分辨荧光微球和耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球，所述检测垫上间隔设置有沿前后向延伸的检测带和质控带，其中，所述检测带中包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；所述质控带中包被有兔IgG单克隆抗体。本实用新型提供的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒可以快速定量检测心肌肌钙蛋白I，具有操作简便、灵敏性高、抗干扰能力强的优点。

Description

一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒。

背景技术

荧光免疫层析技术是以抗原抗体特异性免疫反应为基础的检测技术。以固定有检测线(包被抗体或包被抗原)和质控线(抗抗体)的NC膜层析材料为固定相，测试液为流动相，荧光标记抗体或抗原固定于结合垫，在毛细管作用下使待分析物在膜条上移动。对于带有多个抗原决定簇的待测物大分子抗原(蛋白、病毒、致病菌等)，通常采用“三明治”型的双抗夹心法，即待测物随着流动相在毛细管作用下，先与结合垫上的荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合，最终形成双抗夹心的“三明治”型。目前用于荧光免疫分析的标记物主要包括荧光素、量子点、上转换纳米粒子等。普通的荧光物质荧光光谱的Stones位移只有几十纳米，激发光谱和发射光谱会有重叠造成干扰；且半衰期短，不利于提高产品的灵敏度和抗干扰能力。

目前心肌肌钙蛋白I(cTnI)在POCT荧光免疫层析平台主要采用两步法，先将样本加入到稀释液中混匀，再将稀释后的液体加入到检测卡的方式。增加了操作时间。

实用新型内容

本实用新型的主要目的是提出一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，旨在解决现有的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒检测时间长且灵敏度和抗干扰能力差的问题。

为实现上述目的，本实用新型提出的一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其中所述检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒包括：

外壳；以及，

试剂条，收容于所述外壳内，且包括底板以及沿左右向依次连接设置于所述底板上的样品垫、结合物垫、检测垫和吸水垫，所述结合物垫上包被有耦联鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体的时间分辨荧光微球和耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球，所述检测垫上间隔设置有沿前后向延伸的检测带和质控带；

其中，所述检测带中包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；所述质控带中包被有兔IgG单克隆抗体。

可选地，所述时间分辨荧光微球内部填充有镧系元素的螯合物，所述镧系元素包括铕、钐或镝中的一种。

可选地，所述时间分辨荧光微球表面有修饰官能团，所述修饰官能团包括羧基、羟基或环氧基中的至少一种。

可选地，所述结合物垫和所述吸水垫的一端分别与所述检测垫相对的两端重叠设置，所述样品垫的一端与所述结合物垫的另一端重叠设置，以形成有三个重叠区。

可选地，所述重叠区沿左右向的长度为a，其中，1mm＜a＜2mm。

可选地，所述检测垫包括硝酸纤维素膜；和/或，

所述结合物垫包括玻璃纤维素膜；和/或，

所述吸水垫包括吸水滤纸；和/或，

所述底板包括聚氯乙烯板。

可选地，所述外壳底部设置有多个吸盘。

可选地，所述外壳上对应所述样品垫沿左右方向间隔设置有多个加样孔，所述加样孔孔口上设置有密封膜。

可选地，处于左侧的所述加样孔的孔径大于处于右侧的所述加样孔的孔径。

可选地，所述外壳上对应所述检测垫设置有显露口，用于显露所述检测带和所述质控带，所述显露口上盖合设置有透明板。

本实用新型提供的技术方案中，通过将结合物垫中的抗体通过耦联的方式标记至时间分辨荧光微球中，进而在检测时能够提高检测灵敏度和抗干扰能力，本新型中采用的检测方法为双抗夹心法，首先将样品加入样品垫中，样品垫能够调节样品层析的流速，使样品均匀流向结合物垫，样品中的心肌肌钙蛋白在到达结合物垫后会与标记在时间分辨荧光微球的鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体结合形成复合物，并在层析作用下，继续前进时，再与包被在检测带中的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体结合形成的双抗夹心式的结合物，进而会在检测带上形成一条荧光检测线，与此同时，样品在层析过程中会携带包被在结合物垫中的耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球活动至结合物垫中的质控带中，与包被在质控带中的兔IgG单克隆抗体结合形成复合物，以在质控带中形成一条荧光质控线，在检测反应结果时，在激发光源的作用下，时间分辨荧光微球会发射荧光信号，荧光免疫分析仪捕获荧光信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数据，从而计算出样本中的cTnI浓度。本实用新型提供的试剂盒具有检测快、灵敏度高抗干扰能力强的优点。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的结构获得其他的附图。

图1为本实用新型提供的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒一实施例的结构示意图；

图2为图1中的试剂条的的结构示意图；

图3为图1中的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒的侧视示意图。

附图标号说明：

本实用新型目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

需要说明，若本实用新型实施例中有涉及方向性指示(诸如上、下、左、右、前、后……)，则该方向性指示仅用于解释在某一特定姿态(如附图所示)下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。

另外，若本实用新型实施例中有涉及“第一”、“第二”等的描述，则该“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。另外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本实用新型要求的保护范围之内。

目前，常用的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，通常采用“三明治”型的双抗夹心法，即待测物随着流动相在毛细管作用下，先与结合垫上的荧光标记抗体结合，当到达检测线时再与包被抗体结合，最终形成双抗夹心的“三明治”型。目前用于荧光免疫分析的标记物主要包括荧光素、量子点、上转换纳米粒子等。普通的荧光物质荧光光谱的Stones位移只有几十纳米，激发光谱和发射光谱会有重叠造成干扰；且半衰期短，不利于提高产品的灵敏度和抗干扰能力。

而且，目前心肌肌钙蛋白I(cTnI)在POCT荧光免疫层析平台主要采用两步法，先将样本加入到稀释液中混匀，再将稀释后的液体加入到检测卡的方式，增加了操作时间。

为了解决上述问题，本实用新型提供一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，图1至图3为本实用新型提供的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒的具体实施例。

请参阅图1至图2，所述检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒100包括外壳1和试剂条2；所述试剂条2收容于所述外壳1内，且包括底板以及沿左右向依次连接设置于所述底板上的样品垫21、结合物垫22、检测垫23和吸水垫24，所述结合物垫22上包被有耦联鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体的时间分辨荧光微球和耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球，所述检测垫23上间隔设置有沿前后向延伸的检测带231和质控带232，其中，所述检测带231中包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；所述质控带232中包被有兔IgG单克隆抗体。

本实用新型提供的技术方案中，通过将结合物垫22中的抗体通过耦联的方式标记至时间分辨荧光微球中，进而在检测时能够提高检测灵敏度和抗干扰能力，本新型中采用的检测方法为双抗夹心法，首先将样品加入样品垫21中，样品垫21能够调节样品层析的流速，使样品均匀流向结合物垫22，样品中的心肌肌钙蛋白在到达结合物垫22后会与标记在时间分辨荧光微球的鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体结合形成复合物，并在层析作用下，继续前进时，再与包被在检测带231中的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体结合形成的双抗夹心式的结合物，进而会在检测带231上形成一条荧光检测线，与此同时，样品在层析过程中会携带包被在结合物垫22中的耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球活动至结合物垫22中的质控带232中，与包被在质控带232中的兔IgG单克隆抗体结合形成复合物，以在质控带232中形成一条荧光质控线，在检测反应结果时，在激发光源的作用下，时间分辨荧光微球会发射荧光信号，荧光免疫分析仪捕获荧光信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数据，从而计算出样本中的cTnI浓度。本实用新型提供的试剂盒100具有检测快、灵敏度高抗干扰能力强的优点。

具体地，在本实施例中，所述时间分辨荧光微球内部填充有镧系元素的螯合物，所述镧系元素包括铕、钐或镝中的一种。如此，利用镧系元素螯合物的荧光寿命较长(10～1000μs)，等短寿命背景荧光完全衰变后再测定镧系元素离子螯合物的特异性荧光信号，半衰期长，可以极大的降低本底荧光，产生高信噪比，提高试剂的灵敏度和抗干扰能力；镧系元素位移大，可避免激发光谱和发射光谱重叠，相不干扰，提高检测结果的灵敏度和准确性；另外，镧系元素的激发光谱宽，发射光谱窄，可以进一步降低干扰，在此基础上制备的检测试剂，可以采用一步法，直接加样本70uL到检测卡中，等待15分钟，即可测试出结果。将操作步骤做到极简，在时间分辨荧光的基础上，做到检测准确快速，缩短了对cTnI整个检测过程的时间，为医生对患者病症进行诊断，提供更快更好的辅助。

进一步地，在本实施例中，所述时间分辨荧光微球表面有修饰官能团，所述修饰官能团包括羧基、羟基或环氧基中的至少一种，所述修饰官能团能够用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高了标记物的稳定性。

具体地，为了便于样品通过层析的方式流通于不同的垫层中，在本实施例中，所述结合物垫22和所述吸水垫24的一端分别与所述检测垫23相对的两端重叠设置，所述样品垫21的一端与所述结合物垫22的另一端重叠设置，以形成有三个重叠区3，通过重叠设置能够避免样品在层析过程中流失部分。进一步地，考虑到所述重叠区3长度过长又会影响层析的流速，因此，本实施例中，所述重叠区3沿左右向的长度为a，其中，1mm＜a＜2mm。

具体地，在本实施例中，所述检测垫23采用硝酸纤维素膜；所述结合物垫22采用玻璃纤维素膜，所述吸水垫24采用吸水滤纸，所述底板采用聚氯乙烯板，也即PVC板。

考虑到将样品滴入样品后进行定量检测心肌肌钙蛋白I时，需要将所述壳体水平放置，避免倾斜而影响检测的准确率，在本实施例中，所述外壳1底部设置有多个吸盘11，通过多个所述吸盘11可以将所述试剂盒100吸附于水平的平面上等待检测结果，比如水平的桌面、底面等。

具体地，因为加样孔12是显露于外界的，为了保护所述加样孔12避免受到外界的污染，在本实用新型中，所述外壳1上对应所述样品垫21沿左右方向间隔设置有多个加样孔12，所述加样孔12孔口上设置有密封膜。

进一步地，请参阅图1，在本实施例中，处于左侧的所述加样孔12的孔径大于处于右侧的所述加样孔12的孔径，如此，可以根据加入样品的体积，来选择不同孔径大小的所述加样孔12进行加样，因为体积大的样品加入至样品垫21后流动的速率大于体积小的样品，为了避免样品流动过快而不能够均匀流动至所述结合物垫22，本实施例通过将孔径较大的加样孔12设置于左侧，以延长其活动至所述结合物垫22的距离，进而延长其流动时间，使得样品在所述样品垫21上能够均匀流动。

具体地，因在滴入样品，经过一定的反应时间后，还需要通过荧光免疫分析仪对所述检测带231和所述指控带进行检测，需要将所述检测带231和所述质控带232显露出来，在本实施例中，所述外壳1上对应所述检测垫23设置有显露口13，用于显露所述检测带231和所述质控带232，所述显露口13上盖合设置有透明板。

在本实施例中，所述试剂条2的制备方法如下：

(一)、结合物垫22的制备

(1)结合物垫22预处理

结合物垫22原材料采用玻璃纤维素膜，配制0.5％牛血清白蛋白的结合物垫22处理液，将结合物垫22放至喷膜仪平台的固定位置上进行结合物垫22处理液喷涂包被，处理完毕后，转移进鼓风干燥箱，于45℃+2℃温度下干燥24±2小时，进行干燥

(2)制备荧光标记抗体

配制不同PH值的0.1M磷酸盐缓冲液、EDC溶液、NHS溶液、偶联封闭液；

加液混合：取0.1M磷酸盐缓冲液(PH 7.0)及荧光微球于离心管中，混匀。加液量：200uL缓冲液对应加入50uL荧光微球；

超声分散：使用超声波细胞粉碎机使得荧光微球均匀分散于缓冲液。(10％功率，超5秒停5秒，共1分钟)；

活化：加入EDC溶液(10mg/mL)活化，置于摇床振荡10min，180r，常温。加液量：50uL荧光微球对应加入10uL EDC溶液；

离心洗涤：活化完成后，置于离心机(10000r/m,15分钟)中离心，去除上清液。用0.1M硼酸-硼砂缓冲液(PH 7.0)复溶，离心(10000r/m,15分钟)洗涤两遍；

超声分散、偶联：最后一次复溶后超声分散使荧光微球均匀分散于缓冲液中，然后加入相对应的抗体(质控线荧光微球的标记加入鼠抗兔IgG抗体，检验线荧光微球的标记加入鼠抗人心肌肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体)，使得蛋白终浓度为20ug/mL。置于摇床振荡1h，120r，常温。封闭：每50uL荧光微球加入10uL偶联封闭液，置于摇床封闭1h，120r，常温；

离心洗涤：封闭完成后，置于离心机中离心(10000r/m,15分钟)，去除上清液。用0.1M磷酸盐缓冲液(PH 7.5)复溶，离心(10000r/m,15分钟)洗涤两遍；

超声分散、保存：最后一次离心洗涤后用偶联储存液复溶，超声分散，做好标识：置于2～8℃保存，使用前平衡至室温方可用于包被。

(3)结合物垫22的包被和干燥

配制标记物稀释液；

按以下表1配制结合物垫22包被溶液：

表1

表1为心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒(免疫荧光层析法)结合物垫包被溶液(120uL配料表)，65人份试剂需要120uL包被液(生产时可根据小试情况调整以下用量)

将处理过的结合物垫22正面向上放至结合垫固定板上，通过喷膜仪将标记物稀释液喷涂包被至结合垫正中间，处理完毕后，转移进干燥箱(45℃+2℃)放置24±2小时，进行干燥，干燥完毕的结合物垫22，用密封袋封装，做好标识密封保存，温度：15-30℃、湿度≤30％下保存。

(二)检测垫23的制备

(1)检测垫包被液制备

配制检测线与质控线缓冲液；

按以下表2配制检测线包被溶液：

表2

表2为心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测试剂盒(免疫荧光层析法)检测线包被溶液(1mL配料表)

按以下表3配制质控线包被溶液：

表3

表3为免疫荧光层析试剂质控线包被溶液1ml配料表。

(2)检测垫23的包被与干燥

检测垫23原料为硝酸纤维素膜，将检测垫23放至喷膜仪平台的固定位置上将检测线包被溶液包被至所述检测带上，将质控线包被溶液包被至质控带上，包被完毕后，放置于干燥箱(45℃+2℃)放置72±2小时进行干燥。干燥完毕的检测垫，用密封袋封装，做好标识，密封保存，温度：15-30℃、湿度≤30％。

样品垫21采用玻璃纤维素膜，吸水垫24采用吸水滤纸，将样品垫21和吸水垫24裁剪至合适尺寸，在底板上由左至右依次粘贴样品垫21、结合物垫22、检测垫23和吸水垫24，即可完成所述试剂条的制备。

以上所述仅为本实用新型的优选实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是在本实用新型的构思下，利用本实用新型说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本实用新型的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，包括：

外壳；以及，

试剂条，收容于所述外壳内，且包括底板以及沿左右向依次连接设置于所述底板上的样品垫、结合物垫、检测垫和吸水垫，所述结合物垫上包被有耦联鼠抗人心肌肌钙蛋白单克隆抗体的时间分辨荧光微球和耦联有鼠抗兔IgG抗体的时间分辨荧光微球，所述检测垫上间隔设置有沿前后向延伸的检测带和质控带；

其中，所述检测带中包被有心肌肌钙蛋白I单克隆抗体；所述质控带中包被有兔IgG单克隆抗体。

2.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述时间分辨荧光微球内部填充有镧系元素的螯合物，所述镧系元素包括铕、钐或镝中的一种。

3.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述时间分辨荧光微球表面有修饰官能团，所述修饰官能团包括羧基、羟基或环氧基中的至少一种。

4.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述结合物垫和所述吸水垫的一端分别与所述检测垫相对的两端重叠设置，所述样品垫的一端与所述结合物垫的另一端重叠设置，以形成有三个重叠区。

5.如权利要求4所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述重叠区沿左右向的长度为a，其中，1mm＜a＜2mm。

6.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述检测垫包括硝酸纤维素膜；和/或，

所述结合物垫包括玻璃纤维素膜；和/或，

所述吸水垫包括吸水滤纸；和/或，

所述底板包括聚氯乙烯板。

7.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述外壳底部设置有多个吸盘。

8.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述外壳上对应所述样品垫沿左右方向间隔设置有多个加样孔，所述加样孔孔口上设置有密封膜。

9.如权利要求8所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，处于左侧的所述加样孔的孔径大于处于右侧的所述加样孔的孔径。

10.如权利要求1所述的检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒，其特征在于，所述外壳上对应所述检测垫设置有显露口，用于显露所述检测带和所述质控带，所述显露口上盖合设置有透明板。