CN115820470A - 一株解淀粉芽孢杆菌zh804及其应用 - Google Patents
一株解淀粉芽孢杆菌zh804及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体公开了一株解淀粉芽孢杆菌ZH804及其应用。本发明的菌株具有提高基因活性，加速γ‑聚谷氨酸黏性物质降解，减少γ‑聚谷氨酸黏性物质分泌，降低发酵粘度，提高溶氧、提高发酵过程中菌体的生物量和减少产泡的优点，具有较佳的经济应用价值；且该菌株还具有较佳的产酶特性，生产出的中性蛋白酶具有较佳的耐盐性，在食品发酵工业中有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域，尤其是涉及一株解淀粉芽孢杆菌ZH804 及其应用。
背景技术
芽孢杆菌为自然界中常见的细菌，由于其能形成芽孢，故对外界有害因子具有很强的抵抗能力，如：耐高温、耐射线等。芽孢杆菌的分布很广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道中。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens或 B.amyloliquefaciens)为芽孢杆菌的一种，其是公知的好氧细菌，常常见于土壤样品，其承担世界上大部分α-淀粉酶和蛋白酶的生产，目前对于解淀粉芽孢杆菌的研究大多集中于其产酶能力上，尤其是产中性蛋白酶的能力。
蛋白酶是催化蛋白质水解为多肽和氨基酸的酶，广泛存在于动植物和微生物中，在生物体中执行着不同的生理功能和代谢活性。按其反应的最适pH值，蛋白酶可被分为酸性蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶。蛋白酶在工业上被大量应用，据统计，在所有工业用酶制剂中，约有75％都是蛋白酶。目前商业生产的蛋白酶主要来源于动物、植物及微生物。由于动植物蛋白酶的原材料需求量巨大、分离提纯成本高昂，难以大规模生产。而微生物具有生长快速、所需空间少、调控性强等优点，成为蛋白酶生产的主要来源。其中，来源于芽孢杆菌的中性蛋白酶市场占比最高。在食品工业中，蛋白酶能够将原料中的蛋白质水解为肽类及氨基酸，从而提高原料利用率，加速发酵，改善食品品质口感等。正因如此，蛋白酶被越来越多地应用于食品发酵工业中。然而，发酵食品通常含盐量较高，因此对所添加蛋白酶的耐盐性也有较高要求。
在用于中性蛋白酶生产的同时，芽孢杆菌也广泛使用于生物絮凝剂的生产应用，其中γ-聚谷氨酸就是主要一类，γ-聚谷氨酸是一种具有强吸附性的黏性物质。γ-聚谷氨酸的代谢主要与γ-DL-谷氨酰基水解酶活性相关，其中编码基因 pgdS是其中的关键控制基因。发酵液中γ-聚谷氨酸过多会导致发酵液粘度大、溶氧低，细菌无法正常生长，蛋白酶分离纯化困难等问题。因此，需要通过合适的手段减少发酵中的γ-聚谷氨酸以提高中性蛋白酶产量，降低中性蛋白酶分离纯化的难度，节约成本。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804及其应用。本发明从酱油生产曲料中筛选出产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌，该菌株能够较好降低γ-聚谷氨酸黏性物质的分泌，改善了菌株的发酵性能，使得发酵中的菌体的生物量及中性蛋白酶的产量有较大幅度提升，且生产的中性蛋白酶具有较好的耐盐性。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一目的，本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游-685bp处由A突变为C，突变后的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS的上游基因序列如SEQ ID NO:2所示。
本发明筛选获得γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游位点突变的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，该菌株可以提高基因活性，γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游位点的突变使得γ-dL-谷氨酰基水解酶基因pgdS 在菌株中的表达量提高，γ-dL-谷氨酰基水解酶的产量增加，加速了γ-聚谷氨酸黏性物质降解，降低γ-聚谷氨酸黏性物质的分泌，改善了该菌株的发酵性能。并且，该菌株具有提高发酵过程中中性蛋白酶产量的优点，表明该菌株的产酶特性佳，菌株产生的中性蛋白酶也具有较好的耐盐性。
作为本发明所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的优选实施方式，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) ZH804保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO：62511，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
具体保藏信息如下：
保藏单位名称：广东省微生物菌种保藏中心；
保藏地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；
保藏日期：2022年6月2日；
保藏编号：GDMCC NO：62511。
分类命名：Bacillus amyloliquefaciens
本发明分离筛选得到的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804具有提高基因活性，加速γ-聚谷氨酸黏性物质降解，减少γ-聚谷氨酸黏性物质分泌，降低发酵粘度，提高溶氧、提高生物量和减少产泡的优点，从而提高了发酵均一性和可操作性，同时也提高了发酵过程中性蛋白酶的发酵产量，获得的中性蛋白酶具有较佳的耐盐性。
优选地，本发明从酱油生产曲料中筛选出一株高产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，并通过常压室温等离子体诱变技术对菌株进行诱变和驯化，最终获得解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804。
本发明筛选获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804可以降低发酵粘度，解决了发酵产泡严重等问题，有效提高了菌体的生物量和中性蛋白酶的产量。
第二目的，本发明提供了上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在制备发酵产品中的应用。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)在发酵过程中提高中性蛋白酶含量的应用。
上述获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)进行发酵生产(例如是液态发酵)中可以获得高产量的中性蛋白酶。
第三目的，本发明提供了上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在降低γ-聚谷氨酸黏性物质的生成量中的应用。
本发明通过定向突变筛选出一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804，其γ-DL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游基因发生突变，使得该菌株具有降低发酵粘度的特性，解决了发酵产泡严重等问题。
第四目的，本发明提供了一种提高发酵过程中性蛋白酶含量的方法，包括添加上述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)进行发酵。
第五目的，本发明提供了一种发酵液，所述发酵液含有上述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804具有加速γ-聚谷氨酸分解的特点，使得发酵液的粘度下降，使得菌株可以正常生长，降低分离纯化中性蛋白酶的难度，节约了成本。
第六目的，本发明提供了一种中性蛋白酶，采用上述解淀粉芽孢杆菌 (Bacillusamyloliquefaciens)制备得到。
优选地，所述中性蛋白酶为耐盐中性蛋白酶。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所产的中性蛋白酶经高盐处理后酶活力为231U/mL，相较对照酶活力保留了83.7％。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804及其应用，该菌株具有提高基因活性，加速γ-聚谷氨酸黏性物质降解，减少γ-聚谷氨酸黏性物质分泌，降低发酵粘度，提高溶氧、提高发酵过程中菌体的生物量和减少产泡的优点，具有较佳的经济应用价值；且该菌株还具有较佳的产酶特性，生产出的中性蛋白酶具有较佳的耐盐性，在食品发酵工业中有很好的应用前景。
附图说明
图1为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804划线分离平板菌落形态图；
图2为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804镜检细胞形态图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、产中性蛋白酶的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804
筛选与鉴定
1.菌株分离纯化：
固体培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，2.5％琼脂粉，其他为水，121℃灭菌15min。
取5g传统酱油黄豆曲样品加至50g无菌水中，于摇床中以180rpm转速摇1 小时充分混匀。吸取上清液2mL至折好的滤纸上过滤，获得菌液。将菌液梯度稀释105倍至浓度为2×103CFU/mL后，置于80℃水浴锅中孵育30分钟。吸取菌液50μL，涂布至固体培养基平板上，30℃培养15小时，所得平板上的单菌落即为纯种芽孢杆菌菌株。
2.出发菌株摇瓶发酵筛选：
液体培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，其他为水，121℃灭菌15min。
从上述平板中挑单菌落接种于盛有50mL液体培养基的三角瓶中，在30℃摇床中以180rpm转速培养48小时，将发酵液离心后取上清液，即为粗酶液。
中性蛋白酶酶活力测定：将离心后得到的粗酶液进行适当稀释，使得最后测定酶活时吸光度在0.2～0.8。按照GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》采用福林法测定中性蛋白酶活力。
根据测定的酶活力结果挑选出酶活力最高的菌株作为出发菌株，进行后续的诱变育种。
3.诱变菌株：
本实施例采用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对步骤2所得到的出发菌株进行诱变。
设备准备：ARTP-ⅢS，无锡源清天木生物科技有限公司，按照设备使用说明书正常操作；
实验操作：将培养至对数期的菌液离心收集，生理盐水洗涤3次后，用生理盐水重新悬浮至OD600在0.5左右。在超净台中将10μL菌悬液均匀涂抹在 ARTP金属载片上，随后将载片转移至ARTP载盘。在控制面板设置功率120W，气量10SLM，诱变时间30s，点击“开始”进行样品处理。样品处理完毕，将金属载片转移至盛有1mL无菌生理盐水的离心管中，充分振荡混匀，形成新的菌悬液。将菌悬液稀释至浓度为400CFU/mL左右，吸取100μL涂布于固体培养基(采用步骤1的固体培养基)平板。
4.诱变菌株摇瓶发酵筛选：
从步骤3的平板中挑单菌落接种于盛有50mL液体培养基(采用步骤2的液体培养基)的三角瓶中，在30℃摇床中以180rpm转速培养48小时，取上清液进行粘度及酶活力检测。
粘度检测：使用NDJ-9SB型旋转粘度计进行粘度检测。
中性蛋白酶酶活力检测与步骤2方法相同。
综合测定的结果选择粘度小和酶活力高的菌株作为目标菌株。
5.菌种鉴定：
按照天根生化科技(北京)有限公司细菌基因组DNA提取试剂盒(DP302) 说明书提取所得芽孢杆菌菌株基因组DNA，送至生工生物工程(上海)股份有限公司进行16S rDNA鉴定。鉴定结果显示该菌株与解淀粉芽孢杆菌16S rDNA 序列的同源性为100％(Gene Bank：CP054415.1)，将该菌株命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804已于2022年6月2日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号：GDMCC NO：62511。
本实施例所得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804划线分离平板菌落形态如图1所示。
本实施例所得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804镜检细胞形态如图2所示，测得的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
实施例2、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)低产粘特性分析
1.摇瓶发酵产粘研究：
(1)菌种活化：分别从甘油管中蘸取含有出发菌株和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的菌液在固体培养基平板上划线接种，37℃培养15h得到单菌落。
固体培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，2.5％琼脂粉，其他为水，121℃灭菌15min。
(2)种子液培养：从平板挑选活化的出发菌株单菌落和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的单菌落分别转接到装有种子培养基的50mL三角瓶，在摇床中以37℃、200rpm培养14h，获得种子液。
种子培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，其他为水，121℃灭菌15min。
(3)摇瓶培养：按体积比1％的接种量将步骤(2)所得两个菌株的种子液分别接种到盛有100mL发酵培养基的500mL三角瓶中，在摇床中以30℃、 200rpm培养48h，获得发酵液。
发酵培养基：1.5％葡萄糖，1.5％酵母提取物，2％玉米浆，0.5％海藻糖，0.1％碳酸钠，其他为水，121℃灭菌15min。
(4)粘度及酶活力测定
按照实施例1相同的方法进行粘度及中性蛋白酶酶活力测定，出发菌株所得到的发酵液粘度为1425mPa·S，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens) ZH804所得到的发酵液粘度为57mPa·S，相较出发菌株降低了96.0％；出发菌株所得到发酵液的中性蛋白酶酶活为198U/mL，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所得到发酵液的中性蛋白酶酶活力为276U/mL，相较出发菌株提升了39.4％。
2.全基因组测序分析
通过全基因组测序分析，发现本发明所述低产粘解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游-685bp处发生了由A到C的突变，突变后的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游基因序列如SEQ ID NO.2所示。该上游基因的突变使γ-dL-谷氨酰基水解酶基因 pgdS在本发明所述低产粘解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804 中的表达量提高，γ-dL-谷氨酰基水解酶的产量增加，使得解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)ZH804分泌的γ-聚谷氨酸可被分解，从而使发酵液粘度下降。
实施例3、发酵罐培养产中性蛋白酶
(1)菌种活化：分别从甘油管中蘸取含有出发菌株和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的菌液在固体培养基平板上划线接种，37℃培养15h得到单菌落。
固体培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，2.5％琼脂粉，其他为水，121℃灭菌15min。
(2)一级种子液培养：从平板挑选活化的出发菌株单菌落和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的单菌落分别转接到装有 10mL种子培养基的50mL三角瓶，在摇床中以37℃、200rpm培养14h。
种子培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，其他为水，121℃灭菌15min。
(3)二级种子液培养：按体积比2％接种量将步骤(2)所得两个菌株的一级种子液分别接种到盛有50mL种子培养基的250mL三角瓶，在摇床中以37℃、 200rpm培养8h。其中，种子培养基与步骤(2)的种子培养基相同。
(4)发酵罐培养：按体积比0.5％接种量将步骤(3)所得两个菌株的二级种子液分别接种到盛有7L发酵培养基的10L发酵罐中，发酵温度30℃，搅拌转速180rpm，通气量3V/V/min，发酵40h。
发酵培养基：10％糖蜜，3％酵母提取物，0.5％海藻糖，0.5％磷酸二氢钾， 0.5％磷酸氢二钾，0.05％硫酸镁，其他为水。
(5)粘度与酶活力测定：发酵结束后，按照实施例1相同的方法进行粘度及中性蛋白酶酶活力测定，出发菌株所得到的发酵液粘度为1256mPa·S，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804所得到的发酵液粘度为54mPa·S，相较出发菌株降低了95.7％；出发菌株所得到发酵液的中性蛋白酶酶活力为 669U/mL，解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804所得到发酵液的中性蛋白酶酶活力为1985U/mL，相较出发菌株提升196.7％。
(6)γ-聚谷氨酸测定：取1mL发酵液离心弃菌体残渣，取上清加入3mL 无水乙醇，于4℃冰箱中静置12h，离心收集沉淀。将沉淀加入1mL纯水复溶，经适当稀释后，利用紫外分光光度计测定溶液其在218nm下的吸光度，代入γ- 聚谷氨酸标准曲线中计算获得γ-聚谷氨酸含量。
可知，出发菌株所得到的发酵液中γ-聚谷氨酸含量为45.49g/L，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所得到的发酵液中γ-聚谷氨酸含量为2.32g/L，相较出发菌株减少94.9％。
实施例4、发酵生产蛋白酶
(1)菌种活化：分别从甘油管中蘸取含有出发菌株和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的菌液在固体培养基平板上划线接种，37℃培养15h得到单菌落。
固体培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，2.5％琼脂粉，其他为水，121℃灭菌15min。
(2)一级种子液培养：从平板挑选活化的出发菌株单菌落和实施例1获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的单菌落分别转接到装有 100mL种子培养基的500mL三角瓶，在摇床中以37℃、200rpm培养14h。
种子培养基：1％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，其他为水，121℃灭菌15min。
(3)二级种子液培养：按体积比1.5％接种量将步骤(2)所得两个菌株的一级种子液分别接种到盛有6L种子培养基的10L发酵罐，培养温度37℃，搅拌转速200rpm，培养7h。
种子培养基：2％蛋白胨，0.5％酵母提取物，1％氯化钠，其他为水，121℃灭菌30min。
(4)发酵罐培养：按体积比2％接种量将步骤(3)所得两个菌株的二级种子液分别接种到盛有270L发酵培养基的500L发酵罐中。发酵0-8h，控制温度 37℃，搅拌转速250rpm，通气量为30方/h。发酵8h后控制温度30℃，搅拌转速200rpm，通气量25方/h，再发酵32h。
发酵培养基：15％葡萄糖，6％酵母提取物，0.5％海藻糖，0.5％磷酸二氢钾，0.5％磷酸氢二钾，0.1％硫酸镁，其他为水。
(5)粘度与酶活力测定：发酵结束后，按照实施例1相同的方法进行粘度及中性蛋白酶酶活力测定，出发菌株所得到的发酵液粘度值为1191mPa·S，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所得到的发酵液粘度值为 56mPa·S，相对出发菌株降低了95.3％；出发菌株所得到发酵液的中性蛋白酶酶活力为990U/mL，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所得到发酵液的中性蛋白酶酶活力为2873U/mL，相较出发菌株提升190.2％。
(6)γ-聚谷氨酸测定：按照实施例3相同的方法进行γ-聚谷氨酸含量测定，出发菌株所得到的发酵液中γ-聚谷氨酸含量为45.11g/L，解淀粉芽孢杆菌 (Bacillusamyloliquefaciens)ZH804所得到的发酵液中γ-聚谷氨酸含量为 2.03g/L，相较出发菌株减少95.5％。
实施例5、中性蛋白酶耐盐性实验
(1)样品处理：分别取5mL实施例2中出发菌株所得到的摇瓶发酵液和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所得到的摇瓶发酵液离心后弃沉淀，上清即为粗酶液。取1mL粗酶液与含20％氯化钠的磷酸盐缓冲液1:1(v/v) 混匀，于4℃冰箱中放置12h，得到高盐处理后的酶液。另取1mL粗酶液与不含氯化钠的磷酸盐缓冲液1:1(v/v)混匀，于4℃冰箱中放置12h，作为对照样品。
(2)酶活力测定：按照实施例1相同的方法分别对出发菌株及解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804的高盐处理后酶液和对照样品进行中性蛋白酶酶活力测定。
出发菌株所产的中性蛋白酶经高盐处理后酶活力为119U/mL，相较对照酶活力保留了60.1％。
解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804所产的中性蛋白酶经高盐处理后酶活力为231U/mL，相较对照酶活力保留了83.7％。
综上所述，本发明筛选获得的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804具有提高基因活性，加速γ-聚谷氨酸黏性物质降解，减少γ-聚谷氨酸黏性物质分泌，降低发酵粘度，提高溶氧、提高发酵过程中菌体的生物量和减少产泡的优点，并且，该菌株生产的中性蛋白酶产量高，且中性蛋白酶具有较好的耐盐性，在食品发酵工业中有很好的应用前景。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS上游-685bp处由A突变为C，突变后的γ-dL-谷氨酰基水解酶编码基因pgdS的上游基因序列如SEQID NO:2所示。
2.一株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)ZH804，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZH804保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号为GDMCC NO：62511，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。
3.如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在制备发酵产品中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)在发酵过程中提高中性蛋白酶含量的应用。
5.如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在降低γ-聚谷氨酸黏性物质的生成量中的应用。
6.一种提高发酵过程中性蛋白酶含量的方法，其特征在于，包括添加权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)进行发酵。
7.一种发酵液，其特征在于，所述发酵液含有如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。
8.一种中性蛋白酶，其特征在于，采用如权利要求1或2所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)制备得到。
9.如权利要求8所述的中性蛋白酶，其特征在于，所述中性蛋白酶为耐盐中性蛋白酶。
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2022
- 2022-09-28 CN CN202211207709.XA patent/CN115820470B/zh active Active
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| CN101384615A (zh) * | 2004-06-26 | 2009-03-11 | 汉高两合股份公司 | 形成或分解聚氨基酸的地衣芽胞杆菌新基因产物以及据此改进的生物技术生产方法 |
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