CN115819583A - 一种抗hla-g分子的单克隆抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗HLA‑G分子的抗体(YHWG‑1)及用途，所述抗体(YHWG‑1)由保藏编号为CCTCC NO:202120的杂交瘤产生，采用所有目前已知7种HLA‑G异构体分子(HLA‑G1，HLA‑G2，HLA‑G3，HLA‑G4，HLA‑G5，HLA‑G6及HLA‑G7)共有的，位于HLA‑G分子重链α1结构域第72～91位氨基酸序列抗原肽(QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS)为免疫原。本发明提供了编码本发明所述YHWG‑1抗体的核苷酸及其编码氨基酸序列,本发明还提供了所述YHWG‑1抗体用于HLA‑G异构体分子免疫组化、免疫印迹及流式细胞术等检测的用途。

Description

一种抗HLA-G分子的单克隆抗体及其用途
技术领域
本发明属于生物医药领域，涉及抗HLA-G分子抗体(YHWG-1)的以下方面： 采用所有目前已知7种HLA-G异构体分子(HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3，HLA-G4， HLA-G5，HLA-G6及HLA-G7)共有的，位于HLA-G分子重链α1结构域第72～91氨基 酸序列(QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS)的抗原肽为免疫原，制备抗HLA-G分子的单克 隆抗体(YHWG-1)；编码本发明所述YHWG-1抗体的核苷酸及其编码的氨基酸序 列，以及所述抗体(YHWG-1)用于免疫组化、免疫印迹及流式细胞术检测等用途。
背景技术
人类白细胞抗原-G(human leukocyte antigen-G,HLA-G)基因，全长6.0kb， 位于人类第6号染色体短臂远侧6p21.3。在蛋白质翻译过程中，HLA-G mRNA第 1外显子编码信号肽，第2、3和第4外显子分别编码细胞外区的α1、α2和α3 结构域，第5位外显子编码跨膜区；第6外显子编码仅含6个氨基酸残基的HLA-G 分子胞内段；由于外显子6内含有终止密码子，第7外显子不被转录；第8外显 子对应于HLA-G基因的3′UTR。HLA-G初始转录产物经选择性剪接，可产生7 种成熟mRNA，分别编码7种不同分子量的异构体分子(HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7)。其中HLA-G1、HLA-G2、HLA-G3及HLA-G4含有跨细胞膜 区，为膜结合型异构体；HLA-G5、HLA-G6及HLA-G7缺乏跨细胞膜结构，为可溶 性异构体。HLA-G1～-G7异构体分子的分子量分别为39kD,31kD,22kD,30kD, 34kD,23kD及16kD。
HLA-G1是由全长HLA-G mRNA编码，由胞外区α1、α2及α3结构域，跨膜 区及胞内结构域组成。HLA-G2缺乏α2结构域，由胞外区α1及α3结构域，跨 膜区及胞内结构域组成；HLA-G3缺乏α2和α3结构域，由胞外区α1结构域， 跨膜区及胞内结构域组成；HLA-G4缺乏α3结构域，由胞外区α1及α2结构域， 跨膜区及胞内结构域组成；胞外区结构域分别与HLA-G1及HLA-G2相同，但它们 由含有内含子4的HLA-G mRNA编码，因内含子4中含有终止密码子，所编码的 蛋白分子缺乏由外显子5所编码的跨膜区，形成可溶性HLA-G分子。编码HLA-G7 的mRNA由于内含子2中含有终止密码子，胞外区仅含α1结构域及由内含子2 所编码的2个氨基酸残基相连(图1)。
在正常生理情况下，HLA-G分子仅表达在母胎界面的绒毛外滋养层细胞，维 持妊娠过程中的母胎免疫耐受。病理情况下，HLA-G分子能在肿瘤细胞及病毒感 染等病理组织细胞中诱导性表达，与疾病的发生及进展密切相关。HLA-G分子是 体内一个重要的免疫致耐分子，也是一种重要的免疫检查点分子，其免疫抑制功 能主要通过结合免疫抑制性受体免疫球蛋白样转录物-2(immunoglobulin-like transcript-2,ILT2/LILRB1/CD85j)、免疫球蛋白样转录物-4 (ILT4/LILRB2/CD85d),传递抑制信号，诱导免疫耐受。具体作用机制有：①与 表达在T细胞、NK细胞和B细胞上的ILT-2结合，抑制T细胞和NK细胞免疫杀 伤活性，抑制B细胞增殖和抗体分泌等功能。②与树突状细胞(DC)上表达的 ILT-2、ILT-4结合，抑制DC细胞的成熟和分化，诱导产生耐受性DC细胞。③ 与骨髓来源抑制性细胞(MDSC)和巨噬细胞(Mф)上表达的ILT-2、ILT-4结合， 诱导促炎抗肿瘤的M1型巨噬细胞向免疫致耐性M2型巨噬细胞分化等。因此， HLA-G在肿瘤等疾病的发生发展中起到重要作用。基于HLA-G为靶点的多项肿瘤 免疫靶向治疗已在美国等进入I期临床试验。
HLA-G与受体ILT-2、ILT-4结合，具有分子结构特异性。受体ILT-2、ILT-4 与HLA-G结合的位点HLA-G胞外区α3结构域。ILT-2仅结合HLA-G/β2m复合物， 而ILT-4不仅可以与HLA-G/β2m结合，同时可以与不含β2m的游离HLA-G分子结 合。由于HLA-G1、-G2、-G3、-G4、-G5、-G6及HLA-G7异构体分子在表达机制 及分子结构上存在差异。ILT-2能与HLA-G1和HLA-G结合，而ILT-4能与HLA-G1， HLA-G2，HLA-G5及HLA-G6异构体分子结合。如HLA-G3、-G4、及HLA-G7异构体 胞外区不含α3结构域，不能与ILT-2和ILT-4结合。不同HLA-G异构体分子可在病理生理过程中发挥特定的免疫学效应。在不同病理状态下，尤其在肿瘤组织 细胞中，HLA-G异构体表达存在广泛的异质性，不同HLA-G分子异构体的表达具 有特定的临床意义。因此，分析特定HLA-G异构体分子表达及不同HLA-G异构体 分子表达谱，对于阐述特定HLA-G异构体分子的生物学功能及其临床意义具有重 要意义。
目前国内外用于HLA-G分子免疫组化和免疫印迹的抗体有4H84，MEM-G1及MEM-G2。其中抗体4H84，其识别位点位于HLA-G分子均具有的胞外区α1结构域， 能够检测目前已知含有α1结构域的7种HLA-G异构体分子(HLA-G1，HLA-G2， HLA-G3，HLA-G4，HLA-G5，HLA-G6及HLA-G7)。抗体MEM-G1及MEM-G2由全长 HLA-G重链免疫小鼠得到，具体识别位点无法预测，这两种抗体理论上，与抗体 4H84相似，能够识别上述HLA-G异构体分子。但上述抗体4H84、MEM-G1及MEM-G2 其检测特异性存在局限性，在免疫组化及免疫印迹的应用上存在交叉反应，出现 假阳性。同时，上述三种抗体不能用于流式检测。
因此，在靶向精准医疗的背景下，现有的检测HLA-G分子的抗体不尽如人意， 迫切需要开发更多特异性和亲和力更好的抗HLA-G分子的单克隆抗体。
发明内容
鉴于现有HLA-G抗体存在上述不足，本发明的目的是提供一种抗HLA-G分子的 特异性单克隆抗体(YHWG-1)、编码本发明所述抗体(YHWG-1)的核苷酸序列及 其编码的氨基酸序列；以及所述YHWG-1抗体用于免疫组化、免疫印迹及流式检测 等用途。
本发明采用所有目前已知7种HLA-G异构体分子(HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3， HLA-G4，HLA-G5，HLA-G6及HLA-G7)共有的，位于HLA-G分子重链α1结构域第72～ 91氨基酸序列的抗原肽为免疫原，其氨基酸序列为SEQ ID No.19所示氨基酸序 列(QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS)。QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS肽段位于HLA-G分子重链 α1结构域(图1虚框内所示区域)，并基于此制备抗HLA-G分子的特异性单克隆抗 体(YHWG-1)。
根据发明人的研究成果，本发明提供了一种抗HLA-G分子的单克隆抗体 (YHWG-1)，至少包括轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和重 链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；
所述单克隆抗体(YHWG-1)抗体轻链的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经 替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQID No.1所示序列具有同等功 能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.2所示的 序列QSFVHSNGNIY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2 所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为 SEQ ID No.3所示的序列KVS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3 的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示的序列FQGSHVPPT或经替换、缺失或添加一个 或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；
所述单克隆抗体(YHWG-1)抗体重链的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示或经 替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示序列具有同等功 能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1的氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的 序列GYIFTSYW或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所 示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列IYPSDSYT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与 SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨 基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列TRFGYPFDY或经替换、缺失或添加一个或多 个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。
进一步地，所述单克隆抗体(YHWG-1)还包括轻链框架区(Framework region， FR)和重链框架区；其中，所述轻链框架区包括轻链FR1、FR2、FR3和FR4中的一 种或多种，所述轻链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.9所示的序列 DIVITQDELSLTVSLGDQASISCRTS或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸 形成的与SEQ ID No.9所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR2的氨 基酸序列为SEQ ID No.10所示的序列LEWFLQKPGQSPKLLIY或经替换、缺失或添加 一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.10所示序列具有同等功能的氨基酸序列； 所述轻链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.11所示的序列 SRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYC或经替换、缺失或添加一个或多个氨基 酸形成的与SEQ ID No.11所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR4 的氨基酸序列为SEQ ID No.12所示的序列FGGGTKLEIK或经替换、缺失或添加一 个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.12所示序列具有同等功能的氨基酸序列； 所述重链框架区包括重链FR1、FR2、FR3和FR4中的一种或多种，其中：所述重链 FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.13所示的序列QLQESGTVLVRPGASVKLSCKAS或经替 换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ IDNo.13所示序列具有同等功 能的氨基酸序列；所述重链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.14所示的序列 INWVKQRPGQGLEWIGN或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有与SEQ ID No.14所示序列同等功能的氨基酸序列；所述重链FR3的氨基酸序列为SEQ IDNo.15所示的序列NFNQKFEDKATLTVDTSSSTAYMQFSSPTSEDSAVYYC或经替换、缺失或 添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.15所示序列具有同等功能的氨基酸 序列；所述重链FR4的氨基酸序列为SEQ ID No.16的序列WGQGTTLTVSS或经替换、 缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.16所示序列具有同等功能的 氨基酸序列；
进一步地，所述单克隆抗体(YHWG-1)中编码轻链的核苷酸序列为SEQ ID No.17所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.17所示序列具有同等功能的核苷酸序列，所述单克隆抗体(YHWG-1)中 编码重链的核苷酸序列为SEQID No.18所示的序列或该序列经替换、缺失或添加 一个或多个核苷酸形成的与SEQ IDNo.18所示序列具有同等功能的核苷酸序列。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种优选的抗HLA-G分子的单克隆抗 体(YHWG-1)，所述单克隆抗体(YHWG-1)由保藏编号为CCTCC NO:202120的杂 交瘤产生，其保藏分类命名为杂交瘤细胞株YWHG-1，保藏机构为：中国典型培养 物保藏中心，保藏时间为2021年8月11日，中国典型培养物保藏中心的地址是中 国湖北省武汉市武汉大学，邮编430072。
本发明还提供了所述抗HLA-G分子抗体(YHWG-1)用于HLA-G分子免疫组化、 免疫印迹及流式细胞术等检测的用途，具有特异性高，亲和力强等特点。
为更清楚了解本申请的发明构思和技术方案，下文将通过具体实施例和附图 进一步解释本申请，其中关于实施方式中的技术方案仅是优选的实施方式，不应 被解释为限制本申请的范围。对于本领域技术人员来说，在不脱离本申请的技术 原理的前提下，还可以做出若干改进和调整，这些改进和调整也应视为落入本申 请的保护范围之中。
除非另有定义，本文使用的所有科技术语应视为具有本领域普通技术人员所 理解的相同含义。氨基酸残基的缩写是本领域中所用的指代20个常用氨基酸的标 准3字母和/或1字母代码。
本发明中提及的轻链高变区或重链高变区，其中“高变区”又被称之为互补 决定区(complementarity determining region，CDR)。
本发明中提及的“序列”可以指包含某些生物学功能等同的氨基酸序列或“保 守性替代”，“其它序列”可以包含功能非等同的氨基酸或“非保守性替代”， 其经基因工程改造以改进CDR或含CDR抗体的特性。在不实质性地影响抗体活性的 前提下，本领域技术人员可以对本申请中的序列进行操作，即替换、添加和/或 缺失一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个或多个)氨基酸，以获 得所述抗体或其功能性片段序列的变体。它们应被视为包括在本申请保护的范围 内。例如，在可变区将具有类似性质的氨基酸进行替换。本发明中提及的变体的 序列可以与其来源序列有至少有95％、96％、97％、98％或99％的一致性。序列 一致性可以使用序列分析软件测量。例如使用缺省参数的计算机程序BLAST，尤 其是BLASTP或TBLASTN。本文所述的多种氨基酸序列详见序列表。
附图说明
图1是7种不同HLA-G异构体分子结构模式图及免疫抗原肽段位置。
图2是所述抗体(YHWG-1)重链和轻链亚类鉴定。
图3是所述抗体(YHWG-1)SDS-PAGE检测抗体纯度检测。
图4是所述抗体(YHWG-1)ELISA法抗体亲和常数测定
图5是所述抗体(YHWG-1)免疫印迹检测HLA-G1～HLA-G7分子检测
图6是所述抗体(YHWG-1)流式细胞术检测胞内HLA-G1～HLA-G7分子检测
图7是所述抗体(YHWG-1)免疫印迹检测胃癌肿瘤组织HLA-G分子表达
图8是所述抗体(YHWG-1)应用于免疫组化检测胃癌组织中HLA-G分子表达。
具体实施方式
1.抗HLA-G单克隆抗体(YHWG-1)制备
①抗原肽合成
合成位于HLA-G分子重链α1结构域第72～91氨基酸序的抗原肽，SEQ No.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS。
②小鼠免疫
初次免疫4只SPF级BALB/c雌性小鼠，60ug/只。第一次加强免疫小鼠，30ug/ 只。第二次加强免疫小鼠，30ug/只。第三次加强免疫小鼠，30ug/只。眼眶取血， 测血清效价。用“SEQ No.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”包板，ELISA测定免疫小 鼠效价。用“SEQNo.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”，2ug/ml，4℃包被过夜；2％ 牛奶，37℃封闭2h；血清从200倍开始2倍梯度稀释，空白对照(blank)为PBS， 阴性对照(negative)为阴性血清200倍稀释。融合前，用“SEQ No.19 QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”免疫原50ug，冲击免疫小鼠。融合实验，取小鼠脾细胞 与SP2/0细胞，采用PEG法进行融合，融合完细胞用半固体培养基(含HAT)进行筛选培养。
③单克隆细胞筛选
挑10板×93个细胞单克隆，培养于96孔细胞培养板(事先用胸腺细胞铺板，100ul/孔)。用“SEQ No.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”包板，用包被液稀释“SEQNo.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”，终浓度为2ug/ml，100ul/孔，4℃，过夜；后 用洗液洗涤3次。2％牛奶封闭液封闭，200ul/孔，37℃孵箱，2h；后用洗液洗涤3 次。加入一抗(细胞培养上清)、阴性对照(SP2/0培养上清)、空白对照(PBS)、 阳性对照(阳性血清PBS 1000倍稀释)，均为100ul/孔，37℃孵箱，1h；后用洗 液洗涤3次。加入PBS稀释20000倍的二抗，100ul/孔，37℃孵箱，1h；取出后用 洗液洗涤3次。显色，显色液100ul/孔，显色时间为5min左右。每孔加入50ul终 止液终止。双波长(450，630)测吸光值。对挑选的克隆采用ELISA方法，做第 一次筛选，得到阳性杂交瘤细胞株。将阳性的细胞株，用“SEQ No.19 QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS”再次包板，采用ELISA方法，做第二次筛选，得到阳性 杂交瘤细胞株。经多次筛选后得到一株抗SEQ No.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS片段 的单克隆抗体，命名为YHWG-1(保藏编号为CCTCC NO:202120)。
④抗HLA-G单克隆抗体(YHWG-1)亚类鉴定
将筛选出来的10株阳性细胞株进行亚类鉴定，用100mM PBS(pH7.4)稀释包 被抗体至0.5ug/ml,每孔加0.1ml,4℃，过夜。PBS-T洗2次,每孔加入200ul封闭 液，37℃孵育2h。PBS-T洗3次；每孔加入100ul杂交瘤上清，37℃孵育1h。PBS-T 洗3次；用封闭液1：10000(κ,λ)或1：20000(其它的)稀释的HRP标记的抗体0.1ml 每孔，分别加入适当的孔中，37℃孵育1h。PBS-T洗3次；每孔加50ul底物溶液， 10-20min内于双波长(450，630)测吸光值。抗体亚型再次用Thermo公司的小 鼠抗体亚型快速鉴定法(Pierce Rapid Isotyping Kits–Mouse， Catalog”#26178)确定该细胞株产生的单抗亚型为重链为IgG1型，轻链为kappa(κ)型(图2)。
⑤抗体纯化
样本预处理：用相应的偶联缓冲液以1:3稀释，12000rpm 4℃离心10min，0.22 μm滤膜过滤，除去脂肪、细胞残渣及小颗粒物质。平衡：用10倍柱体积的相应 偶联缓冲液平衡柱子，保持流速为1ml/min。上样：把样品注入柱子上端接口， 收集流出液，保持流速为1ml/min。洗杂：用5倍柱体积的偶联缓冲液过柱，保 持流速为1ml/min。洗脱：用5倍柱体积洗脱缓冲液洗脱抗体，收集于上述EP管 中，保持流速为1ml/min。立即用1M pH9.0的Tris-Hcl缓冲液调整p H值至7.0。 平衡：用10柱体积的偶联缓冲液平衡柱子回pH7.0，保持流速为1ml/min。透析： 使用0.01M PBS缓冲液将抗体透析过夜，换液3次。
⑥SDS-PAGE检测抗体纯度
配置SDS-PAGE胶，分离胶的浓度为12％。样品制备：样品加上样缓冲液后沸 水煮浴10min。上样：每孔10ul。跑胶：浓缩胶80V，30min；分离胶120V，60min。 溴酚蓝前沿到达玻璃板底部时停止电泳，取出凝胶。染色与脱色：将凝胶浸入考 马斯亮蓝染色液中，置摇床上缓慢震荡30min以上(染色时间需根据凝胶厚度适 当调整)。取出凝胶在水中漂洗数次，再加入考马斯亮蓝脱色液、震荡。凝胶脱 色至大致看清条带1h，完全脱色则需更换脱色液2～3次，震荡达24h以上。凝 胶脱色后可通过ECL凝胶成像系统扫描记录。纯化后得到的抗体YHWG-1纯度>90％ (图3)。
⑦ELISA检测抗体的亲和常数测定
用包被液稀释抗原，SEQ No.19QTDRMNLQTLRGYYNQSEAS，终浓度为2ug/ml， 100ul/孔，4℃，过夜；后用洗液洗涤2次。封闭液封闭，200ul/孔，37℃孵箱， 2h；后用洗液洗涤1次。纯化抗体从200倍开始2倍梯度稀释(PBS)，空白对照 (blank)为PBS，均为100ul/孔，37℃孵箱，1h；后用洗液洗涤3次。加入PBS 稀释20000倍的二抗，100ul/孔，37℃孵箱，1h；取出后用洗液洗涤3次。显色， 显色液100ul/孔，显色时间为5-15min。每孔加入50ul终止液终止。双波长(450， 630)测吸光值，作图分析。根据Logistic拟合方程，亲和常数≈150000×A/抗体浓度(A为1/2OD值所对应的抗体稀释倍数；稀释倍数＝25600；YHWG-1抗体浓 度＝1.9mg/mL)，抗体YHWG-1的亲和常数为2.02×109L/mol(图4)。
⑧免疫印迹检测抗体的HLA-G异构体识别特异性。
将HLA-G异构体标准蛋白HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3，HLA-G4，HLA-G5，HLA-G6、 HLA-G7及α1结构域缺乏的HLA-G分子标准蛋白电转膜后，用5％去脂奶粉室温封闭4h，0.2％TBS(Teween-20 PBS)洗涤。加入所述抗体(YHWG-1，1.0ug/ml)，检 测其识别特异性，4℃孵育过夜，洗涤；加入HRP标记兔抗鼠IgG抗体,室温孵育 30min，洗涤后，用DakoREALTMEnVisionTM检测系统(DAKO)孵育1-3min。结 果显示：结果说明所述抗体(YHWG-1)能特异性识别标准蛋白，与其他HLA-G异构 体分子不存在交叉反应,具有很好设别含有α1结构域HAL-G异构体分子 (HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3，HLA-G4，HLA-G5，HLA-G6，HLA-G7)特异性(图5)。
二、应用实施例
实施例2.1.所述抗体(YHWG-1)流式检测胞内HLA-G1～HLA-G7分子检测
分别取对数生长期表达K562(空白对照)，K562-HLA-G1，K562-HLA-G2， K562-HLA-G3，K562-HLA-G4，K562-HLA-G5，K562-HLA-G6及K562-HLA-G7细胞培 养物。通过细胞内流式细胞术检测。
细胞内分子表达流式检测：流式管收集K562，K562-HLA-G1，K562-HLA-G2， K562-HLA-G3，K562-HLA-G4，K562-HLA-G5，K562-HLA-G6及K562-HLA-G7细胞培 养物，2％BSA/PBS离心洗涤2次(250g)，加入250ul细胞破膜剂(BD Cytofix/CytopermTM)，充分混匀，4℃冰箱放置20分钟。加入1ml BD Perm/WashTM 离心洗涤两遍(250g)。洗涤后，100ul BD Perm/WashTM重悬K562，K562-HLA-G1， K562-HLA-G2，K562-HLA-G3，K562-HLA-G4，K562-HLA-G5，K562-HLA-G6及 K562-HLA-G7细胞，加入含有加入1ul(1.0mg/ml)的FITC标记的纯化抗体(YHWG-1),4℃孵育30分钟，用1ml 1×BD Perm/WashTM离心洗涤3遍(250g)； 将细胞用1×BD Perm/WashTM重悬成300ul细胞悬液，流式细胞检测。结果显示： 所述抗体(YHWG-1)能特异性识别胞内表达的HLA-G1，HLA-G2，HLA-G3，HLA-G4， HLA-G5，HLA-G6，HLA-G7分子(图6)。
实施例2.2.所述抗体(YHWG-1)免疫印迹检测胃癌肿瘤组织HLA-G分子表达
62例冷冻胃癌肿瘤组织单细胞悬液制备：首先采用机械分离法，然后采用酶 消化法。取出样品，将样品平衡至室温，用HBSS缓冲液清洗三次，然后切成5～6mm 组织碎片。组织碎片用HBSS缓冲液清洗三次后，用IV型胶原酶(1mg/ml)和透 明质酸酶(10ng/ml)37℃，2％胎牛血清(FBS)HBSS缓冲液中消化4小时。消化 后，使用70μm细胞滤器过滤细胞，获得细胞悬浮液。细胞悬浮液经离心后，用组 织细胞裂解液。4℃裂解2小时后，12000转离心30分钟，收集裂解上清液备用。
62例胃癌肿瘤组织裂解上清液经变性PAGE电泳，半干电转膜后，用2％白蛋白 /PBS室温封闭4h，0.2％TBS(Teween-20 PBS)洗涤。加入所述抗体(YHWG-1)， 检测HLA-G分子的表达。4℃孵育过夜，洗涤；加入HRP标记兔抗鼠IgG抗体,室 温孵育30min，洗涤后，用DakoREALTMEnVisionTM检测系统(DAKO)孵育1-3min。 结果显示：所述抗体(YHWG-1)能特异性检出结直肠癌肿瘤组织中HLA-G分子的表 达(图7)。
实施例2.3.所述抗体(YHWG-1)应用于免疫组化检测胃癌组织中HLA-G分子 表达。
所取胃癌组织于10％-12％中性福尔马林固定，石蜡包埋。组织切片经烤片， 脱蜡，水化及抗原修复等常规制片流程。组织上滴加适量1％BSA，其覆盖组织及 组织边缘2mm，室温孵育10min进行封闭。滴加所述抗体(YHWG-1)(1mg/mL，1:500 稀释)，4℃冰箱湿盒过夜(16-20h)。TBS缓冲液冲洗，滴加二抗(TBS稀释抗体 羊抗鼠比例1：300)，37℃恒温箱孵育30min。TBS缓冲液冲洗，滴加显色剂DAB 工作液，待组织显色完全后，将玻片置于流水中冲洗5min，蒸馏水浸泡5min。HE 复染、脱水、透明、封片后，光学显微镜观察组织切片各视野情况。棕褐色着色 的细胞为胃癌组织细胞HLA-G分子阳性表达，根据细胞棕褐色着色深浅，判别 HLA-G分子的表达强度。其中图8为HLA-G分子在(A),(B),(C)及(D)胃癌组织样 本中高表达(图8)。
序列表
<110> 台州恩泽医疗中心（集团）
<120> 一种抗HLA-G分子的单克隆抗体及用途
<160> 19
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 112
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 1
Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Phe Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Ile Tyr Leu Glu Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 2
<211> 11
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 2
Gln Ser Phe Val His Ser Asn Gly Asn Ile Tyr
1 5 10
<210> 3
<211> 3
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 3
Lys Val Ser
1
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 4
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Pro Thr
1 5
<210> 5
<211> 114
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 5
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Thr Val Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val
1 5 10 15
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp Ile
20 25 30
Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asn
35 40 45
Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Asn Phe Asn Gln Lys Phe Glu Asp
50 55 60
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
65 70 75 80
Phe Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg
85 90 95
Phe Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 6
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 7
Ile Tyr Pro Ser Asp Ser Tyr Thr
1 5
<210> 8
<211> 9
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 8
Thr Arg Phe Gly Tyr Pro Phe Asp Tyr
1 5
<210> 9
<211> 26
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 9
Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Leu Thr Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Thr Ser
20 25
<210> 10
<211> 17
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 10
Leu Glu Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 11
<211> 36
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 11
Ser Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Cys
35
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 12
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 13
<211> 23
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 13
Gln Leu Gln Glu Ser Gly Thr Val Leu Val Arg Pro Gly Ala Ser Val
1 5 10 15
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20
<210> 14
<211> 17
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 14
Ile Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Asn
<210> 15
<211> 38
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 15
Asn Phe Asn Gln Lys Phe Glu Asp Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Phe Ser Ser Pro Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 16
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 17
<211> 334
<212> DNA
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 17
gatatcgtga taacccaaga tgaactctcc ctgactgtca gtcttggaga tcaggcctcc 60
atctcttgca gaactagtca gagttttgta catagtaatg gaaacatcta tttagaatgg 120
ttcctgcgaa accaggccag tctccaaaac tcctgatcta caaagtttcc agccgatttt 180
ctggggtccc agacaggttc agtggcagtg gatcagggac agatttcaca ctcaagatca 240
gcagagtgga ggctaggatc tgggaattta ttactgcttt caaggttcac atgttcctcc 300
gacgttcggt ggaggcacca agctggaaat caaa 334
<210> 18
<211> 340
<212> DNA
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 18
cagctgcagg agtctgggac tgttctggtg aggcctgggg cttcagtgaa gctgtcctgc 60
aaggcttctg gctacatttt caccagctac tggataaact gggtgaagca gaggcctgga 120
caaggcctga gtggatcgga aatatttatc cttctgatag ttatactaac ttcaatcaaa 180
agttcgagga caaggccaca ttgactgtag acacatcctc cagcacagcc tacatgcagt 240
tcagcagccc gacactgagg actctgcggt ctattattgt acaagatttg gttacccctt 300
tgactactgg ggccaaggca caactctcac agtctcctca 340
<210> 19
<211> 20
<212> PRT
<213> 杂交瘤(YWHG-1Hybridoma)
<400> 19
Gln Thr Asp Arg Met Asn Leu Gln Thr Leu Arg Gly Tyr Tyr Asn Gln
1 5 10 15
Ser Glu Ala Ser
20

Claims (5)

1.一种抗HLA-G分子的单克隆抗体(YHWG-1)，所述单克隆抗体(YHWG-1)由保藏编号为CCTCC NO:202120的杂交瘤产生。
2.一种抗HLA-G分子单克隆抗体(YHWG-1)，其特征在于，所述单克隆抗体(YHWG-1)至少包括轻链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种，或/和重链高变区CDR1、CDR2和CDR3中的一种或多种；
所述单克隆抗体(YHWG-1)抗体轻链氨基酸序列如SEQ ID No.1所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.1所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体轻链高变区CDR1氨基酸序列为SEQ ID No.2所示的序列QSFVHSNGNIY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.2所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链高变区CDR2的氨基酸序列为SEQ ID No.3所示的序列KVS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.3所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述轻链高变区CDR3氨基酸序列为SEQ ID No.4所示序列FQGSHVPPT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.4所示的序列具有同等功能的氨基酸序列；
所述单克隆抗体(YHWG-1)抗体重链核苷酸序列如SEQ ID No.5所示或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.5所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述抗体重链高变区CDR1氨基酸序列为SEQ ID No.6所示的序列GYIFTSYW或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.6所示的序列具有同等功能的氨基酸序列，所述重链高变区CDR2氨基酸序列为SEQ ID No.7所示的序列IYPSDSYT或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.7所示序列具有同等功能的氨基酸序列，和所述重链高变区CDR3的氨基酸序列为SEQ ID No.8所示的序列TRFGYPFDY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.8所示的序列具有同等功能的氨基酸序列。
3.根据权利要求2所述的一种抗HLA-G分子的单克隆抗体(YHWG-1)，其特征在于，所述单克隆抗体(YHWG-1)还包括轻链框架区(Framework region，FR)和重链框架区；其中，所述轻链框架区包括轻链FR1、FR2、FR3和FR4中的一种或多种，所述轻链FR1的氨基酸序列为SEQID No.9所示的序列DIVITQDELSLTVSLGDQASISCRTS或该序列经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.9所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.10所示的序列LEWFLQKPGQSPKLLIY或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.10所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.11所示的序列SRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGIYYC或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.11所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述轻链FR4的氨基酸序列为SEQ ID No.12所示的序列FGGGTKLEIK或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.12所示序列具有同等功能的氨基酸序列；
所述重链框架区包括重链FR1、FR2、FR3和FR4中的一种或多种，其中：所述重链FR1的氨基酸序列为SEQ ID No.13所示的序列QLQESGTVLVRPGASVKLSCKAS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.13所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链FR2的氨基酸序列为SEQ ID No.14所示的序列INWVKQRPGQGLEWIGN或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的具有与SEQ ID No.14所示序列同等功能的氨基酸序列；所述重链FR3的氨基酸序列为SEQ ID No.15的序列NFNQKFEDKATLTVDTSSSTAYMQFSSPTSEDSAVYYC或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.15所示序列具有同等功能的氨基酸序列；所述重链FR4的氨基酸序列为SEQ ID No.16的序列WGQGTTLTVSS或经替换、缺失或添加一个或多个氨基酸形成的与SEQ ID No.16所示序列具有同等功能的氨基酸序列。
4.根据权利要求2所述的一种抗HLA-G分子的单克隆抗体(YHWG-1)，其特征在于，所述单克隆抗体(YHWG-1)中编码轻链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.17所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.17所示序列具有同等功能的核苷酸序列，所述单克隆抗体(YHWG-1)中编码重链可变区的核苷酸序列为SEQ ID No.18所示的序列或该序列经替换、缺失或添加一个或多个核苷酸形成的与SEQ ID No.18所示序列具有同等功能的核苷酸序列。
5.权利要求1-4中任一项所述的抗HLA-G分子的单克隆抗体(YHWG-1)用于免疫组化、免疫印迹及胞内流式细胞术的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1312182C (zh) * 2004-10-26 2007-04-25 四川新创生物科技有限公司 抗hla－g的单克隆抗体及分泌它的杂交瘤细胞株、癌症诊断试剂盒及其应用
EP2730588A1 (en) * 2012-11-12 2014-05-14 Intelectys Antibodies and fragments thereof raised against the alpha-3 domain of HLA-G protein, methods and means for their preparation, and uses thereof
CN109563169B (zh) * 2016-06-03 2022-07-01 英韦克泰斯公司 抗hla-g特异性抗体
TW201829463A (zh) * 2016-11-18 2018-08-16 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 抗hla-g抗體及其用途
AU2019346598A1 (en) * 2018-09-27 2021-04-29 Tizona Therapeutics Anti- HLA-G antibodies, compositions comprising anti- HLA-G antibodies and methods of using anti- HLA-G antibodies
CN113045656B (zh) * 2020-07-27 2022-03-08 台州恩泽医疗中心(集团) 抗hla-g异构体分子hla-g5及hla-g6的单克隆抗体及其用途
AR123083A1 (es) * 2020-07-29 2022-10-26 Janssen Biotech Inc Proteínas que comprenden dominios de unión al antígeno hla-g y sus usos
CN112794908A (zh) * 2020-12-31 2021-05-14 杭州冰湖生物科技有限公司 一种抗hla-g抗体的制备及分析方法

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