CN115806896B

CN115806896B - 一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用

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Publication number: CN115806896B
Application number: CN202210891086.6A
Authority: CN
Inventors: 江国托; 单春乔; 刘秋晨; 刘艳; 王刚; 王岩; 李娟�
Original assignee: Dalian Sanyi Animal Drug Co ltd; Jiangsu Sanyi Bioengineering Co ltd
Current assignee: Dalian Sanyi Animal Drug Co ltd; Jiangsu Sanyi Bioengineering Co ltd
Priority date: 2022-07-27
Filing date: 2022-07-27
Publication date: 2023-09-01
Anticipated expiration: 2042-07-27
Also published as: CN115806896A

Abstract

本发明提供了一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用，所述枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Sam4#菌株，于2022年1月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022021，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。所述枯草芽孢杆菌产纤维素酶和木聚糖酶量高，因此对于秸秆、麦麸等动物不易消化的饲料原料具有强大的降解能力，将其用于动物饲料添加剂，可促进动物对饲料的吸收利用，从而促进动物生长，提高饲料能值，增加饲养收益。

Description

一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用

技术领域

本发明属于微生物技术领域，涉及一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。

背景技术

目前，饲料添加剂在养殖行业中的使用越来越广泛，在促进动物生长、增强动物免疫力、防治动物疾病以及提高动物繁殖性能等方面发挥着重要的作用。饲料添加剂的使用，不仅给畜牧养殖业的发展提供了一定的动力，也为人类解决了很多养殖中的问题，也在一定程度上缓解了养殖业对于抗生素的依赖性。但是随着养殖行业的发展，食物的安全性越来越被人们重视。因此养殖使用的饲料引起了人们的关注，尤其是关于饲料中添加剂的使用要求越来越严格。

在这种背景下，以益生菌为主体的饲料添加剂由于其具有安全性高等优良特性引发了饲料添加剂领域的高度关注和研究。益生菌能够产生多种酶，改善动物消化道环境，增强消化道消化和吸收的能力，提高饲料报酬，增强机体免疫力，进而能够防治疾病，提升生产性能，促进动物生长，最终能够减少养殖成本。

畜牧养殖行业使用的饲料多以粮食谷物或植物饲料为主体，因此饲料中含有大量纤维素和半纤维素。除反刍动物对这些纤维素具有一定的分解能力外，大部分畜禽都不具有此能力。植物纤维素的高聚合度、木质素和半纤维素所形成的保护层及其超分子结构中结晶区存有大量氢键，这是它难以被分解利用的原因。纤维素的存在导致了饲料在排出体外前不能被动物充分利用，这降低了动物对于饲料的利用率，造成了饲料营养价值的浪费，大大增加了养殖成本。纤维素酶可以将消化道内的纤维素转化成能被动物吸收的营养物质，纤维素酶作为新型添加剂添加到日粮中，能够提高饲料的利用率，然而当前纤维素酶的高昂费用导致其难以在养殖行业中推广应用。为满足纤维素酶的需求，降低纤维素酶的获取成本，国内外学者将目光转向产纤维素酶的微生物。目前的研究多集中于霉菌、真菌的，然而霉菌是好气性(需氧性)微生物，而饲料发酵都是在少氧或缺氧的环境下进行的，因此对于产纤维素酶活性高的厌氧、及兼性厌氧菌进行研究和开发更具有应用的现实意义。细菌繁殖和产酶速度快、发酵周期短，而出芽孢的细菌在耐酸、耐碱、耐高温等方面都具有明显优势，便于实际操作和工业生产。

木聚糖是植物细胞壁的主要成分之一，属于非淀粉多糖，为一种广泛存在于植物中的半纤维素，它是由β-1,4糖苷键连接而成的木糖聚合物。木聚糖酶是一组可降解木聚糖的功能复杂的水解酶系统，它们既有专一性，作用于不同的糖苷键，又可共同作用，把结构复杂的木聚糖水解为木寡糖和单糖。小麦作为重要的饲料原料之一，其优良的营养价值和较为低廉的价格使其在养殖行业占据着重要的地位，是能够在一定程度上代替豆粕-玉米类型饲料原料的。但是包括小麦在内的多种谷物作为饲料都含有木聚糖等抗营养因子。木聚糖有增加食糜粘度、降低动物采食量、抑制生长以及妨碍养分消化吸收等抗营养作用。在以小麦为主的饲粮中添加木聚糖酶，可以充分利用小麦类饲料原料资源，减少浪费，降低饲料成本，起到和其他日粮相似甚至更好的效果。利用微生物产生的木聚糖酶来降解木聚糖,是解决小麦抗营养因子的主要方法。而出芽孢的细菌在耐酸、耐碱、耐高温等方面都具有明显优势，便于实际操作和工业生产。

然而，现有技术中能够同时产生纤维素酶和木聚糖酶，并且具有优良生物活性的菌株较为少见，且在生产过程中，发酵的时间较长(大部分产木聚糖酶的菌株在筛选后产酶活力达到最高峰时间都在72h或更长时间)，增加了生产成本。而益生菌制剂在生产、保藏、运输和在饲料配制过程中的稳定性，也影响其使用的效果。

基于以上背景，筛选出一种具有良好的生物活性，能够同时产生纤维素酶和木聚糖酶,且发酵活力高，方便生产的菌株，将其作为饲料添加剂，以实现将饲料中的纤维素转化成能被动物吸收的营养物质，水解木聚糖，充分利用小麦类饲料原料资源，减少浪费，降低饲料成本，提高饲料利用率，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Sam4#菌株，于2022年1月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022021，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，所述培养方法包括：将枯草芽孢杆菌活化后接种于发酵培养基中进行培养，得培养液，离心，即得枯草芽孢杆菌培养物。

优选地，所述发酵培养基中含有大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母粉或葡萄糖中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如胰蛋白胨与酵母粉的组合、酵母粉与葡萄糖的组合、大豆蛋白胨与葡萄糖的组合等，其他任意的组合方式均可。

优选地，所述发酵培养基中的组分以质量百分含量计包括大豆蛋白胨1％-3％、胰蛋白胨2％-4％、酵母粉0.05％-0.15％和葡萄糖1％-3％，余量为水。

上述1％-3％中的具体数值例如1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3％等。

上述2％-4％中的具体数值例如2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3％、3.2％、3.4％、3.6％、3.8％、4％等。

上述0.05％-0.15％中的具体数值例如0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％、0.15％等。

优选地，所述培养的温度为35-40℃，例如35℃、35.5℃、36℃、36.5℃、37℃、37.5℃、38℃、38.5℃、39℃、39.5℃、40℃等。

优选地，所述培养的时间为24-72h，例如24h、26h、28h、30h、32h、34h、36h、38h、40h、42h、48h、52h、60h、66h、72h等。

优选地，所述培养的过程中，维持培养液的pH在6-7范围内，例如6、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7等。

第三方面，本发明提供一种复合菌剂，所述复合菌剂包括植物乳杆菌CICC6009、布拉迪酵母CGMCC NO.10381和如第一方面所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌。

优选地，所述植物乳杆菌CICC 6009、布拉迪酵母CGMCC NO.10381与枯草芽孢杆菌的活菌数比为(4-6):(3-5):(1-2)。

上述(4-6)中的具体数值例如4、4.2、4.4、4.6、4.8、5、5.2、5.4、5.6、5.8、6等。

上述(3-5)中的具体数值例如3、3.2、3.4、3.6、3.8、4、4.2、4.4、4.6、4.8、5等。

上述(1-2)中的具体数值例如1、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2等。

第四方面，本发明提供如第一方面所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌或如第三方面所述的复合菌剂在制备动物饲料添加剂中的应用。

优选地，所述动物包括猪、禽或反刍动物。

本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明所提供的枯草芽孢杆菌Sam4#能够同时产纤维素酶和木聚糖酶，且产酶量高，因此对于秸秆、麦麸等动物不易消化的饲料原料具有强大的降解能力，将其用于动物饲料添加剂，可促进动物对饲料的吸收利用，从而促进动物生长，可有效提升泌乳牛产奶量及奶质量(提高乳脂率及乳蛋白率)，提高饲料能值，改善饲料纤维素消化效率，增加饲养收益。

此外，将布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381、植物乳杆菌CICC 6009与枯草芽孢杆菌Sam#4复配，三者相互配合，在促进动物生长、提高饲料利用率、增加奶牛产奶量、改善奶质量(提高乳脂率及乳蛋白率)方面具有协同增效的作用，进而实现了饲养经济效益的进一步提升。

附图说明

图1是实施例4中菌剂1组奶牛粪便测试结果图。

图2是实施例4中对照组奶牛粪便测试结果图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

以下实施例中，若无特殊说明，所用的试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商；若无特殊说明，所用的实验方法和技术手段均为本领域常规的方法和手段。

实施例1-菌株的分离筛选

取新鲜牛瘤胃内容物溶于灭菌生理盐水中，振荡摇匀，置于80℃水浴加热30min得菌液。将菌液置于菌种纯化培养基(以质量百分含量计包括：胰蛋白胨1％、酵母粉0.3％、牛肉膏1％、葡萄糖0.5％、可溶性淀粉0.1％、L-半胱氨酸盐酸盐0.05％、NaCl 0.5％、无水乙酸钠0.3％、NaHCO₃ 0.1％、K₂HPO₄ 0.4％、MgSO₄·7H₂O 0.05％、(NH₄)₂SO₄·0.1％、MnSO₄·H₂O 0.02％、CaCO₃ 0.1％、琼脂粉1.7％，余量为水)平板上划线培养，置于厌氧罐中，37℃培养48h，挑取单个菌落进行革兰氏染色镜检，选取革兰氏阳性的芽孢杆菌继续纯化培养。将各候选菌株进行摇瓶发酵，通过DNS(3,5-二硝基水杨酸)法对其产纤维素酶和木聚糖酶活力进行测定，筛选得到一种木聚糖酶活力和纤维素酶活力之和最高的菌株，命名为枯草芽孢杆菌Sam#4，其16S rDNA序列见SEQ ID No:1：

SEQ ID No:1：

AATTCTGTCACTTCGGCGGCTGGCTCCATAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCCGGCGTTGCTCTCGTCGGACTTTCTGTCCTTTCGGGAGGATTCCTAACTGCTGTCCTCCCGTAAAGAGACTAGTGGCGCGGGG。

实施例2-测试菌株对秸秆和麦麸的分解能力

秸秆和麦麸中含有难降解的木聚糖和纤维素成分，发酵前在发酵培养基中分别加入秸秆8.23g和麦麸7.11g。

发酵培养基配方：以质量百分含量计包括，大豆蛋白胨2％、胰蛋白胨3％、酵母粉0.1％和葡萄糖2％，余量为水。

用10L全自动搅拌不锈钢发酵罐培养枯草芽孢杆菌Sam#4(接种量为5％)，温度37℃，转速150r/min，发酵过程中用NaOH调节发酵液的pH始终保持在6.5左右。发酵36h后，利用失重法测定秸秆和麦麸的降解量，并计算降解率。

结果：秸秆和麦麸的降解率分别为53.2％和65.5％。此结果证实了枯草芽孢杆菌Sam#4产木聚糖酶和纤维素酶的能力强，对秸秆和麦麸具有很好的分解效果，可用作动物饲料添加剂，以提高动物对饲料的利用率。

实施例3-菌粉制备

枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉的制备：

将枯草芽孢杆菌Sam#4接种于LB培养基中，37℃培养18h，得种子液。将种子液以5％接种量接入发酵培养基(以质量百分含量计，大豆蛋白胨2％、胰蛋白胨3％、酵母粉0.1％和葡萄糖2％，余量为水)，在10L全自动搅拌不锈钢发酵罐中进行发酵培养，温度37℃，转速150r/min，发酵过程中用NaOH调节发酵液的pH始终保持在6.5。发酵18h后，离心(8000r/min)，得菌泥。

加入菌泥重量的50％的水，打成菌浆，加入由麦芽糊精与玉米淀粉按质量比1:2混合组成的辅料；将上述混合物过胶体磨，充分研磨过筛，然后进行喷雾干燥，获得枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉。

植物乳杆菌菌粉的制备：

将植物乳杆菌(CICC 6009或ACCC 20039)接种于MRS固体斜面培养基(蛋白陈10g、牛肉膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、吐温-80 1g、磷酸氢二钾2g、乙酸钠5g、柠檬酸二铵2g、硫酸镁0.2g、疏酸锰0.05g、碳酸钙6g、琼脂16g、蒸馏水配至1000mL，调节pH值7.0)，37℃，转速100r/min摇床培养12h，得种子液。将种子液接种于发酵罐中，发酵培养基：蛋白胨20g、玉米淀粉10g、酵母粉10g、葡萄糖10g、牛肉膏10g、磷酸氢二钾4g、硫酸镁0.5g、硫酸锰0.05g、碳酸钙10g、蒸馏水配至1000mL，调节pH值7.0，37℃，转速100r/min，发酵18h，得发酵液，经蒸馏水洗涤后，5000rpm离心10min，得菌泥。从菌泥制备菌粉的方法参照枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉的制备，不再赘述。

酿酒酵母菌CICC 31622菌粉和布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉直接采购得到。

实施例4-不同菌剂对动物生长性能的影响

菌剂1：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉；

菌剂2：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉(活菌数比为5:4)；

菌剂3：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+植物乳杆菌CICC 6009菌粉(活菌数比为5:1)；

菌剂4：布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉+植物乳杆菌CICC 6009菌粉(活菌数比为4:1)；

菌剂5：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+酿酒酵母菌CICC 31622菌粉+植物乳杆菌ACCC20039菌粉(活菌数比为5:4:1)；

菌剂6：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉+植物乳杆菌CICC 6009菌粉(活菌数比为5:4:1)；

菌剂7：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉+植物乳杆菌CICC 6009菌粉(活菌数比为4:5:1)；

菌剂8：枯草芽孢杆菌Sam#4菌粉+布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉+植物乳杆菌CICC 6009菌粉(活菌数比为6:3:2)；

(1)促进动物生长，提高经济效益

肉牛试验：肉牛90头，随机分为9组，每组10头，分别为1个对照组和8个试验组(菌剂1组-菌剂8组)。试验期间饲喂精饲料和粗饲料，各试验组向饲料中添加对应的菌剂，对照组不添加菌剂，试验周期75天。各组肉牛增重情况及实际增收效益(与对照组相比)见表1。

表1

组别	肉牛平均增重(千克/头)	实际增收效益(元/头)
			对照组(无菌剂)	87.6	-
菌剂1组	96.6	41.9
			菌剂2组	99.7	56.3
菌剂3组	98.2	49.3
			菌剂4组	93.3	26.5
菌剂5组	103.7	74.8
			菌剂6组	108.4	96.7
菌剂7组	106.3	86.9
			菌剂8组	105.7	84.2

肉羊实验：肉羊90头，随机分为9组，每组10头，分别为1个对照组和8个试验组(菌剂1组-菌剂8组)。试验期间饲喂精饲料和粗饲料，饲料组成为：粗饲料为玉米黄贮，精饲料为北京驰翔5％预混料，其他为玉米65％、豆粕20％、麸皮10％、小苏打0.7％和食盐0.35％，试验阶段各组饲喂的饲料相同，区别是各试验组向饲料中添加对应的菌剂(各组饲料中添加的活菌数相同)，对照组不添加菌剂，试验周期50天。各组肉羊增重情况及实际增收效益(与对照组相比)见表2。

表2

结果显示：在肉牛和肉羊饲料中添加各组菌剂，均实现了促进动物生长及增加收益的效果，其中菌剂6-8的效果最好，说明枯草芽孢杆菌Sam#4、布拉迪酵母菌CGMCCNO.10381菌粉与植物乳杆菌CICC 6009三者相互配合，在促进动物生长，提高饲料利用率方面具有协同增效的作用，进而实现了饲养经济效益的提升。

(2)提高奶牛产奶量、奶指标，改善纤维素消化率

选择产奶量相近的荷斯坦泌乳牛，平均产奶量为24-28kg/头，随机分为9组，每组10头，分别为1个对照组和8个试验组(菌剂1组-菌剂8组)，试验组和对照组的选择满足胎次、体况、品种、预产期(选择泌乳中期的牛)、饲喂条件等基本相同或相近，唯一区别是试验组的精料中添加对应的菌剂(活菌数相同)，对照组不添加。试验全期为TMR饲喂方法，日粮的组成原料主要为精料、全株青贮玉米；预饲期5d，试验期30d，分别于开始试验时、试验15d后以及试验30d后检测产奶量及奶指标(乳脂率和乳蛋白率)，与初始指标相比30d后各指标变化结果见表3。实验结束后观察奶牛粪便情况，见图1和图2。

表3

结果显示，随着泌乳期的延长，各试验组和对照组的奶牛在15d时产奶量、乳脂率、乳蛋白率都有下落(热应激所致)，当试验进行到30d时，各试验组奶牛的产奶量、乳脂率和乳蛋白均略有增长，而对照组的此三项指标仍在下落，此结果可以充分说明在饲料中添加菌剂，能够有利于增奶量，涨指标。其中菌剂6-8的效果最好，说明枯草芽孢杆菌Sam#4、布拉迪酵母菌CGMCC NO.10381菌粉与植物乳杆菌CICC 6009三者相互配合，在提供奶牛产奶量及改善奶质量方面具有协同增效的作用，进而实现了饲养经济效益的提升。

对比图1(菌剂1组奶牛的粪便情况)和图2(对照组奶牛的粪便情况)可以明显看出：菌剂1组奶牛粪便样品大部分都处于下层筛，遗留在上层筛及中层筛的数量显著少于对照组，其他菌剂组奶牛的粪便情况与菌剂1组类似，不再展示图片，这说明试验组奶牛的纤维消化率明显好于对照组，即菌剂有较好的改善纤维素消化率的效果。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌及其培养方法与应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims

1.一种能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Sam4#菌株，于2022年1月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2022021，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。

2.一种如权利要求1所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述培养方法包括：将枯草芽孢杆菌活化后接种于发酵培养基中进行培养，得培养液，离心，即得枯草芽孢杆菌培养物。

3.如权利要求2所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基中含有大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母粉或葡萄糖中的任意一种或至少两种的组合。

4.如权利要求3所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基中的组分以质量百分含量计包括大豆蛋白胨1%-3%、胰蛋白胨2%-4%、酵母粉0.05%-0.15%和葡萄糖1%-3%，余量为水。

5.如权利要求2所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述培养的温度为35-40℃。

6.如权利要求2所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述培养的时间为24-72 h。

7.如权利要求2所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌的培养方法，其特征在于，所述培养的过程中，维持培养液的pH在6-7范围内。

8.一种复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括植物乳杆菌CICC 6009、布拉迪酵母CGMCC NO.10381和如权利要求1所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌。

9.如权利要求8所述的复合菌剂，其特征在于，所述植物乳杆菌CICC 6009、布拉迪酵母CGMCC NO.10381与枯草芽孢杆菌的活菌数比为(4-6):(3-5):(1-2)。

10.如权利要求1所述的能够产纤维素酶和木聚糖酶的枯草芽孢杆菌或如权利要求8或9所述的复合菌剂在制备肉牛、肉羊或奶牛饲料添加剂中的应用。