CN115803027A - 治疗细胞因子相关的不良事件的方法 - Google Patents

治疗细胞因子相关的不良事件的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115803027A
CN115803027A CN202180043896.XA CN202180043896A CN115803027A CN 115803027 A CN115803027 A CN 115803027A CN 202180043896 A CN202180043896 A CN 202180043896A CN 115803027 A CN115803027 A CN 115803027A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bcma
seq
region
antibody
therapeutic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180043896.XA
Other languages
English (en)
Inventor
D·V·杰亚拉朱
M·阿玛谭格罗
R·拉莫特-莫斯
W·皮尔萨尔
A·G·塔库尔塔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bristol Myers Squibb Co
Original Assignee
Bristol Myers Squibb Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bristol Myers Squibb Co filed Critical Bristol Myers Squibb Co
Publication of CN115803027A publication Critical patent/CN115803027A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4545—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pipamperone, anabasine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/517—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinazoline, perimidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本公开涉及用于治疗或预防细胞因子相关的不良事件或疾病(例如细胞因子释放综合征(CRS))的药剂。

Description

治疗细胞因子相关的不良事件的方法
技术领域
本发明涉及用于治疗或预防细胞因子相关的不良事件或疾病(例如细胞因子释放综合征(CRS))的药剂。
背景技术
细胞因子释放综合征(CRS)是潜在的严重且威胁生命的不良事件，其特征在于升高水平的促炎细胞因子，在严重的情况下导致全身性炎性反应。不受理论束缚，CRS可以由大量和/或快速分泌细胞因子产生，例如由于免疫效应细胞的活化和/或增殖。例如，当大量白细胞被活化并释放炎性细胞因子时发生CRS。
CRS代表T细胞衔接免疫疗法的最频繁的严重副作用之一，包括双特异性T细胞衔接抗体和CAR T细胞(Teachey等人(2013)Blood.121(26)：5154-5157；Hay等人(2017)Blood.130(21)：2295-2306)。也已经描述了在输注若干基于抗体的疗法后的CRS(Chatenoud等人(1990)Transplantation.49(4): 697-702；Freeman等人(2015)Blood.126(24): 2646-2649；Suntharalingam等人(2006)N. Engl. J. Med.355(10): 1018-1028；Winkler等人(1999)Blood.94(7): 2217-2224)。不良事件也可以由其它细胞疗法和免疫疗法以及感染触发。
尽管存在减轻细胞因子释放症状的治疗，例如托珠单抗(Tocilizumab)和皮质类固醇，但是了解和消除细胞因子释放的来源可能潜在地增加这些细胞疗法和免疫疗法的治疗指数。许多细胞因子在患有CRS的患者的血清中显示升高的水平，包括白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10 (IL-10)和IL1-β (Norelli等人(2018)Nat. Med.24(6): 739-748；Wang和Han (2018)Biomark. Res.6: 4)。IL-6已被认为是CRS毒性的主要介质(Tanaka等人(2016)Immunotherapy.8(8): 959-70)，进一步得到托珠单抗通过阻断IL-6信号传导治疗严重CRS患者的有效性的支持(Grupp等人(2013)N. Engl. J. Med. 368: 1509-1518)。或者，可以由阿那白滞素(Anakinra)(IL1-β)靶向IL1-β信号传导以减轻CRS。通常，该试剂将用于靶向单一细胞因子和阻止下游信号传导，并且IL-6或IL1-β的最初分泌不被目前的治疗阻止。此外，现有的CRS治疗不总是有效和/或可能具有不期望的副作用。因此，需要用于治疗或预防CRS的进一步的疗法。
发明内容
本发明涉及使用细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)治疗或预防受试者的细胞因子相关的不良事件或疾病(例如细胞因子释放综合征(CRS))的方法，优选其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺(pomalidomide)、伊贝度胺(iberdomide)、来那度胺(lenalidomide)、阿伐度胺(avadomide)或化合物1 (4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐)。
在一方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子相关的不良事件或疾病(例如细胞因子释放综合征(CRS))的方法的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子相关的不良事件或疾病(例如细胞因子释放综合征(CRS))的方法，所述方法包括给予所述受试者治疗有效剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，其中所述治疗有效剂量是足以减少或预防所述受试者的CRS的发展的剂量，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，所述细胞因子相关的不良事件或疾病是细胞因子释放综合征(CRS)。在优选的实施方案中，所述受试者已经接受或将接受已经引起或可能引起CRS的治疗剂。在特别优选的实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂是T细胞衔接剂。
在备选的实施方案中，所述细胞因子相关的不良事件或疾病是冠状病毒疾病19(COVID-19)。
在又进一步备选的实施方案中，所述细胞因子相关的不良事件或疾病是细胞因子介导的神经毒性。在优选的实施方案中，所述受试者已经接受或将接受已经引起或可能引起细胞因子介导的神经毒性的治疗剂。在特别优选的实施方案中，已经引起或可能引起细胞因子介导的神经毒性的所述治疗剂是T细胞衔接剂。
在另一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)以足以预防或减少所述受试者的CRS的发展的剂量给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在又另一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者BCMA治疗剂，和
b)给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在另一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐；和
b)在给予所述细胞因子抑制剂之后，给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起CRS。
在相关的方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐；和
b)在给予所述细胞因子抑制剂之后，给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起CRS。
在一些实施方案中，在所述BCMA治疗剂之前至少1天，优选在所述BCMA治疗剂之前至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天，或至少14天，作为第一剂量给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在另一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)在给予所述BCMA治疗剂之后，给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在相关的方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)在给予所述BCMA治疗剂之后，给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，在所述细胞因子抑制剂之前至少1天，优选在所述细胞因子抑制剂之前至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天、至少13天，或至少14天，作为第一剂量给予所述BCMA治疗剂。
在进一步的方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂(例如，特异性结合BCMA和促进一种或多种T细胞活化的抗原的多特异性抗体)，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)给予所述受试者化合物1，其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在本发明的任何方面的某些实施方案中，所述“受试者”或“患者”是人。
在特别优选的实施方案中，所述BCMA治疗剂是T细胞衔接剂。
在本发明的任何方面的实施方案中，所述T细胞衔接剂是特异性结合靶抗原(例如，癌抗原，例如BCMA)和促进一种或多种T细胞活化的抗原的多特异性抗体。在一些实施方案中，促进一种或多种T细胞活化的所述抗原选自CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226。在优选的实施方案中，促进一种或多种T细胞活化的所述抗原是CD3。
在本发明的任何方面的备选的实施方案中，所述T细胞衔接剂是针对靶抗原(例如，癌抗原，例如BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)，或表达针对靶抗原(例如，癌抗原，例如BCMA)的至少一种CAR的T细胞。
在本发明的任何方面的实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下的CDR1H、CDR2H、CDR3H、CDR1L、CDR2L和CDR3L区组合：
a) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:23的CDR1L区、SEQ ID NO:24的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
b) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:25的CDR1L区、SEQ ID NO:26的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
c) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
d) SEQ ID NO:29的CDR1H区、SEQ ID NO:30的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
e) SEQ ID NO:34的CDR1H区、SEQ ID NO:35的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
f) SEQ ID NO:36的CDR1H区、SEQ ID NO:37的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；或者
g) SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:18的CDR1L区、SEQ ID NO:19的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下的VH和VL：
a) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:12的VL区；
b) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:13的VL区；
c) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区；
d) SEQ ID NO:38的VH区和SEQ ID NO:12的VL区；
e) SEQ ID NO:39的VH区和SEQ ID NO:12的VL区；
f) SEQ ID NO:40的VH区和SEQ ID NO:12的VL区；或者
g) SEQ ID NO:9的VH区和SEQ ID NO:11的VL区。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区。
在本发明的任何方面的备选的实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含VH和VL，所述VH包含SEQID NO:64的CDR1H、SEQ ID NO:65的CDR2H和SEQ ID NO:66的CDR3H，所述VL包含选自以下的CDR1L、CDR2L和CDR3L序列组：
a) SEQ ID NO:67的CDR1L、SEQ ID NO:68的CDR2L和SEQ ID NO:69的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:77的VL；
b) SEQ ID NO:70的CDR1L、SEQ ID NO:71的CDR2L和SEQ ID NO:72的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:78的VL；或者
c) SEQ ID NO:73的CDR1L、SEQ ID NO:74的CDR2L和SEQ ID NO:75的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:79的VL。
在一些实施方案中，所述多特异性抗体包含抗CD3抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗CD3抗体或其抗原结合片段包含可变结构域VH和可变结构域VL，所述可变结构域VH包含SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR分别作为重链CDR1H、CDR2H和CDR3H，所述可变结构域VL包含SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR分别作为轻链CDR1L、CDR2L和CDR3L。在优选的实施方案中，所述抗CD3抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NO:7的VH区和SEQ ID NO:8的VL区。
在特别优选的实施方案中，所述多特异性抗体包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区；以及抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:7的VH区和SEQ ID NO:8的VL区。
在一些实施方案中，所述多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，所述双特异性抗体是二价的(例如，1+1形式)。在备选的实施方案中，所述双特异性抗体是三价的(例如，2+1形式)。在一些实施方案中，所述三价双特异性抗体具有以下形式：CD3 Fab-BCMA Fab-BCMA Fab；或BCMA Fab-CD3 Fab-BCMA Fab (即，当不存在Fc时)。或者，所述三价双特异性抗体可以具有以下形式：BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab；BCMA Fab-Fc-BCMAFab-CD3 Fab；或CD3 Fab-Fc-BCMA Fab-BCMA Fab (即，当存在Fc时)。在优选的实施方案中，所述三价双特异性抗体具有形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab。
在一些实施方案中，所述抗CD3 Fab包含轻链和重链，其中所述轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换(crossover)轻链，并且其中所述重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。
在一些实施方案中，所述抗BCMA Fab片段的CH1结构域包含氨基酸修饰K147E/D和K213E/D (根据EU编号来编号)并且相应的免疫球蛋白轻链包含具有氨基酸修饰E123K/R/H和Q124K/R/H (根据Kabat编号)的CL结构域。
在一些实施方案中，所述多特异性(例如，双特异性)抗体进一步包含Fc。在一些实施方案中，所述Fc是IgG1 Fc。在一些实施方案中，所述(例如，IgG1) Fc包含第一Fc链和第二Fc链，所述第一Fc链包含第一恒定结构域CH2和CH3，所述第二Fc链包含第二恒定结构域CH2和CH3，并且其中：
a)所述第一CH3结构域包含修饰T366S、L368A和Y407V或其保守取代(根据EU编号来编号)；和
b)所述第二CH3结构域包含修饰T366W或其保守取代(根据EU编号来编号)。
在一些实施方案中，所述(例如，IgG1) Fc包含：
a)修饰L234A、L235A和P329G (根据EU编号来编号)；和/或
b)修饰D356E和L358M (根据EU编号来编号)。
在进一步的实施方案中，根据本发明的双特异性抗体包含在以下SEQ ID NO中示出的多肽的重链和轻链组：
83A10-TCBcv：48，45，46，47 (x2)；
22-TCBcv：48，52，53，54 (x2)；或
42-TCBcv：48，55，56，57 (x2)。
在优选的实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是42-TCBcv，并且包含在SEQID NO:48、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和两个拷贝的SEQ ID NO:57中示出的多肽的重链和轻链组。
在本发明的任何方面的实施方案中，所述BCMA治疗剂是AMG-420 [Amgen]、BCMA三特异性的[Affirmed]、AFM26 [Affirmed]、Ab-957[Janssen]、BCMA/PD-L1[Immunepharmaceuticals]、AMG-701 [Amgen]、PF-06863135 [Pfizer]、REGN-5458 [Regeneron/Sanofi]或TNB-383B [TeneoBio]。
在本发明的任何方面的实施方案中，所述BCMA治疗剂是针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)，或表达针对BCMA的至少一种CAR的T细胞(“BCMA CAR T细胞”)。
在一些实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene-vicleucel (ide-cel)、bb21217、JCARH125 (orva-cel)、KITE-585 (Kite Pharmaceuticals)、P-BCMA-101(Poseida Therapeutics)、CART-BCMA (Novartis)、LCAR-B38M (Legend Biotech)、JNJ-528 (Janssen Biotech)、P-BCMA-101 (Poseida Therapeutics)、CT053 (CARsgenTherapeutics)、CTX120 (CRISPR Therapeutics)、ET140 (Juno Therapeutics)、UCART-BCMA (Cellectis)、P-BCMA-101 (Poseida)、JNJ-528/LCAR-B38M (Johnson&Johnson)。在某些实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是MCARH171、FCARH143、CTX120、CT053(FirstAffiliated Hospital of Wenzhou Medical University, CN)或BCMA-CART(Hrain Biotechnologym Shanghai CN)。在优选的实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene-vicleucel、bb21217或JCARH125.
在本发明的任何方面的实施方案中，已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂是抗体-药物缀合物(ADC)。
在本发明的任何方面的实施方案中，在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之前(例如，之前12或24小时内)、在与给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)的同一天或在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之后(例如，之后12或24小时内)给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之前作为预治疗给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在一些实施方案中，在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之前(例如，之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)作为一个或多个剂量给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在一些实施方案中，在第8天给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之前，在第1、2、3、4、5、6和7天给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在备选的实施方案中，在给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)之前给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)。在一些实施方案中，在给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)之前(例如，之前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)作为一个或多个剂量给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)。在一些实施方案中，在第8天给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)之前，在第1天和任选地第4天给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，在诊断CRS之后12小时内给予所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
本发明的各方面和实施方案在所附权利要求中阐述。本发明的这些和其它方面和实施方案也在本文中描述。
附图说明
现在将参考附图更详细地描述本发明，其中：
图1说明用于本发明的不同形式的双特异性二价抗体，其包含结合T细胞抗原(说明了CD3)和BCMA的以下形式的Fab片段：Fab BCMA-Fc-Fab CD3。CD3 Fab可以包括VH-VL交换以减少轻链错配和副产物。可以在CL-CH1中引入氨基酸取代“RK/EE”以减少生产中的轻链错配/副产物。CD3 Fab和BCMA Fab可以用柔性接头彼此连接。
图2说明用于本发明的不同形式的双特异性三价抗体，其包含结合T细胞抗原(说明了CD3)和BCMA的以下形式的Fab片段：Fab BCMA-Fc-Fab CD3-Fab BCMA (A,B)；FabBCMA-Fc-Fab BCMA-Fab CD3 (C,D)。CD3 Fab可以包括VH-VL交换以减少轻链错配和副产物。可以在CL-CH1中引入氨基酸取代“RK/EE”以减少生产中的轻链错配/副产物。CD3 Fab和BCMA Fab可以用柔性接头彼此连接。
图3说明用于本发明的其它形式的双特异性二价抗体，其包含结合T细胞抗原(说明了CD3)和BCMA的以下形式的Fab片段：Fc-Fab CD3-Fab BCMA (A,B)；Fc-Fab BCMA-FabCD3 (C,D)。CD3 Fab可以包括VH-VL交换以减少轻链错配和副产物。可以在CL-CH1中引入氨基酸取代“RK/EE”以减少生产中的轻链错配/副产物。CD3 Fab和BCMA Fab可以用柔性接头彼此连接。
图4显示通过用某些IMiD/CELMoD试剂预处理减少LPS诱导的自单核细胞的IL-6分泌。将来自健康志愿者的单核细胞以1×106个细胞/ml的浓度接种，并用指示浓度的IMiD/CELMoD试剂处理过夜(~17小时)。第二天早晨，将单核细胞与指示浓度的LPS孵育4小时，然后使用MSD测定评估上清液中的IL-6水平。
图5显示通过用1-100 nM化合物1预处理减少LPS诱导的自单核细胞的IL-6分泌。将来自健康志愿者的单核细胞以1×106个细胞/ml的浓度接种，并用指示浓度的化合物1处理过夜。第二天早晨，将单核细胞与指示浓度的LPS孵育4小时，然后用5ug/ml尼日利亚菌素刺激1小时，然后使用MSD测定评估上清液中的IL-6水平。
图6显示通过用某些IMiD/CELMoD试剂预处理减少LPS诱导的自巨噬细胞的IL-6分泌。将来自健康志愿者的单核细胞以3×105个细胞/ml的浓度用含有M-CSF (50ng/mL)的RPMI 1640培养基 (2天后更换50%培养基)接种4天，以获得幼稚巨噬细胞(M0)。在第4天结束时，用指示浓度的IMiD/CELMoD试剂处理巨噬细胞过夜(~17小时)。第二天早晨，用指示浓度的LPS刺激巨噬细胞8小时，然后使用MSD测定评估上清液中的IL-6水平。
图7显示通过用沙利度胺衍生物(在图7B和7C中分别说明来那度胺和泊马度胺)预处理抑制LPS诱导的促炎细胞因子的分泌。将来自健康志愿者的外周血单核细胞(PBMC)以2×106个细胞/ml的浓度接种，并用指示浓度的IMiD化合物或对照DMSO (0.25%)处理1小时，然后用1 ng/ml LPS刺激。18小时后，通过多重细胞因子分析评估上清液中的促炎细胞因子水平。
图8显示通过用IMiD/CELMoD试剂预处理同时抑制LPS诱导的自PBMC的IL-6、TNF-α和IL1-β分泌。从健康志愿者分离的新鲜的PBMC以1×106个细胞/ml的浓度接种，并用指示浓度的IMiD 药物/CELMoD试剂或DMSO处理过夜，然后用指示浓度的LPS刺激。24小时后，收集细胞培养基，并使用MSD测定评估上清液中的IL-6、TNF-α和IL1-β水平。ULOQ=定量的上限。
图9显示通过用IMiD/CELMoD试剂预处理抑制来自PBMC与表达BCMA的靶细胞的CC-93269诱导的IL-6分泌。从健康志愿者分离新鲜的PBMC，通过流式细胞术定量CD3+T细胞(总)的百分比，并用1 nM化合物1 (CC-92480)或对照DMSO处理PBMC过夜。第二天早晨，将靶细胞(K562-BCMA，其以非常高的水平过表达表面BCMA)或对照细胞(K562-MCB，无BCMA表达)以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中，随后加入指示浓度的CC-93269。在孵育后6小时、24小时和48小时，收集细胞培养基，并使用MSD测定评估上清液中的IL-6的水平。
图10显示对于至多10,000 ng/mL的CC-93269浓度(图10A)并且在15个健康供体中独立地(图10B)，化合物1 (CC-92480)在24小时抑制来自PBMC+K562-BCMA细胞共培养物的CC-93269诱导的IL-6分泌。图10B显示相对于对照DMSO预处理的样品标准化的化合物1(CC-92480)预处理的样品的IL-6水平，其中对照设定为100%。圆圈指示独立的供体，而条形指示中值；不是所有供体都显示，因为对于底部~10%的IL-6浓度，低于200 pg/ml的数据截止值用于消除可能使结果偏离的小变化，并且增加结果的置信度。
图11显示通过用1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺或1 nM化合物1 (CC-92480)预处理抑制来自PBMC与表达BCMA的靶细胞的CC-93269诱导的IL-6分泌。从健康志愿者分离新鲜的PBMC，通过流式细胞术定量CD3+T细胞(总)的百分比，并用指示浓度的IMiD/CELMoD试剂或对照DMSO处理PBMC过夜。第二天早晨，将靶细胞(K562-BCMA，其以非常高的水平过表达表面BCMA)以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中，随后加入指示浓度的CC-93269。在孵育后24小时，收集细胞培养基，并使用MSD测定评估上清液中的IL-6的水平。
图12显示用化合物1 (CC-92480)预处理在24小时后加强来自PBMC与靶K562-BCMA细胞的CC-93269诱导的TNF-α和IL-2分泌。如图9制备PBMC、靶K562-BCMA细胞和CC-93269的共培养物。在孵育后6小时、24小时和48小时，收集细胞培养基，并使用MSD测定评估上清液中的TNF-α (图12A)和IL-2 (图12B)的水平。ULOQ=定量的上限。
图13显示通过用化合物1 (CC-92480)预处理抑制来自PBMC与K562靶细胞的CC-93269诱导的IL1-β分泌。如图9制备PBMC、靶K562-BCMA细胞和CC-93269的共培养物。在孵育后6小时、24小时和48小时，收集细胞培养基，并使用MSD测定评估上清液中的IL1-β的水平(图13A)。图13B显示对于15个独立的健康供体，相对于对照DMSO样品标准化的化合物1(CC-92480)样品在24小时的IL1-β水平。圆圈指示独立的供体，而条形指示中值；不是所有供体都显示，因为对于底部~10%的IL1-β浓度，低于100 pg/ml的数据截止值用于消除可能使结果偏离的小变化，并且增加结果的置信度。
图14显示通过用IMiD/CELMoD试剂预处理抑制来自PBMC与H929靶细胞(H929是多发性骨髓瘤细胞系)的CC-93269诱导的IL-6分泌。从健康志愿者分离新鲜的PBMC，通过流式细胞术定量CD3+T细胞(总)的百分比，并用1 nM化合物1 (CC-92480)或对照DMSO处理PBMC过夜。第二天早晨，将靶H929细胞以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中，随后加入指示浓度的CC-93269。在孵育后6小时、24小时和48小时，收集细胞培养物，并使用MSD测定评估上清液中的IL-6的水平。来自两个独立的健康供体的数据示于图14A和14B中。
图15显示在诱导T细胞耗竭期间先前暴露于Cereblon调节(CM)试剂对CC-93269诱导的细胞溶解活性的作用。在IncuCyte® S3活细胞分析系统上在CC-93269 (47 pM)细胞毒性测定中，A) NCI-H929和B) OPM-2细胞的细胞生长动力学。在DMSO或CM试剂(100 nM泊马度胺、10 nM CC-220或1 nMCC-92480)存在下，用或不用抗CD3/CD28 (7天)进行长期刺激，将健康供体T细胞用作效应细胞。将T细胞和NCI-H929细胞以E:T比率为1:4 (NCI-H929)或1:2 (OPM-2)共培养。在其中CD3+T细胞经历长期抗CD3/CD28刺激7天的测定中，当与新鲜解冻的T细胞比较时，在DMSO处理的细胞中观察到功能性T细胞耗竭(即，细胞溶解功能丧失)。相反，先前暴露于CM试剂防止功能性TBMS细胞耗竭，并且CC-93269活性与新鲜解冻的T细胞观察到的活性相似或更好。所示的值表示来自相同实验的2-3次重复的AUC值的平均值±标准偏差。AUC=曲线下面积；DMSO=二甲亚砜；POM=泊马度胺；CC-220=伊贝度胺。*p<0.05，**p<0.01，相对于新鲜解冻的T细胞，或如指示的，通过方差分析(ANOVA)。
具体实施方式
如本文所用，冠词“一”和“一个”可以指一个或多于一个(例如，至少一个)的冠词的语法对象。
“约”通常可以指鉴于测量的性质或精度，对于测量的量的可接受程度的误差。示例性误差程度在给定值或值范围的百分之20 (20%)内，通常在10%内，并且更通常在5%内。
本文描述为“包含”一个或多个特征的实施方案也可以认为是“由这样的特征组成”和/或“基本上由这样的特征组成”的相应实施方案的公开。
浓度、量、体积、百分比和其它数值在本文中可以范围形式呈现。还应理解，使用这样的范围形式仅仅是为了方便和简洁，并且应灵活地解释为不仅包括作为范围的界限明确列举的数值，而且包括该范围内包含的所有单个数值或子范围，如同明确列举了每个数值和子范围。
细胞因子抑制剂
本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以是Cereblon E3连接酶调节剂(CELMoD)或调节Cereblon的免疫调节酰亚胺药物(IMiD)。Cereblon与损伤的DNA结合蛋白1相互作用，并与Cullin 4和E2结合蛋白ROC1 (称为RBX1)形成E3泛素连接酶复合物，其中它起底物受体的作用，以选择用于泛素化的蛋白。
在优选的实施方案中，细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是沙利度胺衍生物、化合物1或其组合。
如本文所用，“沙利度胺衍生物”涉及2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2,3-二氢-1H-异吲哚-1,3-二酮及其免疫治疗衍生物，例如但不限于：来那度胺(3-(4-氨基-1-氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮；CAS登记号191732-72-6)；泊马度胺(4-氨基-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮；CAS登记号19171-19-8)；伊贝度胺 ((S)-3-(4-((4-(吗啉代甲基)苄基)氧基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮；CAS登记号1323403-33-3)；阿伐度胺(3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-3,4-二氢喹唑啉-3-基)哌啶-2,6-二酮；CAS登记号1398053-45-6)，和各自的盐(优选HCl盐1:1)；或实施例4中称为化合物A和B的化合物。沙利度胺衍生物是调节Cereblon的IMiD试剂。在特别优选的实施方案中，沙利度胺衍生物是泊马度胺、来那度胺、伊贝度胺、阿伐度胺或其组合。
如本文所用，“化合物1”涉及4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈(CAS登记号2259648-80-9)或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。化合物1是CELMoD试剂，在本文中也称为CC-92480。化合物1的结构如下：
Figure SMS_1
如本文所用，“同位素体”是指含有至少一个同位素组成不同于该原子的天然同位素组成的原子的化合物。术语“同位素组成”是指对于给定的原子存在的每种同位素的量。在一些实施方案中，提供了化合物1的同位素体，例如富含氘、碳-13或氮-15的化合物。
药学上可接受的盐包括但不限于胺盐，例如但不限于N,N'-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其它羟烷基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1'-基甲基-苯并咪唑、二乙胺和其它烷基胺、哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱金属盐，例如但不限于锂、钾和钠；碱土金属盐，例如但不限于钡、钙和镁；过渡金属盐，例如但不限于锌；和其它金属盐，例如但不限于磷酸氢二钠和磷酸二钠；并且还包括但不限于无机酸的盐，例如但不限于盐酸盐和硫酸盐；和有机酸的盐，例如但不限于乙酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐、富马酸盐和有机磺酸盐。
本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是可商购获得的和/或可以通过本领域技术人员已知的方法制备。制备伊贝度胺的方法例如描述于US 20110196150；和制备化合物1的方法例如描述于WO-A1-2019226761中。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，细胞因子抑制剂是促炎细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂或IL1-β抑制剂)。
治疗应用
本发明至少部分基于使用细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂) (例如来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺、阿伐度胺、化合物1或其任何组合)治疗或预防患者的细胞因子相关的不良事件或疾病。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”等是指获得期望的药理学和/或生理学作用。优选地，所述作用是治疗性的，即，所述作用部分或完全治愈疾病和/或不良症状。因此，药理学和/或生理学作用可以降低疾病和/或不良症状的严重性。或者，药理学和/或生理学作用可以是预防性的，即，所述作用完全或部分预防疾病或不良症状。
如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”或“预防(prevention)”等是指抑制和/或延迟疾病和/或不良症状的发作、发展和/或恶化。
本发明人出乎意料地发现，某些IMiD和CELMoD试剂可以抑制自巨噬细胞和/或单核细胞的促炎细胞因子(特别是IL-6和IL1-β)的分泌(参见实施例1-5)，其可以由脂多糖LPS人工诱导(Rossol等人(2011年)Crit. Rev. Immunol.31 (5)): 379-446)。基于这一发现，本发明人已经认识到IMiD和CELMoD试剂可以用于其中认为升高水平的细胞因子(特别是升高水平的IL-6和IL1-β)起重要作用的不良事件，例如CRS、细胞因子介导的神经毒性或冠状病毒疾病2019 (COVID-19)。
在优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)治疗或预防患者的细胞因子相关的不良事件，例如CRS或细胞因子介导的神经毒性。优选地，细胞因子相关的不良事件或疾病不是恶性疾病。在一些实施方案中，细胞因子相关的不良事件或疾病不是实体瘤、转移性癌或软组织肿瘤。例如，在一些实施方案中，细胞因子相关的不良事件或疾病不是乳腺癌。
认为CRS由活化的免疫效应细胞(例如，由T细胞衔接免疫疗法活化的T细胞)大量释放的细胞因子(主要是IFN-γ以及TNF-α)触发。不受理论束缚，这些细胞因子诱导其它免疫细胞(包括巨噬细胞和单核细胞)的活化，导致促炎细胞因子从这些细胞快速和/或大量分泌。活化的巨噬细胞和单核细胞分泌IL-6和IL1-β，其以正反馈环方式活化更多的T细胞和其它免疫细胞(Shimabukuro-Vornhagen A等人(2018)J. Immunother. Cancer.6(1):56)。这种炎性级联可以导致细胞因子风暴和全身性炎性反应。
升高的IL-6和IL1-β水平被认为是CRS毒性的主要介质。例如，最近的研究确定，与其它细胞因子相比，高水平的IL-6在第一个月内与严重CRS最强烈地相关(Teachey DT等人(2016)Cancer Discov.6(6): 664-679)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自骨髓基质细胞、成骨细胞、Kuppfer细胞、外周血单核细胞(PBMC)、T细胞、B细胞和/或骨髓细胞(例如，单核细胞和/或巨噬细胞)的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。在一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自PBMC的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。在优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自单核细胞和/或巨噬细胞的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。
可以由本文公开的T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导促炎细胞因子分泌。在一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。在优选的实施方案中，T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的促炎细胞因子至少包括IL-6。在特别优选的实施方案中，T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的促炎细胞因子至少包括IL-6和IL1-β。因此，本发明的细胞因子抑制剂可以提供减少多种细胞因子的优点。相反，现有的治疗(例如托珠单抗和阿那白滞素)靶向单一细胞因子。
可以在PBMC和表达BCMA的靶细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的共培养物中测量T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。在一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自PBMC和表达BCMA的靶细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)以5:1的T细胞与靶细胞的比率的共培养物的T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的IL-6分泌，其中与来自未用细胞因子抑制剂处理的共培养物的IL-6分泌相比，倍数减少为至少1.5倍、2.0倍、2.5倍、3.0倍、3.5倍、4.0倍、4.5倍或5.0倍。任选地，倍数减少为至多5.0倍。因此，在一些实施方案中，倍数减少在1.5倍至5.0倍之间。
在一些实施方案中，与来自未用细胞因子抑制剂处理的共培养物的IL1-β分泌相比，本发明的细胞因子抑制剂减少来自PBMC和表达BCMA的靶细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)以5:1的T细胞与靶细胞的比率的共培养物的T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的IL1-β分泌，减少为其至多1/2、1/4、1/6、1/8或1/10。任选地，倍数减少为至多10倍。因此，在一些实施方案中，倍数减少在2倍至10倍之间。
在一些实施方案中，以至多约100 mg/mL，任选地至多约10,000 ng/mL，例如，至多约1000 ng/mL的42-TCBcv浓度，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自PBMC和表达BCMA的靶细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的共培养物的T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。
在一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)不减少T细胞衔接剂(例如，42-TCBcv)介导的与T细胞细胞毒性相关的细胞因子的分泌。任选地其中与T细胞细胞毒性相关的细胞因子是TNF-α、IL-2和/或IFN-γ中的一种或多种。
或者，促炎细胞因子分泌可以是TLR4-介导的。因此，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以减少来自骨髓基质细胞、成骨细胞、Kuppfer细胞、PBMC、B细胞和/或骨髓细胞(例如，单核细胞和/或巨噬细胞)的TLR4介导的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。优选地，TLR4介导的促炎细胞因子分泌是LPS诱导的。在一些实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)减少来自PBMC、单核细胞和巨噬细胞的TLR4介导的促炎细胞因子(例如，IL-6)分泌。在优选的实施方案中，TLR4介导的促炎细胞因子至少包括IL-6。在特别优选的实施方案中，LPS诱导的促炎细胞因子至少包括IL-6、IL1-β和TNF-α。
在一些实施方案中，促炎细胞因子是IL-6、IL-8、IL1-β、GM-CSF、MDC、MIP-1α和TNF-α中的一种或多种。在优选的实施方案中，促炎细胞因子至少包括IL-6。在一些实施方案中，促炎细胞因子排除IL1-β。在一些实施方案中，促炎细胞因子至少包括IL-6和IL1-β。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂减少来自骨髓基质细胞、成骨细胞、Kuppfer细胞、PBMC、B细胞和/或骨髓细胞的IL-6分泌。在优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂减少来自单核细胞和/或巨噬细胞的IL-6分泌。在本发明的任何方面的特别优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂减少来自骨髓基质细胞、成骨细胞、Kuppfer细胞、PBMC、B细胞和/或骨髓细胞(优选单核细胞和/或巨噬细胞)的TLR4介导的IL-6分泌。在优选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)治疗或预防CRS。CRS通常根据适应等级的策略使用ASTCT或CTCAE分级系统来治疗，其中第一个最近由(Lee DW等人(2019)Biol. Blood Marrow Transplant.25(4): 625-638)定义，而第二个最近由National Cancer Institute在2017年11月公布。本发明可以用于治疗或预防任何级别的CRS。在一些实施方案中，CRS为最小1级、最小2级、最小3级或最小4级。在优选的实施方案中，CRS为最小3级或4级。在一些实施方案中，受试者已经接受或将接受已经引起或可能引起CRS的治疗剂。在一些实施方案中，治疗或预防CRS降低CRS的严重性和/或等级。
在一些实施方案中，已经引起或可能引起CRS的治疗剂选自T细胞衔接剂(例如，多特异性抗体、CAR或CAR T细胞)、特异性结合靶抗原(例如，癌抗原，例如BCMA、CD19、CD20或CD28)的单克隆抗体、特异性结合T细胞抗原(例如，CD3)的单克隆抗体或抗体药物缀合物。在优选的实施方案中，治疗剂是T细胞衔接剂。
本发明人已经进一步发现，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以增强T细胞衔接治疗剂(例如，用于治疗可能引起或已经引起CRS的多发性骨髓瘤)的细胞杀死能力和/或可以预防T细胞耗竭，并因此保持T细胞介导的T细胞衔接剂的杀死(参见实施例9)。
细胞因子介导的神经毒性是T细胞衔接免疫疗法的另一个不良事件。对神经毒性重要的血脑屏障的血管渗漏和破坏与升高的IL-6有关(Khadka RH等人(2019)Immunotherapy.11(10): 851-857)。CAR T细胞疗法后IL-6血清浓度的较早峰值与 ≥ 4级神经毒性的较高风险有关(Gust J等人(2017) Cancer Discov. 7(12):1404-1419)。临床前研究已经证实，包括单核细胞和巨噬细胞的骨髓细胞是T细胞衔接免疫疗法中IL-6的主要来源(Yu S等人(2017)J. Hematol. Oncol.10(1):155；Teachey DT等人(2013)Blood.121(26): 5154-5157)。与CAR T细胞疗法和T细胞衔接免疫疗法相关的神经毒性可以称为“免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(ICANS)” (Lee等人(2018)Biol. Blood Marrow Transplant.25(4): 625-638)。已知升高的细胞因子(包括IL-1)是ICANS的病理生理学的一部分。
在一方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子介导的神经毒性的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，其中治疗有效剂量是足以减少或预防受试者的细胞因子介导的神经毒性发展的剂量。在一些实施方案中，细胞因子介导的神经毒性是免疫效应细胞相关的神经毒性综合征(ICANS)。
在备选的实施方案中，本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)治疗或预防患者的细胞因子相关的疾病，例如冠状病毒疾病2019 (COVID-19)。
冠状病毒疾病2019 (COVID-19)是由严重急性呼吸综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)引起的潜在的严重急性呼吸道感染。在COVID-19的若干研究中一致报道了IL-6分泌的升高，并且与疾病的严重性有关。例如，最近的研究显示IL-6是预测呼吸耗竭的有效标记(Herold T等人(2020) BMJ [预印本，2020年4月10日])。
在一方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的COVID-19的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，其中治疗有效剂量是足以减少或预防受试者的COVID-19发展的剂量。
T细胞衔接剂
在一些实施方案中，细胞因子相关的不良事件或疾病(例如，CRS)由T细胞衔接疗法引起。
如本文所用，术语“T细胞衔接剂”或“T细胞衔接疗法”是指能够重新引导一种或多种T细胞以便触发所述T细胞的活化和/或增殖的任何结合分子或多肽。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，T细胞衔接剂特异性结合促进一种或多种T细胞活化的抗原(“T细胞抗原”)。在本发明的任何方面的一些实施方案中，T细胞衔接剂是特异性结合T细胞抗原的抗体(“T细胞衔接抗体”)，优选其中T细胞衔接抗体是多特异性的，优选双特异性的。在备选的实施方案中，T细胞衔接剂包含特异性结合T细胞抗原的嵌合抗原受体(“CAR”)，优选其中CAR在T细胞上表达(“CAR T细胞”)。
因此，在一些实施方案中，T细胞衔接剂是特异性结合靶抗原(例如，癌抗原)和促进一种或多种T细胞(例如，CD3)活化的抗原的多特异性抗体、针对靶抗原(例如，癌抗原)的嵌合抗原受体(CAR)或表达至少一种针对靶抗原(例如，癌抗原)的CAR的T细胞。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，T细胞衔接剂将一种或多种T细胞引导至癌细胞。不受理论束缚，向癌细胞募集一种或多种T细胞可以导致在癌症部位的T细胞的活化和/或增殖，这可以导致从T细胞、其它免疫细胞和/或旁邻细胞(例如骨髓细胞)大量和/或迅速分泌细胞因子(例如，促炎细胞因子)。
癌细胞可以是血液癌、实体瘤、转移性癌、软组织肿瘤、转移性病变或其组合的细胞。在优选的实施方案中，癌细胞是血液癌的恶性B细胞或浆细胞，所述血液癌选自多发性骨髓瘤、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、慢性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤)、边缘区淋巴瘤或浆细胞白血病。在优选的实施方案中，癌细胞是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或浆细胞白血病的恶性B细胞或浆细胞。
癌细胞可以在它们的表面上表达一种或多种下列抗原：CD138、BCMA、CD81、CD19、CD45、CD56、CD319、CD137、FcRH5、CD117和/或GPCR5d。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，T细胞衔接剂将一种或多种T细胞引导至表达癌抗原的细胞。
在本发明的任何方面的特别优选的实施方案中，T细胞衔接剂特异性结合癌抗原。在一些实施方案中，T细胞衔接剂是特异性结合癌抗原(例如，BCMA)和促进一种或多种T细胞活化的抗原的多特异性(例如，双特异性)抗体。在备选的实施方案中，T细胞衔接剂是针对癌抗原(例如，BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)，或表达至少一种针对癌抗原(例如，BCMA)的CAR的T细胞。
如本文所用，术语“癌抗原”是指在癌细胞表面上完全或作为片段(例如，MHC/肽)表达的分子(通常是蛋白质、碳水化合物或脂质)。在优选的实施方案中，癌抗原是在人癌细胞(优选恶性B细胞或浆细胞)表面表达的人癌抗原。
在一些实施方案中，癌抗原是CD19、CD20、GPCR5d、FcRH5、ROR1或BCMA。在特别优选的实施方案中，癌抗原是BCMA。或者，T细胞衔接剂可以特异性结合BCMA轴的成员，例如BAFF或APRIL。
T细胞衔接抗体
如本文所用，“T细胞衔接抗体”是特异性结合促进一种或多种T细胞活化的抗原(“T细胞抗原”)的抗体。T细胞抗原可以选自CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226。在优选的实施方案中，促进一种或多种T细胞活化的抗原是CD3。因此，在优选的实施方案中，本发明的多特异性抗体结合CD3。
在优选的实施方案中，T细胞衔接抗体包含特异性结合CD3的抗体或其抗原结合片段。
术语“CD3”是指人CD3蛋白质多亚基复合物。CD3蛋白质多亚基复合物由6条不同的多肽链组成。因此，该术语包括CD3γ链(SwissProt P09693)、CD3δ链(SwissProt P04234)、两条CD3ε链(SwissProt P07766)和一条CD3ζ链同源二聚体(SwissProt 20963)，并且其与T细胞受体α和β链缔合。该术语包括“全长的”未加工的CD3，以及任何CD3变体、同种型和物种同源物，其由细胞(包括T细胞)天然表达或可以在用编码这些多肽的基因或cDNA转染的细胞上表达。
术语“特异性结合CD3”是指能够以足够的亲和力结合确定靶的抗体，使得该抗体可用作靶向CD3的治疗剂。可以通过SPR (例如Biacore®)分析本发明的多特异性抗体与CD3的结合。在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗体不结合其它抗原，或不以足够亲和力结合其它抗原以产生生理学作用。
在一些实施方案中，特异性结合CD3的抗体结合人CD3，其解离常数(KD)为约10-7M或更低，KD为约10-8M或更低，KD为约10-9M或更低，KD为约10-10M或更低，KD为约10-11M或更低，或KD为约10-12M或更低，如通过表面等离子体共振测定所确定的，优选使用Biacore 8K在25℃下测量。在优选的实施方案中，抗体以约10-8M或更低的解离常数(KD)结合人CD3。
抗CD3抗体的实例包括OKT3、TR66、APA 1/1、SP34、CH2527、WT31、7D6、UCHT-1、Leu-4、BC-3、H2C、HuM291 (visilizumab)、Hu291 (PDL)、ChAglyCD3 (Otelixizumab)、hOKT3γ1(Ala-Ala) (Teplizumab)和NI-0401(Foralumab)。
产生的第一抗CD3抗体是OKT3 (muromonab-CD3)，一种结合CD3ε结构域的鼠抗体。随后的抗CD3抗体包括人源化或人抗体，和工程化抗体，例如包含修饰的Fc区的抗体。
抗CD3抗体可以识别单一多肽链上的表位，例如APA 1/1或SP34 (Yang SJ, TheJournal of Immunology (1986) 137; 1097-1100)，或位于CD3的两个或更多个亚基上的构象表位，例如WT31、7D6、UCHT-1 (参见WO2000041474)和Leu-4。已经使用若干抗CD3抗体进行临床试验，包括BC-3 (Anasetti C等人(1992)Transplantation.54(5)：844-851)和H2C (WO2008119567A2)。临床开发中的抗CD3抗体包括HuM291 (visilizumab) (Norman DJ等人(2000)Transplantation.70(12): 1707-1712)、Hu291 (PDL)、ChAglyCD3(Otelixizumab) (H Waldmann)、hOKT3γ1(Ala-Ala) (Teplizumab) (J Bluestone和Johnson andJohnson)和(NI-0401) Foralumab。
任何抗CD3抗体或其抗原结合片段可以适用于本发明的T细胞衔接抗体。例如，T细胞衔接抗体可以包含选自以下的抗CD3抗体：OKT3、TR66、APA 1/1、SP34、CH2527、WT31、7D6、UCHT-1、Leu-4、BC-3、H2C、HuM291 (visilizumab)、Hu291 (PDL)、ChAglyCD3(Otelixizumab)、hOKT3γ1(Ala-Ala) (Teplizumab)和NI-0401(Foralumab)。在一些实施方案中，本发明的T细胞衔接抗体包含人源化 SP34抗体或其抗原结合片段。
在一些优选的实施方案中，抗CD3抗体或其抗原结合片段可以衍生自SP34，并且关于表位结合可以具有与抗体SP34相似的序列和相同的性质。
在一些实施方案中，T细胞衔接抗体包含抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含可变结构域VH和可变结构域VL，所述可变结构域VH包含SEQ ID NO:1、2和3的重链CDR分别作为重链CDR1H、CDR2H和CDR3H，所述可变结构域VL包含SEQ ID NO:4、5和6的轻链CDR分别作为轻链CDR1L、CDR2L和CDR3L。
在一些实施方案中，T细胞衔接抗体包含抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQID NO:7 (VH)和SEQ ID NO:8 (VL)的可变结构域。
在一些实施方案中，T细胞衔接抗体包含抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含可变区VH和可变区VL，所述可变区VH包含与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列，所述可变区VL包含与SEQ ID NO:8的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列。
在一些实施方案中，T细胞衔接抗体是多特异性抗体。在优选的实施方案中，多特异性抗体特异性结合一种或多种癌抗原(例如，BCMA)和促进一种或多种T细胞活化的抗原(例如，CD3)。
在优选的实施方案中，T细胞衔接抗体是双特异性抗体。在特别优选的实施方案中，双特异性抗体特异性结合癌抗原(例如，BCMA)和促进一种或多种T细胞活化的抗原(例如，CD3)。
抗体定义
术语“抗体”在本文中涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的抗原结合活性。
“重链”包含重链可变区(本文缩写为“VH”)和重链恒定区(本文缩写为“CH”)。重链恒定区包含重链恒定结构域CH1、CH2和CH3 (抗体类别IgA、IgD和IgG)和任选的重链恒定结构域CH4 (抗体类别IgE和IgM)。
“轻链”包含轻链可变结构域(本文缩写为“VL”)和轻链恒定结构域(本文缩写为“CL”)。可变区VH和VL可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的“恒定结构域”不直接参与抗体与靶的结合，但表现出各种效应子功能。
抗体与其靶抗原或表位之间的结合由互补决定区(CDR)介导。CDR是具有高度序列可变性的区，位于抗体重链和轻链的可变区内，在那里它们形成抗原结合位点。CDR是抗原特异性的主要决定因素。通常，抗体重链和轻链各自包含三个非连续排列的CDR。抗体重链和轻链CDR3区在根据本发明的抗体的结合特异性/亲和力中起特别重要的作用，并因此提供本发明的进一步的方面。
如本文所用，术语“抗原结合片段”包括任何天然存在的或人工构建的抗原结合多肽的构型，所述抗原结合多肽包含一个、两个或三条轻链CDR和/或一个、两个或三条重链CDR，其中多肽能够结合抗原。因此，该术语是指不同于完整抗体的分子，其包含完整抗体的部分，该部分结合完整抗体所结合的抗原。抗体片段的实例包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如，scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
CDR的序列可以参考本领域已知的任何编号系统来鉴定，例如Kabat系统(KabatEA等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版Public Health Service. National Institutes of Health. Bethesda, MD.；Chothia系统(Chothia C和Lesk AM (1987)J. Mol. Biol. 196(4): 901-917)；或IMGT系统(LefrancMP等人(2003)Dev. Comp. Immunol.27(1): 55-77)。
表1：CDR定义
Kabat Chothia IMGT
VH CDR1 31-35 26-32 27-38
VH CDR2 50-65 52-56 56-65
VH CDR3 95-102 95-102 105-117
VL CDR1 24-34 24-34 27-38
VL CDR2 50-56 50-56 56-65
VL CDR3 89-97 89-97 105-117
对于本发明中讨论的重链恒定区氨基酸位置，根据Edelman GM等人(1969)Proc. Natl. Acad. Sci.USA. 63(1): 78-85首先描述的EU索引编号。Edelman的EU编号也在Kabat等人(1991) (见上文)中阐述。因此，在重链的上下文中，术语“在Kabat中阐述的EU索引”、“EU索引”、“Kabat的EU索引”或“EU编号”是指基于Edelman等人的人IgG1 EU抗体的残基编号系统，如在Kabat等人(1991)中阐述的。用于轻链恒定区氨基酸序列的编号系统类似地在Kabat等人(见上文)中阐述。因此，如本文所用，“根据Kabat编号”是指在Kabat等人(见上文)中阐述的Kabat。
本发明的抗体及其抗原结合片段可以通过重组方式衍生自任何物种。例如，抗体或抗原结合片段可以是小鼠、大鼠、山羊、马、猪、牛、鸡、兔、骆驼、驴、人或其嵌合形式。对于用于人给药，非人衍生的抗体或抗原结合片段可以在基因或结构上被改变，以在给予人患者时抗原性降低。
特别优选人或人源化抗体，特别是重组人或人源化抗体。
术语“人源化抗体”指其中框架或“互补决定区” (CDR)已被修饰以包含与亲本免疫球蛋白相比具有不同特异性的免疫球蛋白的CDR的抗体。例如，可以将鼠CDR移植到人抗体的构架区中以制备“人源化抗体”。 例如参见Riechmann L等人(1988)Nature.332: 323-327；和Neuberger MS等人(1985)Nature.314: 268-270。在一些实施方案中，“人源化抗体”是其中恒定区已经从原始抗体的恒定区另外修饰或改变以产生根据本发明的抗体的性质(尤其是关于Clq结合和/或Fc受体(FcR)结合)的那些。
术语“人抗体”是具有氨基酸序列的抗体，所述氨基酸序列对应于由人或人细胞产生的抗体或衍生自利用人抗体库或其它人抗体编码序列的非人来源的抗体的氨基酸序列。人抗体的这种定义明确地排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可以使用本领域已知的各种技术来生产，包括噬菌体展示文库。
术语“嵌合抗体”是指包含来自一种来源或物种的可变区(即，结合区)和至少一部分衍生自不同来源或物种的恒定区的抗体，通常通过重组DNA技术制备。优选包含鼠可变区和人恒定区的嵌合抗体。本发明所包括的“嵌合抗体”的其它优选的形式是其中恒定区已从原始抗体的恒定区修饰或改变以产生根据本发明的抗体的性质(尤其是关于Clq结合和/或Fc受体(FcR)结合)的那些。这样的嵌合抗体也称为“类别转换抗体”。嵌合抗体是表达的免疫球蛋白基因的产物，其包含编码免疫球蛋白可变区的DNA区段和编码免疫球蛋白恒定区的DNA区段。涉及常规重组DNA和基因转染技术的生产嵌合抗体的方法是本领域公知的。例如参见Morrison SL等人(1984)Proc. Natl. Acad. Sci. USA.81(21): 6851-6855；美国专利号5,202,238和5,204,244。
术语“Fc区”和“Fc”在本文中可互换使用，并且是指由两条Fc链形成的天然免疫球蛋白的部分。每条“Fc链”包含恒定结构域CH2和恒定结构域CH3。每条Fc链还可以包含铰链区。天然Fc区是同源二聚体。在一些实施方案中，Fc区可以含有增强Fc异源二聚化的修饰。
术语“Fc部分”是指本发明的抗体或其抗原结合片段的对应于Fc区的部分。
有五种主要类型的重链恒定区，其被分类为IgA、IgG、IgD、IgE和IgM，每种具有由同种型指定的特征性效应子功能。例如，IgG被分成四个亚类，称为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。Ig分子与多种类型的细胞受体相互作用。例如，IgG分子与三类对IgG类抗体具有特异性的Fcγ受体(FcγR) (即，FcγRI、FcγRII和FcγRIII)相互作用。已经报道对于IgG与FcγR受体结合重要的序列位于CH2和CH3结构域中。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以是任何同种型，即，IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，以及四链免疫球蛋白(Ig)结构的合成多聚体。在优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段是IgG同种型。抗体或抗原结合片段可以是任何IgG亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段是IgG1同种型。
在一些实施方案中，抗体包含是IgG同种型的重链恒定区。在一些实施方案中，抗体包含是IgG同种型的重链恒定区的一部分。在一些实施方案中，IgG恒定区或其部分是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区。优选地，IgG恒定区或其部分是IgG1恒定区。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以包含λ轻链或κ轻链。
在优选的实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含是κ轻链的轻链。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含是κ恒定区的轻链恒定区(CL)。
在一些实施方案中，抗体包含轻链，所述轻链包含是κ可变区的轻链可变区(VL)。优选地，κ轻链包含是κVL的VL和是κCL的CL。
或者，抗体或其抗原结合片段可以包含是λ轻链的轻链。在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段包含轻链，所述轻链包含是λ恒定区的轻链恒定区(CL)。在一些实施方案中，抗体包含轻链，所述轻链包含是λ可变区的轻链可变区(VL)。
工程化抗体及其抗原结合片段包括其中对VH和/或VL内的框架残基已进行修饰的那些。这样的修饰可以改进抗体的性质，例如降低抗体的免疫原性和/或改进抗体生产和纯化。
本文公开的抗体及其抗原结合片段可以使用本领域已知的常规技术进一步修饰，例如通过单独或组合使用一个或多个氨基酸缺失、一个或多个插入、一个或多个取代、一个或多个添加和/或一个或多个重组和/或本领域已知的任何一个或多个其它修饰。在作为免疫球蛋白链的氨基酸序列基础的DNA序列中引入这样的修饰的方法是本领域技术人员公知的。
本发明的抗体及其抗原结合片段还包括被修饰(例如通过将任何类型的分子共价附着于抗体)的衍生物，使得共价附着不阻止抗体结合其表位，或以其它方式损害抗体的生物学活性。合适的衍生物的实例包括但不限于岩藻糖基化的抗体、糖基化的抗体、乙酰化的抗体、聚乙二醇化的抗体、磷酸化的抗体和酰胺化的抗体。
预期本发明的抗体的氨基酸序列中的微小变体包括在本发明中，条件是一个或多个氨基酸序列中的变体与本文任何地方定义的本发明的抗体或其抗原结合片段保持至少75%，更优选至少80%、至少90%、至少95%，并且最优选至少99%序列同一性。
本发明的抗体可以包括变体，其中来自一个物种的氨基酸残基在保守或非保守位置取代另一个物种中的相应的残基。在一个实施方案中，非保守位置的氨基酸残基被保守或非保守残基取代。特别地，预期保守氨基酸替换。
“保守氨基酸取代”是其中氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换的取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已经定义，包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸或组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸或谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸或色氨酸)、β-分支侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸或组氨酸)。因此，如果多肽中的氨基酸被来自相同侧链家族的另一氨基酸替换，则认为氨基酸取代是保守的。本发明的抗体中含有保守修饰的变体不排除其它形式的变体，例如多态变体、种间同源物和等位基因。
“非保守氨基酸取代”包括以下取代：其中(i)具有正电性侧链的残基(例如，Arg、His或Lys)取代负电性残基(例如，Glu或Asp)或被负电性残基(例如，Glu或Asp)取代，(ii)亲水性残基(例如，Ser或Thr)取代疏水性残基(例如，Ala、Leu、Ile、Phe或Val)或被疏水性残基(例如，Ala、Leu、Ile、Phe或Val)取代，(iii)半胱氨酸或脯氨酸取代任何其它残基或被任何其它残基取代，或(iv)具有庞大疏水性或芳族侧链的残基(例如，Val、His、Ile或Trp)取代具有较小侧链的残基(例如，Ala或Ser)或没有侧链的残基(例如，Gly)或被具有较小侧链的残基(例如，Ala或Ser)或没有侧链的残基(例如，Gly)取代。
嵌合抗原受体
嵌合抗原受体(CAR)是人工受体，其在修饰的免疫细胞(例如，T细胞)的表面上表达，以将免疫细胞引导至靶细胞。在优选的实施方案中，CAR将免疫细胞(例如，T细胞)引导至癌细胞(例如，血液癌的恶性B细胞或浆细胞)。在特别优选的实施方案中，CAR特异性结合一种或多种癌抗原(例如，BCMA)。
通常，CAR包含胞外抗原结合结构域、跨膜结构域；和胞内信号传导结构域。在某些实施方案中，一旦胞外结构域结合靶抗原(例如，癌抗原(例如，BCMA))，则经由胞内信号传导结构域产生信号，其活化免疫细胞，例如靶向和杀死表达靶抗原的细胞。
在某些实施方案中，胞外结构域包含结合靶抗原(例如，BCMA)的受体或受体的一部分。在某些实施方案中，胞外结构域包含或是结合靶抗原的抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的抗BCMA抗体)。在具体的实施方案中，胞外结构域包含或是单链Fv (scFv)结构域。单链Fv结构域可以包含例如通过柔性接头连接到VH的VL，其中所述VL和VH来自结合靶抗原的抗体。
跨膜结构域可以是从本领域已知的任何分子衍生或获得的任何跨膜结构域。在具体的实施方案中，可以从CD8、CD28、细胞因子受体、白细胞介素受体、生长因子受体等获得或衍生跨膜结构域。
在优选的实施方案中，从人CD8α分子或CD28分子获得或衍生跨膜结构域。CD8是跨膜糖蛋白，其用作T细胞受体(TCR)的共受体，并主要在细胞毒性T细胞的表面上表达。CD8最常见的形式以由CD8 α和CD8 β链组成的二聚体存在。CD28在T细胞上表达，并提供T细胞活化所需的共刺激信号。CD28是CD80 (B7.1)和CD86 (B7.2)的受体。
在某些实施方案中，CAR的胞外结构域通过接头、间隔结构域或铰链多肽(例如来自CD28的序列或来自CTLA4的序列)与多肽的跨膜结构域连接。间隔结构域可以衍生自任何天然的、合成的、半合成的或重组来源。例如，可以从免疫球蛋白(例如，IgG1或IgG4)的一部分(包括但不限于一个或多个恒定区(例如，CH2和CH3)或铰链区或其修饰形式)衍生或获得间隔结构域。
可以从本领域已知的任何胞内信号传导分子获得或衍生细胞间信号传导结构域。在某些实施方案中，从在T细胞的表面上表达并触发所述T细胞活化和/或增殖的蛋白质获得或衍生胞内结构域。在具体的实施方案中，从CD3ζ (CD3ζ)或其修饰形式获得或衍生胞内信号传导结构域。在其它实施方案中，从淋巴细胞受体链、TCR/CD3复合蛋白、Fc受体亚基或IL-2受体亚基获得或衍生胞内结构域。在一些实施方案中，胞内结构域另外包含一个或多个共刺激结构域或基序。可以从CD28、OX40 (CD134)、4-1BB (CD137)、CD27或共刺激可诱导的T细胞共刺激(ICOS)多肽或其它共刺激结构域或基序或其任何组合获得或衍生一个或多个共刺激结构域或基序。在一些实施方案中，CD3ζ、CD28、4-1BB、OX40和/或CD27是人的。
通常通过使用包含编码所述CAR的序列的载体(优选逆转录病毒载体)将这样的CAR转移到免疫效应细胞中。表达CAR的修饰的免疫细胞可以是T细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞或细胞毒性T淋巴细胞)，本文对其使用术语“CAR T细胞”。本发明还提供了这样的CAR T细胞。
本文提供的组合物和方法中使用的T细胞可以是初始T淋巴细胞或MHC限制性T淋巴细胞。在某些实施方案中，T细胞是肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)。在某些实施方案中，T细胞已经从肿瘤活检分离，或者从由肿瘤活检分离的T细胞扩增或已经从自肿瘤活检分离的T细胞扩增。在某些其它实施方案中，T细胞已经从外周血、脐带血或淋巴分离或从由外周血、脐带血或淋巴分离的T细胞中扩增。用于产生表达CAR的修饰的T细胞的T细胞可以使用本领域接受的常规方法分离，例如血液收集，随后血浆分离术(apheresis)和任选地抗体介导的细胞分离或分选。
修饰的T细胞优选对于待给予修饰的T细胞的个体是自体的。在某些其它实施方案中，修饰的T细胞对于待给予修饰的T细胞的个体是同种异体的。当使用同种异体的T细胞制备修饰的T细胞时，优选选择将降低个体中移植物抗宿主病(GVHD)可能性的T细胞。例如，在某些实施方案中，选择病毒特异性T细胞来制备修饰的T细胞，并且预期其具有大大降低的与任何受体抗原结合的天然能力，并因此被其活化。在某些实施方案中，可以通过向宿主共同给予一种或多种免疫抑制剂(例如环孢菌素、他克莫司、西罗莫司、环磷酰胺等)来减少受体介导的同种异体T细胞的排斥。
T细胞(例如未修饰的T淋巴细胞、或表达CD3和CD28的T细胞、或包含含有CD3ζ信号传导结构域和CD28共刺激结构域的多肽的T细胞)可以使用针对CD3和CD28的抗体(例如附着于珠的抗体)扩增；例如参见美国专利号5,948,893；6,534,055；6,352,694；6,692,964；6,887,466；和6,905,681。
修饰的T细胞可以任选地包含“自杀基因”或“安全开关”，其能够在期望时杀死基本上所有的修饰的T细胞。例如，在某些实施方案中，修饰的T细胞可以包含HSV胸苷激酶基因(HSV-TK)，其在与丙氧鸟苷接触时引起修饰的T细胞死亡。在另一个实施方案中，修饰的T细胞包含可诱导的胱天蛋白酶，例如可诱导的胱天蛋白酶9 (icaspase9)，例如胱天蛋白酶9和人FK506结合蛋白之间的融合蛋白，其允许使用特异性小分子药物二聚化。参见Straathof KC等人(2005)Blood105(11)：4247-4254。
BCMA治疗剂
如本文所用，术语“BCMA治疗剂”是指以足够的亲和力特异性结合BCMA的结合分子或多肽，使得结合分子或多肽可用作靶向BCMA的治疗剂。在优选的实施方案中，BCMA治疗剂是T细胞衔接剂。这样的T细胞衔接剂能够将一种或多种T细胞重新引导至表达BCMA的靶细胞。
如本文所用，术语“BCMA”涉及人B细胞成熟抗原，也称为BCMA；TR17_HUMAN、TNFRSF17 (UniProt Q02223)，其是肿瘤坏死因子(TNF)受体超家族的成员，其在分化的浆细胞中优先表达。BCMA的胞外结构域根据UniProt由氨基酸1-54 (或5-51)组成。BCMA是多发性骨髓瘤细胞成熟和存活所必需的跨膜糖蛋白。
如本文所用，“与BCMA表达相关的病症”是其中患者具有异常或增强的BCMA表达的病症。与BCMA表达相关的病症包括浆细胞病症或B细胞病症，例如多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞性白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤)、边缘区淋巴瘤、浆细胞白血病或IgG4相关的疾病。在优选的实施方案中，与BCMA表达相关的疾病是多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或浆细胞白血病。
在一些实施方案中，与BCMA表达相关的疾病是复发性或难治性的，例如复发性或难治性多发性骨髓瘤、复发性或难治性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或复发性或难治性浆细胞白血病。在备选的实施方案中，与BCMA表达相关的病症是新诊断的(即尚未经历治疗)，例如新诊断的多发性骨髓瘤、新诊断的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或新诊断的浆细胞白血病。
在特别优选的实施方案中，与BCMA表达相关的疾病是多发性骨髓瘤，例如，高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，高风险多发性骨髓瘤是R-ISS III期疾病和/或特征在于早期复发的疾病(例如，自上一次治疗方案(例如用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的上一次治疗方案)之日起12个月内的进行性疾病)。
在本发明的任何方面的优选的实施方案中，BCMA治疗剂包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“针对BCMA的抗体”、“抗BCMA抗体”或“结合BCMA的抗体”涉及特异性结合BCMA的胞外结构域的抗体。在一些实施方案中，特异性结合BCMA的抗体不结合其它抗原或不以足够的亲和力结合其它抗原以产生生理学作用。
在一些实施方案中，抗BCMA抗体与无关的非BCMA蛋白的结合程度为抗体与BCMA的结合的约1/10，优选小于1/100，如例如通过表面等离子体共振(SPR) (例如，Biacore®)、酶联免疫吸附(ELISA)或流式细胞术(FACS)所测量的。在一个实施方案中，结合BCMA的抗体的解离常数(Kd)为10-8M或更低，优选10-8M至10-13M，优选10-9M至10-13M。
在一个实施方案中，抗BCMA抗体结合在来自不同物种的BCMA中(优选在人和食蟹猴中，并且此外还优选小鼠和大鼠)保守的BCMA的表位。
优选抗BCMA抗体特异性结合BCMA组，其由人BCMA和非人哺乳动物来源的BCMA组成，优选来自食蟹猴、小鼠和/或大鼠的BCMA。使用板结合的BCMA通过ELISA分析抗BCMA抗体与人BCMA的结合。对于该测定，使用优选1.5 μg/mL的板结合的BCMA的量和在0.1 pM至200nM范围内的浓度的抗BCMA抗体。
在优选的实施方案中，BCMA治疗剂是如本文所述的T细胞衔接剂。
因此，在一些实施方案中，BCMA治疗剂是多特异性(例如，双特异性)抗体，其特异性结合BCMA和促进一种或多种T细胞(例如，CD3)活化的抗原、针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)或表达针对BCMA的至少一种CAR的T细胞。
在一些优选的实施方案中，BCMA治疗剂是多特异性(例如，双特异性)抗体，其特异性结合BCMA和促进一种或多种T细胞(例如，CD3)活化的抗原。在特别优选的实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体包含本文所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段。
在备选的优选的实施方案中，BCMA治疗剂包含针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)，或表达针对BCMA的至少一种CAR的T细胞(“CAR T细胞”)。在一些实施方案中，针对BCMA的CAR的胞外结构域包含结合BCMA的受体或受体的一部分。在一些实施方案中，针对BCMA的CAR的胞外结构域包含本文所述的抗BCMA抗体，例如单链Fv (scFv)或其抗原结合片段。
在备选的实施方案中，BCMA治疗剂是抗体-药物缀合物(ADC)。如本文所用，术语“抗体药物缀合物”或“缀合的抗体”是指特异性结合抗原(例如，BCMA)并与治疗剂(例如，细胞毒性剂或放射性标记)缀合的抗体。
在一些实施方案中，ADC包含本文所述的抗BCMA抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物包含美登木素生物碱(maytansinoid)，优选其中所述美登木素生物碱是不能切割的DM1样美登木素生物碱。在一些实施方案中，抗体-药物缀合物是GSK2857916、AMG224或CC99712。
剂量方案
在一些实施方案中，以足以预防或减少受试者的CRS发展的剂量给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。本发明人已经认识到，给予受试者本文所述的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以通过减弱细胞因子释放(例如，促炎性细胞因子释放)来增加已经引起或可能引起CRS的治疗剂的安全性。不受理论束缚，认为细胞因子抑制剂抑制来自骨髓细胞(例如，巨噬细胞和/或单核细胞)的促炎细胞因子，并因此可以预防或减少受试者的CRS的发展或治疗CRS。作为另外一种选择或除此之外，给予本文所述的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以允许已经引起或可能引起CRS的治疗剂以增加的剂量给予，这是由于与没有给予细胞因子抑制剂相比毒性降低，并从而可以增加治疗剂的治疗指数。
细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和治疗剂(例如，BCMA治疗剂)可以同时、在重叠的时间点或在不同的时间点给予。在一些实施方案中，在治疗剂之前(例如，在第一剂量的治疗剂之前)给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在备选的实施方案中，在治疗剂之后(例如，在第一剂量的治疗剂之后)给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，在给予BCMA治疗剂之前(例如，之前12或24小时内)、与给予BCMA治疗剂同一天或在给予BCMA治疗剂之后(例如，之后12或24小时内)给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在本发明的任何方面的一些实施方案中，在诊断CRS之后12小时内给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
A) 用细胞因子抑制剂引领
在一些实施方案中，作为一个或多个剂量给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前给予至少一个剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。不受理论束缚，用细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)预治疗可以预防或减少与给予治疗剂(例如，T细胞衔接剂)相关的CRS的发展。此外，在其中治疗剂是T细胞衔接剂(例如，多特异性T细胞衔接抗体、CAR或CAR T细胞)的实施方案中，给予本文所述的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以例如通过增强T细胞活化来增加治疗剂的功效。
在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前1-28天(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)给予受试者一个或多个剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在优选的实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前7天给予受试者一个或多个剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前1-28天(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)给予受试者两个或更多个剂量(例如，两个、三个、四个、五个、六个或七个剂量)的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前7天给予受试者第一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，并且在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前(例如，之前1、2、3、4、5或6天)给予受试者一个或多个其它剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。例如，可以在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前6、5、4、3、2和1天给予受试者六个其它剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，作为一个或多个剂量给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中在与给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的同一天给予至少一个剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。因此，在一些实施方案中，作为两个或更多个剂量给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中两个或更多个剂量包含：
(i)在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前1-28天(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天，优选7天)，一个或多个剂量；和
(ii)在与给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的同一天，至少一个剂量。
例如，可以在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之前7、6、5、4、3、2和1天作为七个剂量给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，并且在与给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的同一天给予至少一个剂量。
在本发明的任何方面的备选的实施方案中，在与给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的同一天不给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。不受理论束缚，这样的实施方案可以降低不良事(例如嗜中性粒细胞减少症和/或感染)的风险。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后给予受试者一个或多个剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。不受理论束缚，用细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)后治疗可以预防或减少与给予治疗剂相关的CRS的发展或治疗所述CRS。
在一些实施方案中，在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后，在第一剂量的治疗剂之后1-14天(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天)给予受试者下一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在其中细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)不在与给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的同一天给予受试者的实施方案中，可以在第一剂量的治疗剂之后7-14天(例如，7天)给予受试者下一剂量的细胞因子抑制剂。不受理论束缚，认为在给予治疗剂1周后降低不良事件(例如嗜中性粒细胞减少症或感染)的风险。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，作为包含至少一个治疗周期的治疗给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。如本文所用，“治疗周期”或“周期”是28天。在一些实施方案中，治疗包含其中在第1-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第8、11、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。在备选的实施方案中，治疗包含其中在第1-7天和第15-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第8、11、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。在进一步备选的实施方案中，治疗包含其中在第1-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在治疗周期中不给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。在进一步备选的实施方案中，治疗包含其中在第1天-28给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在治疗周期中不给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。
在一些实施方案中，治疗包含其中在第1-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第二治疗周期。在一些实施方案中，治疗包含第三治疗周期，任选地第四、第五和第六治疗周期，其中在第1-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)。在一些实施方案中，患者继续接受治疗(例如，持续他们的余生)。
在备选的实施方案中，治疗包含其中在第1-7和15-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第二治疗周期。在一些实施方案中，治疗包含第三治疗周期，任选地第四、第五和第六治疗周期，其中在第1-7和15-21天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)。在一些实施方案中，患者继续接受治疗(例如，持续他们的余生)。
在优选的实施方案中，T细胞衔接剂是BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。可以根据表2或表3中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。
表2：
Figure SMS_2
表3：
Figure SMS_3
在一些实施方案中，口服给予细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)。在一些实施方案中，以固定剂量给予一个或多个剂量的细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)。在一些实施方案中，以约0.03 mg至约6 mg之间、约0.1 mg至约4 mg之间、约0.3 mg至约2 mg之间、或约1.0 mg至约1.6 mg之间，例如，约1.0 mg、约1.3 mg或约1.6 mg的固定剂量给予伊贝度胺。在一些实施方案中，以约0.05 mg至约5 mg之间、约0.1 mg至约2 mg之间、约0.2 mg至约1.6 mg之间、或约0.3 mg至约1.0 mg之间，例如，约0.3 mg、约0.6 mg或约1.0mg的固定剂量给予化合物1。
在一些实施方案中，静脉内给予BCMA治疗剂。在优选的实施方案中，皮下给予第一剂量的BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。在一些实施方案中，在第一周期中，任选地在第一和随后的周期中，皮下给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。在一些实施方案中，以约1 mg至约100 mg之间、约1 mg至约75 mg之间、约1 mg至约50 mg之间、约1 mg至约25 mg之间、或约1mg至约12 mg之间的剂量给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。
在其中细胞因子抑制剂是化合物1或伊贝度胺的一些实施方案中，可以根据表4、5或6中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)和细胞因子抑制剂。
表4：
Figure SMS_4
表5：
Figure SMS_5
表6：
Figure SMS_6
在一些实施方案中，给予患者一种或多种另外的治疗剂。在优选的实施方案中，给予皮质类固醇，优选塞米松。在一些实施方案中，每周给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)，持续至少第一治疗周期、至少前两个治疗周期、或至少前三个治疗周期。在优选的实施方案中，(例如，每周)给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)持续三个治疗周期。皮质类固醇(例如，地塞米松)的剂量可以是约40 mg/周(例如，对于至多且包括75岁或不是体重过轻的患者)或约20 mg/周(例如，对于75岁以上或体重过轻(体重指数[BMI]<18.5)的患者)。优选地，口服或静脉内给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。在一些实施方案中，与细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)一起口服给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。在一些实施方案中，在给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)的那天静脉内给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。
在一些实施方案中，根据表7、8或9中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)、细胞因子抑制剂和皮质类固醇(例如，地塞米松)。
表7：
Figure SMS_7
表8：
Figure SMS_8
表9：
Figure SMS_9
在一个方面，提供了治疗与BCMA表达相关的病症(例如，多发性骨髓瘤)的方法，其中所述方法包括给予受试者BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)和细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中根据表2、3、4、5或6中示出的任一方案给予受试者BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)和细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在一些实施方案中，治疗与BCMA表达相关的病症的方法包括给予患者一种或多种另外的治疗剂。在优选的实施方案中，给予皮质类固醇，优选塞米松。在一些实施方案中，每周给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)，持续至少第一治疗周期、至少前两个治疗周期、或至少前三个治疗周期。在优选的实施方案中，(例如，每周)给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)持续三个治疗周期。在一些实施方案中，根据表7、8或9中示出的方案给予患者BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)、细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和皮质类固醇(例如，地塞米松)。
B) 用治疗剂引领
在一些实施方案中，作为一个或多个剂量给予受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后给予第一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。不受理论束缚，在治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以预防或减少与给予治疗剂(例如，T细胞衔接剂)相关的CRS的发展或治疗所述CRS。此外，在其中治疗剂是T细胞衔接剂(例如，多特异性T细胞衔接抗体、CAR或CAR T细胞)的实施方案中，给予本文所述的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以例如通过增强T细胞活化来增加治疗剂的功效。
在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后1-28天(例如，之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)、或在同一天但在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后给予受试者第一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在优选的实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后7天给予受试者第一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后1-28天(例如，之后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天)、或在同一天但在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后(优选在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后7天)给予受试者两个或更多个剂量(例如，两个、三个、四个、五个、六个或七个剂量)的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在一些实施方案中，在第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后7天给予受试者第一剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，并且在给予第一剂量的治疗剂(例如，T细胞衔接剂)之后(例如，之后8-27天)给予受试者一个或多个其它剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在本发明的任何方面的一些实施方案中，作为包含至少一个治疗周期的治疗给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在一些实施方案中，治疗包含其中在第8-28天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、4、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。在备选的实施方案中，治疗包含其中在第8-14天和22-28天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、4、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第一治疗周期。在一些实施方案中，治疗包含其中在第8-28天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第二治疗周期。在备选的实施方案中，治疗包含其中在第8-14天和22-28天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)的第二治疗周期。在一些实施方案中，治疗包含第三治疗周期，任选地第四、第五和第六治疗周期，其中在第8-28天给予患者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和在第1、8、15和22天给予患者治疗剂(例如，T细胞衔接剂)。在一些实施方案中，患者继续接受治疗(例如，持续他们的余生)。
在一些实施方案中，T细胞衔接剂是BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。可以根据表10或表11中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。
表10：
Figure SMS_10
表11：
Figure SMS_11
在一些实施方案中，口服给予细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)。在一些实施方案中，以固定剂量给予一个或多个剂量的细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)。在一些实施方案中，以约0.03 mg至约6 mg之间、约0.1 mg至约4 mg之间、约0.3 mg至约2 mg之间、或约1.0 mg至约1.6 mg之间，例如，约1.0 mg、约1.3 mg或约1.6 mg的固定剂量给予伊贝度胺。在一些实施方案中，以约0.05 mg至约5 mg之间、约0.1 mg至约2 mg之间、约0.2 mg至约1.6 mg之间、或约0.3 mg至约1.0 mg之间，例如，约0.3 mg、约0.6 mg或约1.0mg的固定剂量给予化合物1。
在一些实施方案中，静脉内给予BCMA治疗剂。在优选的实施方案中，皮下给予第一剂量的BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。在一些实施方案中，在第一周期中，任选地在第一和随后的周期中,皮下给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。在一些实施方案中，以约1 mg至约100 mg之间、约1 mg至约75 mg之间、约1 mg至约50 mg之间、约1 mg至约25 mg之间、或约1mg至约12 mg之间的剂量给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)。
在其中细胞因子抑制剂是化合物1或伊贝度胺的一些实施方案中，可以根据表12、13或14中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)和细胞因子抑制剂。
表12：
Figure SMS_12
表13：
Figure SMS_13
表14：
Figure SMS_14
在一些实施方案中，给予患者一种或多种另外的治疗剂。在优选的实施方案中，给予皮质类固醇，优选塞米松。在一些实施方案中，每周给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)，持续至少第一治疗周期、至少前两个治疗周期、或至少前三个治疗周期。在优选的实施方案中，(例如，每周)给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)持续三个治疗周期。皮质类固醇(例如，地塞米松)的剂量可以是约40 mg/周(例如，对于至多且包括75岁且不是体重过轻的患者)或约20 mg/周(例如，对于大于75岁或体重过轻(体重指数[BMI]<18.5)的患者)。优选地，口服或静脉内给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。在一些实施方案中，与细胞因子抑制剂(例如，伊贝度胺或化合物1)一起口服给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。在一些实施方案中，在给予BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)的那天静脉内给予皮质类固醇(例如，地塞米松)。
在一些实施方案中，根据表15、16或17中示出的方案给予患者(例如，多发性骨髓瘤患者)BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)、细胞因子抑制剂和皮质类固醇(例如，地塞米松)。
表15：
Figure SMS_15
表16：
Figure SMS_16
表17：
Figure SMS_17
在一个方面，提供了治疗与BCMA表达相关的病症的方法，其中所述方法包括给予受试者BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)和细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中根据表10、11、12、13或14中示出的任一方案给予受试者BCMA治疗剂和细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
在一些实施方案中，治疗与BCMA表达相关的病症的方法包括给予患者一种或多种另外的治疗剂。在优选的实施方案中，给予皮质类固醇，优选塞米松。在一些实施方案中，每周给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)，持续至少第一治疗周期、至少前两个治疗周期、或至少前三个治疗周期。在优选的实施方案中，(例如，每周)给予患者皮质类固醇(例如，地塞米松)持续三个治疗周期。在一些实施方案中，根据表15、16或17中示出的方案给予患者BCMA治疗剂(例如，42-TCBcv)，细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和皮质类固醇(例如，地塞米松)。
BCMA结合序列
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含选自以下的CDR1H、CDR2H、CDR3H、CDR1L、CDR2L和CDR3L区组合：
a) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:23的CDR1L区、SEQ ID NO:24的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
b) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:25的CDR1L区、SEQ ID NO:26的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
c) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
d) SEQ ID NO:29的CDR1H区、SEQ ID NO:30的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
e) SEQ ID NO:34的CDR1H区、SEQ ID NO:35的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
f) SEQ ID NO:36的CDR1H区、SEQ ID NO:37的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；和
g) SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:18的CDR1L区、SEQ ID NO:19的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在优选的实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含选自以下的CDR1H、CDR2H、CDR3H、CDR1L、CDR2L和CDR3L区组合：
a) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
b) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:25的CDR1L区、SEQ ID NO:26的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；或者
c) SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:18的CDR1L区、SEQ ID NO:19的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在本文公开的任何实施方案中，SEQ ID NO:27的CDR1L区可以被SEQ ID NO:62的CDR1L区替换；和SEQ ID NO:28的CDR2L区可以被SEQ ID NO:63的CDR2L区替换。因此，在一些实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ IDNO:62的CDR1L区、SEQ ID NO:63的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在本文公开的任何实施方案中，SEQ ID NO:25的CDR1L区可以被SEQ ID NO:60的CDR1L区替换；和SEQ ID NO:26的CDR2L区可以被SEQ ID NO:61的CDR2L区替换。因此，在一些实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ IDNO:60的CDR1L区、SEQ ID NO:61的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在本文公开的任何实施方案中，SEQ ID NO:18的CDR1L区可以被SEQ ID NO:58的CDR1L区替换，和SEQ ID NO:19的CDR2L区可以被SEQ ID NO:59的CDR2L区替换。因此，在一些实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ IDNO:58的CDR1L区、SEQ ID NO:59的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区。
在特别优选的实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区和SEQ IDNO:17的CDR3H区，所述VL区包含SEQ ID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQID NO:20的CDR3L区。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含选自以下的VH和VL：
a) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
b) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:13的VL区，
c) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区，
d) SEQ ID NO:38的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
e) SEQ ID NO:39的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
f) SEQ ID NO:40的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，或者
g) SEQ ID NO:9的VH区和SEQ ID NO:11的VL区。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含选自以下的VH和VL：
a)包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
b)包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
c)包含与SEQ ID NO:10的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:14的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
d)包含与SEQ ID NO:38的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
e)包含与SEQ ID NO:39的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
f)包含与SEQ ID NO:40的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:12的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；或者
g)包含与SEQ ID NO:9的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:11的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含选自以下的VH和VL：
a) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:13的VL区，
b) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区，或者
c) SEQ ID NO:9的VH区和SEQ ID NO:11的VL区。
在特别优选的实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含GSK2857916、AMG-420、AMG-701、JNJ-957、JNJ-64007957、PF-06863135、REGN-5458或TNB-383B中的一个的CDR3H、CDR3L、CDR1H、CDR2H、CDR1L和CDR2L。在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)包含GSK2857916、AMG-420、AMG-701、JNJ-957、JNJ-64007957、PF-06863135、REGN-5458或TNB-383B中的一个的VH和VL。在一些实施方案中，抗BCMA抗体是BCMA三特异性的[Affirmed]、AFM26 [Affirmed]、Ab-957 [Janssen]或BCMA/PD-L1 [Immune pharmaceuticals]。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂是本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体，其包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下的CDR1H、CDR2H、CDR3H、CDR1L、CDR2L和CDR3L区组合：
a) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:23的CDR1L区、SEQ ID NO:24的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
b) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:25的CDR1L区、SEQ ID NO:26的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
c) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
d) SEQ ID NO:29的CDR1H区、SEQ ID NO:30的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
e) SEQ ID NO:34的CDR1H区、SEQ ID NO:35的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；
f) SEQ ID NO:36的CDR1H区、SEQ ID NO:37的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:31的CDR1L区、SEQ ID NO:32的CDR2L区和SEQ ID NO:33的CDR3L区；或者
g) SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQ ID NO:18的CDR1L区、SEQ ID NO:19的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；
和抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的CDR1H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、SEQ ID NO:3的CDR3H区、SEQ ID NO:4的CDR1L区、SEQ ID NO:5的CDR2L区和 SEQID NO:6的CDR3L区。
在特别优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含：
a)抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含VH区和VL区，所述VH区包含SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区和SEQ ID NO:17的CDR3H区，所述VL区包含SEQ IDNO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区；和
b)抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:1的CDR1H区、SEQ ID NO:2的CDR2H区、SEQ ID NO:3的CDR3H区、SEQ ID NO:4的CDR1L区、SEQ ID NO:5的CDR2L区和 SEQID NO:6的CDR3L区。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下的VH和VL：
a) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
b) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:13的VL区，
c) SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区，
d) SEQ ID NO:38的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
e) SEQ ID NO:39的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，
f) SEQ ID NO:40的VH区和SEQ ID NO:12的VL区，或者
g) SEQ ID NO:9的VH区和SEQ ID NO:11的VL区；和
抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:7的VH区和SEQ ID NO:8的VL区。
在特别优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含抗BCMA抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:10的VH区和SEQ ID NO:14的VL区；和抗CD3抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ ID NO:7的VH区和SEQ ID NO:8的VL区。
在优选的实施方案中，本发明的双特异性抗体包含以下SEQ ID NO (如以下表23A和24B中所提及)：
83A10-TCBcv：48，45，46，47 (x2) (图2A)
22-TCBcv：48，52，53，54 (x2) (图2A)
42-TCBcv：48，55，56，57 (x2) (图2A)
如本文所用，术语“83A10-TCBcv”是指特异性结合BCMA和CD3的双特异性抗体，如由SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47 (2x)和SEQ ID NO:48的重链和轻链组合所规定，并且如在图2A中所示和EP14179705中所述。
如本文所用，术语“22-TCBcv”是指Mab22的双特异性抗体，如由SEQ ID NO:48、SEQID NO:52、SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54 (2x)的重链和轻链组合所规定，并且如在图2A中所示和WO2017/021450中所述。
如本文所用，术语“42-TCBcv”是指Mab42的双特异性抗体，如由SEQ ID NO:48、SEQID NO:55、SEQ ID NO:56和SEQ ID NO:57 (2x)的重链和轻链组合所规定，并且如在图2A中所示和WO2017/021450中所述。在本申请中，42-TCBcv可以互换地称为CC-93269。
在优选的实施方案中，本发明的双特异性抗体是42-TCBcv。本发明人已经鉴定本文所述的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以以足以抑制由42-TCBcv介导的促炎细胞因子的分泌(例如，来自骨髓细胞(例如，巨噬细胞和/或单核细胞)的促炎细胞因子的分泌)的剂量给予受试者，其中细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)的剂量不降低由42-TCBcv介导的表达BCMA的细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的杀死。因此，细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以预防或减少已经接受或将接受42-TCBcv的受试者的CRS的发展，而不减少由42-TCBcv介导的表达BCMA的细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的杀死(例如参见实施例9)。
在一些实施方案中，细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)增加由42-TCBcv介导的表达BCMA的细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的杀死。在体外，可以在健康供体T细胞和表达BCMA的靶细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)以5:1的T细胞与靶细胞的比率的共培养物中测量42-TCBcv介导的表达BCMA的细胞(例如，多发性骨髓瘤细胞)的杀死。在体内，肿瘤测量可以用于评估42-TCBcv介导的多发性骨髓瘤细胞的杀死，例如在H929异种移植小鼠模型中。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂是42-TCBcv，并且细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺。在一些实施方案中，BCMA治疗剂是42-TCBcv，并且细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是伊贝度胺。在一些实施方案中，BCMA治疗剂是42-TCBcv，并且细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是来那度胺。在一些实施方案中，BCMA治疗剂是42-TCBcv，并且细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是阿伐度胺。在一些实施方案中，BCMA治疗剂是42-TCBcv，并且细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是化合物1。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的42-TCBcv，其中所述方法包括
a)给予受试者42-TCBcv；和
b)以足以预防或减少受试者的CRS的发展的剂量给予受试者泊马度胺。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的42-TCBcv，其中所述方法包括
a)给予受试者42-TCBcv；和
b)以足以预防或减少受试者的CRS的发展的剂量给予受试者伊贝度胺。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的42-TCBcv，其中所述方法包括
a)给予受试者42-TCBcv；和
b)以足以预防或减少受试者的CRS的发展的剂量给予受试者来那度胺。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的42-TCBcv，其中所述方法包括
a)给予受试者42-TCBcv；和
b)以足以预防或减少受试者的CRS的发展的剂量给予受试者阿伐度胺。
在一方面，本发明提供了用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的42-TCBcv，其中所述方法包括
a)给予受试者42-TCBcv；和
b)以足以预防或减少受试者的CRS的发展的剂量给予受试者化合物1。
或者，BCMA治疗剂可以是针对BCMA的CAR或表达针对BCMA的至少一种CAR的T细胞。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，BCMA CAR或BCMA CAR T细胞)包含在表18中示出的VH CDR1、CDR2和CDR3以及VL CDR1、CDR2和CDR3序列。
表18：SEQ ID NO:76-85的CDR1、CDR2和CDR3的CDR氨基酸坐标
Figure SMS_18
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，BCMA CAR或BCMA CAR T细胞)包含VH和VL，其中：
a) VH包含SEQ ID NO:76的CDR并且VL包含SEQ ID NO:77的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:77；
b) VH包含SEQ ID NO:76的CDR并且VL包含SEQ ID NO:78的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:78；
c) VH包含SEQ ID NO:76的CDR并且VL包含SEQ ID NO:79的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:79；
d) VH包含SEQ ID NO:80的CDR并且VL包含SEQ ID NO:81的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:80并且VL包含SEQ ID NO:81；
e) VH包含SEQ ID NO:82的CDR并且VL包含SEQ ID NO:83的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:82并且VL包含SEQ ID NO:83；或者
f) VH包含SEQ ID NO:84的CDR并且VL包含SEQ ID NO:85的CDR，如在表18中示出的，任选地其中VH包含SEQ ID NO:84并且VL包含SEQ ID NO:85。
在一些实施方案中，BCMA治疗剂(例如，BCMA CAR或BCMA CAR T细胞)包含选自以下的VH和VL：
a)包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:77的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
b)包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:78的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
c)包含与SEQ ID NO:76的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:79的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
d)包含与SEQ ID NO:80的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:81的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；
e)包含与SEQ ID NO:82的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:83的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL；或者
f)包含与SEQ ID NO:84的氨基酸序列至少75%相同、至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VH和包含与SEQ ID NO:85的氨基酸序列至少90%相同、至少95%相同或相同的氨基酸序列的VL。
在优选的实施方案中，BCMA治疗剂(例如，BCMA CAR或BCMA CAR T细胞)包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:64的CDR1H、SEQ ID NO:65的CDR2H、SEQ ID NO:66的CDR3H，所述VL包含选自以下的CDR1L、CDR2L和CDR3L序列组：
a) SEQ ID NO:67的CDR1L、SEQ ID NO:68的CDR2L和SEQ ID NO:69的CDR3L，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:77；
b) SEQ ID NO:70的CDR1L、SEQ ID NO:71的CDR2L和SEQ ID NO:72的CDR3L，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:78；或者
c) SEQ ID NO:73的CDR1L、SEQ ID NO:74的CDR2L和SEQ ID NO:75的CDR3L，任选地其中VH包含SEQ ID NO:76并且VL包含SEQ ID NO:79。
在某些实施方案中，BCMA CAR T细胞是ide-cel、idecabtagene-vicleucel或bb21217。在一些实施方案中，CAR T细胞是orva-cel或JCARH125。
在某些实施方案中，BCMA CAR T细胞是KITE-585 (Kite Pharmaceuticals)、P-BCMA-101 (Poseida Therapeutics)、CART-BCMA (Novartis)、LCAR-B38M (LegendBiotech)、JNJ-528 (Janssen Biotech)、P-BCMA-101 (Poseida Therapeutics)、CT053(CARsgen Therapeutics)、CTX120 (CRISPR Therapeutics)、ET140 (JunoTherapeutics)、UCART-BCMA (Cellectis)、P-BCMA-101 (Poseida)、JNJ-528/LCAR-B38M(Johnson&Johnson)或来自Radiance Bio或Second Affiliated Hospital of HenanUniversity oftraditional Chinese Medicine/Hrain Biotechnology Co. Ltd.的BCMACAR T细胞。在某些实施方案中，BCMA CAR T细胞是MCARH171、FCARH143、CTX120、CT053(First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, CN)或BCMA-CART(Hrain Biotechnology, Shanghai CN)。
多特异性抗体形式
多特异性抗体的形式是本领域已知的。例如，双特异性抗体形式描述于Kontermann RE (2012)MAbs.4(2): 182-197; Holliger P和Hudson PJ (2005)Nat. Biotechnol. 23(9): 1126-1136; Chan AC和Carter PJ (2010)Nature Reviews Immunology.10(5): 301-316和Cuesta AM等人(2010)Trends Biotechnol.28(7): 355-362。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以具有任何形式。多特异性和双特异性抗体形式例如包括多价单链抗体、双抗体和三链抗体、和具有全长抗体的恒定结构域结构的抗体(另外的抗原结合结构域(例如，单链Fv、串联scFv、VH结构域和/或VL结构域、Fab或(Fab)2经由一个或多个肽接头连接所述全长抗体)以及抗体模拟物(例如DARPins)。在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体具有scFv的形式，例如双特异性T细胞衔接剂(BITE®)。在一些实施方案中，本发明的抗体是单链抗体，其包含结合BCMA的第一结构域、结合T细胞抗原(例如，CD3)的第二结构域和包含两个多肽单体的第三结构域，每个多肽单体包含铰链、CH2结构域和CH3结构域，其中两个多肽单体经由肽接头彼此融合(例如，(铰链-CH2-CH3-接头-铰链-CH2-CH3))。
抗体的“效价”表示结合结构域的数目。因此，术语“二价的”、“三价的”和“多价的”分别表示存在两个结合结构域、三个结合结构域和多个结合结构域。本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以具有多于一个能够结合每个靶抗原的结合结构域(即，抗体是三价的或多价的)。在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体具有多于一个能够结合每个靶抗原的相同表位的结合结构域。在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体具有多于一个能够结合每个靶抗原上的不同表位的结合结构域。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以是二价的、三价的或四价的。在优选的实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体是三价的，优选其中三价抗体对于BCMA是二价的。因此，本发明的双特异性抗体可以是三价的，其中三价抗体对于BCMA是二价的。
多特异性(例如，双特异性)抗体可以是来自单个物种的全长，或可以是嵌合的或人源化的。对于具有多于两个抗原结合结构域的抗体，一些结合结构域可以是相同的，只要蛋白质具有针对两种不同抗原的结合结构域。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以具有双特异性异源二聚体形式。在一些实施方案中，双特异性抗体包含两条不同的重链和两条不同的轻链。在其它实施方案中，多特异性(例如，双特异性)抗体包含两条相同的轻链和两条不同的重链。在一些实施方案中，在本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体中，两对重链和轻链(HC/LC)之一特异性结合CD3，而另一对特异性结合BCMA。
在其中本发明的双特异性抗体是二价的实施方案中，它们可以包含一种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(本文称为“1+1”形式)。
在其中BCMA和CD3抗体是Fab的实施方案中，1+1形式的二价双特异性抗体可以具有以下形式：CD3 Fab-BCMA Fab (即，当不存在Fc时)。或者，双特异性抗体可以具有以下形式：Fc-CD3 Fab-BCMA Fab；Fc-BCMA Fab-CD3 Fab；或BCMA Fab-Fc-CD3 Fab (即，当存在Fc时)。在优选的实施方案中，二价双特异性抗体具有形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab。
“CD3 Fab-BCMA Fab”是指CD3 Fab经由其N-末端结合BCMA Fab的C-末端。
“Fc-BCMA Fab-CD3 Fab”是指BCMA Fab经由其C-末端结合Fc的N-末端，并且CD3Fab经由其C-末端结合BCMA Fab的N-末端。
“Fc-CD3 Fab-BCMA Fab”是指CD3 Fab经由其C-末端结合Fc的N-末端，并且BCMAFab经由其C-末端结合CD3 Fab的N-末端。
“BCMA Fab-Fc-CD3 Fab”是指BCMA和CD3 Fab片段经由其C-末端结合Fc的N-末端。
在其中本发明的双特异性抗体是三价的实施方案中，它们可以包含两种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(本文称为“2+1”形式)。
在其中BCMA和CD3抗体是Fab的实施方案中，2+1形式的三价双特异性抗体可以具有以下形式：CD3 Fab-BCMA Fab-BCMA Fab；或BCMA Fab-CD3 Fab-BCMA Fab (即，当不存在Fc时)。或者，双特异性抗体可以具有以下形式：BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab；BCMAFab-Fc-BCMA Fab-CD3 Fab；或CD3 Fab-Fc-BCMA Fab-BCMA Fab (即，当存在Fc时)。在优选的实施方案中，三价双特异性抗体具有形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab。
“CD3 Fab-BCMA Fab-BCMA Fab”是指CD3 Fab经由其C-末端结合第一BCMA Fab的N-末端，并且第一BCMA Fab经由其C-末端结合第二BCMA Fab的N-末端。
“BCMA Fab-CD3 Fab-BCMA Fab”是指第一BCMA Fab经由其C-末端结合CD3 Fab的N-末端，并且CD3 Fab经由其C-末端结合第二BCMA Fab的N-末端。
“BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab”是指第一BCMA Fab和CD3 Fab经由其C-末端结合Fc的N-末端，并且第二BCMA Fab经由其C-末端结合CD3 Fab的N-末端。
“BCMA Fab-Fc-BCMA Fab-CD3 Fab”是指第一BCMA Fab和第二BCMA Fab经由其C-末端结合Fc的N-末端，并且CD3 Fab经由其C-末端结合第二BCMA Fab的N-末端。
“CD3 Fab-Fc-BCMA Fab-BCMA Fab”是指CD3 Fab和第一BCMA Fab经由其C-末端结合Fc的N-末端，并且第二BCMA Fab经由其C-末端结合第一BCMA Fab的N-末端。
在一些实施方案中，本发明的双特异性抗体可以包含不超过一个特异性结合BCMA的BCMA Fab、以及不超过一个特异性结合CD3的CD3 Fab和不超过一个Fc部分。
在一些实施方案中，双特异性抗体包含不超过一个特异性结合CD3的CD3 Fab、不超过两个特异性结合BCMA的BCMA Fab和不超过一个Fc部分。在一些实施方案中，不超过一个CD3 Fab和不超过一个BCMA Fab连接到Fc部分，并且经由一个或多个Fab的C-末端与Fc部分的铰链区结合进行连接。在一些实施方案中，第二BCMA Fab经由其C-末端连接到CD3 Fab的N-末端或连接到Fc部分的铰链区，并因此在双特异性抗体的Fc部分和CD3 Fab之间。
在包含两个BCMA Fab的实施方案中，BCMA Fab优选衍生自相同的抗体，并且优选在CDR序列、可变结构域序列VH和VL和/或恒定结构域序列CH1和CL中相同。优选地，两个BCMA Fab的氨基酸序列是相同的。
本发明的双特异性抗体还可以包含scFv而不是Fab。因此，在一些实施方案中，双特异性抗体具有上述形式中的任一种，其中每个Fab用相应的scFv替换。
术语“Fab片段”和“Fab”在本文中可互换使用，并且含有单条轻链(即，恒定结构域CL和VL)和单条重链(即，恒定结构域CH1和VH)。Fab片段的重链不能与另一条重链形成二硫键。
“Fab'片段”含有单条轻链和单条重链，但除了CH1和VH，“Fab'片段”含有在CH1和CH2结构域之间的重链的区，该区是形成链间二硫键所需的。因此，两个“Fab'片段”可以经由形成二硫键缔合以形成F(ab')2分子。
“F(ab')2片段”含有两条轻链和两条重链。每条链包括在两条重链之间形成链间二硫键所必需的恒定区的一部分。
“Fv片段”仅含有重链和轻链的可变区。其不含恒定区。
“单-结构域抗体”是含有单个抗体结构域单元(例如，VH或VL)的抗体片段。
“单链Fv” (“scFv”)是含有抗体的VH和VL结构域的抗体片段，连接在一起以形成单链。多肽接头通常用于连接scFv的VH和VL结构域。
“串联scFv”(也称为TandAb®)是通过两个scFv以串联取向与柔性肽接头共价结合形成的单链Fv分子。
“双特异性T细胞衔接剂” (BiTE®)是由在单条肽链上的两个单链可变片段(scFv)组成的融合蛋白。scFv中的一个经由CD3受体结合T细胞，而另一个结合肿瘤细胞抗原。
“双抗体(diabody)”是小的二价和双特异性抗体片段，其包含通过肽接头连接的与同一多肽链上的轻链可变结构域(VL)连接的重链(VH)可变结构域(VH-VL)，所述肽接头太短以至于不允许同一链上的两个结构域之间的配对(Kipriyanov, Int. J. Cancer 77(1998), 763-772)。这迫使与另一条链的互补结构域配对，并促进具有两个功能性抗原结合位点的二聚体分子的组装。
“DARPin”是双特异性锚蛋白重复分子。DARPin衍生自天然锚蛋白，其可以在人基因组中发现并且是最丰富类型的结合蛋白之一。DARPin文库模块由天然锚蛋白重复蛋白序列定义，使用229个锚蛋白重复序列用于初始设计，而另外的2200个用于随后的精制。模块用作DARPin文库的构件单元。文库模块类似于人基因组序列。DARPin由4-6个模块组成。因为每个模块大约3.5 kDa，平均DARPin的大小为16-21 kDa。结合物的选择通过完全无细胞的核糖体展示完成，并且描述于He M.和Taussig MJ., Biochem Soc Trans. 2007年11月;35(Pt 5):962-5。
本发明的双特异性抗体的组分(例如Fab片段)可以根据现有技术通过使用合适的接头化学连接在一起。在优选的实施方案中，使用(Gly4-Ser1)2接头(Desplancq DK等人(1994)Protein Eng.7(8):1027-33; Mack M等人(1995)PNAS. 92(15): 7021-7025)。如本文所用，“化学连接” (或“连接”)是指组分通过共价结合连接。由于接头是肽接头，这样的共价结合通常通过生物化学重组方式进行。例如，如果抗体包含Fc，则可以使用编码相应的Fab片段的VL和/或VH结构域、接头和Fc部分链的核酸进行结合。
在使用接头的情况下，该接头可以具有足以确保第一和第二结构域中的每一个可以彼此独立地保留其差异结合特异性的长度和序列。
Fc
本发明的抗体(例如，双特异性抗体)可以具有Fc或可以不具有Fc。在优选的实施方案中，本发明的抗体(例如，双特异性抗体)包含Fc，优选人Fc。
在某些实施方案中，Fc是变体Fc，例如，相对于亲本Fc序列(例如随后经修饰以产生变体的未修饰的Fc多肽)已经被修饰(例如通过氨基酸取代、缺失和/或插入)的Fc序列，以提供期望的结构特征和/或生物学活性。
因此，本发明的抗体(例如，双特异性抗体)可以包含含有一个或多个修饰的Fc，通常以改变抗体的一个或多个功能性质，例如血清半衰期、补体固定、Fc受体结合，和/或抗原依赖性细胞毒性。Fc可以连接到本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体中的抗BCMA和/或抗CD3 Fab片段。
Fc的存在具有延长抗体的消除半衰期的优点。本发明的抗体(例如，双特异性抗体)在小鼠或食蟹猴(优选食蟹猴)中的消除半衰期可以长于12小时，优选3天或更长。在一些实施方案中，本发明的抗体(例如，双特异性抗体)的消除半衰期为约1-12天，其允许每周至少一次或两次给予。
降低的效应子功能
优选地，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含Fc区(例如，IgG1亚类的)，其包含修饰以避免FcR和C1q结合并最小化ADCC/CDC。这提供了这样的优点，即双特异性抗体纯粹通过效应细胞(例如T细胞)的强大机制、重定向/活化介导其肿瘤细胞杀死功效。因此，避免了另外的作用机制，例如对补体系统和表达FcR的效应细胞的作用，并且降低副作用(例如输注相关的反应)的风险。
在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含IgG (特别是IgG1) Fc区，其包含修饰L234A、L235A和P329G (根据EU编号来编号)。
异源二聚化
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以是异源多聚体抗体。这样的异源多聚体抗体可以在参与抗体链之间的相互作用的区中包含修饰，以促进抗体的正确组装。
例如，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含在CH2和CH3结构域中具有一个或多个修饰以增强Fc异源二聚化的Fc。作为另外一种选择或除此之外，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以在CH1和CL区中包含修饰以促进Fab片段的重链和轻链之间的优先配对。
存在许多促进异源二聚化的策略。这些策略可以包括将不对称互补修饰引入两条抗体链的每一条中，使得两条链彼此相容，并因此能够形成异源二聚体，但每条链不能与其自身二聚化。这样的修饰可以包括插入、缺失、保守和非保守取代和重排。
可以通过引入带电残基以在第一抗体链和第二抗体链之间产生有利的静电相互作用来促进异源二聚化。例如，可以将一个或多个带正电荷的氨基酸引入第一抗体链，并且可以将一个或多个带负电荷的氨基酸引入第二抗体链中的相应的位置。
作为另外一种选择或除此之外，可以通过在接触残基之间引入位阻来促进异源二聚化。例如，可以将一个或多个具有庞大侧链的残基引入第一抗体链，并且可以将一个或多个能够容纳庞大侧链的残基引入第二抗体链。
作为另外一种选择或除此之外，可以通过在链之间的界面处向亲水和疏水残基引入一个或多个修饰来促进异源二聚化，以使异源二聚体形成比同源二聚体形成在熵和焓上更有利。
促进异源二聚化的另一种策略是重排抗体链的部分，使得每条链仅与包含相应重排的链保持相容。例如，CrossMAb技术基于抗体结构域的交换，以能够进行正确的链缔合。存在三种主要的CrossMAb形式，它们是：(i) CrossMAbFab，其中VH和VL交换并且CH1和CL交换；(ii) CrossMAbVH-VL，其中VH和VL交换；和(iii) CrossMAbCH1-CL，其中CH1和CL交换(KleinC等人(2016)MAbs.8(6): 1010-1020)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含VH和VL的交换。在一些实施方案中，本发明的抗体(例如，双特异性)抗体可以包含CH1和CL的交换。在一些实施方案中，本发明的抗体(例如，双特异性)可以包含VH和VL的交换以及CH1和CL的交换。
在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含VH和VL的交换。
促进异源二聚化的其它方法包括使用链交换工程化结构域(SEED) (Davis JH等人(2010)Protein Eng Des Sel,23(4): 195- 202)。
上述策略的组合可以用于使组装效率最大化，同时使对抗体稳定性的影响最小化。
Fc异源二聚化
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以具有异源二聚体Fc，例如它们可以包含一条源自抗BCMA抗体的重链和一条源自抗CD3抗体的重链。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含异源二聚体Fc，其包含促进第一CH2和/或CH3结构域与第二CH2和/或CH3结构域缔合的一个或多个修饰。在优选的实施方案中，一个或多个修饰促进第一CH3结构域与第二CH3结构域缔合，例如通过对CH3结构域产生不对称修饰。一个或多个修饰可以包含选自氨基酸插入、缺失、保守和非保守取代和重排及其组合的修饰。
通常第一CH3结构域和第二CH3结构域均以互补方式工程化，使得每个CH3结构域(或包含其的重链)可以不再与其自身同源二聚化，而是被迫与互补工程化的另一CH3结构域异源二聚化(使得第一和第二CH3结构域异源二聚化，并且在两个第一或两个第二CH3结构域之间不形成同源二聚体)。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含具有一个或多个“结入洞(knob-into-holes)”修饰的Fc，其在例如WO 96/027011；Ridgway JB等人(1996)Protein Eng.9(7) 617-621; Merchant AM等人(1998)Nat. Biotechnol.16(7): 677-681；和WO98/050431的若干实施例中详细描述。
在该方法中，改变两个CH3结构域的相互作用表面以增加含有这两个CH3结构域的两条Fc链的异源二聚化。(两条Fc链的)两个CH3结构域之一可以是“结”，而另一个是“洞”。
因此，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含两个CH3结构域，其中第一Fc链的第一CH3结构域和第二Fc链的第二CH3结构域各自在包含抗体CH3结构域之间的原始界面的界面处相交，其中改变所述界面以促进抗体的形成。
在一些实施方案中：
a)改变一条Fc链的CH3结构域，使得在与另一条Fc链的CH3结构域的原始界面相交的一条Fc链的CH3结构域的原始界面内，氨基酸残基用具有较大侧链体积的氨基酸残基替换，从而在一条Fc链的CH3结构域的界面内产生凸起，所述凸起可以定位在另一条Fc链的CH3结构域的界面内的腔中；和
b)改变另一条Fc链的CH3结构域，使得在与一条Fc链的CH3结构域的原始界面相交的另一条Fc链的CH3结构域的原始界面内，氨基酸残基用具有较小侧链体积的氨基酸残基替换，从而在另一条Fc链的CH3结构域的界面内产生腔，其中一条Fc链的CH3结构域的界面内的凸起可定位在所述腔内。
优选地，具有较大侧链体积的所述氨基酸残基选自精氨酸(R)、苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域，所述第一CH3结构域在位置T366、L368和Y407处包含一个或多个修饰，例如T366S、L368A和Y407V (根据EU编号来编号)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第二CH3结构域，所述第二CH3结构域在位置T366处包含修饰(“结修饰”)，例如T366W (根据EU编号来编号)。
在特别优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域和第二CH3结构域，所述第一CH结构域包含修饰T366S、L368A和Y407V或其保守取代，所述第二CH结构域包含修饰T366W或其保守取代(根据EU编号来编号)。
在一个实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含含有在表19中示出的修饰的第一CH3结构域和含有在表19中示出的修饰的第二CH3结构域。
表19：“结入洞”修饰
Figure SMS_19
或者，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含在US 9,562,109和US 9,574,010 (通过引用并入本文)中示出的一个或多个修饰。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域，所述第一CH3结构域在位置T350、L351、F405和/或Y407 (根据EU编号来编号)处包含一个或多个修饰，例如，T350V、L351Y、F405A和/或Y407V。在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域，所述第一CH3结构域在位置T350、L351、F405和Y407 (根据EU编号来编号)处包含一个或多个修饰，例如，T350V、L351Y、F405A和Y407V。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第二CH3结构域，所述第二CH3结构域在位置T350、T366、K392和/或T394 (根据EU编号来编号)处包含一个或多个修饰，例如，T350V、T366L、K392L和/或T394W。在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第二CH3结构域，所述第二CH3结构域在位置T350、T366、K392和T394 (根据EU编号来编号)处包含一个或多个修饰，例如，T350V、T366L、K392L和T394W。
在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域和第二CH3结构域，所述第一CH3结构域在位置T350、L351、F405和/或Y407处包含一个或多个修饰(例如，T350V、L351Y、F405A和/或Y407V)，所述第二CH3结构域在位置T350、T366、K392和/或T394处包含一个或多个修饰(例如，T350V、T366L、K392L和/或T394W) (根据EU编号来编号)。
在特别优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域和第二CH3结构域，所述第一CH3结构域在位置T350、L351、F405和Y407处包含修饰(例如，T350V、L351Y、F405A和Y407V)，所述第二CH3结构域在位置T350、T366、K392和T394处包含修饰(例如，T350V、T366L、K392L和T394W) (根据EU编号来编号)。
一个或多个修饰可以修饰侧链之间的静电荷、疏水/亲水相互作用和/或空间干扰。
在特别优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含第一CH3结构域和第二CH3结构域，所述第一CH3结构域包含修饰T350V、L351Y、F405A和Y407V或其保守取代，所述第二CH3结构域包含修饰T350V、T366L、K392L和T394W或其保守取代(根据EU编号来编号)。
在一个实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含含有在表20中示出的修饰的第一CH3结构域和含有在表20中示出的修饰的第二CH3结构域。
表20：Fc异源二聚化修饰
Figure SMS_20
预期用于CH3修饰以增强异源二聚化的其它技术作为本发明的备选并且例如描述于WO96/27011、WO98/050431、EP1870459、WO2007/110205、WO2007/147901、WO2009/089004、WO2010/129304、WO2011/90754、WO2011/143545、WO2012/058768、WO2013/157954、WO2013/157953和WO2013/096291。
在一些实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是IgG2同种型，并且可以使用在WO2010/129304中描述的异源二聚化方法。
其它Fc修饰
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含Fc，其中通过引入半胱氨酸(C)作为在每个CH3结构域的相应位置的氨基酸来改变两个CH3结构域，使得可以在两个CH3结构域之间形成二硫桥。可以在CH3结构域之一的位置349和在另一个CH3结构域的位置354(根据EU编号来编号)引入半胱氨酸。
优选地，在位置354引入的半胱氨酸在第一CH3结构域中，而在位置349引入的半胱氨酸在第二CH3结构域中(根据EU编号来编号)。
Fc可以包含修饰，例如D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I (根据EU编号来编号)。优选地，两个CH3结构域包含D356E和L358M (根据EU编号来编号)。
轻链和重链异源二聚化
在本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体中，一条或多条免疫球蛋白重链和轻链可以包含一个或多个修饰，例如当重链和轻链共表达或共产生时能够促进特定重链与特定轻链的优先配对的氨基酸修饰。这样的修饰可以提供相当改进的生产/纯化，而不改变生物学性质，例如与BCMA的结合。特别地，通过引入一个或多个修饰(例如，氨基酸交换)，可以显著减少生产中的轻链错配和副产物的形成，并因此提高产率并促进纯化。
一个或多个修饰可以通过引入位阻、用相反电荷取代带电氨基酸和/或通过疏水或亲水相互作用促进优先异源二聚体配对。在优选的实施方案中，一个或多个修饰通过引入位阻和用相反电荷取代带电氨基酸来促进优先异源二聚体配对。
氨基酸交换可以是减少轻链错配的用相反电荷(例如，在CH1/CL界面中)取代带电氨基酸(例如，Bence-Jones型副产物)。
在优选的实施方案中，有助于轻链和重链异源二聚化的一个或多个修饰是CDR外部的轻链和重链中的氨基酸修饰。
一个或多个修饰可以存在于抗BCMA抗体或其抗原结合片段中。或者，一个或多个修饰可以存在于抗CD3抗体或其抗原结合片段中。在优选的实施方案中，一个或多个修饰存在于抗BCMA抗体或其抗原结合片段中。
在一些实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含免疫球蛋白重链和相应的免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白重链包含具有氨基酸修饰K147E/D和K213E/D(根据EU编号来编号)的CH1结构域，所述相应的免疫球蛋白轻链包含具有氨基酸修饰E123K/R/H和Q124K/R/H (根据Kabat编号)的CL结构域。优选地，CH1结构域包含氨基酸修饰K147E和K213E (根据EU编号)或其保守取代，并且相应的CL结构域包含氨基酸修饰E123R和Q124K或其保守取代(根据Kabat编号)。这样的多特异性(例如，双特异性)抗体可以以高产率产生并且可以容易地纯化。
在一个实施方案中，表21中所述的氨基酸修饰可以在BCMA抗体中或在CD3抗体中。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是二价的，并且包含一种抗BCMA抗体或其抗原结合片段和一种抗CD3抗体或其抗原结合片段(“1+1”形式)，其中：
a) BCMA抗体或其抗原结合片段(例如，BCMA Fab)包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域；或者
b) CD3抗体或其抗原结合片段(例如，CD3 Fab)包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是三价的，并且包含两种抗BCMA抗体或其抗原结合片段和一种抗CD3抗体或其抗原结合片段(“2+1”形式)，其中：
a)一种或两种BCMA抗体或其抗原结合片段(例如，BCMA Fab)包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域；或者
b) CD3抗体(例如，CD3 Fab)包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
特别地，每种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)可以包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
表21：轻链和重链异源二聚化修饰
Figure SMS_21
在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含在表21中示出的修饰与在表19中示出的修饰的组合。因此，在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是二价的，并且包含：
a)一种抗BCMA抗体或其抗原结合片段和一种抗CD3抗体或其抗原结合片段(“1+1”形式)，其中(i) BCMA抗体或其抗原结合片段(例如，BCMA Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰K147E和K213E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰E123R和Q124K (即，在表21中示出的修饰)，或(ii) CD3抗体或其抗原结合片段(例如，CD3 Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰K147E和K213E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰E123R和Q124K (即，在表21中示出的修饰)；和
b)包含修饰T366S、L368A和Y407V的第一CH3结构域和包含修饰T366W (即，在表19中示出的修饰)的第二CH3结构域。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是三价的，并且包含：
a)两种抗BCMA抗体或其抗原结合片段和一种抗CD3抗体或其抗原结合片段(“2+1”形式)，其中(i)一种或两种BCMA抗体或其抗原结合片段(例如，BCMA Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰K147E和K213E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰E123R和Q124K (即，在表21中示出的修饰)，或(ii) CD3抗体或其抗原结合片段(例如，CD3 Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰K147E和K213E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰E123R和Q124K (即，在表21中示出的修饰)；和
b)包含修饰T366S、L368A和Y407V的第一CH3结构域和包含修饰T366W (即，在表19中示出的修饰)的第二CH3结构域。
特别地，每种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)可以包含具有在表21中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表21中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。在优选的实施方案中，第一Fc链在Fc的N-末端结合第一抗BCMA抗体的C-末端，并且第二Fc链在Fc的N-末端结合抗CD3抗体的C-末端。
在备选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含免疫球蛋白重链和相应的免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白重链重链包含在一个或多个位置A141、L145、K147、Q175 (根据EU编号来编号)处具有氨基酸修饰的CH1结构域，所述相应的免疫球蛋白轻链包含在一个或多个位置F116、Q124、L135、T178(根据Kabat编号)处具有氨基酸修饰的CL结构域。优选地，CH1结构域包含氨基酸修饰A141W、L145E、K147T、Q175E或其保守取代(根据EU编号来编号)，并且相应的CL结构域包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V、T178R或其保守取代(根据Kabat编号)。
在一个实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CL结构域的相应的免疫球蛋白轻链。在其中本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段和本发明的抗CD3抗体或其抗原结合片段的实施方案中，在表22中描述的氨基酸修饰可以在BCMA抗体中或在CD3抗体中。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是二价的，并且包含一种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(“1+1”形式)，其中：
a) BCMA抗体(例如，BCMA Fab)包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域；或者
b) CD3抗体(例如，CD3 Fab)包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是三价的，并且包含两种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(“2+1”形式)，其中：
a)一种或两种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域；或者
b) CD3抗体(例如，CD3 Fab)包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
在特别优选的实施方案中，每种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)可以包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。
表22：轻链和重链异源二聚化修饰
Figure SMS_22
在优选的实施方案中，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体包含在表22中示出的氨基酸修饰与在表20中示出的氨基酸修饰的组合。因此，在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是二价的，并且包含：
(a)一种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(“1+1”形式)，其中(i) BCMA抗体(例如，BCMA Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰A141W、L145E、K147T和Q175E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V和T178R(即，在表22中示出的修饰)，或(ii) CD3抗体(例如，CD3 Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰A141W、L145E、K147T和Q175E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V和T178R (即，在表22中示出的修饰)；和
(b)包含修饰T350V、L351Y、F405A和Y407V的第一CH3结构域和包含修饰T350V、T366L、K392L和T394W (即，在表20中示出的修饰)的第二CH3结构域。
在优选的实施方案中，第一Fc链在Fc的N-末端结合抗BCMA抗体的C-末端，并且第二Fc链在Fc的N-末端结合抗CD3抗体的C-末端。
在一个实施方案中，本发明的双特异性抗体是三价的，并且包含：
a)两种抗BCMA抗体和一种抗CD3抗体(“2+1”形式)，其中(i)一种或两种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰A141W、L145E、K147T和Q175E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V和T178R (即，在表22中示出的修饰)，或(ii) CD3抗体(例如，CD3 Fab)包含CH1结构域和相应的CL结构域，所述CH1结构域包含氨基酸修饰A141W、L145E、K147T和Q175E，所述相应的CL结构域包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V和T178R (即，在表22中示出的修饰)；和
b)包含修饰T350V、L351Y、F405A和Y407V的第一CH3结构域和包含修饰T350V、T366L、K392L和T394W (即，在表20中示出的修饰)的第二CH3结构域。
特别地，每种BCMA抗体(例如，BCMA Fab)包含具有在表22中示出的氨基酸修饰的CH1结构域和具有在表22中示出的氨基酸修饰的相应的CL结构域。在优选的实施方案中，第一Fc链在Fc的N-末端结合第一抗BCMA抗体的C-末端，并且第二Fc链在Fc的N-末端结合抗CD3抗体的C-末端。
或者，CH1结构域可以包含在位置Q175 (根据EU编号来编号)处的氨基酸修饰，并且相应的CL结构域可以包含在一个或多个位置F116、Q124、L135、T178 (根据Kabat编号)处的氨基酸修饰。CH1结构域可以包含氨基酸修饰Q175K (根据EU编号来编号)或其保守取代，并且相应的CL结构域可以包含氨基酸修饰F116A、Q124R、L135V、T178R (根据Kabat编号)或其保守取代。
在备选的实施方案中，CH1结构域可以包含在位置Q175 (根据EU编号来编号)处的氨基酸修饰，并且相应的CL结构域可以包含在一个或多个位置Q124、L135、Q160、T180 (根据Kabat编号)处的氨基酸修饰。CH1结构域可以包含氨基酸修饰Q175K (根据EU编号来编号)或其保守取代，并且相应的CL结构域可以包含氨基酸修饰Q124E、L135W、Q160E和T180E或其保守取代(根据Kabat编号)。
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以另外包含在选自氨基酸酪氨酸(Y)、谷氨酸(E)、丝氨酸(S)和组氨酸(H)的VL区的位置49处的氨基酸取代和/或在为苏氨酸(T)或丙氨酸(A)的VL区的位置74处的氨基酸取代。
CrossMAb
本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含CrossMAb技术。CrossMAb技术基于抗体结构域的交换，以能够正确链缔合。其用于促进多特异性抗体形成。存在三种主要的CrossMAb形式，它们是：(i) CrossMAbFab，其中VH和VL交换并且CH1和CL交换；(ii)CrossMAbVH-VL，其中VH和VL交换；和(iii) CrossMAbCH1-CL，其中CH1和CL交换(Klein C等人(2016)MAbs.8(6): 1010-1020)。
CrossMAb技术是本领域已知的。其中可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1彼此替换的双特异性抗体描述于WO2009080251和WO2009080252中。
在本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体内的一种或多种抗体或抗原结合片段中，可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1可以彼此替换。在一些实施方案中，本发明的抗体(例如，双特异性)抗体可以包含VH和VL的交换和CH1和CL的交换。因此，本发明的多特异性(例如，双特异性)抗体可以包含交换轻链和交换重链。如本文所用，“交换轻链”是可以包含VH-CL、VL-CH1或VH-CH1的轻链。如本文所用，“交换重链”是可以包含VL-CH1、VH-CL或VL-CL的重链。
在一些方面，提供了多特异性(例如，双特异性)抗体，其包含本发明的抗BCMA抗体或其抗原结合片段以及抗CD3抗体或其抗原结合片段，其中多特异性(例如，双特异性)抗体包含：
a)特异性结合CD3的抗体的轻链和重链；和
b)特异性结合BCMA的抗体的轻链和重链，
其中可变结构域VL和VH和/或恒定结构域CL和CH1在(i)抗BCMA抗体；和/或(ii)抗CD3抗体中彼此替换。
在一些实施方案中，抗CD3抗体或其抗原结合片段的可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1彼此替换。更优选地，抗CD3抗体或其抗原结合片段的可变结构域VL和VH彼此替换。
在其中1+1形式的双特异性抗体具有以下形式的实施方案中：CD3 Fab-BCMA Fab(即，当不存在Fc时)；Fc-CD3 Fab-BCMA Fab；Fc-BCMA Fab-CD3 Fab；或BCMA Fab-Fc-CD3Fab，双特异性抗体可以包含CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1 -CL。BCMA Fab可以具有CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1-CL。或者，CD3 Fab可以具有CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1-CL。在优选的实施方案中，双特异性抗体的CD3 Fab包含CrossMAbVH-VL形式。
特别优选具有2+1形式的本发明的双特异性抗体包含CrossMAb技术。因此，在其中2+1形式的三价双特异性抗体具有以下形式的实施方案中：CD3 Fab-BCMA Fab-BCMA Fab；BCMA Fab-CD3 Fab-BCMA Fab (即，当不存在Fc时)；BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab；BCMAFab-Fc-BCMA Fab-CD3 Fab；或CD3Fab-Fc-BCMA Fab-BCMA Fab，双特异性抗体可以包含CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1-CL。BCMA Fab可以具有CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1-CL。或者，CD3 Fab可以具有CrossMAb形式，例如，CrossMAbFab、CrossMAbVH-VL或CrossMAbCH1-CL。在优选的实施方案中，双特异性抗体的CD3 Fab包含CrossMAbVH-VL形式。
在一些实施方案中，具有1+1形式的本发明的双特异性抗体不包含CrossMAb技术，即，抗BCMA抗体和抗CD3抗体都不具有彼此替换的可变结构域VL和VH或恒定结构域CL和CH1。
示例性多特异性抗体
多特异性抗体的示例性实施方案在图1-3中示出并在下文描述。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab的一个Fc部分。抗BCMA Fab片段包含在表21中示出的氨基酸修饰。抗CD3Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。该实施方案在图1A中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含(a)轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链；和以及(b)在表21中示出的氨基酸修饰。该实施方案在图1B中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是三价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的两个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab的一个Fc部分。每个抗BCMA Fab片段包含在表21中示出的氨基酸修饰。抗CD3 Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。该实施方案在图2A中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是三价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的两个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含(a)轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链；和以及(b)在表21中示出的氨基酸修饰。该实施方案在图2B中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是三价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的两个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-BCMA Fab-CD3 Fab的一个Fc部分。每个抗BCMA Fab片段包含在表21中示出的氨基酸修饰。抗CD3 Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。该实施方案在图2C中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是三价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的两个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-BCMA Fab-CD3 Fab的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含(a)轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链；和以及(b)在表21中示出的氨基酸修饰。该实施方案在图2D中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式Fc-CD3 Fab-BCMA Fab的一个Fc部分。抗BCMA Fab片段包含在表21中示出的氨基酸修饰。抗CD3 Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。该实施方案在图3A中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式Fc-CD3 Fab-BCMA Fab和的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含(a)轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链；和以及(b)在表21中示出的氨基酸修饰。该实施方案在图3B中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式Fc-BCMA Fab-CD3 Fab的一个Fc部分。抗BCMA Fab片段包含在表21中示出的氨基酸修饰。抗CD3 Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。该实施方案在图3C中说明。
在一个实施方案中，根据本发明的双特异性抗体是二价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的一个Fab片段和根据形式Fc-BCMA Fab-CD3 Fab的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含(a)轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链；和以及(b)在表21中示出的氨基酸修饰。该实施方案在图3D中说明。
在一个实施方案中，在图2中说明的抗体另外包含在表19中示出的修饰。
在一方面，根据本发明的双特异性抗体是三价双特异性抗体，其包含抗CD3抗体的一个Fab片段、抗BCMA抗体的两个Fab片段和根据形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab的一个Fc部分。抗CD3 Fab片段包含轻链和重链，其中轻链是包含可变结构域VH和恒定结构域CL的交换轻链，并且其中重链是包含可变结构域VL和恒定结构域CH1的交换重链。每个抗BCMAFab片段包含轻链和重链，其中重链包含含有氨基酸修饰K147E和K213E (根据EU编号来编号)的CH1结构域，并且其中轻链包含含有氨基酸修饰E123R和Q124K (根据Kabat编号)(即，在表21中示出的修饰)的相应的CL结构域。Fc部分包含第一Fc链和第二Fc链，其中第一Fc链包含第一恒定结构域CH2和第一恒定结构域CH3，并且第二Fc链包含第二恒定结构域CH2和第二恒定结构域CH3。第一Fc链在Fc的N-末端结合第一抗BCMA Fab的C-末端，并且第二Fc链在Fc的N-末端结合抗CD3 Fab的C-末端。第一CH3结构域包含修饰T366S、L368A和Y407V (“洞修饰”)，并且第二CH3结构域包含修饰T366W (“结修饰”) (根据EU编号来编号)(即，在表19中示出的修饰)。另外，两个Fc链还包含修饰L234A、L235A和P329G，和任选的D356E和L358M (根据EU编号来编号)。任选地，第一CH3结构域还包含氨基酸修饰S354C，并且第二CH3结构域还包含氨基酸修饰Y349C (根据EU编号来编号)，使得在两个CH3结构域之间形成二硫桥。
药物组合物
根据本发明所述应用的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以作为药物组合物给予患者。因此，本发明还提供了药物组合物，其包含治疗有效剂量的本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和药学上可接受的赋形剂。
如本文所用，术语“药学上可接受的”是指由联邦或州政府的管理机构批准的，或在美国药典、欧洲药典或其它公认的药典中列出的用于动物，并且更特别地用于人的。
合适的赋形剂的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等中的一种或多种，以及它们的任何组合。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇或氯化钠。特别地，合适的赋形剂的相关实例包括：(1) Dulbecco磷酸盐缓冲盐水，pH约7.4，含有或不含约1 mg/mL至25 mg/mL人血清白蛋白，(2) 0.9%盐水(0.9% w/v氯化钠(NaCl))，和(3) 5% (w/v)葡萄糖；和还可以含有抗氧化剂(例如色胺)和稳定剂(例如Tween20®)。
本领域技术人员将理解，与治疗有效剂量的本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)一起使用的一种或多种赋形剂的适当选择将取决于药物组合物的期望的性质。
本发明的药物组合物或治疗有效剂量的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以通过任何适当的全身或局部给予途径给予患者。例如，给予可以是口服、口腔、舌下、眼、鼻内、气管内、肺、局部、经皮、泌尿生殖器、直肠、皮下、静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、颅内、鞘内、硬膜外、心室内或肿瘤内。在优选的实施方案中，口服给予药物组合物或细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。
可以以固定剂量给予细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)。在其中细胞因子抑制剂是伊贝度胺的实施方案中，以约0.03 mg至约6 mg之间、约0.1 mg至约4 mg之间、约0.3mg至约2 mg之间、或约1.0 mg至约1.6 mg之间，例如，约1.0 mg、约1.3 mg或约1.6 mg的固定剂量给予细胞因子抑制剂。在一些实施方案中，以约0.05 mg至约5 mg之间、约0.1 mg至约2 mg之间、约0.2 mg至约1.6 mg之间、或约0.3 mg至约1.0 mg之间，例如，约0.3 mg、约0.6 mg或约1.0 mg的固定剂量给予化合物1。
可以配制本发明的药物组合物用于通过任何适当的方式给予，例如通过表皮或透皮贴剂、软膏、洗剂、乳膏或凝胶；通过喷雾器、蒸发器或吸入器；通过注射或输注；或以胶囊、片剂、在水或非水性介质中的液体溶液或悬浮液、滴剂、栓剂、灌肠剂、喷雾剂或粉末的形式。在任何给定的情况下，最合适的给予途径将取决于患者的身体和精神状况、疾病的性质和严重性以及制剂的期望的性质。
在进一步的方面，本发明提供了试剂盒，其包含：
a) BCMA治疗剂(例如，特异性结合BCMA和促进一种或多种T细胞活化的抗原的多特异性抗体(例如，42-TCBcv))；和
b)包含化合物1的药物组合物，其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
组合疗法
在一些实施方案中，治疗包含作为组合疗法给予患者治疗有效剂量的本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中组合疗法包含给予治疗有效剂量的本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)和一种或多种另外的治疗剂。术语“组合疗法”是指包括将选择的治疗剂给予单个患者，并且旨在包括其中通过相同或不同的给予途径或在相同或不同的时间给予药剂的治疗。
在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂选自：
a)类固醇，例如皮质类固醇；
b)选自以下的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂：GM-CSF、IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体(IL-6R)、IFNy、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、ΜΙΡΙβ、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1、IL-1R1和IL-1Rα/IL-1β，其中拮抗剂选自抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
c) 减少调节性T细胞(Treg)群体的分子，例如，环磷酰胺；
d)退热剂、止痛剂和/或抗生素；和/或
e)癫痫发作预防剂，例如，左乙拉西坦。
如本文所用，“皮质类固醇”是指可以衍生自胆固醇并且特征在于氢化的环戊烷全氢菲环系的任何天然存在的或合成的类固醇激素。天然存在的皮质类固醇通常由肾上腺皮质产生。合成的皮质类固醇可以被卤化。活性所需的官能团包括Δ4处的双键、C3酮和C20酮。皮质类固醇可以具有糖皮质激素和/或盐皮质激素活性。示例性皮质类固醇的实例包括泼尼松龙、甲泼尼龙、泼尼松、曲安西龙、倍他米松、布地奈德和地塞米松。在一些实施方案中，皮质类固醇是地塞米松或甲泼尼龙。
细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂可以选自托珠单抗、司妥昔单抗、阿那白滞素、clazakizumab、sarilumab、olokizumab、elsilimomab、ALD518/BMS-945429、sirukumab(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、lenzilumab、FE301和FM101。在一些实施方案中，拮抗剂是抗IL-6R抗体，例如，托珠单抗。在一些实施方案中，拮抗剂是抗IL-6抗体，例如，司妥昔单抗。在一些实施方案中，拮抗剂是IL-1R1拮抗剂，例如，阿那白滞素。
在优选的实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包含托珠单抗。在备选优选的实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包含阿那白滞素。在一些实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包含托珠单抗和阿那白滞素。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者泊马度胺和托珠单抗和/或阿那白滞素。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者伊贝度胺和托珠单抗和/或阿那白滞素。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者来那度胺和托珠单抗和/或阿那白滞素。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者阿伐度胺和托珠单抗和/或阿那白滞素。
在一些实施方案中，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者治疗有效剂量的化合物1和托珠单抗和/或阿那白滞素，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
在优选的实施方案中，一种或多种另外的治疗剂包含地塞米松。本发明的细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)可以与地塞米松连续(之前或之后)或同时给予。在一些实施方案中，如果发生不良事件(例如，CRS或嗜中性粒细胞减少症)，则治疗可以进一步包含给予患者地塞米松。
可以以足以减弱由本文所述的T细胞衔接剂诱导的细胞因子(例如，IL-6)分泌的量给予地塞米松。在一些实施方案中，以每周约20 mg至约40 mg的剂量给予地塞米松。例如，可以将约40 mg/周地塞米松的剂量给予非老年受试者(例如，至多且包括75岁)，而可以将约20 mg/周地塞米松的剂量给予老年受试者(例如，超过75岁)或体重过轻的受试者。优选地，口服或静脉内给予地塞米松。在一些实施方案中，与细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)一起口服给予地塞米松。在一些实施方案中，在给予T细胞衔接剂(例如，BCMA治疗剂)的那天静脉内给予地塞米松。可以在给予T细胞衔接剂之后至少一个月(例如，在给予T细胞衔接剂之后两个月或优选三个月)给予地塞米松。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者伊贝度胺和地塞米松。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者化合物1和地塞米松。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者泊马度胺和地塞米松。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者来那度胺和地塞米松。
在一个方面，本发明提供了用于治疗或预防受试者的细胞因子释放综合征(CRS)的方法，所述方法包括给予受试者沙利度胺和地塞米松。
上述实施方案应理解为说明性示例。设想进一步的实施方案。应当理解，关于任何一个实施方案描述的任何特征可以单独使用，或者与描述的其它特征组合使用，并且还可以与任何其它实施方案的一个或多个特征组合使用，或者与任何其它实施方案的任何组合使用。此外，在不背离所附权利要求中限定的本发明的范围的情况下，也可以采用上面未描述的等同物和修改。
在本发明的上下文中，本文所述的抗体和方法的其它实例和变体对于本领域技术人员将是显而易见的。其它实施例和变体在如所附权利要求中所阐述的本发明的范围内。
本文引用的所有文献各自通过引用以其整体并入本文，包括在引用的文献中呈现的所有数据、表、图和文本。
表23A：抗体序列
Figure SMS_23
Figure SMS_24
Figure SMS_25
Figure SMS_26
Figure SMS_27
Figure SMS_28
Figure SMS_29
Figure SMS_30
附注：SEQ ID NO:20和SEQ ID NO:33是相同的；SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85是相同的。
表23B：抗BCMA序列(缩减名单)
Figure SMS_31
表24A：另外的构建体
Figure SMS_32
表24B：另外的/构建体
Figure SMS_33
实施例
实施例1：用来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺或化合物1治疗减少自分离的单核细胞的IL-6分泌
通过Ficoll细胞分离从四个健康人供体的血液中分离外周血单核细胞(PBMC)，然后通过阴性选择从这些PBMC中分离单核细胞。以1×106个细胞/ml的浓度接种富集的单核细胞，并与1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺或1 nM化合物1或对照DMSO(0.001%)孵育过夜(~17小时)，然后用各种浓度的LPS刺激用于IL-6分泌。
4小时后，将细胞培养物以300g离心5分钟以去除细胞，并使上清液经受MesoScale Discovery (MSD)分析以定量分泌的IL-6。
数据显示通过用来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺或化合物1预治疗减少LPS诱导的自单核细胞的IL-6分泌(参见图4)。
实施例2：通过一定浓度范围内的化合物1减少来自单核细胞的IL-6分泌
如实施例1中分离来自两个健康人供体的单核细胞。在此，用各种浓度的化合物1(1 nM、10 nM或100 nM)或对照DMSO (0.001%)处理分离的单核细胞(1×106个细胞/ml)过夜(~17小时)，然后用各种浓度的LPS刺激。
4小时后，加入5μg/ml尼日利亚菌素以活化炎性体1小时，收获上清液，并进行MSD分析以定量分泌的IL-6。
数据显示通过用1 nM、10 nM或100 nM化合物1预治疗减少LPS诱导的自单核细胞的IL-6分泌(参见图5)。
实施例3：用来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺或化合物1治疗减少自分离的巨噬细胞的IL-6分泌
通过Ficoll细胞分离从两个健康人供体的血液中分离外周血单核细胞(PBMC)，然后使用MACS C14磁性微珠通过阳性选择从这些PBMC中分离单核细胞。以3×105个细胞/mL的浓度接种分离的单核细胞，并与含有M-CSF (50ng/mL)的RPMI 1640培养基(2天后更换50%培养基)孵育4天，以获得幼稚巨噬细胞(M0)。在第4天结束时，将巨噬细胞与1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺、1 nM化合物1或对照DMSO (0.001%)孵育过夜(~17小时)，然后用各种浓度的LPS刺激用于IL-6分泌。
6小时后，将细胞培养物以300g离心5分钟以去除细胞，并使上清液经受MSD分析以定量分泌的IL-6。
数据显示通过用来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺或化合物1预治疗减少LPS诱导的自巨噬细胞的IL-6分泌(参见图6)。
实施例4：用某些IMiD化合物治疗减少LPS诱导的促炎细胞因子的分泌。
通过Ficoll细胞分离从健康人供体的血液中分离外周血单核细胞(PBMC)。以2×106个细胞/ml的浓度接种PBMC，并在37℃下用各种浓度的IMiD化合物或对照DMSO (0.25%)处理1小时，然后在37℃下用1 ng/ml LPS刺激18小时。
使上清液样品经受多重细胞因子分析(Luminex IS100仪器)，以定量IL-6、IL-8、IL1-β (IL-1β)、GM-CSF、MDC、MIP-1α (MIP-1α)、MIP-1β (MIP-1β)和TNF-α (TNF-α)的分泌水平(例如参见图7A-C)。
计算IC50 (半最大抑制浓度)值以测量每种IMiD化合物在抑制LPS-刺激的每种细胞因子分泌的效力(参见表25)。
数据显示通过用泊马度胺、来那度胺、阿伐度胺、伊贝度胺、化合物A或化合物B预治疗抑制LPS诱导的自PBMC的促炎细胞因子分泌。化合物A和B是具有以下结构的IMiD化合物和区域异构体：
Figure SMS_34
沙利度胺对IL-6、IL-8、IL-1β、GM-CSF、MDC、MIP-1α、MIP-1β和TNF-α分泌具有最小作用至没有作用。相反，沙利度胺衍生物抑制IL-6、IL-8、IL-1β、GM-CSF、MDC、MIP-1α和TNF-α的分泌，具有不同的效力。
表25：IMiD化合物的细胞因子抑制特性的总结
Figure SMS_35
实施例5：LPS诱导的自PBMC的IL-6、TNF-α和IL1-β的IMiD/CELMoD介导的抑制。
通过Ficoll基细胞分离从健康人志愿者的血液(血沉棕黄层)中分离新鲜的外周血单核细胞(PBMC)。以1×106个细胞/ml的浓度接种分离的PBMC，并用1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺、1 nM化合物1 (CC-92480)或对照DMSO处理过夜(~17小时)。第二天早晨，用各种浓度的LPS (来自大肠杆菌O111:B4的脂多糖)刺激PBMC。
24小时后，从对照和刺激的细胞收集细胞培养基，以300g离心5分钟以去除细胞，并使用MSD测定使上清液经受细胞因子分析，以定量IL-6、TNF-α (TNF-α)和IL1-β (IL-1β)的分泌水平(例如参见图8A-C)。
数据显示用来那度胺、泊马度胺、伊贝度胺或化合物1预治疗减少LPS诱导的自PBMC的IL-6、TNF-α和IL-1β分泌。因此，用IMiD/CELMoD预治疗可以用作单一药剂以靶向所有三种细胞因子，而不是各自靶向单一细胞因子的单独药剂(这是目前管理CRS的护理标准)。
实施例6：来自PBMC与表达BCMA的靶细胞的CC-93269诱导的IL-6的IMiD/CELMoD介导的抑制
通过Ficoll基细胞分离从健康人志愿者的血液(血沉棕黄层)中分离新鲜的PBMC。通过流式细胞术定量PBMC中CD3+T细胞(总)的百分比。以1.5×106个细胞/ml的浓度在12孔板中接种分离的PBMC，并用1 nM化合物1 (CC-92480)、1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺或对照DMSO处理过夜(~17小时)。
过夜孵育后，将靶K562-BCMA细胞(以非常高的水平过表达表面BCMA)或对照K562-MCB细胞(无BCMA表达)以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中。K562-BCMA和K562-MCB是衍生自慢性骨髓性白血病(CML)细胞系的同基因对。将CC-93269以各种浓度加入到共培养物中并孵育。CC-93269是抗BCMA抗CD3双特异性T细胞衔接抗体，并且在本文中也称为42-TCBcv。
在6、24和48小时孵育后，从所有样品收集细胞培养基，以300g离心5分钟以去除细胞，并使用MSD测定使上清液经受细胞因子分析，以定量IL-6的分泌水平。
图9A和B分别显示K562-BCMA和K562-MCB共培养物的化合物1预治疗的数据。K562-BCMA共培养物中的IL-6水平与CC-93269结合BCMA和CD3和随后的T细胞活化相关，而在K562-MCB共培养物中显示背景IL-6水平。
图10A显示K562-BCMA样品在24小时的IL-6水平，其中来自独立健康供体的PBMC用化合物1或对照DMSO预处理，并且CC-93269浓度高达10,000 ng/mL。该体外系统的线性范围在约100 ng/mL CC-93269时丧失，但数据显示，即使超过动态范围，在CC-93269浓度高达10,000 ng/mL时抑制IL-6分泌。
还收集了来自15个健康供体的PBMC的独立数据。如上所述，用化合物1或DMSO (对照)预处理PBMC，并加入靶细胞(K562-BCMA)和CC-93269。图10B显示相对于对照处理标准化的用化合物1预处理的PBMC在24小时的IL-6水平，其中对照设定为100%。总之，在所有测试的供体中，在10 ng/ml CC-93269时观察到IL-6水平的中值降低约两倍。圆圈指示独立的供体，而条形指示中值；不是所有供体都显示，因为对于底部~10%的IL-6浓度，低于200 pg/ml的数据截止值用于消除可能使结果偏离的小变化，并且增加结果的置信度。
图11显示在用1000 nM来那度胺、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺、1 nM化合物1(CC-92480)或对照DMSO预处理的靶K562-BCMA细胞和来自一个供体的PBMC的共培养物中在24小时的IL-6水平。对于来那度胺、泊马度胺和伊贝度胺预处理来自另外两个健康供体的PBMC，也观察到CC-93269介导的IL-6分泌的减少。数据显示用化合物1、来那度胺、泊马度胺或伊贝度胺预处理PBMC和表达BCMA的细胞(K562-BCMA)的共培养物导致减少/减弱与CC-93269活性相关的IL-6分泌。
值得注意的是，也在该体外模型中评估了与T细胞裂解活性和免疫活化相关的关键细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-2。使用MSD测定，如对于IL-6，定量孵育后6、24和48小时上清液中TNF-α、IFN-γ和IL-2的水平。图12A-B显示用化合物1 (CC-92480)预治疗在24小时加强来自PBMC与K562靶细胞的CC-93269诱导的TNF-α和IL-2分泌。IFN-γ不受用IMiD/CELMoD预治疗的影响(数据未显示)。
实施例7：来自PBMC与表达BCMA的靶细胞的CC-93269诱导的IL1-β的化合物1 (CC-92480)介导的抑制
通过Ficoll基细胞分离从健康人志愿者的血液(血沉棕黄层)中分离新鲜的PBMC。通过流式细胞术定量PBMC中CD3+T细胞(总)的百分比。以1.5×106个细胞/ml的浓度在12孔板中接种分离的PBMC，并用1 nM化合物1 (CC-92480)或对照DMSO处理过夜(~17小时)。过夜孵育后，将靶K562-BCMA细胞以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中，随后与各种浓度的CC-93269一起孵育。K562-BCMA是慢性骨髓性白血病(CML)细胞系，其以非常高的水平过表达表面BCMA。
在孵育后6、24和48小时，从所有样品收集细胞培养基，以300g离心5分钟以去除细胞，并使用MSD测定使上清液经受细胞因子分析，以定量IL1-β的分泌水平。
图13A显示用化合物1预处理PBMC和表达BCMA的细胞(K562-BCMA)的共培养物导致减少/减弱与CC-93269活性(即，结合BCMA和CD3和随后的T细胞活化)相关的IL1-β分泌。考虑到来自前述实施例的数据，预期其它IMID/CELMoD (例如来那度胺、泊马度胺和伊贝度胺)的行为与化合物1相似。
还收集了从15个健康供体收集的PBMC的独立数据。如上所述，用化合物1或DMSO(对照)预处理PBMC，并加入靶细胞(K562-BCMA)和CC-93269。图13B显示相对于对照处理标准化的用化合物1预处理的PBMC在24小时的IL1-β水平，其中对照设定为100%。总之，在所有测试的供体中，10 ng/ml CC-93269的IL1-β水平的中值降低十倍。
实施例8：来自PBMC与多发性骨髓瘤细胞的CC-93269诱导的IL-6的化合物1 (CC-92480)介导的抑制
通过Ficoll基细胞分离从人志愿者的血液(血沉棕黄层)中分离新鲜的PBMC。通过流式细胞术定量PBMC中CD3+T细胞(总)的百分比。以1.5×106个细胞/ml的浓度在12孔板中接种分离的PBMC，并用1 nM化合物1 (CC-92480)或对照DMSO处理过夜(~17小时)。过夜孵育后，洗涤细胞以去除CC-92480，然后将靶H929细胞以5:1的T细胞与靶细胞的比率加入到孔中。H929是多发性骨髓瘤细胞系，其表达中等水平的BCMA (为K562-BCMA的1/4)。
然后将共培养物与各种浓度的CC-93269一起孵育。在孵育后6、24和48小时，从所有样品收集细胞培养基，以300g离心5分钟以去除细胞，并使用MSD测定使上清液经受细胞因子分析，以定量IL-6的分泌水平。图14A-B显示来自两个独立健康供体的数据。
数据显示用化合物1预处理PBMC和多发性骨髓瘤细胞的共培养物导致减少/减弱与CC-93269活性(即，结合BCMA和CD3和随后的T细胞活化)相关的IL-6分泌。考虑到来自其它实施例的数据，预期其它IMID/CELMoD (例如来那度胺、泊马度胺和伊贝度胺)的行为与化合物1相似。
实施例9：IMiD/CELMoD体外增强CC-93269介导的MM细胞的T细胞杀死
为了评价Cereblon调节(CM)剂在长期刺激(即，模拟T细胞耗竭)后对T细胞功能的作用，在DMSO (对照)、100 nM泊马度胺、10 nM 伊贝度胺 (CC-220)或1 nM化合物1 (CC-92480)存在下，用抗CD3/CD28刺激富集CD3+的健康供体T细胞7天。T细胞的延长和重复抗CD3/CD28刺激导致体外功能性T细胞耗竭。
然后将长期刺激的T细胞用于CC-93269介导的细胞毒性测定(使用NCI-H929或OPM-2多发性骨髓瘤(MM)靶细胞)。洗涤T细胞以去除化合物，并在固定浓度的CC-93269 (47pM)存在下，以优化的效应细胞与靶(E:T)比率(1:2或1:4)与荧光标记的MM细胞系(NCI-H929、OPM-2)混合。来自相同供体的新鲜解冻的T细胞(即未耗尽的T细胞)用作对照效应细胞。在该实验性细胞毒性测定设置中，使用IncuCyte® S3 Live-Cell Analysis System连续监测靶细胞的数目，持续最少10天。在与MM靶细胞混合后3天，从随后的CC-93269介导的细胞毒性测定的孔中提取细胞培养上清液。对于每个MM细胞系，测试来自2或3个独立健康供体的CD3+T细胞。
NCI-H929 (图15A)和OPM-2细胞(图15B)两者作为MM靶细胞观察到的结果提示，在双特异性抗体引导的靶细胞杀死中，测试的CM试剂(泊马度胺、伊贝度胺或CC-92480)对T细胞的细胞溶解功能具有有益的作用。在DMSO (对照)存在下经历长期刺激的T细胞显示双特异性抗体诱导的细胞溶解活性(即功能性T细胞耗竭)的延迟丧失，其中MM靶细胞随时间再生长。相反，在CM试剂存在下已经历长期刺激的T细胞保持CC-93269诱导的细胞溶解活性，与新鲜解冻的T细胞介导的活性相当。因此，通过暴露于CM试剂防止由长期抗CD3/CD28刺激引起的T细胞耗竭，导致在随后的CC-93269测定中保持效应细胞的细胞溶解活性。
序列表
<110> 百时美施贵宝公司
<120> 治疗细胞因子相关的不良事件的方法
<130> ENG0024-WO
<150> EP20172322.8
<151> 2020-04-30
<160> 85
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 1
Thr Tyr Ala Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 2
Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 3
His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 14
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 4
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 5
Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 6
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val
1 5
<210> 7
<211> 125
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 7
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 8
<211> 109
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 8
Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser
20 25 30
Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Phe Arg Gly
35 40 45
Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn
85 90 95
Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 9
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 VH
<400> 9
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 VH
Mab22 VH
Mab42 VH
<400> 10
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 11
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 VL
<400> 11
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 12
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 VL, Mab27 VL, Mab33 VL, Mab39 VL
<400> 12
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Glu Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Glu His Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab22 VL
<400> 13
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ser Gly Ala Gly Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 14
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab42 VL
<400> 14
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asp Glu
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile His Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR1H
<400> 15
Ser Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 16
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR2H
<400> 16
Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 17
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR3H, Mab21 CDR3H, Mab22 CDR3H, Mab42 CDR3H, Mab 27 CDR3H,
Mab33 CDR3H, Mab39 CDR3H
<400> 17
Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr
1 5
<210> 18
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR1L
<400> 18
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR2L
<400> 19
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 20
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR3L, Mab21 CDR3L, Mab22 CDR3L, Mab42 CDR3L
<400> 20
Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro Asp Phe Thr
1 5 10
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 CDR1H
Mab22 CDR1H
Mab42 CDR1H
<400> 21
Asp Asn Ala Met Gly
1 5
<210> 22
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 CDR2H
Mab22 CDR2H
Mab42 CDR2H
<400> 22
Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 CDR1L
<400> 23
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Glu Tyr Tyr Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 24
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab21 CDR2L
<400> 24
Glu His Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab22 CDR1L
<400> 25
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab22 CDR2L
<400> 26
Gly Ala Gly Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 27
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab42 CDR1L
<400> 27
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asp Glu Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 28
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab42 CDR2L
<400> 28
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 CDR1H
<400> 29
Ser Ala Pro Met Gly
1 5
<210> 30
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 CDR2H
<400> 30
Ala Ile Ser Tyr Ile Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 CDR1L
Mab33 CDR1L
Mab39 CDR1L
<400> 31
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Glu Tyr Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 CDR2L
Mab33 CDR2L
Mab39 CDR2L
<400> 32
His Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 CDR3L
Mab33 CDR3L
Mab39 CDR3L
<400> 33
Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro Asp Phe Thr
1 5 10
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab33 CDR1H
<400> 34
Thr Asn Ala Met Gly
1 5
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab33 CDR2H
<400> 35
Ala Ile Asn Arg Phe Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 36
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab39 CDR1H
<400> 36
Gln Asn Ala Met Gly
1 5
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab39 CDR2H
<400> 37
Ala Ile Ser Pro Thr Gly Phe Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 38
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab27 VH
<400> 38
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ala
20 25 30
Pro Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Tyr Ile Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 39
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab33 VH
<400> 39
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Tyr Thr Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Asn Arg Phe Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab39 VH
<400> 40
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Gln Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Pro Thr Gly Phe Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 BCMA CH1, Mab21 BCMA CH1, Mab22 BCMA CH1, Mab42 BCMA CH1
<400> 41
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Glu Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Glu
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
100
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 BCMA CL, Mab21 BCMA CL, Mab22 BCMA CL, Mab42 BCMA CL
<400> 42
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg
1 5 10 15
Lys Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 43
<211> 103
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3 CH1
<400> 43
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
100
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3 CL
<400> 44
Ala Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 45
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10-TCBcv knob HC
<400> 45
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
225 230 235 240
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr
245 250 255
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro
260 265 270
Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
275 280 285
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
290 295 300
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
325 330 335
Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
340 345 350
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
355 360 365
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
370 375 380
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
385 390 395 400
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
405 410 415
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
420 425 430
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
435 440 445
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
450 455 460
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
465 470 475 480
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
485 490 495
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
500 505 510
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
515 520 525
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
530 535 540
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
545 550 555 560
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
565 570 575
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
580 585 590
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
595 600 605
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
610 615 620
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
625 630 635 640
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
645 650 655
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665 670
<210> 46
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10-TCBcv hole HC
<400> 46
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 47
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10-TCBcv LC
<400> 47
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 48
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3 LC
<400> 48
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Asp
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Val Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe
100 105 110
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 49
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-TCBcv knob HC
<400> 49
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
225 230 235 240
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr
245 250 255
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro
260 265 270
Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
275 280 285
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
290 295 300
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
325 330 335
Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
340 345 350
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
355 360 365
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
370 375 380
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
385 390 395 400
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
405 410 415
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
420 425 430
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
435 440 445
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
450 455 460
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
465 470 475 480
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
485 490 495
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
500 505 510
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
515 520 525
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
530 535 540
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
545 550 555 560
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
565 570 575
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
580 585 590
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
595 600 605
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
610 615 620
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
625 630 635 640
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
645 650 655
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665 670
<210> 50
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-TCBcv hole HC
<400> 50
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 51
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 21-TCBcv LC
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Glu Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Glu His Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 52
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-TCBcv knob HC
<400> 52
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
225 230 235 240
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr
245 250 255
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro
260 265 270
Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
275 280 285
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
290 295 300
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
325 330 335
Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
340 345 350
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
355 360 365
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
370 375 380
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
385 390 395 400
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
405 410 415
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
420 425 430
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
435 440 445
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
450 455 460
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
465 470 475 480
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
485 490 495
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
500 505 510
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
515 520 525
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
530 535 540
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
545 550 555 560
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
565 570 575
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
580 585 590
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
595 600 605
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
610 615 620
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
625 630 635 640
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
645 650 655
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665 670
<210> 53
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-TCBcv hole HC
<400> 53
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 54
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 22-TCBcv LC
<400> 54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Ser Gly Ala Gly Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 55
<211> 671
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 42-TCBcv knob HC
<400> 55
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Gly Gly Gly Gly
210 215 220
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu
225 230 235 240
Thr Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr
245 250 255
Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Glu Lys Pro
260 265 270
Gly Gln Ala Phe Arg Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro
275 280 285
Gly Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
290 295 300
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
305 310 315 320
Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
325 330 335
Thr Val Leu Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
340 345 350
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
355 360 365
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
370 375 380
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
385 390 395 400
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
405 410 415
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
420 425 430
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
435 440 445
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val
450 455 460
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
465 470 475 480
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
485 490 495
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
500 505 510
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
515 520 525
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
530 535 540
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
545 550 555 560
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
565 570 575
Pro Cys Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu
580 585 590
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
595 600 605
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
610 615 620
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
625 630 635 640
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
645 650 655
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
660 665 670
<210> 56
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 42-TCBcv hole HC
<400> 56
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Pro Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Glu Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Glu Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Gly Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Cys Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 57
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 42-TCBcv LC
<400> 57
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asp Glu
20 25 30
Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile His Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ala Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Tyr Pro Pro
85 90 95
Asp Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Arg Lys Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 58
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR1L
<400> 58
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 59
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 83A10 CDR2L
<400> 59
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 60
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab22 CDR1L
<400> 60
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Tyr Leu Ala Trp
1 5 10
<210> 61
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab22 CDR2L
<400> 61
Ser Gly Ala Gly Ser Arg Ala Thr
1 5
<210> 62
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab42 CDR1L
<400> 62
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Asp Glu Tyr Leu Ser Trp
1 5 10
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Mab42 CDR2L
<400> 63
His Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR1H?
<400> 64
Asp Tyr Ser Ile Asn
1 5
<210> 65
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR2H?
<400> 65
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR3H?
<400> 66
Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 67
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR1 L1?
<400> 67
Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile Gly Ala His Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR2? L1
<400> 68
Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR3 L1?
<400> 69
Leu Gln Ser Arg Ile Phe Pro Arg Thr
1 5
<210> 70
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR1 L2?
<400> 70
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr Gly Phe Ser Phe Met His
1 5 10 15
<210> 71
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR2 L2?
<400> 71
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR3 L2?
<400> 72
Gln Gln Ser Asn Lys Asp Pro Arg Thr
1 5
<210> 73
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR1 L3?
<400> 73
Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 74
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR2 L3?
<400> 74
Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
1 5
<210> 75
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
CDR3 L3?
<400> 75
Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr
1 5
<210> 76
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
VH?
<400> 76
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 77
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
VL1?
<400> 77
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 78
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
VL2?
<400> 78
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Phe Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Thr Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Asn
85 90 95
Lys Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 79
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C11D5.3
VL3?
<400> 79
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile
20 25 30
Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Ile Tyr Ser Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 80
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A7D12.2
VH
<400> 80
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met
35 40 45
Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 81
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> A7D12.2
VL
<400> 81
Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 82
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C12A32.2
VH
<400> 82
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Arg His Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Thr Glu Ser Gly Val Pro Ile Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asp Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys
85 90 95
Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Ala
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 83
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C12A32.2
VL
<400> 83
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 84
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C13F12.1
VH
<400> 84
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Thr Glu Thr Gly Glu Pro Leu Tyr Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Val Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Phe Phe Cys
85 90 95
Ser Asn Asp Tyr Leu Tyr Ser Cys Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 85
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> C13F12.1
VL
<400> 85
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (21)

1.用于治疗或预防受试者的细胞因子相关的不良事件或疾病的方法的细胞因子抑制剂，其中所述细胞因子抑制剂是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述应用的细胞因子抑制剂，其中所述细胞因子相关的不良事件或疾病是细胞因子释放综合征(CRS)。
3.根据权利要求1或2所述应用的细胞因子抑制剂，其中所述受试者已经接受或将接受已经引起或可能引起CRS的治疗剂。
4. 根据权利要求3所述应用的细胞因子抑制剂，其中所述治疗剂针对BCMA (“BCMA治疗剂”)。
5. 根据权利要求1所述应用的细胞因子抑制剂，其中所述细胞因子相关的不良事件或疾病是冠状病毒疾病2019 (COVID-19)或细胞因子介导的神经毒性。
6. 用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)以预防或减少所述受试者的CRS的发展的剂量给予所述受试者细胞因子抑制剂，其中所述细胞因子抑制剂是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
7. 用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐；和
b)在给予所述细胞因子抑制剂之后，给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起CRS。
8.根据权利要求7所述应用的BCMA治疗剂，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)在所述BCMA治疗剂之前约7天作为第一剂量给予。
9. 用于治疗受试者的与BCMA表达相关的病症的方法的BCMA治疗剂，其中所述方法包括：
a)给予所述受试者所述BCMA治疗剂，其中所述给予在所述受试者中可能引起或已经引起CRS；和
b)在给予所述BCMA治疗剂之后，给予所述受试者细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)，其中所述细胞因子抑制剂(例如，IL-6抑制剂)是泊马度胺、伊贝度胺、来那度胺、阿伐度胺或化合物1，并且其中化合物1是4-(4-(4-(((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)氧基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)-3-氟苄腈，或其对映异构体、对映异构体的混合物、互变异构体、同位素体或药学上可接受的盐。
10.根据权利要求9所述应用的BCMA治疗剂，其中在所述细胞因子抑制剂之前约7天作为第一剂量给予所述BCMA治疗剂。
11.根据权利要求6-10中任一项所述应用的BCMA治疗剂，其中所述受试者的与BCMA表达相关的病症是：多发性骨髓瘤，任选地其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤；慢性淋巴细胞性白血病；或非霍奇金淋巴瘤，任选地其中所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞性淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B-成淋巴细胞性淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
12.根据权利要求3或4所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求6-11中任一项所述应用的BCMA治疗剂，其中已经引起或可能引起CRS的所述治疗剂或所述BCMA治疗剂是T细胞衔接剂。
13.根据权利要求12所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求12所述应用的BCMA治疗剂，其中所述T细胞衔接剂是特异性结合癌抗原(例如，BCMA)和促进一种或多种T细胞活化的抗原的多特异性抗体，任选地其中促进一种或多种T细胞活化的所述抗原选自CD3、TCRα、TCRβ、TCRγ、TCRζ、ICOS、CD28、CD27、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、SLAM、CD2或CD226，优选其中促进一种或多种T细胞活化的所述抗原是CD3。
14. 根据权利要求13所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求13所述应用的BCMA治疗剂，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体，任选地其中所述双特异性抗体包含抗BCMA抗体的两个Fab片段、抗CD3抗体的一个Fab片段和一个Fc部分，并且所述双特异性抗体具有形式BCMA Fab-Fc-CD3 Fab-BCMA Fab。
15.根据权利要求12所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求12所述应用的BCMA治疗剂，其中所述T细胞衔接剂是针对癌抗原(例如，BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)，或表达至少一种针对癌抗原(例如，BCMA)的CAR的T细胞。
16.根据权利要求4或当从属于权利要求4时权利要求12-14中任一项所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求6-15中任一项所述应用的BCMA治疗剂，其中所述BCMA治疗剂包含选自以下的CDR1H、CDR2H、CDR3H、CDR1L、CDR2L和CDR3L区组合：
a) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQID NO:27的CDR1L区、SEQ ID NO:28的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:10的VH和SEQ ID NO:14的VL；
b) SEQ ID NO:21的CDR1H区、SEQ ID NO:22的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQID NO:25的CDR1L区、SEQ ID NO:26的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:10的VH和SEQ ID NO:13的VL；和
c) SEQ ID NO:15的CDR1H区、SEQ ID NO:16的CDR2H区、SEQ ID NO:17的CDR3H区、SEQID NO:18的CDR1L区、SEQ ID NO:19的CDR2L区和SEQ ID NO:20的CDR3L区，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:9的VH和SEQ ID NO:11的VL。
17. 根据权利要求13或14所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求13或14所述应用的BCMA治疗剂，其中所述多特异性抗体包含在SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56和两个拷贝的SEQ ID NO:57中示出的多肽的重链和轻链组。
18. 根据权利要求4或当从属于权利要求4时权利要求12-15中任一项所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求6-15中任一项所述应用的BCMA治疗剂，其中所述BCMA治疗剂包含VH和VL，所述VH包含SEQ ID NO:64的CDR1H、SEQ ID NO:65的CDR2H、SEQ ID NO:66的CDR3H，所述VL包含选自以下的CDR1L、CDR2L和CDR3L序列组：
a) SEQ ID NO:67的CDR1L、SEQ ID NO:68的CDR2L和SEQ ID NO:69的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:77的VL；
b) SEQ ID NO:70的CDR1L、SEQ ID NO:71的CDR2L和SEQ ID NO:72的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:78的VL；或者
c) SEQ ID NO:73的CDR1L、SEQ ID NO:74的CDR2L和SEQ ID NO:75的CDR3L，任选地其中所述BCMA治疗剂包含SEQ ID NO:76的VH和SEQ ID NO:79的VL。
19.根据权利要求3、4或12-18中任一项所述应用的细胞因子抑制剂或根据权利要求6-18中任一项所述应用的BCMA治疗剂，其中：
(a)在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之前(例如，之前12或24小时内)给予所述细胞因子抑制剂；
(b)在与给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)的同一天给予所述细胞因子抑制剂；
(c)在给予所述治疗剂(例如，BCMA治疗剂)之后(例如，之后12或24小时内)给予所述细胞因子抑制剂；或者
(d)在诊断CRS之后12小时内给予所述细胞因子抑制剂。
20.根据前述权利要求中任一项所述应用的细胞因子抑制剂或BCMA治疗剂，其中所述细胞因子抑制剂是促炎细胞因子抑制剂。
21.根据前述权利要求中任一项所述应用的细胞因子抑制剂或BCMA治疗剂，其中所述细胞因子相关的不良事件或疾病不是乳腺癌。
CN202180043896.XA 2020-04-30 2021-04-29 治疗细胞因子相关的不良事件的方法 Pending CN115803027A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20172322 2020-04-30
EP20172322.8 2020-04-30
PCT/US2021/029877 WO2021222552A1 (en) 2020-04-30 2021-04-29 Methods of treating cytokine-related adverse events

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115803027A true CN115803027A (zh) 2023-03-14

Family

ID=70482328

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180043896.XA Pending CN115803027A (zh) 2020-04-30 2021-04-29 治疗细胞因子相关的不良事件的方法

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20230172923A1 (zh)
EP (1) EP4142722A1 (zh)
JP (1) JP2023524068A (zh)
KR (1) KR20230007384A (zh)
CN (1) CN115803027A (zh)
AU (1) AU2021263408A1 (zh)
BR (1) BR112022020673A2 (zh)
CA (1) CA3180173A1 (zh)
IL (1) IL297716A (zh)
MX (1) MX2022013465A (zh)
WO (1) WO2021222552A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015329965A1 (en) 2014-10-09 2017-04-27 Engmab Sàrl Bispecific antibodies against CD3epsilon and ROR1

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US5948893A (en) 1996-01-17 1999-09-07 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Murine hybridoma and antibody binding to CD28 receptor secreted by the hybridoma and method of using the antibody
ES2246069T3 (es) 1997-05-02 2006-02-01 Genentech, Inc. Procedimiento de preparacion de anticuerpos multiespecificos que tienen componentes comunes y multimericos.
US20020142000A1 (en) 1999-01-15 2002-10-03 Digan Mary Ellen Anti-CD3 immunotoxins and therapeutic uses therefor
JP5620626B2 (ja) 2005-03-31 2014-11-05 中外製薬株式会社 会合制御によるポリペプチド製造方法
AR060070A1 (es) 2006-03-24 2008-05-21 Merck Patent Gmbh Dominios proteicos heterodimericos obtenidos por ingenieria
WO2007147901A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Novo Nordisk A/S Production of bispecific antibodies
SI2155783T1 (sl) 2007-04-03 2013-10-30 Amgen Research (Munich) Gmbh Medvrstno specifiäśna cd3-epsilon vezavna domena
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
PL2235064T3 (pl) 2008-01-07 2016-06-30 Amgen Inc Sposób otrzymywania cząsteczek przeciwciał z heterodimerycznymi fc z zastosowaniem kierujących efektów elektrostatycznych
ES2708124T3 (es) 2009-04-27 2019-04-08 Oncomed Pharm Inc Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas
DK2519543T3 (en) 2009-12-29 2016-09-26 Emergent Product Dev Seattle HETERODIMER BINDING PROTEINS AND USE THEREOF
PT3202460T (pt) 2010-02-11 2019-08-05 Celgene Corp Derivados arilmetoxi-indolina e composições que os compreendem e métodos para a sua utilização
US9527926B2 (en) 2010-05-14 2016-12-27 Rinat Neuroscience Corp. Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them
EP2635607B1 (en) 2010-11-05 2019-09-04 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
JP6326371B2 (ja) 2011-11-04 2018-05-16 ザイムワークス，インコーポレイテッド Ｆｃドメインにおける変異を有する安定なヘテロ二量体抗体デザイン
CA2859667C (en) 2011-12-20 2022-05-24 Medimmune, Llc Modified polypeptides for bispecific antibody scaffolds
CN114163530A (zh) 2012-04-20 2022-03-11 美勒斯公司 用于产生免疫球蛋白样分子的方法和手段
CN104797256A (zh) * 2012-09-10 2015-07-22 细胞基因公司 用于治疗局部晚期乳腺癌的方法
EP3670535A1 (en) 2015-08-03 2020-06-24 EngMab Sàrl Monoclonal antibodies against bcma
WO2019014100A1 (en) * 2017-07-10 2019-01-17 Celgene Corporation ANTIPROLIFERATIVE COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOF
EA202091974A1 (ru) * 2018-02-21 2020-12-08 Селджин Корпорейшн Связывающие bcma антитела и их применение
SG11202011545YA (en) 2018-05-23 2020-12-30 Celgene Corp Antiproliferative compounds and bispecific antibody against bcma and cd3 for combined use

Also Published As

Publication number Publication date
IL297716A (en) 2022-12-01
EP4142722A1 (en) 2023-03-08
KR20230007384A (ko) 2023-01-12
MX2022013465A (es) 2023-01-11
US20230172923A1 (en) 2023-06-08
AU2021263408A1 (en) 2022-10-27
CA3180173A1 (en) 2021-11-04
WO2021222552A1 (en) 2021-11-04
BR112022020673A2 (pt) 2023-01-24
JP2023524068A (ja) 2023-06-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7280828B2 (ja) Ｂｃｍａを標的とする抗体およびその使用
TWI718098B (zh) 三特異性結合分子及其使用方法
JP6703520B2 (ja) Ｃｄ３イプシロンおよびｂｃｍａに対する二特異性抗体
JP2019517539A (ja) 併用療法
JP2018501204A (ja) Ｔ細胞活性化二重特異性抗原結合分子ｃｄ３ ａｂｄ葉酸受容体１（ｆｏｌｒ１）及びｐｄ−１軸結合アンタゴニストの併用療法
JP2017535257A (ja) 免疫応答およびがん治療の増強に使用するための組成物および方法
JP7115758B2 (ja) Ｃｄ１６ａ指向性ｎｋ細胞エンゲージメント用タンデムダイアボディ
JP7384835B2 (ja) Ｃｄ３に特異的な抗体及びその使用
WO2021092060A1 (en) Methods of treatment
US20240052064A1 (en) Anti-bcma therapy in autoimmune disorders
CA3201518A1 (en) Bi-functional molecules
IL254335B (en) Isolated peptides derived from the dimerization regions of b7
US20230172923A1 (en) Methods of treating cytokine-related adverse events
US20230057602A1 (en) Methods of treatment with antibodies against bcma and cd3
WO2023221936A9 (zh) 双功能蛋白质及其制剂和用途
US20240034816A1 (en) NATURAL KILLER (NK) CELL ENGAGERS BINDING TO NKp46 AND BCMA VARIANTS WITH FC-ENGINEERING
TW202413419A (zh) 與ｎｋｐ４６和ｂｃｍａ變體結合之具有ｆｃ工程化的自然殺手（ｎｋ）細胞接合物
TW202404638A (zh) 抗ｔｓｐａｎ８－抗ｃｄ３雙特異性抗體之與ｐｄ－１訊息抑制劑之組合在癌治療的用途
TW202317624A (zh) 結合cldn18.2及cd3之雙特異性結合劑

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination