CN115786315A - 酰化酶、编码基因、工程菌，及在水解和合成n-脂肪酰谷氨酸型表面活性剂中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种酰化酶、编码基因、工程菌，及在水解和合成N‑脂肪酰谷氨酸型表面活性剂中的应用。该酰化酶是一种来源于假单胞菌的重组酰化酶，所述酰化酶的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，相应的氨基酸序列为SEQ IDNO.2所示。该酶能催化N‑月桂酰谷氨酸钠水解生成月桂酸和谷氨酸钠，也可以催化其逆反应，即催化月桂酸和谷氨酸钠合成N‑月桂酰谷氨酸钠。酶的氨基酸序列与报道的以N‑脂肪酰氨基酸为主要底物的酰化酶有较大的差异(同源性低)，是一种具有类似底物催化性能的新酰化酶。本发明在利用生物酶法水解和合成N‑月桂酰谷氨酸钠具有潜在的应用价值。

Description

酰化酶、编码基因、工程菌，及在水解和合成N-脂肪酰谷氨酸 型表面活性剂中的应用

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及来源假单胞菌的酰化酶、编码基因及在水解和合成N-脂肪酰谷氨酸型表面活性剂中的应用。

背景技术

N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂大量使用在化妆品、洗护用品上，目前该类表面活性剂的生产主要采用化学法，但化学法有污染大的缺点。用生物酶法合成该类表面活性剂是现阶段研究的热门。酶法合成具有反应条件温和，能耗低，污染小的优点，符合未来绿色合成的发展方向。酶法合成研究中最重要的就是生物催化剂酶的筛选。一般的研究均采用已知的脂肪酶制剂如Novozyme435、Lipozyme脂肪酶、南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)等来合成N-脂肪酰氨基酸。但是，这些酶是有限的，而且氨基酸表面活性剂的种类繁多，它们也不可能适用于所有的产品，所以筛选来源广泛、催化性能各异、底物特异性强的酶是当务之急。

有一些研究者采用酰化酶(或称酰胺水解酶，EC 3.5.1)来水解或合成N-酰基氨基酸。Kazuhiro Nakanishi课题组在链霉菌Streptomyces mobaraensis的基因组中挖掘出3个酰化酶基因，分别是Sm-PVA(Demin Zhang等，2007)、Sm-ELA(Mayuko Koreishi,RyokoKawasaki等，2009)和Sm-AA(Mayuko Koreishi,Yasuyuki Nakatani等，2009)。这三个酶的基因序列和催化功能均有所不同：Sm-PVA能催化水解各种N-脂肪酰-L-氨基酸，也能催化羧酸甲酯和氨基化合物合成相应的酰胺；Sm-ELA可以催化赖氨酸和月桂酸合成Nε-月桂酰-L-赖氨酸，是一种ε-赖氨酸酰化酶；Sm-AA可以催化水解N-中长短链酰基氨基酸。YasuakiTakakura等(2019)报道了一种来自伯克氏菌Burkholderia sp.的氨基酰化酶基因，该酶具有水解和合成各种N-酰基氨基酸的活性。胡丽云等(2021)公开了一项发明专利“一种重组酰胺水解酶及其应用”(CN 113481223A)，其酶可以催化N-月桂酰甘氨酸和N-月桂酰谷氨酸钠的水解，也可以催化N-月桂酰甘氨酸和N-月桂酰精氨酸的合成，但文中未说明酶的来源(如来自何种生物)。

本发明将公开一种新的酰化酶基因序列和它的功能，还将公开筛选该酶的方法。该筛选方法是利用微生物依靠特定营养物生长的特点，将特定的N-脂肪酰氨基酸表面活性剂作为唯一的碳氮源，首先筛选出能专一性水解和利用该底物的微生物，再从微生物的基因组中挖掘出相应的酰化酶基因。该酶能够催化水解特定的N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂，在一定的条件下，它也能催化水解的逆反应——即合成该表面活性剂。这个方法为筛选来源广泛、性能各异、底物专一性强的N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂的水解和合成的酶催化剂，提供了一条很好的途径。

发明内容

本发明提供一种酰化酶、编码基因、载体、工程菌及其在N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂中的应用，该酶能催化N-月桂酰谷氨酸钠水解生成月桂酸和谷氨酸钠，也可以催化其逆反应，即催化月桂酸和谷氨酸钠合成N-月桂酰谷氨酸钠。

本发明提供了一种酰化酶，氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示，具体如下：

MSQHPTIERLAASTEDFARIRRDLHQHPELGFEEARTSAIVAGYLREWGYEVHEGIGGTGVVGVLRQGNSARSIGIRADMDALPIDEASGVPYASQHAGRMHACGHDGHTAILLCAARDLAEQRLFDGTLNLIFQPAEETLGGAVAMMDDGLFERFPCDAVYALHNAPGLPVGCFLTREGALTASSDRVSIRLTGVGGHGAMPHLTKDPIVAAAELVLALQSIVARNVPSTEVGVVTVGMLKAGEAANVIPDHADLRLSVRATRPDVRELLKRRIGEITRGVAAVHGMELQYEYEELVPVLVNTPEETRLAREVLTELVGPQRLLSEIPSGFLGSEDFAWMLERRPGCYIALGNGNSGPSGCMVHNPGYDFNDAAIPFGAALWVRLVETFLGTGARA

或者还包括任何与SEQ ID NO.2所示氨基酸序列同源性在80％以上，且与其功能相同的氨基酸序列。

由于氨基酸序列的特殊性，任何含有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的多肽的片段或其变体，如其保守性变体、生物活性片段或衍生物，只要该多肽的片段或多肽变体与前述氨基酸序列同源性在80％以上，均属于本发明保护范围之列。具体的，所述改变可包括氨基酸序列中氨基酸的缺失、插入或替换；其中，对于变体的保守性改变，所替换的氨基酸具有与原氨基酸相似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸，变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。

本发明提供了一种所述酰化酶的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.1所示,具体如下：

ATGAGTCAGCACCCCACGATAGAAAGACTTGCGGCAAGCACCGAGGACTTCGCGCGGATTCGCCGGGACCTCCACCAGCATCCCGAACTGGGCTTCGAGGAGGCGCGCACCAGCGCCATCGTCGCCGGCTACCTGCGCGAATGGGGCTATGAAGTCCATGAGGGCATCGGTGGTACCGGCGTTGTCGGCGTACTGCGCCAGGGCAACAGCGCGCGCAGCATCGGCATTCGCGCCGACATGGATGCATTGCCCATCGACGAGGCCAGCGGTGTCCCCTACGCCAGCCAGCACGCCGGGCGCATGCACGCGTGCGGCCACGACGGCCATACCGCCATCCTGCTCTGTGCCGCACGCGACCTGGCCGAGCAGCGCCTCTTCGACGGTACCCTCAACCTGATCTTCCAGCCCGCCGAGGAAACCCTCGGCGGCGCCGTGGCGATGATGGACGATGGCCTGTTCGAGCGCTTCCCCTGCGATGCGGTGTACGCGCTGCACAATGCGCCGGGCCTGCCGGTCGGTTGCTTCCTGACCCGCGAGGGCGCGCTGACGGCATCCTCCGACCGCGTGTCGATCCGCCTGACCGGTGTCGGCGGTCATGGCGCCATGCCGCACCTGACCAAGGACCCGATTGTCGCCGCCGCCGAACTGGTACTGGCACTGCAAAGTATCGTCGCGCGCAATGTGCCGTCCACCGAAGTGGGCGTGGTGACGGTCGGCATGCTCAAGGCAGGGGAGGCGGCCAACGTCATTCCCGATCATGCCGACCTGCGCCTGAGCGTACGCGCTACCAGACCCGACGTGCGCGAGCTGCTCAAGCGGCGCATCGGCGAGATCACCCGTGGCGTTGCCGCGGTGCACGGCATGGAGCTGCAGTACGAATACGAGGAGCTGGTGCCGGTGCTGGTCAATACGCCGGAAGAAACCCGCCTCGCCCGCGAGGTACTGACCGAGCTGGTCGGTCCGCAGCGCCTCCTGTCCGAGATCCCTTCGGGCTTCCTCGGCAGCGAGGATTTCGCCTGGATGCTCGAGCGCCGCCCCGGCTGCTACATCGCCCTGGGCAACGGCAACAGCGGCCCCAGCGGCTGCATGGTCCACAATCCAGGCTACGACTTCAACGACGCCGCCATCCCCTTCGGCGCTGCCCTCTGGGTGCGACTGGTGGAAACCTTCCTGGGCACGGGAGCCAGAGCATGA

本发明提供了一种由所述酰化酶编码基因构建的载体。

本发明提供了一种由所述载体转化获得的基因工程菌。

进一步地，由所述酰化酶编码基因构建的载体(具体为Acy2-pET28a(+))，及由所述载体转化获得的基因工程菌(具体为Acy2-pET-28a(+)-E.coli BL21 Gold(DE3))。

本发明提供了所述酰化酶在催化N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂水解中的应用。

所述的N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂包括：N-癸酰谷氨酸钠、N-月桂酰谷氨酸钠、N-肉豆蔻酰谷氨酸钠、N-棕榈酰谷氨酸钠中的至少一种，优选N-月桂酰谷氨酸钠。

以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养得到的菌体破碎得到的粗酶液为催化剂，以N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂为底物，进行水解反应。

进一步地，以粗酶液为催化剂，以月桂酸和谷氨酸钠为底物，以pH7.0磷酸盐缓冲液和乙酸丁酯的混合液作为反应介质(乙酸丁酯：缓冲液＝80：20，v/v)构成反应体系，在40-60℃、200-300rpm条件下进行合成反应，反应获得含N-月桂酰谷氨酸钠的混合液。

本发明提供了所述酰化酶在催化月桂酸和谷氨酸钠合成N-月桂酰谷氨酸钠中的应用。

以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养得到的菌体破碎得到的粗酶液为催化剂，以月桂酸和谷氨酸钠为底物，进行合成反应，反应获得含N-月桂酰谷氨酸钠。

进一步地，以粗酶液为催化剂，以N-月桂酰谷氨酸钠为底物，以pH8.0的50mMTris-HCl缓冲液为反应介质构成反应体系，在35-40℃、150-200r/min条件下进行水解反应，反应产物是月桂酸和谷氨酸钠。

本发明以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用缓冲液悬浮，高压匀浆破碎、离心，取上清液即为粗酶液。

进一步，所述催化剂(粗酶液)按如下方法制备：将含重组酰化酶编码基因Acy2的工程菌Acy2-pET-28a(+)-E.coli BL21 Gold(DE3)接种在含卡那霉素50μg/mL的LB液体培养基中，37℃，180r/min培养至菌液OD₆₀₀约为0.5-0.8，添加IPTG至终浓度为0.6mmol/L，25℃、180r/min诱导培养10h，将菌液在4℃、8000r/min离心10min，弃上清液；取沉淀细胞即湿菌体悬浮于100mmol/L的pH8.0 Tris-HCl缓冲液中，菌体浓度1.5-3g/L(优选1.5g/L)，4℃下高压匀浆破碎，12000r/min离心20min，取上清液，获得粗酶液。

采用DNAMAN软件，将酰化酶Acy2(氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示)和在“背景技术”中提到的、已报道的5种酰化酶(主要底物均为N-酯酰氨基酸)，进行氨基酸序列比对，比对结果见图1。根据比对结果绘制了它们之间的进化树，见图2。

由图1和2知，酰化酶Acy2与上述已报道的5种作用于N-脂肪酰氨基酸的酰化酶的氨基酸序列同源性均很低。它与酶Sm-AA的同源性最高，也仅15％(而酶E-CN11(专利CN113481223A)与酶E-Burk(Yasuaki Takakura等，2019)的氨基酸序列同源性高达80％)。表明酰化酶Acy2是以N-脂肪酰氨基酸为底物的一种新酰化酶蛋白。

与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：

本发明提供的酰化酶基因Acy2在大肠杆菌中进行克隆和表达，表达的重组酶对水解N-月桂酰谷氨酸钠有高活性。用适量重组酶液催化水解N-月桂酰谷氨酸钠，浓度1g/L，反应10min，底物转化率为78.1％。该重组酶也能催化合成N-月桂酰谷氨酸，用适量重组酶液，两种底物月桂酸和谷氨酸钠的浓度分别是20mM和100mM，反应5h，底物月桂酸的转化率为13.4％。酶Acy2的氨基酸序列与报道的以N-脂肪酰氨基酸为主要底物的酰化酶有较大的差异(同源性低)，是一种具有类似底物催化性能的新酰化酶。该发明在利用生物酶法水解和合成N-月桂酰谷氨酸钠具有潜在的应用价值。

附图说明

图1：酰化酶Acy2与报道的5种酰化酶(主要底物均为N-脂肪酰氨基酸)的氨基酸序列比对；

图2：由图1的氨基酸序列比对结果建立的进化树；

图3：显微镜下菌株Pseudomonas sp.131菌种形态；

图4：菌株Pseudomonas sp.131的16S rDNA系统进化树；

图5：PCR扩增的酰化酶基因Acy2的DNA片段的琼脂糖电泳图；泳道1、2：目的基因；

图6：重组质粒的PCR验证；M：Marker；泳道1：Acy2-pET-28a(+)重组质粒；泳道2：基因Acy2扩增片段；泳道3：pET-28a(+)空质粒；

图7：重组菌Acy2-pET-28a(+)-E.coli BL21 Gold(DE3)表达产物的SDS-PAGE图；M：Marker；泳道1：有IPTG诱导；泳道2：无IPTG诱导；泳道3：酶Acy2；

图8：酰化酶粗酶液催化水解N-月桂酰谷氨酸的HPLC图；A反应0min，B反应10min。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步描述。

本发明所述重组酰化酶来源于假单胞菌(Pseudomonas sp.131)，由长沙普济生物科技股份有限公司在环境中筛选得到。

实施例1：菌种的筛选和鉴定

1、菌种的筛选

初筛：制作固体培养基，含底物N-月桂酰谷氨酸钠，倒平板。酰化酶可以将底物水解成月桂酸和谷氨酸，含酶的微生物分别把它们作为碳源和氮源生长，运用该法可快速筛选到有效菌株。具体操作为取100μL来自环境的菌液与900μL生理盐水(灭过菌，下同)混合进行倍比稀释，分别制成10^-4、10^-5、10^-6、10^-7不同稀释度的菌液涂布到含有N-月桂酰谷氨酸钠的固体培养基上，30℃培养2-4天后，观察平板上的生长情况。

固体培养基(g/L)：K₂HPO₄ 2.0，KH₂PO₄ 0.4，NaCl 0.1，MgSO₄·7H₂O 0.2，CaCl₂0.025，NH₄NO₃ 0.5，N-月桂酰谷氨酸钠1.0，琼脂20，115℃灭菌30min。

复筛：从初筛培养基上挑选生长良好的菌株接种到液体培养基上，30℃、200r/min摇床培养24h，取样进行高效液相色谱分析，选取对N-月桂酰谷氨酸钠水解效果好的菌株，于-80℃保存。

液体培养基(g/L)：NaCl 0.5，MgSO₄·7H₂O 1.0，K₂HPO₄ 1.0，NH₄ NO₃ 1.0，酵母粉5.0，甘油5.0，CaCl₂ 0.03，N-月桂酰谷氨酸钠1.0，115℃灭菌30min。

2、菌种的鉴定

形态鉴定：将筛选得到的菌株，接种到液体培养基，30℃培养24h，再将菌液稀释到适当的倍数涂布到固体培养基中，再30℃培养48h，光学显微镜观察菌株大小、形态，并取单菌落进行革兰氏染色(见图3)。将菌株送到某生物公司进行16S rDNA鉴定，并据此做出菌株的系统进化树(见图4)，图4表明它属于假单胞菌，命名为假单胞菌131(Pseudomonassp.131)。

实施例2：酰化酶基因的扩增和重组工程菌的构建

将菌株送某生物公司进行二代基因组测序，在注释的基因组中挖掘到一个酰化酶Acy2的基因，将该基因克隆到大肠杆菌中进行表达。

1、假单胞菌Pseudomonas sp.131基因组DNA的提取

将菌株接种于液体培养基中，30℃、200r/min摇床培养24h生成种子液，将种子液按体积浓度6％的接种量转接至液体培养基，30℃、200r/min摇床培养24h，获得菌体。依照DNA提取试剂盒的说明书，按步骤提取目标菌株的基因组DNA。

2、酰化酶基因Acy2的扩增和重组工程菌的构建

以假单胞菌Pseudomonas sp.131的基因组DNA为模板，设计特异性引物进行目标基因的扩增。设计的引物如下：

上游引物：5’-CGCGGATCCGAATTCGAGATGAGTCAGCACCCCACG-3’(见SEQ ID NO.3)，BamHⅠ

下游引物：5’-CGCAAGCTTGTCACACCACCACCACCACCACTGCTCTGGCTC-3’(见SEQ IDNO.4)，HindⅢ。

PCR体系(50μL)：

表1PCR体系

PCR反应参数：

PCR反应结束后，使用PCR产物纯化试剂盒清洗目的基因PCR产物：按照试剂盒说明书上的操作步骤操作，采用离心法回收PCR产物，同时将核酸产物进行琼脂糖凝胶电泳，检测目的条带，结果如图5所示。从图中可以看出，1000-1500bp有一个明显条带，无非特异性条带，与预期大小相符。回收目的片段，用限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ分别对目的片段、pET28a(+)进行双酶切，将酶切后的目的片段(核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示)和pET-28a(+)通过高效连接液连接，将连接产物转化到E.coli BL21Gold(DE3)宿主菌中，获得重组大肠杆菌Acy2-pET-28a(+)-E.coli BL21 Gold(DE3)。

将重组菌涂布于含50μg/mL卡那霉素的LB平板上，37℃恒温培养箱过夜培养。随机挑取几个平板上的单菌落，LB液体培养基(含50μg/mL卡那霉素)过夜富集培养。使用质粒DNA小量试剂盒提取重组质粒，双酶切，进行质粒PCR验证(见图6)，结果与预期相符。将重组质粒送样测序，测序结果表明，重组大肠杆菌构建成功。

实施例3：酰化酶的表达和粗酶液的获得

挑取实施例2保藏在平板上的重组大肠杆菌Acy2-pET-28a(+)-E.coli BL21 Gold(DE3)单菌落，接种于50ml含有50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，37℃，180r/min培养12h。以体积浓度1％接种量接种于50ml液体LB培养基(含50μg/mL卡那霉素)。37℃，180r/min恒温摇床培养3h，加入IPTG至终浓度为0.6mmol/L，25℃，180r/min诱导10h。分别取未诱导和诱导的重组菌胞内液(发酵液离心后取湿菌体，高压匀浆破碎后，离心取上清液)进行SDS-PAGE电泳分析，如图7可知，泳道1(诱导组)和泳道2(未诱导组)相比，在40-55KDa间有一个超表达蛋白条带，说明经IPTG诱导，重组大肠杆菌有目的蛋白表达，大小约为42kDa，与预期相符。

将含酰化酶编码基因的工程菌接种在含卡那霉素50μg/mL的LB液体培养基中，37℃，180r/min培养至菌液OD₆₀₀为0.5-0.8，添加IPTG至终浓度为0.6mmol/L，25℃、180r/min诱导培养10h，将菌液在4℃、8000r/min离心10min，弃上清液；取沉淀细胞即湿菌体悬浮于100mmol/L的pH8.0 Tris-HCl缓冲液中，菌体浓度1.5g/L，4℃下高压匀浆破碎，12000r/min离心20min，取上清液，获得粗酶液。

实施例4：酰化酶水解N-月桂酰谷氨酸钠及其它N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂

以N-月桂酰谷氨酸钠30mg为底物，以50mM Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)为反应介质，加入实施例3制备的粗酶液50μL，总反应体系30mL，37℃、180r/min下摇瓶中反应，反应过程中，分别在反应0、10min取样，样品在8000rpm离心5min，取上清液100μL与900μL流动相混合稀释，0.22μm有机膜过滤，采用HPLC检测反应液中底物和产物谷氨酸的浓度变化(如图8所示，A：反应0min；B：反应10min)。底物N-月桂酰谷氨酸钠(出峰时间14.2min)在初始10min内转化率是78.1％，它的平均水解速率为4.69g/L/h(即13.4mmol/L/h)。

高效液相色谱检测条件(光散射低温蒸发探测器)：色谱柱：125×2.1mm(

Altech，法国)C18；流动相A：甲醇/水/三氟乙酸(TFA，60/40/0.1，v/v/v)；流动相B：甲醇/TFA(100/0.07，v/v)；流速为：0.5mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。

梯度洗脱：开始用甲醇/水/TFA(60/40/0.1v/v/v)洗脱，6min后采用线性洗脱梯度达到甲醇/水/TFA(95/5/0.1v/v/v)。该甲醇浓度保持在13min内，然后在1min内降低到初始的甲醇/水/TFA(60/40/0.1v/v/v)，保持该甲醇浓度直到运行结束(35min)。

采用同样的方法测定酰化酶对其它几种常见的N-酯酰氨基酸表面活性剂的水解活性，结果见表2。

表2酰化酶对常见的N-酯酰氨基酸表面活性剂的水解活性

底物	相对活性(％)<sup>*</sup>
		N-癸酰谷氨酸钠	88.3
N-月桂酰谷氨酸钠	100
		N-肉豆蔻酰谷氨酸钠	93.6
N-棕榈酰谷氨酸钠	82.7
		N-月桂酰丙氨酸钠	3.6

^*在反应条件下(37℃，pH8.0)，以N-月桂酰谷氨酸钠的水解速率(mol/L/h为单位)为100％活性。

由表2知，酰化酶对C10-C16的中长链N-脂肪酰谷氨酸钠都有较大的水解活性，其中对C12(月桂酰)的活性最高。但酰化酶对N-月桂酰丙氨酸钠的水解活性很低，可能的原因是谷氨酸有γ-羧基，而酶与底物的结合中心可能有与γ-羧基特异性结合的氨基酸残基，但丙氨酸没有第2个羧基所以没法与该中心相应位置的氨基酸残基进行结合。这个结果表明，本发明的筛选方法能筛选出底物专一性较高的微生物酶。

实施例5：重组酶催化合成N-月桂酰谷氨酸钠

取实施例3方法制备的粗酶液50μL，加入乙酸丁酯和磷酸缓冲液(100mmol/L，pH7.0)的混合液(乙酸丁酯：缓冲液＝80:20，v/v)，谷氨酸钠100mM，月桂酸20mM，总反应体系30ml。40℃、200rpm摇床中反应5h，用实施例4中的HPLC法测得产物N-月桂酰谷氨酸钠的浓度0.938g/L(2.68mM)，它的平均合成速率为0.536mmol/L/h。月桂酸的转化率为13.4％。

Claims (10)

1.一种酰化酶，其特征在于，氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示；或者还包括任何与SEQID NO.2所示氨基酸序列同源性在80％以上，且与其功能相同的氨基酸序列。

2.一种权利要求1所述酰化酶的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

3.一种由权利要求2所述酰化酶编码基因构建的载体。

4.一种由权利要求3所述载体转化获得的基因工程菌。

5.权利要求1所述酰化酶在催化N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂水解中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂包括：N-癸酰谷氨酸钠、N-月桂酰谷氨酸钠、N-肉豆蔻酰谷氨酸钠、N-棕榈酰谷氨酸钠中的至少一种，优选N-月桂酰谷氨酸钠。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养得到的菌体破碎得到的粗酶液为催化剂，以N-脂肪酰氨基酸型表面活性剂为底物，进行水解反应。

8.权利要求1所述酰化酶在催化月桂酸和谷氨酸钠合成N-月桂酰谷氨酸钠中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养得到的菌体破碎得到的粗酶液为催化剂，以月桂酸和谷氨酸钠为底物，进行合成反应，反应获得含N-月桂酰谷氨酸钠。

10.如权利要求7或9所述的应用，其特征在于：以含酰化酶编码基因的工程菌经发酵培养获得的湿菌体用缓冲液悬浮，高压匀浆破碎、离心，取上清液即为粗酶液。

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