CN115777826A - 一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，是由含有当归与黄芪提取物以及常用辅料制备获得。所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：45～75份糖浆、40～70份砂糖、70～90份果汁、50～90份鱼胶液、5～15份柠檬汁、2～5份当归与黄芪提取物；所述鱼胶液是由5～15份鱼胶粉和45～75份果汁制备而成。本发明的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，使用形式新颖便携、接受度高、受众面广、易于推广。
Description
技术领域
本发明属于口香糖制备技术领域，具体地说，涉及一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖。
背景技术
随着学业压力日益增加，课后作业往往需要集中注意力数小时才能完成，期间时常倦意来袭。长期以来，发现这不仅降低学习效率也无形中延迟了休息时间，造成恶性循环。曾尝试过咖啡和茶水，虽然有一定的提神效果，但往往会导致失眠。此外，还需要时不时地去饮用，并不适用于需要晚上专注写作业的学生群体。
通过对中医药文献查阅，发现当归与黄芪不仅属于药食同源的食物，而且在家庭饮食的烹饪中也偶有添加，具有一定的抗疲劳、补血效果。
疲劳是机体在过度紧张、繁重或长时间体力、脑力下引起工作效率降低的一种常见现象([1]王静.乳酸在运动性中枢疲劳中的作用及机制研究,[D].中国人民解放军军事医学科学院.2005.10)。由于生活节奏的加快，疲劳已成为影响人们生活质量的重要因素。据统计，疲劳在人群中的发生率约为7％-45％([2]张勤,莫迎锐.运动性疲劳产生机制的综述[J].科技信息:科学·教研,2007(10):148.)，学生群体中发生率则更高。疲劳发生后如果不及时缓解，就会逐渐积累，最终导致机体的神经、内分泌及免疫系统调节失常，甚至会出现器质性病变，严重影响人们的身心健康([3]李晶,朱娜,郑飞,等.红参红景天混合物提取工艺及其抗疲劳作用[J].食品工业科技,2019,40(16):181-191.)。
所谓抗疲劳，就是延缓疲劳的产生或加速疲劳的消除。可缓解疲劳的功能性物质有很多，如营养素类：糖、蛋白质、氨基酸、维生素，又如生药类：人参、枸杞、螺旋藻、扇贝、鲫鱼。常见的抗疲劳产品形式以饮料为主，此外也有粉剂和片剂等补充形式。王金玺([4]王金玺,徐国华,马猛华,等.一种含虾青素的抗疲劳固体饮料及制备方法.公开号为：CN108308493A)利用虾青素制作出口感良好、色泽鲜红的抗疲劳固体饮料；张小凯以西洋参、银杏叶提取物为原料制备了一种抗疲劳粉剂，对缓解慢性疲劳综合症有明显的疗效；宁二娟([5]宁二娟,李聘聘,李自红,et al.一种含姜油的抗疲劳口含片及其制备方法，公开号为：CN108523130A)采用姜油、薄荷油、甘草和罗汉果等为原料，发明了一款口感清爽、香味浓郁的抗疲劳口含片。
中医药长期临床研究表明，许多药食同源中药对缓解和治疗疲劳展现出积极作用。当归([6]张孟之,管连城,陈雨佳,等.当归补血汤的研究进展[J].湖南中医杂志,2018.241-243.)为伞形科植物当归(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)的干燥根，主产陕西、甘肃东南部。黄芪([7]汪娟.黄芪的药理作用研究进展[J].医疗装备,2018,031(014):202-203.)(Astragaluspropinquus(Fisch.)Bge.)是豆科黄耆属植物的根，分布于俄罗斯和中国的东北、华北及西北。《内外伤辨惑论》曾记载名方当归补血汤：“治肌热，燥热，困渴引饮，目赤面红，昼夜不息，其脉洪大而虚，重按全无”。该方由黄芪和当归组成，其中黄芪味甘，性微温，为君药，其主要化学成分为皂苷类、黄酮类、多糖；当归味甘、辛，性温，为臣药，其主要化学成分为挥发油类、有机酸类、多糖，可缓解劳倦内伤、气弱血虚等症状([8]陈锋,张杰,沈敏,罗艳辉,易跃能.当归补血汤中毛蕊异黄酮葡萄糖苷及阿魏酸的含量测定[J].中国医药科学,2021,11(11):60-63.)。当归和黄芪作为药食同源的植物([9]李成福,李香兰,许青松,等.黄芪水提取液抗运动性疲劳作用的部分机制[J].中国现代医学杂志,2012,022(023):58-61.)，也常常以各种形式出现在中国家庭的餐桌上，如：当归土鸡汤、生姜当归羊肉粥、当归黄芪排骨汤等。
目前，含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖未见文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一方面提供了一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，是由含有当归与黄芪提取物以及常用辅料制备获得。
所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
45～75份糖浆、40～70份砂糖、70～90份果汁、50～90份鱼胶液、5～15份柠檬汁、2～5份当归与黄芪提取物；
所述鱼胶液是由5～15份鱼胶粉和45～75份果汁制备而成。
所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
75份糖浆、65份砂糖、80份果汁、70份鱼胶液、10份柠檬汁、2.5份当归与黄芪提取物。
所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
45份糖浆、40份砂糖、90份果汁、80份鱼胶液、15份柠檬汁、3份当归与黄芪提取物。
所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
65份糖浆、55份砂糖、70份果汁、60份鱼胶液、5份柠檬汁、2份当归与黄芪提取物。
所述鱼胶液是由10份鱼胶粉和60份果汁制备而成。
所述鱼胶液是由5份鱼胶粉和75份果汁制备而成。
所述鱼胶液是由15份鱼胶粉和45份果汁制备而成。
所述糖浆是百钻麦芽糖浆。
所述果汁选自菠萝汁、苹果汁、西瓜汁。
所述当归与黄芪提取物的制备方法包括以下步骤：将干燥的当归和黄芪粉碎，将质量比为1:5的当归和黄芪混匀；
方法一：以80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法二：以纯水为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法三：以纯水为提取液，料液比为1：30，煎煮40min，抽滤后取抽滤液；
将上述获得的抽滤液蒸发至干，获得所述当归与黄芪提取物。
所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖的制备方法包括以下步骤：
按照配比将果汁和鱼胶粉搅拌均匀，室温静置后隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体，获得鱼胶液；
按照配比将糖浆、砂糖、果汁混匀，温度为115～120℃的条件下加热5～15min，待液体冷却降温至65～75℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入柠檬汁和当归与黄芪提取物，将混合好的液体倒入口香糖模具，冷藏过夜，次日取出脱模，获得含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，使用形式新颖便携、接受度高、受众面广、易于推广。尤其非常适用于需要集中注意力作业的人群，如：学生、司机、高空工作者等群体。目前，有一些文献研究抗疲劳产品，大多以抗疲劳饮料为主要形式，辅以粉剂和片剂。以口香糖为载体的抗疲劳产品非常少，且没有研究做过以当归、黄芪提取物为活性成分的抗疲劳口香糖。
本发明的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，显著增强了抗疲劳产品的功能性。运用分子对接技术筛选出与受体匹配度高即抗疲劳活性好的关键成分，从而淘汰一些对接情况较差的化合物，缩小了活性成分寻找范围，使产品有较高的功效和较低的成本，尤其在生产规模较大时可以得以体现。
本发明通过Discovery Studio 3.0分子对接软件中的LibDock模块进行分子对接，选择对接分数较高的化合物组分进行提取；比较三种提取方法，综合提取物得率和纯度择一方法进行后续实验；设置空白组、阳性组、高剂量组、中剂量组、低剂量组共五组，通过探究提取物对小鼠体重、游泳时间、血清尿素氮和肝糖原的影响，来检测不同剂量提取物的抗疲劳效果；通过Morris水迷宫实验探究不同剂量提取物对小鼠认知和记忆能力的影响；最终选择合适的剂量制备抗疲劳口香糖；结果：分子对接确定了两类得分较高的组分：皂苷类、阿魏酸；确定目标物质提取方法：80％乙醇提取，料液比1：30，200W、50℃超声20min，两次提取后合并液抽滤，减压蒸发至干燥；高、中、低剂量组小鼠游泳时间与空白照组比，依次升高128.85％、70.57％、17.15％，其中高剂量组与空白组相比具有极显著性差异(P<0.001，***)；高、中、低剂量组小鼠血清尿素氮含量与空白组比，依次降低28.81％、25.74％、14.59％，高、中剂量组与空白组相比具有极显著差异(P<0.001，***)；高、中、低剂量组小鼠肝糖原含量与空白组比，依次升高103.14％、43.33％、28.38％，高剂量组与空白组相比具有极显著差异(P<0.001，***)；Morris水迷宫实验显示，低剂量组小鼠探索策略几乎全是趋向式，在固定时间内游泳的速度最快，为63.55cm/s；综合分析认为，当归与黄芪提取物能有效延迟小鼠疲劳出现时间、增强实验动物对负荷的适应力及提升小鼠肝糖原储备能力；此外，小鼠在具备较好的体能素养时，还可保持优异的学习能力。因此认为，以低剂量50mg/kg为参考制备的抗疲劳口香糖可在一定程度上缓解疲劳，且不会影响正常学习。
附图说明
图1是小鼠标记示意图。
图2是Morris水迷宫示意图。
图3是总皂苷浓度测定标准曲线示意图。
图4是阿魏酸浓度测定标准曲线示意图。
图5是血清尿素氮浓度检测标准曲线示意图。
图6是肝糖原浓度检测标准曲线示意图。
图7是各组小鼠典型的水迷宫轨迹图。
图8是熬糖的示意图。
图9是口香糖脱模后的示意图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
本发明实施例中选用的糖浆是百钻麦芽糖浆。
实施例1
一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖的制备方法包括以下步骤：
往60g果汁(菠萝汁)内加入10g鱼胶粉，搅拌均匀，室温静置10min。隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体。为防止鱼胶液体表面结皮，用保鲜膜覆盖待用。
将75g糖浆、65g砂糖、80g菠萝汁加入容器内，117℃加热10min。待液体冷却降温至70℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入10g柠檬汁和2.5g当归与黄芪提取物。将混合好的液体倒入口香糖模具，冰箱上层冷藏过夜，次日取出脱模。
所述当归与黄芪提取物的制备方法包括以下步骤：将干燥的当归和黄芪粉碎，将质量比为1:5的当归和黄芪混匀；
方法一：以80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法二：以纯水为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法三：以纯水为提取液，料液比为1：30，煎煮40min，抽滤后取抽滤液；
将上述获得的抽滤液蒸发至干，获得所述当归与黄芪提取物。
实施例2
一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖的制备方法包括以下步骤：
往75g菠萝汁内加入5g鱼胶粉，搅拌均匀，室温静置10min。隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体。为防止鱼胶液体表面结皮，用保鲜膜覆盖待用。
将45g糖浆、40g砂糖、90g菠萝汁加入容器内，117℃加热10min。待液体冷却降温至70℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入15g柠檬汁和3g当归与黄芪提取物。将混合好的液体倒入口香糖模具，冰箱上层冷藏过夜，次日取出脱模。
实施例3
一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖的制备方法包括以下步骤：
往45g菠萝汁内加入15g鱼胶粉，搅拌均匀，室温静置10min。隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体。为防止鱼胶液体表面结皮，用保鲜膜覆盖待用。
将65g糖浆、55g砂糖、70g菠萝汁加入容器内，117℃加热10min。待液体冷却降温至70℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入5g柠檬汁和2g当归与黄芪提取物。将混合好的液体倒入口香糖模具，冰箱上层冷藏过夜，次日取出脱模。
实施例4
1材料与方法
1.1实验材料与仪器
表1
表2
1.2实验方法
1.2.1分子对接技术筛选当归与黄芪抗疲劳活性成分
通过软件模拟受体和配体之间的对接过程，从而筛选出有效活性成分。
收集与抗疲劳相关的蛋白受体、配体：结合有关文献报道，收集与抗疲劳相关的蛋白受体，在蛋白质数据库(protein data bank，PDB)检索并下载PDB受体三维模型，对各个蛋白分子进行去除水分子、配体和补充残基处理，为对接做准备。
配体和受体分子对接：采用Discovery Studio 3.0(DS)分子对接软件中的LibDock模块进行对接。根据相关文献，共鉴定出22个化合物。将22个化合物的分子结构图导入DS软件，在“Small Molecules”菜单栏中点击“Prepare Ligands”，对所有化合物进行处理。
将处理好的配体小分子和几种蛋白受体分别应用“Receptor-LigandInteractions”模块进行分子对接，并修改相应的参数，对接结束后，进行结果分析。选取对接分数较高的组分进行提取。
1.2.2当归与黄芪提取物的制备
使用多功能粉碎机将干燥的当归和黄芪依次粉碎，各自密封备用。称取当归粉末5g、黄芪粉末25g(当归：黄芪＝1：5)混匀。
方法一：以80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法二：以纯水为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法三：以纯水为提取液，料液比为1：30，煎煮40min，抽滤后取抽滤液。
减压蒸发抽滤液至干，以300mL甲醇溶解旋干物，待测。采用差值法计算得出干燥提取物的质量。
总皂苷含量测定([11]龚盛昭,杨卓如,曾海宇.微波提取黄芪皂苷的工艺研究[J].中成药,2005,27(008):889-891.)：①标准品溶液的制备。精密称定齐墩果酸对照品5mg，加甲醇溶解置5mL容量瓶中，再加甲醇定容，摇匀，即得；②标准曲线的绘制。分别精密吸取0，60，120，180，240uL齐墩果酸对照品溶液，置于10mL试管中，70℃水浴加热，将溶剂挥干后向其中加入0.2mL浓度为5g/100mL的香草醛-冰醋酸溶液，而后加入0.8mL的高氯酸，摇匀后将其放于60℃的热水中保持15min后立即取出，冷却，加入4mL的乙酸乙酯溶液，摇匀后静置，以相应试剂为空白，在550nm处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线；③提取液中的总皂苷含量测定。将不同方式制备的待测液100μL在70℃水浴加热条件下挥发至干，按标准曲线制备方法测定吸光度，通过标准曲线计算浓度。
阿魏酸含量测定([12]阿来·海拉希.阿魏中阿魏酸的提取方法及抑菌作用研究[J].当代化工,2017,046(012):2454-2459.)：①标准品溶液的制备。称取阿魏酸标准品10mg，用质量分数75％乙醇定容至100mL，所得阿魏酸标准溶液的溶度为0.1mg/mL；②标准曲线的绘制。分别移取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0mL标准溶液至10mL容量瓶中，用质量分数75％乙醇定容，测定310nm处的吸光度。每个质量浓度做3次平行并取平均值，绘制标准曲线；③提取液中的阿魏酸含量测定：取不同方式制备的待测液10mL，按标准曲线制备方法测定吸光度，通过标准曲线计算浓度。
1.2.3抗疲劳作用研究
1.2.3.1供试动物分组及给药
(1)小鼠品种：ICR小鼠，雄性，4周龄；
(2)分组：空白对照组、阳性对照组、低剂量组(当归与黄芪提取物)、中剂量组(当归与黄芪提取物)、高剂量组(当归与黄芪提取物)，7只/组；
(3)称重、标记：称量小鼠体重后，使用黄色的苦味酸按顺序标记小鼠：1号-左前肢、2号-右前肢、3号-左后肢、4号-右后肢、5号-头部、6号-头部+左前肢、7号-头部+右前肢。图1是小鼠标记示意图。
(4)供试动物给药
空白对照组：300μL纯水阳性对照组：300μL红参提取液(1.75g/mL)
低剂量组：50mg/kg中剂量组：100mg/kg
高剂量组：200mg/kg(300μL，固定以皂苷含量为指标进行剂量计算)
在适应性饲养后，于每日上午9点定时、定量给药，持续7天。
1.2.3.2小鼠负重游泳实验
末次灌胃30min后，鼠尾根部负荷5％体重的铅块，将小鼠放入水中游泳，水深30cm，水温25±0.5℃，记录小鼠自游泳开始至沉入水底超过10s且放在平面上不能完成翻正反应的时间。
1.2.3.3血清尿素氮及肝糖原检测
小鼠负重游泳实验结束后，摘眼球采血，室温静置2h后离心(5000rpm，5min)取血清。使用试剂盒检测血清尿素氮含量：
①从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
②设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
③样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL(即样本稀释5倍)；空白孔不加；
④除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min；
⑤弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；
⑥每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
⑦每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔OD值；
⑧绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
脱颈处死小鼠后取肝脏，经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏0.1g，加入900μL生理盐水(1：9)，放入高通量组织研磨器匀浆(60Hz，60s)，随后离心(3000rpm，10min)，取上清备用。
使用试剂盒检测肝糖原含量：
①从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃；
②设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
③样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加；
④除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min；
⑤弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次；
⑥每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
⑦每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值；
⑧绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
1.2.4促进学习及记忆能力的作用研究—Morris水迷宫测试
Morris水迷宫([10]方松,余化霖.Morris水迷宫实验中海马相关空间学习记忆的研究进展[J].国际病理科学与临床杂志,2010,30(4):321-326.)(Morris water maze，MWM)实验是一种强迫实验动物游泳，学习寻找隐藏在水中平台的一种实验，主要用于测试实验动物的学习记忆能力。被广泛应用于学习记忆、老年痴呆、海马/外海马研究、智力与衰老、新药开发/筛选/评价等多个学科的科学研究和计算机辅助教学等领域。
1.2.4.1定位航行实验
第一阶段：即获得性训练，于每日灌胃2h后定时定点进行学习。共进行5天，每只小鼠每天进行3次训练，每天从不同象限轴将小鼠头朝池壁放入水中，放入位置随机取东、西、南、北四个起始位置之一。观察并记录小鼠找到水下平台的路程和时间(s)。在获得性训练中，若60s内小鼠找到站台，则记录小鼠找到站台所用的时间，并仍然保存小鼠在站台站立学习15s；如果这个时间超过60s，则引导动物到站台。让动物在平台上停留15s。此时潜伏期记录为60s，记录所有小鼠每天平均训练后的所有潜伏期。实验记录好后，将小鼠拿出水面，用毛巾擦拭、吹风吹干，放回鼠笼。图2是Morris水迷宫示意图。
1.2.4.2空间探索实验
第二阶段：通过训练学习小鼠获得了空间记忆能力，在末次测试航行后24个小时，撤除第四象限的平台，分别从第二象限将小鼠面向池壁放入水中，观察并记录60s内小鼠在目标象限(第四象限)中的航行时间及路程等。实验记录好后，将小鼠拿出水面，用毛巾擦拭、吹风吹干，放回鼠笼。
1.2.5抗疲劳口香糖的制备
往60g果汁(菠萝汁)内加入10g鱼胶粉，搅拌均匀，室温静置10min。隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体。为防止鱼胶液体表面结皮，用保鲜膜覆盖待用。
将75g糖浆、65g砂糖、80g菠萝汁加入容器内，117℃加热10min。待液体冷却降温至70℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入10g柠檬汁和2.5g当归与黄芪提取物。将混合好的液体倒入口香糖模具，冰箱上层冷藏过夜，次日取出脱模。
2结果与分析
2.1分子对接结果分析
通过全面文献检索，建立当归和黄芪中含有的有效抗疲劳活性成分的化合物库，作为分子对接配体选择依据，通过文献查阅确定分子对接的配体蛋白。
表3当归有效活性成分
表4黄芪有效活性成分
分子对接分数结果提示，皂苷类物质(110.4～136.077)和阿魏酸(92.071)具有较好的对接结果。因此选择黄芪皂苷(黄芪甲苷)、阿魏酸为目标物进行后续实验。
2.2当归与黄芪提取物制备
通过总皂苷浓度标准曲线(y＝15.042x+0.0215，R2＝0.9993)及阿魏酸浓度测定标准曲线(y＝72.486x-0.0041，R2＝0.9988)，采用紫外可见分光光度法在特定波长处测定样品吸光度值。每个样品重复三次，取均值。图3是总皂苷浓度测定标准曲线示意图，图4是阿魏酸浓度测定标准曲线示意图。根据标准曲线公式和样品吸光度计算三种提取方法制备的提取液中总皂苷和阿魏酸浓度、干重、提取率等。
表5不同提取方法提取液中总皂苷浓度
表6不同提取方法提取液中阿魏酸浓度
提取率为提取出来的物质所占全部原提取物的比例，纯度为目标物质占提取出的总物质的比例，提取率高纯度未必高。因此，在制备目标提取物时需要同时充分考虑提取率和纯度两个指标。方法一在目标提取物的提取率和纯度两方面均明显优于其它两种方法(表7)，因此选用方法一进行后续重复提取实验，即：80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液。
表7不同提取方法皂苷和阿魏酸提取率及纯度
2.3抗疲劳效果检测结果
通过血清尿素氮标准曲线(y＝0.043x+0.2717，R2＝0.9902)及肝糖原测定标准曲线(y＝0.0049x+0.2636，R2＝0.995)，并使用酶标仪在特定波长处测定样品吸光度值。每个样品重复三次，取均值。图5是血清尿素氮浓度检测标准曲线示意图。图6是肝糖原浓度检测标准曲线示意图。
小鼠负重游泳试验结果显示：随着当归和黄芪提取物剂量的增加，小鼠的负重游泳时间呈增加趋势，其中高剂量组能增加游泳时长，与空白对照组比较有统计学意义，具有极显著差异(P<0.001)；中剂量组与空白对照组比较，有显著性差异差异(P<0.01)；低剂量组与空白对照组比较，差异不显著。
各组小鼠血清尿素的测定结果显示：随着当归和黄芪提取物剂量的增加，小鼠的血清尿素水平呈下降趋势，特别是高剂量组和低剂量组能有效地降低小鼠运动后血清尿素含量，与空白对照组比较具有统计学意义，具有极显著差异(P<0.001)；低剂量组与对照组比较，具有显著差异(P<0.01)。
表8提取物对小鼠游泳时间、血清尿素氮及肝糖原含量影响
注：与空白对照组比较，***，P<0.001，具有极显著差异；**，P<0.01，具有显著差异；*，P<0.05，具有非显著差异。
小鼠肝糖原检测结果显示：随着当归和黄芪提取物剂量的增加，小鼠的肝脏糖原含量呈增加趋势，特别是高剂量组有效地增高小鼠运动后肝糖原含量，与空白对照组比较具有统计学意义，具有极显著差异(P<0.001)；中剂量组与空白对照组比较，有显著性差异差异(P<0.01)；低剂量组与对照组比较，具有非显著差异(P<0.05)，见表8。
表9提取物对小鼠体重影响
注：与空白对照组比较，***，P<0.001，具有极显著差异；**，P<0.01，具有显著差异；*，P<0.05，具有非显著差异。
通过对比各组小鼠初始体重和最终体重可知，提取物的持续灌胃对各组小鼠体重增重没有产生显著性差异(P值均大于0.05)，各组小鼠体重增长幅度保持在5.05g～8.82g范围间，见表9。因此，当归与黄芪提取物对小鼠体重差异性变化影响不大。
2.4Morris水迷宫实验结果
测试期间需保持实验室内灯光昏暗、环境安静、杜绝带入食物及饮料以避免气味对实验的干扰作用。
表10提取物对小鼠学习记忆能力的影响
图7是各组小鼠典型的水迷宫轨迹图。其中，A象限分布及站台位置、B空白组、C阳性组、D低剂量组、E中剂量组、F高剂量组。
搜索策略的类别是衡量动物分析判断能力和解决问题能力的指标。由图7中A可知水迷宫水池被均匀划分为四个象限，站台位于第四象限。图7中B为空白组小鼠水迷宫轨迹图代表，小鼠探索策略以随机式为主，偶有一次边缘式。说明小鼠并未学会寻找站台的方法；图7中C为阳性组小鼠水迷宫轨迹图代表，小鼠探索策略均为随机式。此组小鼠也未较好学会寻找站台的方法；图7中D为低剂量组小鼠水迷宫轨迹图代表，小鼠探索策略绝大多数以趋向式为主；说明此组小鼠能够对站台位置产生记忆，并有意识向站台趋近，且5次的穿台次数显著高于其它组别，见表10。图7中E为中剂量组小鼠水迷宫轨迹图代表，小鼠探索策略以随机式为主，说明此组小鼠未能掌握寻找站台的方法；图7中F为高剂量组小鼠水迷宫轨迹图代表，小鼠探索策略以边缘式为主，说明此组小鼠未能掌握寻找站台的方法，或推测该组小鼠产生不要去站台站立而是要在水迷宫中寻找出口的意识。
通过水迷宫每日的获得性训练，观测小鼠在给药过程中的认知行为学变化。从每日的潜伏时间趋势来看，大部分小鼠通过定时定点学习，可不同程度地缩短找到站台的时间，达到了学习的效果。但也有小鼠经过数日学习训练，一次也未登台。此外，还有小鼠登台后迅速一跃跳入水中，推测其可能体力亢奋暂不需要停驻休息。若水迷宫是一道题目，小鼠为学生，则可以说：大部分学生可通过日积月累的学习掌握解题的方法，通过考试验证低剂量组学习成果最优秀；极小部分学生完全没有读懂题目，即不知道水迷宫中有站台需要寻找、可以休息。
此外，通过水迷宫最后一天的测试可以知道，低剂量组小鼠在固定时间内跑的速度最快为63.55cm/s，不仅学习能力强，还拥有较好的体能素养。
因此，综合Morris水迷宫实验结果和抗疲劳实验的结果，计划选择低剂量为参考，进行抗疲劳口香糖的制作。
2.5抗疲劳口香糖的制备
通过准备鱼胶液、熬糖和添加香气成分及当归和黄芪提取物成分(50mg/kg，按照50kg计算)、浇筑和脱模等步骤，初步制备了一批抗疲劳口香糖。
往60g果汁(菠萝汁)内加入10g鱼胶粉，搅拌均匀，室温静置10min。隔水加热使得其融化至顺滑的水状液体。为防止鱼胶液体表面结皮，用保鲜膜覆盖待用。
将75g糖浆、65g砂糖、80g菠萝汁加入容器内，117℃加热10min。待液体冷却降温至70℃后倒入上述鱼胶液，搅拌均匀，加入10g柠檬汁和2.5g当归黄芪提取物。将混合好的液体倒入口香糖模具，冰箱上层冷藏过夜，次日取出脱模。
经鉴定，产品形态规整、表面无颗粒、提取物分布均匀、香气富裕不突兀。且此口香糖不含胶基，咀嚼一段时间后即可吞咽，不会产生垃圾破坏环境。图8是熬糖的示意图。图9是口香糖脱模后的示意图。
3结论与展望
本发明旨在将当归与黄芪提取物有机地结合在一起，开发一种具有抗疲劳效果的功能性口香糖。在此基础上，研究了其总皂苷及阿魏酸提取、抗疲劳活性、对学习记忆的影响。具体结论如下：
(1)采用Discovery Studio 3.0(DS)分子对接软件中的LibDock模块进行活性成分筛选，确定了两类得分较高的物质进行后续实验：皂苷类、阿魏酸。
(2)综合得率和纯度两方面因素，确定当归与黄芪混合粉末中目标物质的提取方法：80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液，减压蒸发至干燥。
(3)高、中、低剂量组小鼠游泳时长与空白组比较均有升高(依次升高128.85％、70.57％、17.15％)，高剂量组与空白组相比具有显著性差异，当归与黄芪提取物能延迟小鼠疲劳时间；高、中、低剂量组小鼠BUN含量与空白对照组比较均有降低(依次降低28.81％、25.74％、14.59％)，高、中剂量组与空白组对比具有极显著差异；高、中、低剂量组小鼠肝糖原含量与空白对照组比较均有升高(依次升高103.14％、43.33％、28.38％)，高剂量组与空白组对比具有极显著差异，当归与黄芪提取物能提升小鼠肝糖原储备能力。
(4)Morris水迷宫实验显示，低剂量组小鼠不仅探索策略几乎全是趋向式，拥有优异的学习能力，而且具备较好的体能素养，在固定时间内游泳的速度最快，为63.55cm/s。
现代生活节奏快，不论是学校的学生、公司的白领，还是工厂中的工人，亦或是其他从事脑力的劳动者，都常常将“累”字挂在嘴边。人体疲劳不仅仅对人的工作造成一定的影响，更对人体造成一定损害。解决或者缓解人体的体力疲劳，是并且一直是人们不懈追求的目标。
目前，人们对口香糖的认知从口味型向功能型方向转变([13]张苗,夏伟,宋雅楠,等.中药保健口香糖的研制[J].食品与发酵科技,2019,055(004):87-91.)，可通过添加具有抗疲劳功能的成分使产品富有一定功效同时，达到口味与功能的兼顾。因此开展抗疲劳口香糖的研究，具有极其重要的理论和现实意义。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (10)
1.一种含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，是由含有当归与黄芪提取物以及常用辅料制备获得。
2.根据权利要求1所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
45～75份糖浆、40～70份砂糖、70～90份果汁、50～90份鱼胶液、5～15份柠檬汁、2～5份当归与黄芪提取物；
所述鱼胶液是由5～15份鱼胶粉和45～75份果汁制备而成。
3.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
75份糖浆、65份砂糖、80份果汁、70份鱼胶液、10份柠檬汁、2.5份当归与黄芪提取物。
4.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
45份糖浆、40份砂糖、90份果汁、80份鱼胶液、15份柠檬汁、3份当归与黄芪提取物。
5.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖是由以下重量份的组分制成：
65份糖浆、55份砂糖、70份果汁、60份鱼胶液、5份柠檬汁、2份当归与黄芪提取物。
6.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述鱼胶液是由10份鱼胶粉和60份果汁制备而成。
7.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述鱼胶液是由5份鱼胶粉和75份果汁制备而成。
8.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述鱼胶液是由15份鱼胶粉和45份果汁制备而成。
9.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述果汁选自菠萝汁、苹果汁、西瓜汁。
10.根据权利要求2所述的含当归与黄芪提取物的抗疲劳口香糖，其特征在于，所述当归与黄芪提取物的制备方法包括以下步骤：将干燥的当归和黄芪粉碎，将质量比为1:5的当归和黄芪混匀；
方法一：以80％乙醇为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法二：以纯水为提取液，料液比为1：30，在200W、50℃的条件下超声20min，两次提取后合并提取液抽滤，取抽滤液；
方法三：以纯水为提取液，料液比为1：30，煎煮40min，抽滤后取抽滤液；
将上述获得的抽滤液蒸发至干，获得所述当归与黄芪提取物。
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2022
- 2022-11-14 CN CN202211418239.1A patent/CN115777826A/zh active Pending
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