CN115770238A

CN115770238A - 大麻素类化合物cbe的制备方法及其医药用途

Info

Publication number: CN115770238A
Application number: CN202111052504.4A
Authority: CN
Inventors: 吕久安; 赵海龙; 童卫民; 卢蕾
Original assignee: Beijing Honghui Meditech Co ltd
Current assignee: Beijing Honghui Meditech Co ltd
Priority date: 2021-09-08
Filing date: 2021-09-08
Publication date: 2023-03-10

Abstract

本发明提供了一种大麻素类化合物CBE的制备方法及其医药用途。其中，医药用途即提供了大麻素类化合物CBE在制备用于治疗受益于调节TRP通道作用相关的疾病的药物中的应用，TRP通道包括TRPA1通道、TRPV1通道和TRPM8通道，开拓了该大麻素类化合物在药物学领域的应用。

Description

大麻素类化合物CBE的制备方法及其医药用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体而言，涉及一种大麻素类化合物CBE的制备方法及其医药用途。

背景技术

大麻(Cannabis sativa)，又名山丝苗，线麻、胡麻、野麻、火麻，为桑科一年生草本植物。大麻常以种子入药，称“火麻仁”，现代药理研究表明大麻具有镇痛、降眼压、抗肿瘤、抗呕吐、安神、抗血栓、抗菌抗炎症等生物活性。在现代临床治疗中，大麻对慢性疼痛、青光眼、恶性神经胶质肿瘤、动脉粥样硬化、艾滋病消瘦综合征、癌症化学治疗及放射治疗后的不良反应等均有明显的治疗作用。

根据THC的含量，大麻可被分为两类：工业大麻(四氢大麻酚<0.3％，不显示精神活性)和娱乐大麻(四氢大麻酚>0.5％，具有明显的精神活性和滥用倾向)。而大麻二酚(CBD)则是工业大麻中提取的重要化合物，通常我们所说的工业大麻，多指的就是 CBD，它与影响精神状态的药物效力不相关，也不影响运动机能、记忆或体温。由于其良好的安全性和其不具有精神活性作用，可用于包括炎症、神经退行性疾病、癫痫病、自身免疫性疾病如多发性硬化症、关节炎、精神分裂症和癌症等。

桑科植物大麻含有数百种化学实体的次生代谢产物，主要有大麻素、黄酮、菧类、萜类、木质素和生物碱等成分，其中大麻素是大麻植物中特有的含有烷基的和单萜基团分子结构的一类次生代谢产物。目前已从大麻干物质及新鲜的大麻叶中分离出大麻素90多种，主要包括四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)、大麻环萜酚(CBC)、大麻酚(CBN)、大麻萜酚(CBG)、 CBE及其同系物THCV、CBDV、CBCV和CBGV，其中THC和CBD的含量最高，CBE的含量极低。

TRP通道即瞬时受体电位通道，涉及多种生理功能，范围从视觉、听觉、味觉的传导，伤害感受和温度感受，到肌肉收缩和血管舒缩控制等。此外，TRP通道是调节肠道蠕动、矿物质吸收、血液循环、膀胱和气道超敏反应、体液平衡，细胞生长和存活的主要参与者，这使得TRP家族成为许多主要疾病如心血管疾病、神经系统退行性疾病、疼痛、癌症等的重要治疗靶点。TRP通道在哺乳动物中有6个亚族，28个成员，其中TRPV1、 TRPA1、TRPM8是目前研究的热点。

瞬时受体电位通道蛋白(TRPA1)作为TRPs家族中的一类冷敏感离子通道，近年研究发现TRPA1在血管、肠道、胰腺及心肌组织中均有表达。激活TRPA1具有调节肠胃激素，如GLP-1、Ghrelin、5-HT和缩胆囊素等的分泌，可抑制肠胃排空，从而影响摄食，可能是其减肥作用的重要机制。通过激活胰腺β的TRPA1可促进胰岛素的分泌，另因其可促进GLP-1分泌，可能使其具有调节血糖稳态的作用。激活内皮细胞的TRPA1可通过促进NO的释放改善血管内皮依赖性舒张功能，其中包括神经源性机制和平滑肌机制。此外，作为冷通道，低温通过激活TRPA1可显著延长寿命。

TRPM8通道也是一种冷激活的通道，主要表达在背根和三叉神经节的体感神经元中，可以将被多种化学和物理刺激，比如薄荷醇、磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸(PIP2)和电压所激活，进而激活细胞信号参与各种各样的生理过程。目前已发现TRPM8作为薄荷醇诱导的急性和偏头痛的主要介质，发挥着至关重要的作用，使其成为冷相关疼痛、慢性疼痛和偏头痛的潜在治疗靶点。另外，TRPM8通道还参与了肠易激综合征、口咽吞咽困难(OD)和慢性咳嗽等过程，因此，TRPM8受体被认为是一个有价值的治疗靶点，可以用于开发相关靶向药物。另外，在癌症的治疗方面，以TRPM8通道为靶点的研究报道也有很多，其在前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌等方面表现出治疗前景。

Chem.Pharm.Bull.38(6)1697—1701(1990)报道了CBD在体内和体外的代谢过程，其代谢产物之一为CBE(Cannabielsoin)，但是无CBE活性相关报道。

J.Pharmacobio-Dyn.1988,11:833-838报道了CBE是CBD的体内代谢产物，在小鼠中评估了CBE对戊巴比妥诱发的睡眠和体温的影响，CBE都几乎未显示活性。

Jacs1974，96(23):7372上报道了CBE的合成方法，以CBD为原料，经过乙酰基保护，间氯过氧苯甲酸氧化，碱水解得到CBE，化学合成步骤较长，收率偏低，且间氯过氧苯甲酸有爆炸风险，且价格相对较贵。

现有技术CBE的合成方法步骤较长，收率偏低，氧化剂使用间氯过氧苯甲酸有一定的安全风险，价格也相对昂贵，且几乎无CBE相关药理活性报道。

发明内容

本发明旨在提供一种CBE的制备方法及其医药用途，以开拓该大麻素类化合物在药物学领域的应用。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了大麻素类化合物CBE在制备用于治疗受益于调节TRP通道作用相关的疾病的药物中的应用，TRP通道包括TRPA1通道、TRPV1 通道和TRPM8通道。

进一步地，应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPA1通道激活作用相关的疾病的药物中的应用；优选地，疾病包括肥胖、高血压、高血糖及衰老中的任意一种或多种。

进一步地，应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPM8通道抑制作用的疾病的药物中的应用。

进一步地，疾病包括慢性疼痛、偏头痛、肠易激综合征、口咽吞咽困难、慢性咳嗽和癌症中的任意一种或多种；优选地，癌症包括前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌。

进一步地，药物的给药方式为口服给药、注射给药或经皮给药；优选地，药物的剂型选自胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂；优选地，注射剂为静脉注射剂。

根据本申请的第二个方面，提供了一种药物，该药物包括有效量的大麻素类化合物CBE 及药学上可接受的辅料。

根据本申请的第三个方面，提供了大麻素类化合物CBE的制备方法，该制备方法包括：将大麻二酚溶解于有机溶剂和水的混合溶剂中，得到大麻二酚溶液；向大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，生成大麻素类化合物CBE。

进一步地，大麻二酚与混合溶剂的质量体积比为1g：5～10mL；优选地，混合溶剂中有机溶剂的体积占比为60％～70％；优选地，有机溶剂选自甲醇或乙醇；优选地，氧化剂选自重铬酸钠、重铬酸钾或30％双氧水；优选地，氧化剂中重铬酸钠或重铬酸钾与大麻二酚的质量比为0.35～0.4：1；优选地，氧化剂中30％双氧水与大麻二酚的体积与质量比为0.45～0.5ml：1g；优选地，转化反应的温度为70～80℃；优选地，转化反应的时间为20～30h，优选22～25h。

进一步地，向大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，生成大麻素类化合物CBE包括：向大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，得到转化产物粗品溶液；对该转化产物粗品溶液进行减压浓缩至干，得到粗品；对粗品进行提纯，得到大麻素类化合物CBE。

进一步地，对粗品进行提纯，得到大麻素类化合物CBE包括：采用硅胶柱层析的方法对粗品进行一次纯化，得到第一提纯产物；采用反向C18硅胶层析柱对第一提纯产物进行二次纯化，得到大麻素类化合物CBE；优选地，硅胶柱层析的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合液，更优选地，石油醚和乙酸乙酯的体积比为80:1～30:1；优选地，反向C18硅胶层析柱的洗脱液为乙腈与水的混合液，更优选地，乙腈与水的体积比为40：60得到大麻素类化合物CBE；优选地，硅胶柱层析的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合液，更优选地，石油醚和乙酸乙酯的体积比为80:1～30:1；优选地，反向C18硅胶层析柱的洗脱液为乙腈(ACN)与水的混合液，更优选地，ACN与水的体积比为40：60。

应用本发明的技术方案，将大麻二酚CBD在合适的氧化剂和温度条件下一步转化成大麻素类化合物CBE，并且发现其对TRPA1通道具有激活作用，而对TRPM8通道具有选择性抑制作用(对TRPV1通道无抑制作用)将其进一步开发为潜在的药物提供了理论依据和物质基础。

附图说明

构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1示出了实施例1中CBE的质谱图；

图2示出了实施例1中CBE的核磁共振氢谱；

具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。

针对现有技术中CBE的合成方法步骤较长，收率偏低，氧化剂使用间氯过氧苯甲酸有一定的安全性风险、价格相对昂贵，且几乎无CBE相关药理活性报道的状况，发明人对CBE进行了深入研究，并发现了一种简单方便、成本更低的合成方法，且通过药理实验发现，CBE对TRPA1通道和TRPM8通道具有活性作用，进而有望使CBE在制备治疗减肥、降血压、降血糖、抗衰老，以及治疗疼痛、慢性咳嗽和多种癌症等方面的药物制备中发挥作用。

在上述研究结果的基础上，申请人提出了本申请的技术方案。在第一种典型的实施方式中，提供了大麻素类化合物CBE在制备用于治疗调节TRP通道作用相关的疾病的药物中的应用，其中，TRP通道包括TRPA1通道、TRPV1通道和TRPM8通道。

根据本申请研究结果，CBE对TRPA1通道有激活作用，而对TRPM8通道具有选择性抑制作用，而对TRPV1通道几乎无作用，表明CBE在治疗受益于与调节相关通道作用的疾病的药物制备时，具备潜在的医药开发价值。

具体地，在一些优选实施例中，上述应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPA1通道激活作用相关的疾病的药物中的应用，优选地，相关疾病包括肥胖、高血压、高血糖及衰老中的任意一种或多种。

在一些优选实施例中，上述应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPM8通道抑制作用的疾病中的应用，优选相关疾病包括慢性疼痛、偏头痛、肠易激综合征、口咽吞咽困难、慢性咳嗽和癌症；更优选地，癌症包括前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌。

在一种优选实施例中，药物的给药方式为口服给药、注射给药或经皮给药；优选地，药物的剂型选自胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂；优选地，注射剂为静脉注射剂。

在第二种典型的实施方式中，提供了一种药物，该药物包括有效量的大麻素类化合物CBE 及药学上可接受的辅料。

此处的“有效量”包括治疗有效量和预防有效量。“治疗有效量”是指在必要的剂量和特定的持续时间下实现期望的治疗结果的有效量。药剂的治疗有效量可以根据多种因素而改变，例如个体的病状、年龄、性别、和体重，以及药剂在个体体内引起期望的反应的能力。治疗有效量也是治疗有益效果超过药剂的任何毒性或有害效果的量。“预防有效量”指在必要的剂量和时间期限内，有效实现所希望的预防结果的量。可以根据上述对治疗有效量的描述确定预防有效量。对于任何具体受试者，可以根据个体需要和施用人的职业判断随时间调节特定剂量。

辅料可以根据不同剂型或给药途径的不同而选择合适的现有的辅料即可。制备成药物时，除了有效成分CBE外，进一步需要药学上可接受的载体、赋形剂或佐剂等辅料。而且，该药物可以制成不同的剂型以适应多样化的给药途径，具体可适用的给药途径包括口服给药注射给药或经皮给药。而药物的剂型包括胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂等。

具体地，可以按照制药工业中已知的方法将本发明的药物制成片胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂等。优选地，注射剂为静脉注射剂。在制备适于口服给药的胶囊剂、片剂、口服液时，可以使用蔗糖、乳糖、半乳糖、玉米淀粉、明胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素等作为载体或赋形剂。另外，也可以使用制药工业中已知的方法和辅助成分将本发明的药物制成适于口服给药的溶液剂和悬浮剂。若制备适于胃肠道外途经给药的溶液剂和悬浮剂，可以使用蒸馏水、注射用水、等渗氯化钠或葡萄糖溶液，或者低浓度(例如1-100mm)磷酸缓冲液(PBS)作为载体或稀释剂。可以在这些胃肠道外给药的制剂中加入一种或多种其他辅助成分或添加剂，例如可使用抗坏血酸作为抗氧化剂，使用苯甲酸钠等作为防腐剂。在这些剂型的制剂中还可以含有其他的增溶剂、崩解剂、着色剂、分散剂或表面活性剂。

在第三种典型的实施方式中，提供了一种大麻素类化合物CBE的制备方法，该制备方法包括：将大麻二酚溶解(即完全溶解)于有机溶剂和水的混合溶剂中，得到大麻二酚溶液；向大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，生成大麻素类化合物CBE。

采用有机溶剂与水的混合液作为溶剂，有助于促进大麻二酚的溶解和后续加入氧化剂后的反应性。在60～80℃下进行转化反应既能够获得相对较高的反应速率和收率，且产物纯度也相对较高。更重要的是，本申请的CBE的合成方法简单且产率高。

上述大麻二酚与混合溶剂的质量体积比以能够完全溶解且利用后续反应为准，具体的比例数值可以根据不同需求合理优化调整得到。在一种优选实施例中，大麻二酚与混合溶剂的质量体积比为1g：5～10ml，在该比例下，具有溶解性和反应性均达到最优。

为了进一步提高大麻二酚在混合溶剂中的溶解速度和效率，在一种优选实施例中，混合溶剂中有机溶剂的体积占比为60％～70％(一般有机相比例过低不利于CBD溶解，比例过高不利于后续反应转化，在该优选范围内溶解性和反应性俱佳)；优选地，有机溶剂选自甲醇或乙醇，以及二者的混合溶剂；优选地，氧化剂选自重铬酸钠、重铬酸钾或30wt％双氧水；优选地，重铬酸钠或重铬酸钾与大麻二酚的质量比为0.35～0.4：1，30％双氧水与所述大麻二酚的体积与质量比为0.45～0.5ml：1g(合理比例的氧化剂有助于提高产物收率，同样质量的CBD 原料的情况下，氧化剂用量在该范围内，产物收率高，纯度高。氧化剂用量过多，由于氧化过度，可导致杂质增多，进而影响产物收率和纯度)。

上述转化反应中，转化的温度和时间可进一步根据氧化剂及CBD用量的不同而有所调整。优选地，转化反应的温度为70～80℃(在该温度下反应效率高，产物收率也高，且氧化程度适中，杂质少，产物纯度高。若温度更高，则氧化反应强烈，容易产生较多杂质而使得收率偏低)；优选地，转化反应的时间为20～30h，优选22～25h，同等反应条件下，反应时间长短对产物收率有影响，反应时间在20～30h内，收率相对较高。而在22～25h内，收率更高一些。

在一种优选实施例中，向大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，得到转化产物粗品溶液；对转化产物粗品溶液进行减压浓缩至干，得到粗品；对粗品进行提纯，得到大麻素类化合物CBE。

在一种优选实施例中，对粗品进行提纯，得到大麻素类化合物CBE包括：采用硅胶柱层析的方法对粗品进行一次纯化，得到第一提纯产物；采用反向C18硅胶层析柱对第一提纯产物进行二次纯化，得到大麻素类化合物CBE；优选地，硅胶柱层析的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合液，更优选地，石油醚和乙酸乙酯的体积比为80:1～30:1；优选地，反向C18硅胶层析柱的洗脱液为ACN(乙腈)与水的混合液，更优选地，ACN与水的体积比为40：60(等度洗脱)。在上述条件下提纯产物的纯度相对较高。

下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。

实施例1

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应25h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约12.5g产物，即CBE，纯度为99.2％。

MS：330，[M+H]⁺＝331。

¹H-NMR(600MHz，CDCl₃)，δ6.30-6.28ppm(s，2H)，δ5.38ppm(s，1H)，δ5.08-5.04ppm(d， 2H)，δ4.12-4.11ppm(d，1H)，δ3.35-3.32ppm(dd，1H)，δ2.50-2.48ppm(m，2H)，δ1.90-1.83ppm(m， 4H)，δ1.72～1.70(t，3H)，δ1.60～1.50ppm(m，5H)，δ1.48ppm(t，3H)，δ1.34-1.25ppm(m，5H)，δ0.89-0.87ppm(t，3H)。

CBE的质谱见附图1，核磁共振氢谱见附图2。

实施例2

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的乙醇水溶液中，加入10mL双氧水(30％)，于70℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约12.0g 产物，即CBE，经质谱分析纯度为99.4％。

实施例3

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钠，于60℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约8.4g产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.5％。

实施例4

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钠，于90℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约6.2g产物，即CBE，经质谱分析纯度为96.1％。

实施例5

将20g大麻二酚CBD溶于100ml 85％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约4.5g产物，即CBE，经质谱分析纯度为97.3％。

实施例6

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入7g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约11.9g产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.8％。

实施例7

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 70％的甲醇水溶液中，加入6g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应24h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约8.5g产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.5％。

实施例8

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 70％的甲醇水溶液中，加入9g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应22h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约2.3g产物，即CBE，经质谱分析纯度为94.2％。

实施例9

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 70％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钠，于80℃下搅拌反应20h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约10.3g产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.6％。

实施例10

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 70％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钾，于80℃下搅拌反应22h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约11.8g产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.8％。

实施例11

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入8g重铬酸钾，于80℃下搅拌反应30h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约9.8g产物，即CBE，经质谱分析纯度为96.2％。

实施例12

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入10ml 30％双氧水，于80℃下搅拌反应23h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约11.6g 产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.7％。

实施例13

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入9ml 30％双氧水，于80℃下搅拌反应23h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约11.8g 产物，即CBE，经质谱分析纯度为98.2％。

实施例14

将20g大麻二酚CBD溶于200ml 60％的甲醇水溶液中，加入11ml 30％双氧水，于80℃下搅拌反应23h。反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到约8.8g 产物，即CBE，经质谱分析纯度为97.5％。

实施例15

将CBD 20g分别溶于200ml 60％的如下有机溶剂的水溶液中：甲醇、异丙醇、乙腈，待 CBD完全溶解后，加入8g重铬酸钠，置于80℃下搅拌反应24h，减反应液浓缩后经硅胶柱层析(PE:EA＝80:1～30:1梯度洗脱)分离纯化，洗脱液浓缩后，再经C18硅胶柱层析分离(ACN:H₂O＝40:60)，洗脱液浓缩至干，即可得到产物CBE。不同溶剂下的产物CBE的产量和质谱分析的纯度结果见下表：

表1：

有机溶剂	产量(g)	纯度(％)
			甲醇	12.2g	99.1％
异丙醇	产物少，杂质过多，无分离价值	--
			乙腈	4.5g	97.2％

实施例11

(一)试验材料

供试品：实施例1的CBE，自制品，纯度99.2％。

阳性对照品：肉桂醛(纯度98％)、钌红Ruthenium Red(纯度100％)、辣椒素(纯度100％)、辣椒平(纯度99.3％)、薄荷醇(纯度97％)、2-APB(纯度约100％)。

(二)膜片钳检测大麻素A对TRPV1、TRPA1、TRPM8的作用

1)TRPA1

全细胞膜片钳记录全细胞TRPA1电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mV。记录电压由0mV阶跃至-100mV维持1ms，然后给予300ms Ramp刺激至100mV。每隔5s重复采集数据，观察药物对TRPA1电流的作用。试验数据由EPC-10放大器(HEKA)进行采集并储存于PatchMaster(HEKA)软件中。

2)TRPV1

全细胞膜片钳记录全细胞TRPV1电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于0mV。记录电压由0mV阶跃至-100mV维持1ms，然后给予300ms Ramp刺激至100mV。每隔5s重复采集数据，观察药物对TRPV1电流的作用。试验数据由EPC-10放大器(HEKA Electronics)进行采集并储存于Patch Master(HEKA Electronics)软件中。

3)TRPM8

全细胞膜片钳记录全细胞TRPM8电流的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后细胞膜电压钳制于-80mV。记录电压由0mV阶跃至-100mV，给予500ms Ramp刺激至100mV。每隔5s重复采集数据，观察药物对TRPM8电流的作用。试验数据由EPC-10放大器(HEKAElectronics)进行采集并储存于Patch Master(HEKA Electronics)软件中。

用微电极拉制仪将毛细玻璃管拉制成记录电极。在倒置显微镜下操纵微电极操纵仪将记录电极接触到细胞上，给予负压抽吸，形成GΩ封接。形成GΩ封接后进行快速电容补偿，然后继续给予负压，吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。

将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微镜中的记录浴槽中，测试化合物工作液以及不含化合物的外液利用重力灌流的方法流经记录浴槽从而作用于细胞，在记录中利用真空泵进行液体交换。独立重复检测三个细胞。所有电生理试验在室温下进行。

在三次独立重复试验中检测CBE对TRPA1，TRPV1和TRPM8通道的激动作用与抑制作用。试验结果总结如下：

表2：

CBE对TRPA1电流及阳性对照品钌红对TRPV1电流的作用结果

从上表可知，CBE对TRPA1通道产生激动作用。

表3：

CBE对TRPV1电流及阳性对照品辣椒平(Capsazepine)对TRPV1电流的作用结果

从上表可知，CBE与阳性对照比较，几乎未显示抑制作用。

表4：

CBE对TRPM8电流的抑制作用及阳性对照品2-APB对TRPM8电流的抑制结果

从上表可知，CBE与阳性对照比较显示出了更强的抑制作用，完全阻断了TRPM8离子通道。

需要说明的是，本申请尽管仅采用了实施例1所制备的纯度为99.2％的CBE进行上述药理学实验，但这并不排除其余实施例所制备的纯度相当或稍微低些的CBE同样具有上述药理学实验。因为纯度低的CBE还可以利用现有技术的其他纯化手段(比如制备色谱、重结晶等) 进一步提升。此外，按照行业惯例，药理实验样品纯度一般在95％以上即可满足要求。

从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：

1、与现有技术报道的CBE的化学合成方法，合成步骤较长，收率偏低，氧化剂使用间氯过氧苯甲酸价格相对昂贵相比，本发明将大麻二酚CBD在常见氧化剂下一步即可转化成CBE，方法简单，操作方便，成本更低。

2、在现有技术中几乎未见CBE的任何药理活性的报道的基础上，本发明发现了CBE对 TRPA1通道和TRPM8通道的活性作用，进而有望使CBE在减肥、降血压、降血糖、抗衰老，以及治疗疼痛、慢性咳嗽和多种癌症等方面发挥作用。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.大麻素类化合物CBE在制备用于治疗受益于调节TRP通道作用相关的疾病的药物中的应用，其特征在于，所述TRP通道包括TRPA1通道、TRPV1通道和TRPM8通道。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPA1通道激活作用相关的疾病的药物中的应用；

优选地，所述疾病包括肥胖、高血压、高血糖及衰老中的任意一种或多种。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用为CBE在制备用于治疗受益于TRPM8通道抑制作用的疾病的药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述疾病包括慢性疼痛、偏头痛、肠易激综合征、口咽吞咽困难、慢性咳嗽和癌症中的任意一种或多种；

优选地，所述癌症包括前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、肺癌和皮肤癌。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的应用，其特征在于，所述药物的给药方式为口服给药、注射给药或经皮给药；

优选地，所述药物的剂型选自胶囊、片剂、口服液、注射剂或透皮吸收剂；

优选地，所述注射剂为静脉注射剂。

6.一种药物，其特征在于，所述药物包括有效量的大麻素类化合物CBE及药学上可接受的辅料。

7.大麻素类化合物CBE的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：

将大麻二酚溶解于有机溶剂和水的混合溶剂中，得到大麻二酚溶液；

向所述大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，生成所述大麻素类化合物CBE。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述大麻二酚与所述混合溶剂的质量体积比为1g：5～10mL；

优选地，所述混合溶剂中所述有机溶剂的体积占比为60％～70％；

优选地，所述有机溶剂选自甲醇或乙醇；

优选地，所述氧化剂选自重铬酸钠、重铬酸钾或30％双氧水；

优选地，所述氧化剂中重铬酸钠或重铬酸钾与所述大麻二酚的质量比为0.35～0.4：1；

优选地，所述氧化剂中30％双氧水与所述大麻二酚的体积与质量比为0.45～0.5ml：1g；

优选地，所述转化反应的温度为70～80℃；

优选地，所述转化反应的时间为20～30h，优选22～25h。

9.根据权利要求7或8所述的制备方法，其特征在于，向所述大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，生成所述大麻素类化合物CBE包括：

向所述大麻二酚溶液中加入氧化剂，并置于60～80℃下进行转化反应，得到转化产物粗品溶液；

对所述转化产物粗品溶液进行减压浓缩至干，得到粗品；

对所述粗品进行提纯，得到所述大麻素类化合物CBE。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，对所述粗品进行提纯，得到所述大麻素类化合物CBE包括：

采用硅胶柱层析的方法对所述粗品进行一次纯化，得到第一提纯产物；

采用反向C18层析柱对所述第一提纯产物进行二次纯化，得到所述大麻素类化合物CBE；

优选地，所述硅胶柱层析的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合液，更优选地，所述石油醚和乙酸乙酯的体积比为80:1～30:1；

优选地，所述反向C18层析柱的洗脱液为乙腈与水的混合液，更优选地，所述乙腈与水的体积比为40：60。