CN115747279A - 一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，包括将大分子或中等分子透明质酸钠原料在水蛭型透明质酸酶的存在下进行酶解反应，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物；然后采用截留分子量为25KD‑35KD的纳滤滤膜过滤，只需要一步低温纳滤工艺，无需再次过滤除菌和活性炭吸附，滤液直接喷雾干燥，得到动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da的透明质酸钠寡糖组合物精品。本发明相对现有技术，可以得到透明质酸钠寡糖含量≥95.0％，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；溶液透光度≥99.0％；细菌总数＜100CFU/g，其中霉菌和酵母菌＜50CFU/g透明质酸钠寡糖组合物精品，操作简单，节能环保，便于工业化大生产。

Description

一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法。

背景技术

透明质酸(Hyaluronic acid，HA，即大分子透明质酸，又名玻璃酸)是一类由(1-3)-2-N-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖-(1-4)-O-β-D-葡萄糖醛酸的二糖重复排列而形成的一种酸性直链多聚粘多糖。1934年由Meyer等人从牛眼玻璃体中首次提取获得，具有很强的亲水性和非常好的保湿性能，是目前自然界中发现的保湿性能最好的物质，被国际化妆品行业公认为最理想的天然保湿因子，同时，由于HA无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品和医药等行业。

根据文献研究表明，分子量大小对HA的生物活性影响较大，不同分子量范围的HA表现出截然不同的生理学功能。高分子量或大分子量的HA(Mr>1×10⁶)由于具有良好的粘弹性、保湿性、抑制炎性反应、润滑等功能，可应用于高端化妆品行业、眼科手术粘弹剂和关节腔内注射治疗。中等分子量的HA(Mr介于1×10⁵到1×10⁶)具有良好的保湿性、润滑和药物缓释作用，广泛用于化妆品、滴眼液、皮肤烧伤愈合及术后防粘连。低分子量的HA(Mr低于1×10⁴)，尤其是透明质酸寡糖(如Mr低于2000的四糖、六糖、八糖)，表现出非常强的生物活性，具有促进创口愈合、促进骨和血管生成、免疫调节等作用，且易于渗透到真皮中。因此，低分子透明质酸在食品保健、化妆品、药品等领域有广阔的应用前景。

当前低分子量透明质酸钠的制备方法主要有三种，分别为物理法、化学法以及生物酶法。其中生物酶法为近年来新兴的降解大分子HA的方法，利用透明质酸酶的水解作用，制备低分子透明质酸钠。生物酶法具有条件温和，操作简便，效率较高等优势，是目前发展的趋势。在酶解大分子透明质酸制备透明质酸寡糖过程中，使用的透明质酸酶根据水解机制不同，可分为3类：睾丸型透明质酸酶(BTH)、水蛭型透明质酸酶(LHase)和微生物型透明质酸酶，因此所得的透明质酸寡糖结构也不同。其中，牛睾丸型透明质酸酶能够水解HA中β-1,4糖苷键，生成以还原性末端为氨基葡萄糖的寡糖系列，最小产物是二糖(GlcUA-GlcNAc)。而水蛭型透明质酸酶能够水解HA中β-1,3糖苷键，生成还原性末端为葡萄糖醛酸的饱和寡糖系列。微生物型透明质酸酶通过内切β-1,4糖苷键和β-消去作用获得的最终产物是单一的4,5-不饱和二糖。目前最常用的透明质酸酶是牛睾丸型透明质酸酶，因此大部分文献报道的酶解法得到的透明质酸寡糖采用的酶是牛睾丸型，对于水蛭型透明质酸酶生产透明质酸寡糖的研究报道较少。

目前，在透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产过程中，通过控制酶解条件仍然存在不同批次的透明质酸钠寡糖组合物中蛋白质含量高达1％，溶液透光度低，透明质酸钠寡糖含量及葡萄糖醛酸含量低、细菌总数不达标，动力粘度、平均分子量、数值不稳定，波动较大等缺陷。

因此有必要开发一种新的透明质酸寡糖工业化生产工艺以解决上述技术问题。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种稳定的透明质酸寡糖组合物的工业化生产方法。

本发明一方面，涉及一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，包括如下工艺：

(1)将大分子透明质酸钠原料或中等分子透明质酸钠原料在水蛭型透明质酸酶的存在下进行酶解反应，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物；

(2)将上述混合物采用截留分子量为25KD-35KD的纳滤滤膜过滤，收集滤液；

(3)将上述滤液直接喷雾干燥，得到透明质酸钠寡糖组合物的含量≥95.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；溶液透光度≥99.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da的透明质酸钠寡糖组合物精品。

作为本发明的一种实施方式，步骤(1)所述的大分子透明质酸钠的分子量＞1×10⁶Da，中等分子量透明质酸钠的分子量介于1×10⁵-1×10⁶之间。

作为本发明的一种实施方式，步骤(1)所述的水蛭型透明质酸酶利用酵母工程菌表达得到。

本发明所述的截留分子量(或孔径)为25KD-35KD的纳滤滤膜，主要用途是除去水蛭型透明质酸酶、粗酶液中存在的大分子蛋白、未水解的大分子透明质酸钠以及大分子透明质酸钠原料中本身携带的杂蛋白。例如截留分子量(或孔径)为25KD的纳滤滤膜，可以除去分子量＞25KD的水蛭型透明质酸酶、粗酶液中存在的大分子蛋白、未水解的大分子透明质酸钠以及大分子透明质酸钠原料中本身携带的杂蛋白。

作为本发明的一种实施方式，步骤(2)所述的纳滤滤膜的材料为聚酰胺、聚醚砜、磺化聚醚砜、聚乙烯醇或醋酸纤维素，进一步优选为聚醚砜材质的纳滤膜，可能原因是聚醚砜材质的结构特征、理化性质稳定，耐压性能好，更容易过滤除去酶、大分子杂蛋白及其它高分子物质，使溶液透光度更好。本发明通过筛选不同材质的滤膜，发现蛋白质含量均能稳定控制在≤0.02％，同时聚醚砜滤膜可以进一步降低透明质酸钠寡糖组合物中细菌总数，使之达到理想水平。

当采用截留分子量为25KD-35KD范围内的聚醚砜滤膜时，随着纳滤滤膜的截留分子量的升高，各项参数呈现如下趋势：其蛋白质含量略微变大、溶液透光度略微降低，细菌总数略微变大，但都能得到满足要求的产品，因此截留分子量在25KD～30KD时，所得产品质量更佳。作为本发明的一种实施方式，步骤(2)所述聚醚砜滤膜截留分子量可以为26KD-34KD，或27KD-33KD，或28KD-32KD，或29KD-31KD或根据需要进行定制，最佳选择为聚醚砜滤膜型号为8040-30KD。

本发明研究发现，当纳滤滤膜的截留分子量大于35KD时，随着纳滤滤膜的截留分子量的升高，各项参数呈现如下变化：透明质酸钠寡糖含量明显降低、葡萄糖醛酸含量明显降低、蛋白质含量明显变大、溶液透光度明显降低，细菌总数明显变大，产品质量变差，不满足质量要求。可能原因是部分水解的透明质酸钠(分子量＞35KD还未完成水解成透明质酸钠寡糖的中间体)透过纳滤滤膜，导致透明质酸钠寡糖含量和葡萄糖醛酸含量明显降低；以及部分原料中本身携带的杂蛋白、菌等物质(分子量＞35KD的部分)透过纳滤滤膜，导致蛋白质含量增大，溶液透光度变差，细菌总数变多。

当纳滤滤膜的截留分子量小于25KD时，虽然蛋白质含量明显降低了，但是纳滤过程中物料流速慢，滤膜容易被堵塞，使用寿命短，需要经常更换，且透明质酸钠寡糖组合物收率大大降低，含量低于95％，或葡萄糖醛酸的含量低于43.0％，可能原因是滤膜浓缩液中含有的大分子结构包裹住透明质酸钠寡糖，使其不能快速通过截留分子量＜25KD的聚醚砜滤膜本研究意外发现纳滤滤膜的截留分子量对透明质酸钠寡糖的含量和葡萄糖醛酸的含量有至关重要的影响。

作为本发明的一种实施方式，步骤(2)所述纳滤工艺中包含透明质酸钠寡糖组合物和水蛭型透明质酸酶的混合物的进料流速为2～20L/h，进一步优选为5～15L/h。进料流速过快，滤膜更容易损坏和堵塞；进料流速过慢，会导致工艺时间过长，影响工作效率。

所述纳滤工艺中包含透明质酸钠寡糖组合物和水蛭型所述纳滤工艺中操作温度为15～30℃，在该温度范围内，可以保证滤膜有更长的使用寿命。

作为本发明的一种实施方式，步骤(2)所述纳滤工艺中跨膜压为0.1～0.8Mpa，在该压力范围内，可以保证滤膜有更长的使用寿命。

作为本发明的一种实施方式，步骤(2)所述纳滤处理结束后，可选加入适量纯化水至浓缩液中，循环0.1～1h，继续纳滤至结束。多次循环，可以使浓缩液中大分子蛋白或部分未水解的透明质酸钠原料中包裹的透明质酸钠寡糖充分通过滤膜，从而使得透明质酸钠寡糖的收率更高，减少损失。

作为本发明的一种实施方式，步骤(3)所得的透明质酸钠寡糖组合物的含量可以进一步≥96.0％或≥97.0％或≥98.0％或≥99.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％或≥44.0％或≥45.0％或≥46.0％或≥47.0％或≥48.0％或≥49.0％或≥49.5％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％或≤0.04％或≤0.03％或≤0.02％或≤0.01％。

作为本发明的一种实施方式，步骤(3)所得的透明质酸钠寡糖组合物，为多种寡糖的组合，非单一一种寡糖，其中透明质酸钠二糖含量占比为5-40％，透明质酸钠四糖含量占比40-70％，透明质酸钠六糖含量占比10-30％，透明质酸钠八糖含量占比1-15％，透明质酸钠十糖含量占比1-10％，透明质酸钠十糖及以上含量占比低于6％。

本发明另外一个方面，根据上述的工业化生产方法制备得到了一种符合质量要求的透明质酸钠寡糖组合物，所得的透明质酸钠寡糖组合物的含量≥95.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da。

本发明的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，相对现有技术，具有如下优势：

(1)通过将大分子或中等分子的透明质酸钠原料在水蛭型透明质酸酶的存在下进行酶解反应，将得到的混合物经过截留分子量为25KD-35KD的纳滤滤膜过滤，所得的滤液直接喷雾干燥，可以得到动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da，透明质酸钠寡糖含量≥95.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；溶液透光度≥99.0％；细菌总数＜100CFU/g，其中霉菌和酵母菌＜50CFU/g的透明质酸钠寡糖组合物精品。

(2)本发明后处理纯化过程中只需要一步低温纳滤工艺，无需再次过滤除菌和活性炭吸附，直接喷雾干燥就可以得到符合要求的透明质酸钠寡糖组合物精品，且无需加热至80℃或以上进行高温灭酶活处理，可以避免高温加热导致透明质酸寡糖间的化学健如β-1,4糖苷键被破坏，即在酸性条件下进一步裂解或者未充分被酶解的大分子透明质酸在酸性条件下，在糖醛酸残基上的C1糖苷键、C4糖苷键和C5处的C-O等部位被化学裂解可能出现的不同结构，保证产品质量更加单一，均生成还原性末端为葡萄糖醛酸的饱和寡糖系列，透明质酸钠寡糖含量≥95.0％，甚至可高达99％或100％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％。因此本发明操作简单，节能环保，满足工业化生产需求。

附图说明

图1为实施例1得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

图2为实施例2得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

图3为实施例3得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

图4为实施例4得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

图5为实施例5得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

图6为实施例6得到的透明质酸钠寡糖组合物的HPLC检测图谱。

具体实施方式

为便于本领域技术人员理解本发明内容，下面将结合具体实施例进一步描述本发明的技术方案，但以下内容不应以任何方式限制本发明权利要求书请求保护的范围。

下述具体实施方式中所用的大分子或中等分子透明质酸钠等材料、试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。其中水蛭型透明质酸酶是参考现有技术文献通过重组基因技术，用P.pastoris发酵得到的粗酶液(Jin P,et al.High-yield novel leechhyaluronidase to expedite the preparation of specific hyaluronan oligomers[J].Scientific Reports,2014,4:8)。

本发明所述透明质酸钠寡糖含量通过HPLC法测定，葡萄糖醛酸的含量通过EP9.0Sodium Hyaluronate<1472>方法测定，平均分子量通过CN111040048A公开的方法进行测定，蛋白质含量通过《中国药典》2015版0731第五法考马斯亮蓝法测定，溶液透光度参考《QB/T4576-2013透明质酸钠》透光率测定方法测定，动力粘度通过动力粘度仪(42#，200转，25℃)测定，细菌总数通过《化妆品安全技术规范》2015年版中菌落总数检验方法测定。

实施例1

于1000L反应釜中，加入纯化水600L，控制温度40±5℃，加入适量水蛭型透明质酸酶，使体系酶活为8×10⁴U/mL，调节pH至5.0-5.5，加入66Kg分子量为1x10⁶Da的大分子透明质酸钠，待全部溶解后，保持体系40℃±5℃继续反应15h，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物。

将上述混合物降温至25～30℃，开启安装有截留分子量为30KD的聚酰胺纳滤滤膜的纳滤系统进行过滤，控制混合物的进料流速为2L/h，跨膜压力为0.1Mpa，除去可能未充分反应的水蛭型透明质酸酶、粗酶液中存在的大分子蛋白、未水解的大分子透明质酸钠以及大分子透明质酸钠原料中本身携带的杂蛋白，再加入300L纯化水至浓缩液中，继续循环0.5h，收集滤液。

将上述滤液加入喷雾装置中，直接喷雾干燥，得到透明质酸钠寡糖组合物精品，经测定其动力粘度为25cP，平均分子量为857Da，透明质酸钠寡糖组合物的含量100.0％(如图1所示)，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量50.1％；蛋白质含量为0.01％；溶液透光度99.8％；细菌总数60CFU/g，其中霉菌和酵母菌25CFU/g。

实施例2

于1000L反应釜中，加入纯化水600L，控制温度40±5℃，加入适量水蛭型透明质酸酶，使体系酶活为8×10⁴U/mL，调节pH至5.0-5.5，加入66Kg分子量为1x10⁶Da的大分子透明质酸钠，待全部溶解后，保持体系40℃±5℃继续反应15h，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物。

将上述混合物降温至20～25℃，开启安装有截留分子量为30KD的聚乙烯醇纳滤滤膜的纳滤系统进行过滤，控制混合物的进料流速为20L/h，跨膜压力为0.8Mpa，除去可能未充分反应的水蛭型透明质酸酶、粗酶液中存在的大分子蛋白、未水解的大分子透明质酸钠以及大分子透明质酸钠原料中本身携带的杂蛋白，再加入300L纯化水至浓缩液中，继续循环0.5h，收集滤液，收集滤液。

将上述滤液加入喷雾装置中，直接喷雾干燥，得到透明质酸钠寡糖组合物精品，经测定其动力粘度为23cP，平均分子量为1000Da，透明质酸钠寡糖的含量100.0％(如图2所示)，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量49.7％；蛋白质含量为0.02％；溶液透光度100％；细菌总数62CFU/g，其中霉菌和酵母菌26CFU/g。

实施例3

于1000L反应釜中，加入纯化水600L，控制温度40±5℃，加入适量水蛭型透明质酸酶，使体系酶活为8×10⁴U/mL，调节pH至5.0-5.5，加入66Kg分子量为1x10⁶Da的大分子透明质酸钠，待全部溶解后，保持体系40℃±5℃继续反应15h，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物。

将上述混合物降温至15～20℃，开启安装有截留分子量为30KD的聚醚砜纳滤滤膜的纳滤系统进行过滤，控制混合物的进料流速为10L/h，跨膜压力为0.5Mpa，除去可能未充分反应的水蛭型透明质酸酶、粗酶液中存在的大分子蛋白、未水解的大分子透明质酸钠以及大分子透明质酸钠原料中本身携带的杂蛋白，再加入300L纯化水至浓缩液中，继续循环0.5h，收集滤液，收集滤液。

将上述滤液加入喷雾装置中，直接喷雾干燥，得到透明质酸钠寡糖组合物精品，经测定其动力粘度为30cP，平均分子量为915Da，透明质酸钠寡糖的含量100.0％(如图3所示)，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量51.5％；蛋白质含量为0.01％；溶液透光度100％；细菌总数58CFU/g，其中霉菌和酵母菌23CFU/g。

通过实施例1-3表明，使用相同截留分子量而不同材质的纳滤滤膜都能得到满足要求的产品，尤其是对透明质酸寡糖含量、葡萄糖醛酸含量、蛋白质含量及溶液透光度几乎没有影响。其中使用聚醚砜纳滤滤膜的工艺得到的透明质酸钠寡糖组合物中细菌总数相对更少。

实施例4

采用截留分子量为25KD的聚醚砜滤膜代替实施例3中截留分子量为30KD的聚醚砜滤膜，其余参数和工艺均同实施例1，最终得到动力粘度为28cP，平均分子量为860Da，透明质酸钠寡糖的含量100.0％(如图4所示)，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量49.6％；蛋白质含量为0.01％；溶液透光度100.0％；细菌总数56CFU/g，其中霉菌和酵母菌22CFU/g。

实施例5

采用截留分子量为35KD的聚醚砜滤膜代替实施例3中截留分子量为30KD的聚醚砜滤膜，其余参数和工艺均同实施例1，最终得到动力粘度为30cP，平均分子量为957Da，透明质酸钠寡糖的含量100％(如图5所示)，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量49.0％；蛋白质含量为0.05％；溶液透光度99.0％；细菌总数72CFU/g，其中霉菌和酵母菌30CFU/g。

通过实施例3-5发现，纳滤滤膜的截留分子量在25KD～35KD范围内，随着纳滤滤膜的截留分子量的升高，各项参数呈现如下趋势：其蛋白质含量略微变大、溶液透光度略微降低，细菌总数略微变大，但都能得到满足要求的产品，因此截留分子量在25KD～30KD时，所得产品质量更佳。

实施例6

在实施例1的基础上，初步纳滤结束后，不再继续补充加入300L纯化水至浓缩液中，其余参数和工艺均同实施例1，最终得到动力粘度为29cP，平均分子量为913Da，透明质酸钠寡糖的含量98.3％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量49.1％；蛋白质含量为0.02％；溶液透光度99.0％；细菌总数66CFU/g，其中霉菌和酵母菌32CFU/g。

通过对比实施例1和实施例6结果表明，纳滤过程中通过补充加水，多次循环，可以使浓缩液中大分子蛋白或部分未水解的透明质酸钠原料中包裹的透明质酸钠寡糖充分通过滤膜，从而使得透明质酸钠寡糖的收率更高，减少损失。

对比例1

采用截留分子量为50KD的聚醚砜滤膜代替截留分子量为30KD的聚醚砜滤膜，其余参数和工艺均同实施例1，最终得到动力粘度为32cP，平均分子量为1540Da，透明质酸钠寡糖的含量90.2％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量45.3％；蛋白质含量为1％；溶液透光度94.0％；细菌总数159CFU/g，其中霉菌和酵母菌78CFU/g。

结果表明，纳滤滤膜的截留分子量在50KD时，随着纳滤滤膜的截留分子量的升高，各项参数呈现如下变化：透明质酸钠寡糖含量明显降低、葡萄糖醛酸含量明显降低、蛋白质含量明显变大、溶液透光度明显降低，细菌总数明显变大，产品质量变差，不满足质量要求。可能原因是部分水解的低分子量透明质酸钠(还未完成水解成透明质酸钠寡糖，如透明质酸钠二糖～十二糖)透过纳滤滤膜，导致透明质酸钠寡糖含量和葡萄糖醛酸含量明显降低；以及部分原料中本身携带的杂蛋白、菌等物质(分子量介于35KD～50KD之间的部分)透过纳滤滤膜，导致蛋白质含量增大，溶液透光度变差，细菌总数变多。

对比例2

采用截留分子量为10KD的聚醚砜滤膜代替截留分子量为30KD的聚醚砜滤膜，其余参数和工艺均同实施例1，虽然蛋白质含量明显降低了，但是纳滤过程中物料流速慢，滤膜容易被堵塞，使用寿命短，需要经常更换，且透明质酸钠寡糖组合物收率大大降低，含量仅86.8％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量42.0％，可能原因是滤膜浓缩液中含有的大分子结构包裹住透明质酸钠寡糖，使其不能快速通过截留分子量为10KD的聚醚砜滤膜本研究意外发现纳滤滤膜的截留分子量对透明质酸钠寡糖的含量和葡萄糖醛酸的含量有至关重要的影响。

Claims (10)

1.一种透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：

(1)将大分子透明质酸钠原料或中等分子透明质酸钠原料在水蛭型透明质酸酶的存在下进行酶解反应，得到包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物；

(2)将上述混合物采用截留分子量为25KD-35KD的纳滤滤膜过滤，收集滤液；

(3)将上述滤液直接喷雾干燥，得到透明质酸钠寡糖组合物的含量≥95.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；溶液透光度≥99.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da的透明质酸钠寡糖组合物精品。

2.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述大分子透明质酸钠的分子量＞1×10⁶Da，中等分子量透明质酸钠的分子量介于1×105-1×106之间；所述水蛭型透明质酸酶利用酵母工程菌表达得到。

3.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述纳滤滤膜采用聚酰胺、聚醚砜、磺化聚醚砜、聚乙烯醇或醋酸纤维素材质。

4.根据权利要求4所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述聚醚砜滤膜的截留分子量为28KD-32KD。

5.根据权利要求4所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述聚醚砜滤膜的截留分子量为30KD。

6.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述纳滤工艺中包含透明质酸钠寡糖组合物的混合物进料流速为2～20L/h。

7.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述纳滤工艺中操作温度为15～30℃。

8.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述纳滤工艺中跨膜压力为0.1～0.8Mpa。

9.根据权利要求1所述的透明质酸钠寡糖组合物的工业化生产方法，其特征在于：所述纳滤处理结束后，可选补加适量纯化水至浓缩液中，循环0.1～1h，继续纳滤至结束。

10.一种利用根据权利要求1～9任一所述的工业化生产方法制备得到的透明质酸钠寡糖组合物，其特征在于：所得的透明质酸钠寡糖组合物精品的含量≥95.0％，以葡萄糖醛酸计，葡萄糖醛酸的含量≥43.0％；蛋白质含量能够稳定控制在≤0.05％；动力粘度为20～30cP，平均分子量为850～1050Da的透明质酸钠寡糖组合物精品。

Images