CN115738371A - 一种亚临界双溶剂萃取方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种亚临界双溶剂萃取方法及其应用，属于中药提取及中药制剂技术领域。本发明的膏贴产品采用低温双溶剂萃取技术提取中草药中的有效成分，有利于中草药中有效成分的高效萃取与高效利用，与低温超微粉碎的中草药粉末共同制备膏贴，进一步提高了膏贴单位面积的载药量，且所制备得到的膏贴厚度适宜，表面平整，透皮效果良好。本发明的乳膏产品采用低温双溶剂萃取技术提取中草药中的有效成分，有利于中草药中有效成分的高效萃取与高效利用，与常规中草药水煎煮液共同制备乳膏/乳液，其中，双溶剂萃取液以油相游离于基质中，在不破坏乳膏状态的同时，提高油脂基质的载药量，透皮效果良好，铺展性好，亲肤性好，柔滑性好。

Description

一种亚临界双溶剂萃取方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种亚临界双溶剂萃取方法及其应用，属于中药提取及中药制剂技术领域。

背景技术

膏贴或乳膏都是中药透皮吸收制剂的一种，中药透皮吸收制剂是指在中医药理论的指导下，将中药单方或中药复方粉碎为细粉或经过合理的提取、纯化等工艺所得到的有效部位或有效成分或提取物与适宜的辅料或基质混合后制成的通过皮肤表面给药，使中药成分以恒定速度或接近恒定速度通过皮肤各层，进入体循环产生全身或局部治疗作用的制剂。透皮吸收制剂具有以下特点和优点：1、延长了半衰期较短药物的治疗效果，具有能长期维持稳定的给药速率等特点，可以保持血药水平稳定在治疗有效浓度范围内；2、不经过口服，避免了肝脏的“首过效应”和胃肠道环境对药效的干扰和作用(如胃肠道酶、消化液、pH值等因素的影响)，对某些药物来说，透皮给药比口服给药能更稳定地进入血液，提高生物利用度；3、减少给药次数，对不适宜口服给药与不愿打针与服药的儿童可方便地通过经皮给药途径给药；4、提高用药的安全性，降低药物毒性和副作用，如发现药物有副作用，易将贴剂移去，减少了口服或注射给药的危险。

中国古代有许多医药文献中都有关于中药透皮吸收制剂(中药外用制剂)的制备和使用方法的记载，《内经·素问》中有中药外治的内容；晋·葛洪《肘后备急方》对黑膏药制法有详细记载；宋代的《太平惠民和剂局方》己有可用于局部治疗的膏药；明代李时珍的《本草纲目》总结了以前的外治经验，荟萃了涂、擦、抹、敷、塞等多种药物外治方法，收载了捣、煎、调配等外用药的加工方法，详述了外治施药部位，除直施病灶外，还有上病施下、下病施上、左病施右、右病施左等。在现有技术中，膏贴的制备方法主要包括将药物粉末涂布于背衬层或将药物提取物涂布于背衬层。前者(如CN 107412672 A)由于药物粉末为固体颗粒，为了保证膏贴厚度适宜、表面平整，往往载药量有限，后者(如CN 112089816 A)药物提取物往往只含有药物中的某些成分，膏贴的效果会大打折扣。乳膏是将药物加入适宜基质中，制成易于涂布于皮肤表面的外用半固体制剂，其中，水溶性药物/脂溶性药物可直接溶于水相/油相中，不溶性药物粉碎成细粉(糊状)混合均匀。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种中药膏贴及其制备方法。

本发明的目的在于优化提取工艺，研制一种载药量大，释放度好，透皮吸收率高的膏贴或乳膏。

本发明的技术方案如下：

一种亚临界双溶剂萃取工艺，包括如下步骤：

(1)原料预处理：将原料粉碎至5-50目，得原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取剂，浸泡2～3h，控制萃取温度为55-65℃、萃取压力为0.6-1.0MPa，萃取50-60min，固液分离，经溶剂回收后得到萃取液Ⅰ及原料渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的原料渣再进行一次亚临界萃取，得到萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的萃取液Ⅰ和步骤(3)得到的萃取液Ⅱ混合，即得亚临界双溶剂萃取液。

根据本发明优选的，步骤(1)中所述原料的含水量＜13％。

本发明中，进行亚临界双溶剂萃取的原料包括一种或多种，若原料为多种，将原料混合后粉碎，进行亚临界双溶剂萃取，严格按照上述浸泡、加压、分离、溶剂回收等工艺操作，即得目标萃取液。

根据本发明优选的，步骤(1)中所述原料为干姜和艾草。

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

按照上述方法制备得到的亚临界双溶剂萃取液。

上述亚临界双溶剂萃取液在制备膏贴中的应用。

根据本发明优选的，所述应用是将上述亚临界双溶剂萃取液与经低温超微粉碎的原料粉末和医用压敏胶混合，涂布于背衬层，制得膏贴。

本发明中，上述应用经低温超微粉碎的原料与经亚临界双溶剂萃取的原料相同或不同均可。本发明中，所述医用压敏胶和背衬层均为本领域常规市售产品。

根据本发明优选的，所述低温超微粉碎的条件为-20℃～0℃超微粉碎至200～500目。

根据本发明优选的，所述低温超微粉碎的原料为干姜和艾草。

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

一种按照上述应用的方法制备得到的膏贴。

根据本发明优选的，所述膏贴的有效成分及其含量：桉油精0.067～0.101mg/g，龙脑为0.029～0.043mg/g，6-姜辣素含量为3.135～3.484mg/g。

上述亚临界双溶剂萃取液在制备乳膏/乳液中的应用。

根据本发明优选的，所述应用是将上述亚临界双溶剂萃取液与原料的水煎煮液和乳膏专用基质混合，经溶解、增溶、乳化、混悬制备得到。

本发明中，上述应用经水煎煮的原料与经亚临界双溶剂萃取的原料相同或不同均可。本发明中，所述乳膏专用基质为本领域常规市售产品。本发明中所述的溶解、增溶、乳化、混悬均为本领域制备乳膏或乳液时的常规操作，在此不再详细说明。

根据本发明优选的，所述水煎煮液的原料为干姜和艾草。

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

一种按照上述应用的方法制备得到的乳膏/乳液。

根据本发明优选的，所述乳膏/乳液的有效成分及其含量：桉油精为0.010～0.015mg/g，龙脑为0.004～0.006mg/g，6-姜辣素含量为0.446～0.496mg/g。

有益效果：

本发明的膏贴产品采用低温双溶剂萃取技术提取中草药中的有效成分，有利于中草药中有效成分的高效萃取与高效利用，与低温超微粉碎的中草药粉末共同制备膏贴，进一步提高了膏贴单位面积的载药量，且所制备得到的膏贴厚度适宜，表面平整，透皮效果良好。

本发明的乳膏产品采用低温双溶剂萃取技术提取中草药中的有效成分，有利于中草药中有效成分的高效萃取与高效利用，与常规中草药水煎煮液共同制备乳膏/乳液，其中，双溶剂萃取液以油相游离于基质中，在不破坏乳膏状态的同时，提高油脂基质的载药量，透皮效果良好，铺展性好，亲肤性好，柔滑性好。

附图说明

图1为原料超微粉碎粉末的图片，其中，A为干姜4kg和艾草1kg混合后的超微粉碎粉末，B为干姜2kg和艾草1kg混合后的超微粉碎粉末。

图2为体外透皮实验中第8h的供试品的气相色谱图。

图3为体外透皮实验中第8h的供试品的液相色谱图

图4为不同膏贴样品的单位面积桉油精累积透过量曲线。

图5为不同膏贴样品的单位面积龙脑累积透过量曲线。

图6为不同膏贴样品的单位面积6-姜辣素累积透过量曲线。

图7为不同乳膏样品的单位面积桉油精累积透过量曲线。

图8为不同乳膏样品的单位面积龙脑累积透过量曲线。

图9为不同乳膏样品的单位面积6-姜辣素累积透过量曲线。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案作进一步说明，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的原料与试剂，若无特殊说明，均为普通市售产品；实施例中涉及的实验步骤，若无特殊说明，均为本领域常规操作。

实施例1：亚临界双溶剂萃取液的制备

一种亚临界双溶剂萃取工艺，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜4kg，艾草1kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液。

实施例2：膏贴的制备

一种膏贴的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜4kg，艾草1kg，混匀后烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎至300目，得干姜和艾草的超微粉碎粉末；

(2)将10kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(1)制得的干姜和艾草的超微粉碎粉末加入到溶解的医用压敏胶中，混合均匀后再加入实施例1制得的干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

干姜中有效成分6-姜辣素的含量为0.72％，艾草中有效成分桉油精的含量为0.066％、龙脑的含量为0.028％。上述膏贴中，桉油精含量为0.081mg/g，龙脑为0.034mg/g，6-姜辣素含量为3.345mg/g。

实施例3：乳膏的制备

一种乳膏的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜4kg，艾草1kg，混匀后粗粉，在水中煎煮30min，固液分离，将分离的药渣在水中再次煎煮20min，混合两次所得的药液，沉淀8h，取上清液过200目筛，得煎煮液；

(2)以步骤(1)的煎煮液作为水相，以实施例1制得的双溶剂萃取液作为油相，再加入10kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，制得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.012mg/g，龙脑为0.005mg/g，6-姜辣素含量为0.476mg/g。

实施例4

一种亚临界双溶剂萃取工艺，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜3kg，艾草1kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过10目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为60℃、萃取压力为0.8MPa，萃取55min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液。

一种膏贴的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜3kg，艾草1kg，混匀后烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎至400目，得干姜和艾草的超微粉碎粉末；

(2)将8kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(1)制得的干姜和艾草的超微粉碎粉末加入到溶解的医用压敏胶中，混合均匀后再加入上述实施例4中制得的亚临界双溶剂萃取液，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

上述膏贴中，桉油精含量为0.101mg/g，龙脑为0.043mg/g，6-姜辣素含量为3.135mg/g。

一种乳膏的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜3kg，艾草1kg，混匀后粗粉，在水中煎煮30min，固液分离，将分离的药渣在水中再次煎煮20min，混合两次所得的药液，沉淀8h，取上清液过200目筛，得煎煮液；

(2)以步骤(1)的煎煮液作为水相，以上述实施例4中制得的双溶剂萃取液作为油相，再加入8kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.015mg/g，龙脑为0.006mg/g，6-姜辣素含量为0.446mg/g。

实施例5

一种亚临界双溶剂萃取工艺，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜5kg，艾草1kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过30目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为65℃、萃取压力为1.0MPa，萃取60min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液。

一种膏贴的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜5kg，艾草1kg，混匀后烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎至500目，得干姜和艾草的超微粉碎粉末；

(2)将12kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(1)制得的干姜和艾草的超微粉碎粉末加入到溶解的医用压敏胶中，混合均匀后再加入上述实施例5中制得的亚临界双溶剂萃取液，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

上述膏贴中，桉油精含量为0.067mg/g，龙脑为0.029mg/g，6-姜辣素含量为3.484mg/g。

一种乳膏的制备方法，步骤如下：

(1)取干姜5kg，艾草1kg，混匀后粗粉，在水中煎煮30min，固液分离，将分离的药渣在水中再次煎煮20min，混合两次所得的药液，沉淀8h，取上清液过200目筛，得煎煮液；

(2)以步骤(1)的煎煮液作为水相，以上述实施例5中制得的双溶剂萃取液作为油相，再加入12kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.010mg/g，龙脑为0.004mg/g，6-姜辣素含量为0.496mg/g。

对比例1

一种膏贴的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜2kg，艾草1kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液；

(5)取干姜2kg，艾草1kg，混匀后烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎。在超微粉碎时，由于混合中草药中艾草的含量较高，超微粉碎时艾草产生的艾绒相互纠结，发生团聚，不利于原料粉碎，最终原料无法完全粉碎，所得粉碎粉料不均一，如图1所示，无法进行后续膏贴的制备。

对比例2：仅采用亚临界萃取液制备膏贴

一种膏贴的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜8㎏，艾草2kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液；

(5)将10kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(4)制得的亚临界双溶剂萃取液加入到溶解的医用压敏胶中，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

上述膏贴中，桉油精含量为0.108mg/g，龙脑为0.046mg/g，6-姜辣素含量为4.189mg/g。

对比例3：仅采用超微粉碎粉末制备膏贴

一种膏贴的制备方法，包括如下步骤：

(1)取干姜8kg，艾草2kg，混匀后烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎至300目，得干姜和艾草的超微粉碎粉末；

(2)将10kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(1)制得的干姜和艾草的超微粉碎粉末加入到溶解的医用压敏胶中，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

上述膏贴中，桉油精含量为0.066mg/g，龙脑为0.028mg/g，6-姜辣素含量为2.880mg/g。

以粉碎或超微粉碎的方式制备原料粉末，添加到医用压敏胶中制备膏贴，原料粉末的最大添加量为50％，质量百分比，若超过该添加量，无法形成膏状物料，更无法制备膏贴。

对比例4：仅采用亚临界萃取液制备乳膏

一种乳膏的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜8㎏，艾草2kg，混合后烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到干姜和艾草的萃取液Ⅰ，以及干姜和艾草的混合渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜和艾草的混合渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜和艾草的萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜和艾草的萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜和艾草的萃取液Ⅱ混合，得干姜和艾草的亚临界双溶剂萃取液；

(5)将步骤(4)制得的双溶剂萃取液作为油相，再加入10kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.108mg/g，龙脑为0.046mg/g，6-姜辣素含量为4.189mg/g。

对比例5：仅采用水煎煮液制备乳膏

一种乳膏的制备方法，包括如下步骤：

(1)取干姜8kg，艾草2kg，混匀后粗粉，在水中煎煮30min，固液分离，将分离的药渣在水中再次煎煮20min，混合两次所得的药液，沉淀8h，取上清液过200目筛，得煎煮液；

(2)以步骤(1)的煎煮液作为水相，再加入10kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.002mg/g，龙脑为0.001mg/g，6-姜辣素含量为0.105mg/g。

以煎煮液作为水相，添加到医用压敏胶中制备膏贴，原料粉末的最大添加量为50％，质量百分比，若超过该添加量，将会造成破乳，无法形成乳膏状。

对比例6

一种膏贴的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取艾草2kg，烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到艾草萃取液Ⅰ，以及艾草渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的艾草渣再进行一次亚临界萃取，得到艾草萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的艾草萃取液Ⅰ与步骤(3)得到艾草萃取液Ⅱ混合，得艾草的亚临界双溶剂萃取液；

(5)取干姜8kg，烘干至水分含量＜13％，粗粉后在-20℃超微粉碎至300目，得干姜超微粉碎粉末；

(6)将10kg医用压敏胶(市售产品)溶解化胶，在110-135℃下，将步骤(5)制得的干姜超微粉碎粉末加入到溶解的医用压敏胶中，混合均匀后再加入步骤(4)制得的亚临界双溶剂萃取液，充分搅拌20分钟，涂布于背衬层，制得膏贴。

上述膏贴中，桉油精含量为0.065mg/g，龙脑为0.028mg/g，6-姜辣素含量为3.165mg/g。

对比例7

一种乳膏的制备方法，包括如下步骤：

(1)原料预处理：称取干姜8㎏，烘干至水分含量＜13％，粉碎过5目筛，得到原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得的原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取溶剂，完全浸没原料粉料后，浸泡2h后，控制萃取温度为55℃、萃取压力为0.6MPa，萃取50min，固液分离，溶剂回收后得到干姜萃取液Ⅰ，以及干姜渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的干姜渣再进行一次亚临界萃取，得到的干姜萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的干姜萃取液Ⅰ与步骤(3)得到干姜萃取液Ⅱ混合，得亚临界双溶剂萃取液；

(5)取艾草2kg，粗粉，在水中煎煮30min，固液分离，将分离的药渣在水中再次煎煮20min，混合两次所得的药液，沉淀8h，取上清液过200目筛，得煎煮液；

(6)以步骤(5)的煎煮液作为水相，以步骤(4)制得的双溶剂萃取液作为油相，再加入10kg乳膏专用基质(市售产品)，经溶解、增溶、乳化、混悬，得乳膏。

上述乳膏中，桉油精含量为0.0086mg/g，龙脑为0.0036mg/g，6-姜辣素含量为1.496mg/g。

实验例：体外透皮实验

1.试验方法：选取健康的雄性昆明小鼠(18-22g)，用电动剌毛刀给其腹部脱毛，脱颈处死，立即剥离其腹部皮肤，去除干净皮下脂肪及粘连物，用生理盐水浸泡冲洗干净并检查鼠皮有无破损，将其剪成适宜的大小待用。采用改良Franz双室渗透扩散装置，将小鼠离体皮肤置于装置中间夹好固定，角质层一侧朝上，面向供药室，再分别将裁剪好的同质量的膏贴贴于角质层一侧鼠皮上，或将同质量的乳膏涂抹于角质层一侧鼠皮上，进行固定设置；接收室加入空白接收液(含30％乙醇的生理盐水)6.5mL，接收液与离体皮肤真皮层紧密接触不得有气泡；设置水浴温度为37℃；以恒速300r/min搅拌；分别于1、2、3、4、6、8h在接收室取样2mL作为供试品溶液待测，并补充等体积等温的空白接收液。

2.检测指标：采用GC法测定样品液中桉油精、龙脑的含量，采用HPLC法测定样品液中6-姜辣素的含量。

(1)桉油精、龙脑含量：按照气相色谱法(中国药典四部通则0521)测定。

色谱条件：以50％苯基-甲基聚硅氧烷为固定相(柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm)；柱温为程序升温，初始温度45℃，先以每分钟2℃的速率升温至75℃，保持5分钟；然后以每分钟1℃的速率升温至90℃，保持6分钟；再以每分钟5℃的速率升温至150℃；最后以每分钟10℃的速率升温至250℃，保持5分钟；进样口温度为240℃；检测器温度为250℃。流量为每分钟0.6mL；分流进样，分流比为5:1。理论板数按龙脑峰计算应不低于50000。

对照品溶液的制备：取桉油精对照品、龙脑对照品适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1mL含桉油精0.2mg、龙脑0.1mg的混合溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与接收室取样供试品溶液各1μL，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

其中，第8h的供试品的气相色谱图如图2所示，图中包括了供试品平行进样的色谱结果。

(2)6-姜辣素含量：按照高效液相色谱法(中国药典四部通则0512)测定。

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-甲醇-水(40∶5∶55)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按6-姜辣素峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备：取6-姜辣素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与接收室取样供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

其中，第8h的供试品的液相色谱图如图3所示，图中包括了供试品平行进样的色谱结果。

3.检测结果：桉油精、龙脑、6-姜辣素的累积透过量结果见下表。

表1.不同膏贴不同时间的单位面积各成分的累积透过量

以单位面积桉油精、龙脑、6-姜辣素的累积透过量(Qn)对时间(t)做回归，得到膏贴桉油精、龙脑、6-姜辣素的平均稳态透皮速率方程，如表所1示，均符合零级释放过程。

上述膏贴中桉油精、龙脑、6-姜辣素随时间的累积透过量的变化如图4、图5、图6所示，由图可知，按照本发明实施例2的工艺制备的膏贴，其有效成分桉油精、龙脑、6-姜辣素的透皮效果显著优于对比例2、对比例3和对比例6。

表2.不同乳膏不同时间的单位面积各成分的累积透过量

以单位面积桉油精、龙脑、6-姜辣素的累积透过量(Qn)对时间(t)做回归，得到乳膏桉油精、龙脑、6-姜辣素的平均稳态透皮速率方程，如表所2示，均符合零级释放过程。

上述乳膏中桉油精、龙脑、6-姜辣素随时间的累积透过量的变化如图7、图8、图9所示，由图可知，按照本发明实施例3的工艺制备的乳膏，其有效成分桉油精、龙脑、6-姜辣素的透皮效果显著优于对比例4、对比例5和对比例7。

Claims (10)

1.一种亚临界双溶剂萃取工艺，其特征在于，包括如下步骤：

(1)原料预处理：将原料粉碎至5-50目，得原料粉料备用；

(2)丁烷萃取：将步骤(1)所得原料粉料进行亚临界萃取，采用丁烷为萃取剂，浸泡2～3h，控制萃取温度为55-65℃、萃取压力为0.6-1.0MPa，萃取50-60min，固液分离，经溶剂回收后得到萃取液Ⅰ及原料渣；

(3)乙醇萃取：采用无水乙醇作为萃取剂，按照步骤(2)的方法对步骤(2)得到的原料渣再进行一次亚临界萃取，得到萃取液Ⅱ；

(4)将步骤(2)得到的萃取液Ⅰ和步骤(3)得到的萃取液Ⅱ混合，即得亚临界双溶剂萃取液。

2.如权利要求1所述的亚临界双溶剂萃取工艺，其特征在于，步骤(1)中所述原料的含水量＜13％；

优选的，步骤(1)中所述原料为干姜和艾草；

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

3.按照权利要求1所述的亚临界双溶剂萃取工艺制备得到的亚临界双溶剂萃取液。

4.权利要求3所述的亚临界双溶剂萃取液在制备膏贴中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用的方法是将权利要求3所述的亚临界双溶剂萃取液与经低温超微粉碎的原料粉末和医用压敏胶混合，涂布于背衬层，制得膏贴；

优选的，所述低温超微粉碎的条件为-20℃～0℃超微粉碎至200～500目；

优选的，所述低温超微粉碎的原料为干姜和艾草；

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

6.一种按照权利要求5所述应用的方法制备得到的膏贴；

优选的，所述膏贴的有效成分及其含量：桉油精0.067～0.101mg/g，龙脑为0.029～0.043mg/g，6-姜辣素含量为3.135～3.484mg/g。

7.权利要求3所述的亚临界双溶剂萃取液在制备乳膏/乳液中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用的方法是将权利要求3所述的亚临界双溶剂萃取液与原料的水煎煮液和乳膏专用基质混合，经溶解、增溶、乳化、混悬制备得到；

优选的，所述水煎煮液的原料为干姜和艾草；

进一步优选的，所述干姜和艾草的质量比例为3～5：1。

9.一种按照权利要求8所述应用的方法制备得到的乳膏/乳液。

10.如权利要求9所述的乳膏/乳液，其特征在于，所述乳膏/乳液的有效成分及其含量：桉油精为0.010～0.015mg/g，龙脑为0.004～0.006mg/g，6-姜辣素含量为0.446～0.496mg/g。

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