CN115737648B

CN115737648B - 二苯甲基哌嗪类化合物在治疗包虫病中的应用

Info

Publication number: CN115737648B
Application number: CN202111032276.4A
Authority: CN
Inventors: 霍乐乐; 张皓冰; 姜斌; 魏玉芬; 殷梦; 沈玉娟; 陶奕; 薛剑
Original assignee: National Institute of Parasitic Diseases of Chinese Center for Disease Control and Prevention
Current assignee: National Institute of Parasitic Diseases of Chinese Center for Disease Control and Prevention
Priority date: 2021-09-03
Filing date: 2021-09-03
Publication date: 2024-06-25
Anticipated expiration: 2041-09-03
Also published as: CN115737648A

Abstract

本发明提供一种二苯甲基哌嗪类化合物在治疗包虫病中的应用。二苯甲基哌嗪类化合物包括氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪中的一种或多种的组合；以及其药学上可接受的盐；包虫病为棘球蚴病，包括囊型包虫病和/或泡型包虫病。本发明采用二苯甲基哌嗪类化合物针对棘球绦虫，尤其是棘球蚴具有很好的抑制和杀死作用，将其用于治疗棘球蚴病具有较优的治疗效果。本发明的二苯甲基哌嗪类化合物相比本领域临床用于治疗棘球蚴病的阿苯达唑而言，针对体外多房棘球绦虫原头蚴和微囊的抑制效果具有等同甚至更加突出的效果，氟桂利嗪具有显著性效果。针对体内多房棘球绦虫包囊的抑制效果，桂利嗪的效果要显著优于阿苯达唑。

Description

二苯甲基哌嗪类化合物在治疗包虫病中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种二苯甲基哌嗪类化合物在治疗包虫病中的应用。

背景技术

包虫病(Hydatidosis)，也称棘球蚴病(Echinococcosis)，是棘球绦虫的幼虫(棘球蚴，Echinococcus)寄生于人和动物体内而引起的严重人畜共患寄生虫病，分布地域广泛，主要流行于畜牧业地区，严重危害人类健康和畜牧业生产。棘球绦虫成虫寄生于犬科和猫科动物的小肠内，虫卵随宿主粪便排出，人或动物吞食虫卵后，卵内的六钩蚴在肠内孵出，钻入肠壁，经血循环至肝、肺等组织器官发育成含棘球蚴的包囊。该病主要包括细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)引起的囊型包虫病(Cystic echinococcosis，CE)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis，AE)引起的泡型包虫病(Alveolarechinococcosis)，其中多房棘球蚴可直接浸润肝组织，属于高度致死疾病，故又有“虫癌”之称。

目前，包虫病的治疗主要依靠手术和药物化疗。由于手术通常难以完全切除病变组织，所以一般采用手术联合药物化疗的方式来降低复发风险，而且，对于因患有禁忌症而不适于进行手术的病人，药物化疗是主要的治疗手段。现阶段，临床上用于治疗棘球蚴病的主要药物为苯并咪唑氨基甲酸酯类衍生物，如阿苯达唑(Albendazole)和甲苯达唑(Mebendazole)，它们通过与微管蛋白相结合，抑制微管的形成而发挥作用。由于这类药物的体内生物利用度较低，所以临床治愈率仅有30％左右，且需要长期甚至终生服药。鉴于棘球蚴病所面临的缺乏有效治疗药物的窘境，开发新型的抗棘球蚴药物势在必行。

发明内容

基于现有技术存在的问题，本发明的第一目的在于提供一种二苯甲基哌嗪类化合物在制备治疗包虫病的药物中的应用；本发明的第二目的在于提供一种体外杀死包虫的方法。

为解决上述技术问题，本发明首先提供一种二苯甲基哌嗪类化合物在制备治疗包虫病的药物中的应用。

“老药新用”是一种经济有效的药物开发经典策略，现有技术中，二苯甲基哌嗪类化合物临床上主要用来治疗脑血管疾病、过敏性疾病等，主要作用机理是拮抗钙离子通道和组胺受体。发明人在对现有上市药物的筛选中发现了二苯甲基哌嗪类化合物对棘球绦虫，尤其是棘球蚴具有很好的抑制和杀死作用，其作用机理目前尚不清楚。

上述的应用中，优选地，所述二苯甲基哌嗪类化合物包括氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪中的一种或多种的组合；以及其药学上可接受的盐(例如：盐酸盐)；但不限于此。

所述氟桂利嗪的结构式如下：

所述桂利嗪的结构式如下：

所述美克洛嗪的结构式如下：

所述西替利嗪的结构式如下：

上述的应用中，优选地，所述包虫病为棘球蚴病，包括囊型包虫病和/或泡型包虫病；但不限于此。

上述的应用中，优选地，所述包虫包括细粒棘球绦虫和/或多房棘球绦虫；但不限于此。

上述的应用中，优选地，所述细粒棘球绦虫和/或所述多房棘球绦虫包括其虫卵、棘球蚴和成虫中的一种或多种；但不限于此。

上述的应用中，优选地，所述棘球蚴包括其角皮层、生发层、生发囊、子囊、孙囊、囊液和原头蚴中的一种或多种；但不限于此。

上述的应用中，优选地，所述药物包括有效量的二苯甲基哌嗪类化合物及其药学上可接受的盐(例如：盐酸盐，但不限于此)；还选择性包括辅料。

上述的应用中，优选地，所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、口服液或注射剂；但不限于此。

另一方面，本发明还提供一种体外杀死包虫的方法，该方法包括：将二苯甲基哌嗪类化合物溶于二甲基亚砜中，配制成含有有效量的二苯甲基哌嗪类化合物的二甲基亚砜溶液；将其与包虫接触培养，从而体外杀死包虫。

上述的方法中，优选地，所述二苯甲基哌嗪类化合物包括氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪中的一种或多种的组合，以及其药学上可接受的盐；但不限于此；

所述包虫包括细粒棘球绦虫和/或多房棘球绦虫；但不限于此。

上述的方法中，优选地，所述方法为体外非治疗性的方法。

上述的方法中，优选地，所述培养条件为37℃、5％CO₂的培养箱中培养1～6天。

本发明的有益效果：

本发明采用二苯甲基哌嗪类化合物针对棘球绦虫，尤其是棘球蚴具有很好的抑制和杀死作用，将其用于治疗棘球蚴病具有较优的治疗效果。本发明的二苯甲基哌嗪类化合物相比本领域临床用于治疗棘球蚴病的阿苯达唑而言，针对体外多房棘球绦虫原头蚴和微囊的抑制效果具有等同甚至更加突出的效果，氟桂利嗪具有显著性效果。针对体内多房棘球绦虫包囊的抑制效果，桂利嗪的效果要显著优于阿苯达唑。

附图说明

图1为本发明实施例1中采用二苯甲基哌嗪类化合物、二甲基亚砜(阴性对照组)、阿苯达唑(阳性对照组)作用24小时后多房棘球绦虫原头蚴在光镜下的状态对比图。

图2为本发明实施例2中采用二苯甲基哌嗪类化合物、二甲基亚砜(阴性对照组)、阿苯达唑(阳性对照组)作用后萎缩的多房棘球绦虫微囊在光镜下的形态对比图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本发明而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本发明各权利要求所要求保护的技术方案。本发明下述实施例中所采用的原料若无特殊说明，均为常规市售获得，所采用的实验操作若无特殊说明，均为本领域常规操作。

实施例1：

本实施例提供本发明四种二苯甲基哌嗪类化合物(氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪)抗多房棘球绦虫棘球蚴作用，具体实验过程如下：

1、实验方法：

将感染多房棘球蚴的蒙古沙鼠麻醉后脱颈处死，在无菌条件下分离沙鼠腹腔内的泡球蚴组织，置于含有1％青霉素—链霉素的新鲜生理盐水中剪碎并充分研磨得到混悬液，混悬液用60目的尼龙网过滤，收集滤液并用新鲜生理盐水(含1％青霉素—链霉素)重悬，重悬液用300目的尼龙网过滤，收集网上的原头蚴，并用新鲜生理盐水(含1％青霉素—链霉素)漂洗3次。将收集的原头蚴用RPMI1640培养液(含10％胎牛血清和1％青霉素—链霉素)重悬，取适量重悬液于载玻片上，置于倒置显微镜下观察原头蚴的活力状况，重悬至其存活率大于95％，将其稀释成约10000条/毫升备用。

将本发明四种二苯甲基哌嗪类化合物和阿苯达唑(阳性对照组)分别配制成浓度为50毫摩/升的二甲基亚砜(DMSO)溶液，备用。

48孔板上每孔加入949微升的RPMI 1640培养基(含10％小牛血清和1％青霉素—链霉素)，50微升的原头蚴的备用液(约含原头蚴500条)，1微升的待测药物溶液，使得终浓度为50微摩/升，同时设不含药物的DMSO对照组(阴性对照组)；培养板于37℃、5％CO₂的培养箱中培养48小时，每隔24小时，在倒置显微镜下观察原头蚴状态。实验重复三次。

2、实验结果：

实验结果参见如下表1和图1所示。

表1 二苯甲基哌嗪类药物对多房棘球绦虫原头蚴的抑制效果

药物	24h原头蚴死亡率(％)	48h原头蚴死亡率(％)
			氟桂利嗪	100	-
桂利嗪	10～20	100
			美克洛嗪	100	-
西替利嗪	5～10	10～20
			阿苯达唑	5～10	10～15
DMSO	<5	<5

由表1和图1实验数据可以看出：本发明的二苯甲基哌嗪类化合物相比本领域临床用于治疗棘球蚴病的阿苯达唑而言，针对多房棘球绦虫原头蚴的抑制效果具有等同甚至更加突出的效果，其中，氟桂利嗪和美克洛嗪具有显著性效果。

实施例2：

本实施例提供本发明四种二苯甲基哌嗪类化合物(氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪)抗多房棘球绦虫微囊作用，具体实验过程如下：

1、实验方法：

将感染多房棘球蚴的蒙古沙鼠麻醉后脱颈处死，在无菌条件下分离沙鼠腹腔内的泡球蚴组织，利用含1％青霉素—链霉素的新鲜生理盐水清洗干净，剪碎成小块置于长满HepG2细胞的培养皿(含有DMEM高糖培养基、10％胎牛血清、1％青霉素—链霉素)中培养，2～3天更换一次细胞，收集培养出的微囊(体积相似)备用。

48孔板上每孔加入999微升的DMEM高糖培养基(含10％小牛血清和1％青霉素—链霉素)，3个微囊，1微升的待测药物溶液，使得终浓度为50微摩/升，同时设不含药物的DMSO对照组(阴性对照组)；培养板于37℃、5％CO₂的培养箱中培养6天，每隔2天，在倒置显微镜下观察微囊状态，记录萎缩微囊的数量。实验重复二次。

2、实验结果：

实验结果参见如下表2和图2所示。

表2 二苯甲基哌嗪类药物对多房棘球绦虫微囊的抑制效果

由表2和图2实验数据可以看出：本发明的二苯甲基哌嗪类化合物相比本领域临床用于治疗棘球蚴病的阿苯达唑而言，针对多房棘球绦虫微囊的抑制效果具有等同甚至更加突出的效果，其中，氟桂利嗪具有显著性效果。

实施例3：

本实施例提供本发明四种二苯甲基哌嗪类化合物(氟桂利嗪、桂利嗪、美克洛嗪和西替利嗪)体内抗多房棘球绦虫包囊作用，具体实验过程如下：

1、实验方法：

将感染多房棘球蚴的蒙古沙鼠麻醉后脱颈处死，在无菌条件下分离沙鼠腹腔内的泡球蚴组织，置于含有1％青霉素—链霉素的新鲜生理盐水中剪碎并充分研磨得到混悬液，混悬液用60目的尼龙网过滤，收集滤液并用新鲜生理盐水(含1％青霉素—链霉素)重悬，重悬液用300目的尼龙网过滤，收集网上的原头蚴，并用新鲜生理盐水(含1％青霉素—链霉素)漂洗3次。将收集的原头蚴用新鲜生理盐水(含1％青霉素—链霉素)重悬，取适量重悬液于载玻片上，置于倒置显微镜下观察原头蚴的活力状况，重悬至其存活率大于95％，将其稀释成约7500条/毫升备用。

30只昆明小鼠(雌性，6-8周龄)每只腹腔注射0.2毫升含有原头蚴(约1500条)的生理盐水，SPF级动物实验室饲养8个月后，随机分成6组(5只/组)，其中5组为给药组，1组为溶剂对照组。将本发明四种二苯甲基哌嗪类化合物和阿苯达唑(阳性对照组)分别用由蜂蜜(Honey)和磷酸盐缓冲液(PBS)组成的混合液(比例为2：5)配制成浓度为10毫克/毫升的混悬液，按照5毫升/千克体重的剂量灌胃给药，每天1次，连续8周。停药后将小鼠麻醉处死并解剖，分离包囊、称重并记录包囊重量，用GraphPad Prism 5进行数据分析。

2、实验结果：

实验结果参见如下表3所示。

表3 二苯甲基哌嗪类化合物对小鼠体内多房棘球绦虫包囊的抑制效果

备注：*p<0.05，**p<0.01。

由表3实验数据可以看出：包囊重量比溶剂对照组的重量越低越好，其中，相比溶剂对照组，本发明的四种二苯甲基哌嗪类化合物对小鼠体内多房棘球绦虫包囊均起到抑制效果，不仅如此，本发明桂利嗪的效果要显著优于阳性对照药阿苯达唑。

最后，需要说明的是，本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。

Claims

1.氟桂利嗪和/或桂利嗪以及其药学上可接受的盐在制备治疗棘球蚴病的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述棘球蚴病包括囊型棘球蚴病和/或泡型棘球蚴病。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述棘球蚴包括其角皮层、生发层、生发囊、子囊、孙囊、囊液和原头蚴中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物包括有效量的氟桂利嗪和/或桂利嗪及其药学上可接受的盐；还选择性包括辅料。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述药物的剂型包括片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、口服液或注射剂。