CN115684589A - 一种用于结核分枝杆菌的检测试剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种用于结核分枝杆菌的检测试剂，所述检测体系包括抗原修复剂、免疫纳米磁珠抓取剂、荧光染色剂、复染剂和洗脱剂，所述抗原修复剂为高碘酸溶液。本发明提供的结核分枝杆菌检测试剂，大幅降低了临床样本中结合分枝杆菌的检测限，同时大幅提高了结核分枝杆菌检测的灵敏度和准确率。
Description
技术领域
本发明涉及免疫检测技术领域，具体涉及一种用于结核分枝杆菌的检测试剂及其制备方法。
背景技术
结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的一种人畜共患传染病。据2021年WHO统计，全球新发结核病患者987万，死亡128万例左右，TB仍然是世界上最致命的传染病杀手之一。我国结核发病率位于世界第二，仅次于印度，结核病早期快速诊断与防治是我国控制结核病的关键环节。实验室病原学检查，即通过检测结核分枝杆菌或其核酸，可为临床诊断提供最重要的实验室依据。
MTB为细长略带弯曲的杆菌，大小1～0.4μm，临床常见用于MTB的检测方法包括齐-尼氏抗酸染色法(Z-N检测法)、培养法和金胺O荧光染色法等。
但对于临床上结核病早期轻度感染患者，菌体含量低，采用常见的Z-N检测法、培养法和金胺O荧光染色法，容易因检出限过高造成漏诊。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中的早期结核病患者样本中结核病含量过低导致的漏检缺陷，从而提供一种用于结核分枝杆菌的检测试剂及其制备方法。
本发明提供的一种用于结核分支杆菌的检测试剂，包括抗原修复剂、免疫纳米磁珠抓取剂、荧光染色剂、复染剂和洗脱剂，所述抗原修复剂为高碘酸溶液。
优选的，所述高碘酸溶液的浓度为5-10mg/mL，
优选的，所述高碘酸溶液的浓度为8mg/mL。
优选的，所述免疫纳米磁珠抓取剂的质量浓度为5-10mg/mL。
优选的，所述免疫纳米磁珠抓取剂的质量浓度为10mg/mL。
优选的，所述荧光染色剂组成为：每100mL荧光染色剂包含有：
金胺o 0.5-0.9g；
罗丹明B 0.1-0.3g；
苯酚1-2mL；
乙醇17-28.5mL；
甘油19.5-30.5mL；
二甲基亚砜10-11.5mL；
余量为水。
优选的，所述荧光染色剂组成为：每100mL荧光染色剂包含有：
金胺o 0.6-0.9g；
罗丹明B 0.1-0.3g；
苯酚2mL；
乙醇23.5mL；
甘油19.5mL；
二甲基亚砜10mL；
余量为水。
优选的，所述洗脱剂组成为：每100mL洗脱剂包含有：
盐酸0.5-1mL；
乙醇59.5-64m1；
水35-40m1。
优选的，所述复染剂为浓度为30-50mg/mL的高锰酸钾溶液。
优选的，所述复染剂为浓度为30mg/mL的高锰酸钾溶液。
与现有技术相比，本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的用于结核分枝杆菌的检测试剂，采用高碘酸为抗原修复液，起氧化修复标本的作用。免疫纳米磁珠可特异性富集、纯化样本中的MTB，增加标本菌体的单位浓度，增加标本阳性的检出率，减少下一步的非特异性染色。金胺O起标记抗酸分枝杆菌的作用，罗丹明B为红色荧光素，能使抗酸杆菌的染色效果更佳，使抗酸杆菌呈现金黄色。乙醇为有机促溶剂，使粉末更好的溶解和保持溶液的稳定性，甘油为保湿剂，可以增加溶液整体的保湿度以及折光度，提高反差，从而使得染色更为清晰。苯酚为渗透剂，可增加试剂对标本细胞的渗透和染色作用。洗脱剂中的盐酸起染色后的洗涤脱色作用，结核分枝杆菌由于抗酸特性不被脱色，减少其他杂菌的非特异性染色。高锰酸钾复染剂使标本复染后增强了颜色反差，便于菌体成像更加清晰。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是Z-N抗酸染色法处理的痰标本染色效果图；
图2是本发明实施例2制备的提供的检测试剂处理的痰标本染色效果图；
具体实施方式
实施例1
用于结核分枝杆菌的检测试剂包括:
(1)100mL抗原修复剂，抗原修复剂为质量浓度为10mg/mL的高碘酸溶液，其制备方法为：称取高碘酸1g，充分溶解于100mL蒸馏水中制得；
(2)免疫纳米磁珠抓取剂100mL，免疫纳米磁珠抓取剂的浓度为10mg/mL，其制备方法为：
以1g氨基化介孔二氧化硅包覆Fe3O4/SiO2纳米粒子为原料(购于昂星新型碳材料常州有限公司)，加入50mL二甲基甲酰胺(DMF)于锥形瓶中，超声分散1h后，再加入10mL溶解有3g丁二酸酐(SA)的DMF于锥形瓶，室温下搅拌12h；置磁力架分离后，用无水乙醇洗涤6次，50℃下真空干燥，获得羧基化的磁性微球。在50mL锥形瓶中加入上一步的羧基化的磁性微球30mg，再加入15mL蒸馏水，超声分散5min，再加入30mg/mL的1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)和30mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)各1mg于50mL锥形瓶中，室温下水浴振荡活化羧基0.5h，再加入15ml溶解有品红和海藻糖的混合溶液(品红和海藻糖的质量浓度为1mg/mL)，室温振荡反应24h，置磁力架分离后，用无水乙醇和蒸馏水反复洗涤至洗涤液中不显红色，40℃真空干燥，获得包被有海藻糖和品红的活性纳米磁珠原液。将活性纳米磁珠原液溶解于蒸馏水中，使其达到预期浓10mg/m1。
(3)荧光染色剂100mL，其中包含：金胺O 0.9g，罗丹明B 0.1g，苯酚1mL，蒸馏水32.5mL，乙醇28.5mL，甘油26.5mL，二甲基亚砜11.5mL，总体积为100mL。其中，试剂(苯酚、乙醇、甘油、二甲基亚砜)均是分析纯(AR)级别；其制备方法为：将苯酚、甘油和乙醇充分混溶得到有机溶剂；将部分蒸馏水与金胺O、罗丹明B混合溶解为饱和溶剂；再将饱和溶剂、有机溶剂和剩余部分的水搅拌充分混合，即得。
(4)洗脱剂100mL，其中包含：盐酸1mL，乙醇64mL，水35mL；盐酸浓度为1mol/L，乙醇浓度为无水乙醇(分析纯AR)；其制备方法为：将盐酸、乙醇和水充分混合即得。
(5)复染剂100mL，复染剂为质量浓度为50mg/mL的高锰酸钾溶液；其制备方法为：称取高锰酸钾5g，充分溶解于100mL蒸馏水中，即得。
实施例2
用于结核分枝杆菌的检测试剂包括:
(1)100mL抗原修复剂，抗原修复剂为质量浓度为8mg/mL的高碘酸溶液，其制备方法为：称取高碘酸0.8g，充分溶解于100mL蒸馏水中制得；
(2)免疫纳米磁珠抓取剂100mL，免疫纳米磁珠抓取剂的浓度为5mg/mL，其制备方法同实施例1。
将纳米磁珠原液溶解于蒸馏水中，使其达到预期浓5mg/m1。
(3)荧光染色剂100mL，其中包含：金胺O 0.6-0.9g，罗丹明B0.1-0.3g，苯酚2mL，蒸馏水45.0mL，乙醇23.5mL，甘油19.5mL，二甲基亚砜10mL，总体积为100mL。其中，试剂(苯酚、乙醇、甘油、二甲基亚砜)浓度均是分析纯(AR)级别；其制备方法为：将苯酚、甘油和乙醇充分混溶得到有机溶剂；将部分蒸馏水与金胺O、罗丹明B混合溶解为饱和溶剂；再将饱和溶剂、有机溶剂和剩余部分的水搅拌充分混合，即得。
(4)洗脱剂100mL，其中包含：盐酸0.5mL，乙醇59.5mL，水40mL；盐酸浓度为1mol/L，乙醇浓度为无水乙醇(分析纯AR)；其制备方法为：将盐酸、乙醇和水充分混合即得。
(5)复染剂100mL，复染剂为质量浓度为30mg/mL的高锰酸钾溶液；其制备方法为：称取高锰酸钾3g，充分溶解于100mL蒸馏水中，即得。
实施例3
用于结核分枝杆菌的检测试剂包括:
(1)抗原修复剂100mL，抗原修复剂为质量浓度为5mg/mL的高碘酸溶液，其制备方法为：称取高碘酸0.5g，充分溶解于100mL蒸馏水中制得；
(2)免疫纳米磁珠抓取剂100mL，免疫纳米磁珠抓取剂的浓度为5mg/mL，其制备方法同实施例1。
将活性纳米磁珠原液溶解于蒸馏水中，使其达到预期浓5mg/m1。
(3)荧光染色剂100mL，其中包含：金胺O 0.5g，罗丹明B 0.2g，苯酚2mL，蒸馏水40.5mL，乙醇17mL，甘油30.5mL，二甲基亚砜10mL，。其中，试剂(苯酚、乙醇、甘油、二甲基亚砜)均是分析纯(AR)级别；其制备方法为：将苯酚、甘油和乙醇充分混溶得到有机溶剂；将部分蒸馏水与金胺O、罗丹明B混合溶解为饱和溶剂；再将饱和溶剂、有机溶剂和剩余部分的水搅拌充分混合，即得。
(4)洗脱剂100mL，其中包含：盐酸0.5mL，乙醇59.5mL，水40mL；盐酸浓度为1mol/L，乙醇浓度为无水乙醇(分析纯AR)；其制备方法为：将盐酸、乙醇和水充分混合即得。
(5)复染剂100mL，复染剂为质量浓度为50mg/mL的高锰酸钾溶液；其制备方法为：称取高锰酸钾5g，充分溶解于100mL蒸馏水中，即得。
下面以本发明实施例2制备的结核分枝杆菌检测试剂为代表，对本发明提供的结核分枝杆菌检测试剂进行最低检测限、敏感性、特异性和稳定性等指标试验，说明本发明提供的结合分支杆菌检测试剂的技术效果。
试验准备
(1)菌种与痰液标本来源
结核分枝杆菌ATCC25177菌种和大肠埃希氏菌CMCC(B)44102菌种购于信阳莱耀生物科技有限公司，金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003菌种，鼠李糖乳杆菌ATCC53103菌种和植物乳杆菌ATCC8014菌种均购于北京三药科技开发公司，痰液标本来源于2021年5月-2022年2月山东省第二总医院收治的145例初诊疑似肺结核患者，男85例，女60例，年龄26～71岁，平均年龄(52.3±5.6)岁；患者无其他感染，无其他心、肝、肾、肺等功能障碍，患者均自愿签署知情同意书。
(2)仪器与试剂
NGPro-32液基纯化自动染色机购于江苏诺鬲生物科技有限公司，全自动显微镜扫描系统购于江苏诺鬲生物科技有限公司，LEICADM500荧光显微镜购自杭州图显科技公司；BACTEC MGIT960分枝杆菌快速培养分析仪购自美国BD公司，Thermo Scientific MK3酶标仪购自济南存昌生物技术有限公司，台式高速离心机离心机H/T16MM购于湖南赫西仪器装备有限公司，Z-N抗酸染色试剂盒购于珠海BASO生物技术有限公司，综合苏通液体培养基购于上海瑞楚生物科技有限公司，脑心浸液肉汤培养基和MRS肉汤培养基购于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
(3)免疫磁珠荧光染色法建立
采用全自动NGPro-32液基纯化自动染色机设备进行检测，取出预封装有本发明实施例2制备的结核分枝杆菌检测试剂的深孔板颠倒混匀数次使免疫磁珠重悬，使用前小心撕去铝箔封口膜。在深孔板的第1列和第6列中加入1-3.5ml标本，将深孔板放置于全自动纯化染色机深孔板底座上。将磁棒套插入全自动纯化仪磁棒套架卡槽内，编辑好提取程序，选择自动化提取程序并运行；自动化程序结束后，将第5、10列提纯标本取出制片。打开全自动显微镜扫描系统一体机设备，进入扫描软件主界面，点击完整模式，选中放入玻片的样品盘位(可同时放置5份标本)，点击刷新预览图-等待预览图拼图成功，对焦点位根据实际情况进行适当调整，点击立即扫描-等待扫描结束(12mm×12mm区域，扫描时间低于240S)，扫描结束后，点击诊断报告并打印。本设备在UV波段(激发波长330nm～380nm，发射波长420nm)高倍镜下自动检测，含有AI算法数据库，采用高性能的神经网络算法，融合了SE、FPN等多种优化机制，在保证高识别率的同时实现了对标本MTB实时检测。
指标试验
1、最低检测限实验
将结核分枝杆菌ATCC 25177菌株的菌种瓶平衡至室温，在生物安全柜中打开；用移液枪吸取配套的菌种复苏液滴加到菌种瓶中，轻轻旋转瓶身并吹打5-10s，使冻干菌种和液体充分混合并完全溶解；将瓶内的液体接种至综合苏通液体培养基中，将其放入37℃培养箱中培养28-35天。取阳性结核分枝杆菌菌悬液适量用酶标仪检测OD600＝1(菌数量3×108CFU/ml)时，作为初始浓度，然后进行梯度稀释，使菌液浓度分别为3×105，3×104，3×103，3×102，1.5×102，1×102，3×10，各浓度菌液分别进入采用本发明实施例2制备的结核分枝杆菌检测试剂的免疫磁珠荧光染色法分析系统进行检测，分析检测下限。结果如表1所示。
表1免疫磁珠荧光染色法检测下限
*“+”表示本方法镜下判读结果阳性。
由表1可知，本实施例2提供的结合分支杆菌检测试剂的检测下限是30CFU/ml，当浓度低于此时，结果可能会被判定为阴性。
2、敏感性和特异性实验
将上述不同浓度的结核分枝杆菌ATCC 25177菌株培养液50份做纯阳标本，进入采用本发明实施例2制备的结核分枝杆菌检测试剂的免疫磁珠荧光染色法分析系统进行检测，进行敏感性试验。将金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003菌种和大肠埃希氏菌CMCC(B)44102菌种平衡至室温，用移液枪吸取配套的菌种复苏液进行复苏后，分别接种至脑心浸液肉汤培养基中，将其放入37℃培养箱中培养24-48h。将鼠李糖乳杆菌ATCC53103菌种和植物乳杆菌ATCC8014菌种平衡至室温，用相应的菌种复苏液进行复苏后分别接种至MRS肉汤培养基中，将其放入37℃培养箱中培养24-48h。将培养的各菌悬液稀释后摇匀后，将清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细管将菌液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细管渗透作用自动进入计数室，使计数室充满菌液，在显微镜下观察小方格中菌的个数[9]，后计算出1mL菌悬液中细菌的总个数，然后四种菌株菌悬液进行浓度稀释，混合，使得混合菌悬液中所含的各菌液浓度(单位CFU/ml)分别为1×106，1×105，1×104，1×103，1×102，10，混合菌悬液的各浓度菌液各做50份纯阴标本，进入免疫磁珠荧光染色法分析系统进行检测，进行特异性试验。结果如表2和表3所示。
表2免疫磁珠荧光染色法灵敏度
表3免疫磁珠荧光染色法特异性(％)
由表2可知，本发明实施例2提供的结核分枝杆菌的检测试剂的灵敏度随着初始菌液浓度的变化会发生变化，当接近检测下限30CFU/ml时变化明显；当浓度低于此时，灵敏度下降至56％；
由表3免疫磁珠荧光染色法特异性实验结果可知，而其他四种菌株混悬液在不同浓度时，使用实施例2提供的结核分枝杆菌的检测试剂，经过免疫磁珠的磁吸和荧光染色的两部处理后，混合菌液的检测结果均为阴性，说明实施例2提供的结合分支杆菌的检测方法的特异性均为100％。
3、稳定性试验
对本发明实施例提供的结核分枝杆菌检测试剂进行稳定性试验，具体实验步骤为：将本发明实施例提供的结核分枝杆菌检测试剂分别置于0℃、20℃、30℃三个不同温度下，分别各自放置30天、60天、90天、180天、365天，采用处理后的结核分枝杆菌检测试剂对痰标本进行检测，结果显示，处理后的结核分支杆菌的灵敏度、特异度和准确度均在95％以上。
下面以本发明实施例2制备法人结核分枝杆菌检测试剂为代表，对本发明提供的结核分枝杆菌检测试剂与传统的结核分枝杆菌检测方法进行临床对比实验，对比指标包括阳性检出率、灵敏度和准确度、染色实验三个指标。
试验准备
(1)菌种与标本来源
结核分枝杆菌ATCC25177菌种和大肠埃希氏菌CMCC(B)44102菌种购于信阳莱耀生物科技有限公司，金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003菌种，鼠李糖乳杆菌ATCC53103菌种和植物乳杆菌ATCC8014菌种均购于北京三药科技开发公司，痰液标本来源于2021年5月-2022年2月山东省第二总医院收治的145例初诊疑似肺结核患者，男85例，女60例，年龄26～71岁，平均年龄(52.3±5.6)岁；患者无其他感染，无其他心、肝、肾、肺等功能障碍，患者均自愿签署知情同意书。
(2)仪器与试剂
NGPro-32液基纯化自动染色机购于江苏诺鬲生物科技有限公司，全自动显微镜扫描系统购于江苏诺鬲生物科技有限公司，LEICADM500荧光显微镜购自杭州图显科技公司；BACTEC MGIT960分枝杆菌快速培养分析仪购自美国BD公司，Thermo Scientific MK3酶标仪购自济南存昌生物技术有限公司，台式高速离心机离心机H/T16MM购于湖南赫西仪器装备有限公司，Z-N抗酸染色试剂盒购于珠海BASO生物技术有限公司，综合苏通液体培养基购于上海瑞楚生物科技有限公司，脑心浸液肉汤培养基和MRS肉汤培养基购于青岛高科技工业园海博生物技术有限公司。
(3)免疫磁珠荧光染色法建立
采用全自动NGPro-32液基纯化自动染色机设备进行检测，取出预封装有本发明实施例2制备的结核分枝杆菌检测试剂的深孔板颠倒混匀数次使免疫磁珠重悬，使用前小心撕去铝箔封口膜。在深孔板的第1列和第6列中加入1-3.5ml标本，将深孔板放置于全自动纯化染色机深孔板底座上。将磁棒套插入全自动纯化仪磁棒套架卡槽内，编辑好提取程序，选择自动化提取程序并运行；自动化程序结束后，将第5、10列提纯标本取出制片。打开全自动显微镜扫描系统一体机设备，进入扫描软件主界面，点击完整模式，选中放入玻片的样品盘位(可同时放置5份标本)，点击刷新预览图-等待预览图拼图成功，对焦点位根据实际情况进行适当调整，点击立即扫描-等待扫描结束(12mm×12mm区域，扫描时间低于240S)，扫描结束后，点击诊断报告并打印。本设备在UV波段(激发波长330nm～380nm，发射波长420nm)高倍镜下自动检测，含有AI算法数据库，采用高性能的神经网络算法，融合了SE、FPN等多种优化机制，在保证高识别率的同时实现了对标本MTB实时检测。
(4)临床标本取材
收集患者的一般资料，如临床症状、体征、X线、结核血常规、血生化等检验结果。每例患者收集深咯痰标本，合格标本量≥1ml，将痰标本放入无菌塑料标本盒中，以做痰涂片镜检和培养用。
1、阳性检出率、灵敏度和准确度实验
(1)萋-尼(Z-N)抗酸染色法
每例患者痰标本直接涂片1张，按照试剂盒说明书进行染色；最后置于光学显微镜油镜下观察；若结果阳性的话，结核分枝杆菌呈红色，其他细菌及细胞呈蓝色。
(2)免疫磁珠荧光染色法
用移液枪将临床患者痰液(无需特殊处理)标本加入到本发明实施例2制备的结合分枝杆菌检测试剂的预封装深孔板样品巢(预装有4％氢氧化钠消化液)中；纯化染色完毕后制片进入全自动荧光生物显微镜设备中检测，在UV波段高倍镜下自动检测，出具结果报告，若结果阳性的话，可见结核分枝杆菌经过富集纯化，荧光染色后在蓝色的背景下，菌体呈现金黄色。
(3)BACTEC 960系统培养法
将患者痰液标本吸取至15ml的离心管中，加入等体积4％的氢氧化钠溶液，旋紧盖子涡旋震荡15-20s，室温静置15-20min。加入无菌磷酸盐缓冲液至15ml，充分混匀后3000g离心30min，弃去上清液加入1ml无菌磷酸盐缓冲液重悬沉淀物，取0.5ml重悬液接种于MGIT960液体快速结核杆菌培养基中，放入MGIT 960快速培养系统中进行培养。根据测定管中荧光强度，定期判断管内结核分枝杆菌的生长情况。
(5)观察指标
分析免疫磁珠荧光染色法用于结核分枝杆菌检测的方法可行性，以及评估在临床结核病检测中的诊断价值；诊断标准以培养法的结果为金标准，灵敏度＝真阳性数/总阳性数；特异性＝真阴性数/总阴性数；准确率＝(真阳性数+真阴性数)/(总阳性数+总阴性数)。
(6)统计学方法
检验结果的数据采用SPSS 22.0统计学软件进行处理分析，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，进行t检验；计数资料以例数(n)，率(％)表示；组间比较采用χ2检验，若P＜0.05则认为差异显著，具有统计学意义。
阳性检出率对比实验结果
临床三种检测方法对结核分枝杆菌的检出结果对比见表4。145例标本中，采用实施例2提供的结核分枝杆菌检测试剂，结核分枝杆菌免疫磁珠富集纯化后自动荧光染色，经过全自动荧光扫描仪检测的阳性率为73.1％，明显高于传统Z-N抗酸染色方法阳性率40.7％，差异显著具有统计学意义(*χ2＝31.0599，P＜0.05)；免疫磁珠荧光染色法的阳性率低于培养法的阳性率78.6％，但差异不显著不具有统计学意义(**χ2＝1.2052，P＞0.05)。
表4三种检测方法对TB患者结核分枝杆菌感染的检测结果对比(n)
(*χ2＝31.0599，P＜0.05，**χ2＝1.2052，P＞0.05)
灵敏度、特异性和准确率对比实验结果
临床两种染色方法与培养法检测结果对比见表5和表6，实施例2提供的结合分支杆菌检测试剂的灵敏度、特异度、准确率为92.98％，100％，94.48％，明显高于Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度、准确率(47.37％，83.87％，55.17％)，且差异显著具有统计学意义(χ2＝56.6647，P＜0.05；χ2＝5.4386，P＜0.05；χ2＝59.4792，P＜0.05)。
表5实施例2和Z-N抗酸染色法检测结果与培养法结果对比(n)
表6实施例2和Z-N抗酸染色法检测价值的比较(％)
2、染色试验
利用Z-N法和本发明实施例2提供的检测试剂，分别针对痰标本进行染色，Z-N法染色结果如1所示，本发明实施例2提供的检测试剂的染色结果如图2所示。
从图1可以看出，抗酸结合分支杆菌呈红色，形状呈稍弯曲西甘庄；其他细菌呈蓝色。整体背景差异不大，不易识别抗酸结核分枝杆菌。对于早期轻度感染患者，因结合分枝杆菌菌体含量低，容易造成假阴性，出现漏诊概率较高。
从图2可以看出，本发明实施例2提供的检测试剂，通过对痰标本中的结核分枝杆菌进行抗原修复、纳米磁珠富集纯化以及多重荧光染色，可有效增强和提高检测结果的敏感性、特异性和准确性。染色结果中结核分枝杆菌呈现金黄色，形状呈稍弯曲杆状、螺旋状以及交叉杆状结构，染色后的结核分枝杆菌与蓝色背景反差色大，便于肉眼识别，可有效提高识别效率和识别准确度。另染色结果，无需油镜即可清晰观察到结核分枝杆菌，结果判断更加简单、高效。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种用于结核分支杆菌的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括抗原修复剂、免疫纳米磁珠抓取剂、荧光染色剂、复染剂和洗脱剂，所述抗原修复剂为高碘酸溶液。
2.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述高碘酸溶液的浓度为5-10mg/mL。
3.如权利要求2所述的检测试剂，其特征在于，所述高碘酸溶液的浓度为8mg/mL。
4.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述免疫纳米磁珠抓取剂的制备方法为：以Fe3O4/SiO2纳米粒子为原料，经过乙醇溶解，室温下超声分散，经氨基化修饰活化，加入碱性品红(BF)溶液进行处理，包被有海藻糖的活性纳米磁珠；纳米磁珠的质量浓度为5-10mg/mL。
5.如权利要求4所述的检测试剂，其特征在于，所述免疫纳米磁珠抓取剂的质量浓度为10mg/mL。
6.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述荧光染色剂组成为：每100mL荧光染色剂包含有：
金胺o 0.5-0.9g；
罗丹明B 0.1-0.3g；
苯酚1-2mL；
乙醇17-28.5mL；
甘油19.5-30.5mL；
二甲基亚砜10-11.5mL；
余量为水。
7.如权利要求6所述的检测试剂，其特征在于，所述荧光染色剂组成为：每100mL荧光染色剂包含有：
金胺o 0.6-0.9g；
罗丹明B 0.1-0.3g；
苯酚2mL；
乙醇23.5mL；
甘油19.5mL；
二甲基亚砜10mL；
余量为水。
8.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述洗脱剂组成为：每100mL洗脱剂包含有：
盐酸0.5-1mL；
乙醇59.5-64m1；
水35-40m1。
9.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述复染剂为浓度为30-50mg/mL的高锰酸钾溶液。
10.如权利要求1所述的检测试剂，其特征在于，所述复染剂为浓度为30mg/mL的高锰酸钾溶液。
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