CN115650957A - 一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 - Google Patents
一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115650957A CN115650957A CN202211130925.9A CN202211130925A CN115650957A CN 115650957 A CN115650957 A CN 115650957A CN 202211130925 A CN202211130925 A CN 202211130925A CN 115650957 A CN115650957 A CN 115650957A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- synuclein
- compound
- alpha
- proteolytic
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 title claims abstract description 80
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 title claims abstract description 80
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 230000007065 protein hydrolysis Effects 0.000 title 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims abstract description 54
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 70
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010067889 Dementia with Lewy bodies Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002832 Lewy body dementia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 claims description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 claims description 2
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims 1
- 239000010408 film Substances 0.000 claims 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 abstract description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 15
- 239000003446 ligand Substances 0.000 abstract description 14
- 102000006275 Ubiquitin-Protein Ligases Human genes 0.000 abstract description 11
- 108010083111 Ubiquitin-Protein Ligases Proteins 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 abstract description 7
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 abstract description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 5
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 abstract description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 135
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 105
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 69
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 67
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 50
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 43
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 41
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 34
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 21
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 21
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical compound [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 20
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 18
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 16
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 13
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 13
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 13
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 4-toluenesulfonyl chloride Chemical compound CC1=CC=C(S(Cl)(=O)=O)C=C1 YYROPELSRYBVMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 10
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N (1S,2S,4R,8S,9S,11S,12R,13S,19S)-6-[(3-chlorophenyl)methyl]-12,19-difluoro-11-hydroxy-8-(2-hydroxyacetyl)-9,13-dimethyl-6-azapentacyclo[10.8.0.02,9.04,8.013,18]icosa-14,17-dien-16-one Chemical compound C([C@@H]1C[C@H]2[C@H]3[C@]([C@]4(C=CC(=O)C=C4[C@@H](F)C3)C)(F)[C@@H](O)C[C@@]2([C@@]1(C1)C(=O)CO)C)N1CC1=CC=CC(Cl)=C1 AOSZTAHDEDLTLQ-AZKQZHLXSA-N 0.000 description 7
- 229940126657 Compound 17 Drugs 0.000 description 7
- GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N (1s,2s,3r,4r)-3-[[5-chloro-2-[(1-ethyl-6-methoxy-2-oxo-4,5-dihydro-3h-1-benzazepin-7-yl)amino]pyrimidin-4-yl]amino]bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxamide Chemical compound CCN1C(=O)CCCC2=C(OC)C(NC=3N=C(C(=CN=3)Cl)N[C@H]3[C@H]([C@@]4([H])C[C@@]3(C=C4)[H])C(N)=O)=CC=C21 GLGNXYJARSMNGJ-VKTIVEEGSA-N 0.000 description 6
- YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N (4R)-5-[(6-bromo-3-methyl-2-pyrrolidin-1-ylquinoline-4-carbonyl)amino]-4-(2-chlorophenyl)pentanoic acid Chemical compound CC1=C(C2=C(C=CC(=C2)Br)N=C1N3CCCC3)C(=O)NC[C@H](CCC(=O)O)C4=CC=CC=C4Cl YQOLEILXOBUDMU-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 6
- YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 2-amino-9-[(1S,6R,8R,9S,10R,15R,17R,18R)-8-(6-aminopurin-9-yl)-9,18-difluoro-3,12-dihydroxy-3,12-bis(sulfanylidene)-2,4,7,11,13,16-hexaoxa-3lambda5,12lambda5-diphosphatricyclo[13.2.1.06,10]octadecan-17-yl]-1H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC2=C(N=CN2[C@@H]2O[C@@H]3COP(S)(=O)O[C@@H]4[C@@H](COP(S)(=O)O[C@@H]2[C@@H]3F)O[C@H]([C@H]4F)N2C=NC3=C2N=CN=C3N)C(=O)N1 YSUIQYOGTINQIN-UZFYAQMZSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940125758 compound 15 Drugs 0.000 description 6
- 229940125844 compound 46 Drugs 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 6
- ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N (1R,3R)-3-[[3-bromo-1-[4-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-6-yl]amino]-N,1-dimethylcyclopentane-1-carboxamide Chemical compound BrC1=NN(C2=NC(=NC=C21)N[C@H]1C[C@@](CC1)(C(=O)NC)C)C1=CC=C(C=C1)C=1SC(=NN=1)C ASGMFNBUXDJWJJ-JLCFBVMHSA-N 0.000 description 5
- VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4,4-dimethylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(C)=O VIJSPAIQWVPKQZ-BLECARSGSA-N 0.000 description 5
- UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N (3ar,5s,6s,7r,7ar)-5-(difluoromethyl)-2-(ethylamino)-5,6,7,7a-tetrahydro-3ah-pyrano[3,2-d][1,3]thiazole-6,7-diol Chemical compound S1C(NCC)=N[C@H]2[C@@H]1O[C@H](C(F)F)[C@@H](O)[C@@H]2O UDQTXCHQKHIQMH-KYGLGHNPSA-N 0.000 description 5
- CRAUTELYXAAAPW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-4-fluoroisoindole-1,3-dione Chemical compound O=C1C=2C(F)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O CRAUTELYXAAAPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-6-[6-methoxy-4-[(3-phenylmethoxyphenyl)methoxy]-1-benzofuran-2-yl]imidazo[2,1-b][1,3,4]thiadiazole Chemical compound N1=C2SC(OC)=NN2C=C1C(OC1=CC(OC)=C2)=CC1=C2OCC(C=1)=CC=CC=1OCC1=CC=CC=C1 LFOIDLOIBZFWDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229940127007 Compound 39 Drugs 0.000 description 5
- LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N N-[(2R,3S)-2-(4-chlorophenyl)-1-(1,4-dimethyl-2-oxoquinolin-7-yl)-6-oxopiperidin-3-yl]-2-methylpropane-1-sulfonamide Chemical compound CC(C)CS(=O)(=O)N[C@H]1CCC(=O)N([C@@H]1c1ccc(Cl)cc1)c1ccc2c(C)cc(=O)n(C)c2c1 LVDRREOUMKACNJ-BKMJKUGQSA-N 0.000 description 5
- LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N [(1s,3r,4ar,7s,8s,8as)-3-hydroxy-8-[2-[(4r)-4-hydroxy-6-oxooxan-2-yl]ethyl]-7-methyl-1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahydronaphthalen-1-yl] (2s)-2-methylbutanoate Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=C[C@H]2C[C@@H](O)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)CC1C[C@@H](O)CC(=O)O1 LJOOWESTVASNOG-UFJKPHDISA-N 0.000 description 5
- SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N [(2R)-1-[[4-[(3-phenylmethoxyphenoxy)methyl]phenyl]methyl]pyrrolidin-2-yl]methanol Chemical compound C(C1=CC=CC=C1)OC=1C=C(OCC2=CC=C(CN3[C@H](CCC3)CO)C=C2)C=CC=1 SPXSEZMVRJLHQG-XMMPIXPASA-N 0.000 description 5
- 229940127204 compound 29 Drugs 0.000 description 5
- 229940125936 compound 42 Drugs 0.000 description 5
- 229940127271 compound 49 Drugs 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N nazartinib Chemical compound C1N(C(=O)/C=C/CN(C)C)CCCC[C@H]1N1C2=C(Cl)C=CC=C2N=C1NC(=O)C1=CC=NC(C)=C1 IOMMMLWIABWRKL-WUTDNEBXSA-N 0.000 description 5
- 229940124823 proteolysis targeting chimeric molecule Drugs 0.000 description 5
- IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N (2r)-n-[(2s,3r)-4-[[(4s)-6-(2,2-dimethylpropyl)spiro[3,4-dihydropyrano[2,3-b]pyridine-2,1'-cyclobutane]-4-yl]amino]-3-hydroxy-1-[3-(1,3-thiazol-2-yl)phenyl]butan-2-yl]-2-methoxypropanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](C)OC)[C@H](O)CN[C@@H]1C2=CC(CC(C)(C)C)=CN=C2OC2(CCC2)C1)C(C=1)=CC=CC=1C1=NC=CS1 IUSARDYWEPUTPN-OZBXUNDUSA-N 0.000 description 4
- STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N (2s)-n-[(3s,4s)-5-acetyl-7-cyano-4-methyl-1-[(2-methylnaphthalen-1-yl)methyl]-2-oxo-3,4-dihydro-1,5-benzodiazepin-3-yl]-2-(methylamino)propanamide Chemical compound O=C1[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC)[C@H](C)N(C(C)=O)C2=CC(C#N)=CC=C2N1CC1=C(C)C=CC2=CC=CC=C12 STBLNCCBQMHSRC-BATDWUPUSA-N 0.000 description 4
- FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 2-[[4-(2,2-difluoropropoxy)pyrimidin-5-yl]methylamino]-4-[[(1R,4S)-4-hydroxy-3,3-dimethylcyclohexyl]amino]pyrimidine-5-carbonitrile Chemical compound FC(COC1=NC=NC=C1CNC1=NC=C(C(=N1)N[C@H]1CC([C@H](CC1)O)(C)C)C#N)(C)F FMKGJQHNYMWDFJ-CVEARBPZSA-N 0.000 description 4
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940125878 compound 36 Drugs 0.000 description 4
- 229940125807 compound 37 Drugs 0.000 description 4
- 229940127113 compound 57 Drugs 0.000 description 4
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 4
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 4
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 4
- UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N (1R,9R,10S,11R,12R,15S,18S,21R)-10,11,21-trihydroxy-8,8-dimethyl-14-methylidene-4-(prop-2-enylamino)-20-oxa-5-thia-3-azahexacyclo[9.7.2.112,15.01,9.02,6.012,18]henicosa-2(6),3-dien-13-one Chemical compound C([C@@H]1[C@@H](O)[C@@]23C(C1=C)=O)C[C@H]2[C@]12C(N=C(NCC=C)S4)=C4CC(C)(C)[C@H]1[C@H](O)[C@]3(O)OC2 UAOUIVVJBYDFKD-XKCDOFEDSA-N 0.000 description 3
- ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N (1r,2r,4r)-2-(4-bromophenyl)-n-[(4-chlorophenyl)-(2-fluoropyridin-4-yl)methyl]-4-morpholin-4-ylcyclohexane-1-carboxamide Chemical compound C1=NC(F)=CC(C(NC(=O)[C@H]2[C@@H](C[C@@H](CC2)N2CCOCC2)C=2C=CC(Br)=CC=2)C=2C=CC(Cl)=CC=2)=C1 ABJSOROVZZKJGI-OCYUSGCXSA-N 0.000 description 3
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 3
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 3
- YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N (2r,3r,4s,5r)-2-[6-amino-8-[(4-phenylphenyl)methylamino]purin-9-yl]-5-(hydroxymethyl)oxolane-3,4-diol Chemical compound C=1C=C(C=2C=CC=CC=2)C=CC=1CNC1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O YJLIKUSWRSEPSM-WGQQHEPDSA-N 0.000 description 3
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 3
- HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N (3r,4r)-3-azaniumyl-5-[[(2s,3r)-1-[(2s)-2,3-dicarboxypyrrolidin-1-yl]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-oxo-4-sulfanylpentane-1-sulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)CC[C@@H](N)[C@@H](S)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N1CCC(C(O)=O)[C@H]1C(O)=O HUWSZNZAROKDRZ-RRLWZMAJSA-N 0.000 description 3
- MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M (3r,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-5-[methyl-[(1r)-1-phenylethyl]carbamoyl]-4-propan-2-ylpyrazol-3-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound C1([C@@H](C)N(C)C(=O)C2=NN(C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C2C(C)C)C=2C=CC(F)=CC=2)=CC=CC=C1 MPDDTAJMJCESGV-CTUHWIOQSA-M 0.000 description 3
- OMBVEVHRIQULKW-DNQXCXABSA-M (3r,5r)-7-[3-(4-fluorophenyl)-8-oxo-7-phenyl-1-propan-2-yl-5,6-dihydro-4h-pyrrolo[2,3-c]azepin-2-yl]-3,5-dihydroxyheptanoate Chemical compound O=C1C=2N(C(C)C)C(CC[C@@H](O)C[C@@H](O)CC([O-])=O)=C(C=3C=CC(F)=CC=3)C=2CCCN1C1=CC=CC=C1 OMBVEVHRIQULKW-DNQXCXABSA-M 0.000 description 3
- UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 1-[6-[2-[3-[3-[3-[2-[2-[3-[[2-[2-[[(2r)-1-[[2-[[(2r)-1-[3-[2-[2-[3-[[2-(2-amino-2-oxoethoxy)acetyl]amino]propoxy]ethoxy]ethoxy]propylamino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-1-oxopropan-2-yl Chemical compound O=C1C(SCCC(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(=O)N[C@@H](CSC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CO)C(=O)NCCCOCCOCCOCCCNC(=O)COCC(N)=O)CC(=O)N1CCNC(=O)CCCCCN\1C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2CC/1=C/C=C/C=C/C1=[N+](CC)C2=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C1 UNILWMWFPHPYOR-KXEYIPSPSA-M 0.000 description 3
- TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynyl-1H-purine-6,8-dione Chemical compound NC=1NC(C=2N(C(N(C=2N=1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C)=O TVTJUIAKQFIXCE-HUKYDQBMSA-N 0.000 description 3
- QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 3-[(1r)-1-[(2r,6s)-2,6-dimethylmorpholin-4-yl]ethyl]-n-[6-methyl-3-(1h-pyrazol-4-yl)imidazo[1,2-a]pyrazin-8-yl]-1,2-thiazol-5-amine Chemical compound N1([C@H](C)C2=NSC(NC=3C4=NC=C(N4C=C(C)N=3)C3=CNN=C3)=C2)C[C@H](C)O[C@H](C)C1 QBWKPGNFQQJGFY-QLFBSQMISA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N [(3r,4ar,5s,6s,6as,10s,10ar,10bs)-3-ethenyl-10,10b-dihydroxy-3,4a,7,7,10a-pentamethyl-1-oxo-6-(2-pyridin-2-ylethylcarbamoyloxy)-5,6,6a,8,9,10-hexahydro-2h-benzo[f]chromen-5-yl] acetate Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@](C)(CC(=O)[C@]2(O)[C@@]2(C)[C@@H](O)CCC(C)(C)[C@@H]21)C=C)C)OC(=O)C)C(=O)NCCC1=CC=CC=N1 PSLUFJFHTBIXMW-WYEYVKMPSA-N 0.000 description 3
- XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N asunaprevir Chemical compound O=C([C@@H]1C[C@H](CN1C(=O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(C)(C)C)OC1=NC=C(C2=CC=C(Cl)C=C21)OC)N[C@]1(C(=O)NS(=O)(=O)C2CC2)C[C@H]1C=C XRWSZZJLZRKHHD-WVWIJVSJSA-N 0.000 description 3
- KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N benzyl n-[(2r)-1-[(2s,4r)-2-[[(2s)-6-amino-1-(1,3-benzoxazol-2-yl)-1,1-dihydroxyhexan-2-yl]carbamoyl]-4-[(4-methylphenyl)methoxy]pyrrolidin-1-yl]-1-oxo-4-phenylbutan-2-yl]carbamate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CO[C@H]1CN(C(=O)[C@@H](CCC=2C=CC=CC=2)NC(=O)OCC=2C=CC=CC=2)[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)(O)C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C1 KGNDCEVUMONOKF-UGPLYTSKSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 3
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 3
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 3
- 229940125833 compound 23 Drugs 0.000 description 3
- 229940125961 compound 24 Drugs 0.000 description 3
- 229940125846 compound 25 Drugs 0.000 description 3
- 229940125851 compound 27 Drugs 0.000 description 3
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-amino-n-[3-(difluoromethoxy)-4-(1,3-oxazol-5-yl)phenyl]-4-methylpentanamide Chemical compound FC(F)OC1=CC(NC(=O)[C@H](N)CC(C)C)=CC=C1C1=CN=CO1 GCTFTMWXZFLTRR-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 2
- WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N (2s)-2-[[2-benzyl-3-[hydroxy-[(1r)-2-phenyl-1-(phenylmethoxycarbonylamino)ethyl]phosphoryl]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)C(CP(O)(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC1=CC=CC=C1 WWTBZEKOSBFBEM-SPWPXUSOSA-N 0.000 description 2
- IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N (3S,8S,10R,13S,14S,17S)-17-isoquinolin-7-yl-N,N,10,13-tetramethyl-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-3-amine Chemical compound CN(C)[C@H]1CC[C@]2(C)C3CC[C@@]4(C)[C@@H](CC[C@@H]4c4ccc5ccncc5c4)[C@@H]3CC=C2C1 IWZSHWBGHQBIML-ZGGLMWTQSA-N 0.000 description 2
- KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 1-[(1R)-1-(2,4-dichlorophenyl)ethyl]-6-[(4S,5R)-4-[(2S)-2-(hydroxymethyl)pyrrolidin-1-yl]-5-methylcyclohexen-1-yl]pyrazolo[3,4-b]pyrazine-3-carbonitrile Chemical compound ClC1=C(C=CC(=C1)Cl)[C@@H](C)N1N=C(C=2C1=NC(=CN=2)C1=CC[C@@H]([C@@H](C1)C)N1[C@@H](CCC1)CO)C#N KQZLRWGGWXJPOS-NLFPWZOASA-N 0.000 description 2
- PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 2-[6-(2-cyclopropylethoxy)-9-(2-hydroxy-2-methylpropyl)-1h-phenanthro[9,10-d]imidazol-2-yl]-5-fluorobenzene-1,3-dicarbonitrile Chemical compound C1=C2C3=CC(CC(C)(O)C)=CC=C3C=3NC(C=4C(=CC(F)=CC=4C#N)C#N)=NC=3C2=CC=C1OCCC1CC1 PYRKKGOKRMZEIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 2-amino-9-[(2R,3S,4S,5R)-4-fluoro-3-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-7-prop-2-ynylpurin-8-one Chemical compound NC1=NC=C2N(C(N(C2=N1)[C@@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H]1O)F)CO)=O)CC#C NPRYCHLHHVWLQZ-TURQNECASA-N 0.000 description 2
- TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-M 2-oxobutanoate Chemical compound CCC(=O)C([O-])=O TYEYBOSBBBHJIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 4-[[(1s)-2-[(e)-3-[3-chloro-2-fluoro-6-(tetrazol-1-yl)phenyl]prop-2-enoyl]-5-(4-methyl-2-oxopiperazin-1-yl)-3,4-dihydro-1h-isoquinoline-1-carbonyl]amino]benzoic acid Chemical compound O=C1CN(C)CCN1C1=CC=CC2=C1CCN(C(=O)\C=C\C=1C(=CC=C(Cl)C=1F)N1N=NN=C1)[C@@H]2C(=O)NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 WYFCZWSWFGJODV-MIANJLSGSA-N 0.000 description 2
- QMHIMXFNBOYPND-UHFFFAOYSA-N 4-methylthiazole Chemical compound CC1=CSC=N1 QMHIMXFNBOYPND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 5-chloro-2-[4-[(1r,2s)-2-[2-(5-methylsulfonylpyridin-2-yl)oxyethyl]cyclopropyl]piperidin-1-yl]pyrimidine Chemical compound N1=CC(S(=O)(=O)C)=CC=C1OCC[C@H]1[C@@H](C2CCN(CC2)C=2N=CC(Cl)=CN=2)C1 XFJBGINZIMNZBW-CRAIPNDOSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N Deuterated methanol Chemical compound [2H]OC([2H])([2H])[2H] OKKJLVBELUTLKV-MZCSYVLQSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 2
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N [[(2R,3S,4R,5S)-5-(2,6-dioxo-3H-pyridin-3-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [[[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-fluoro-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-hydroxyphosphoryl]oxy-hydroxyphosphoryl] hydrogen phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@H]2O[C@H]([C@H](O)[C@@H]2O)C2C=CC(=O)NC2=O)[C@H](O)[C@@H](F)[C@@H]1O SMNRFWMNPDABKZ-WVALLCKVSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229940126208 compound 22 Drugs 0.000 description 2
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 description 2
- 229940125877 compound 31 Drugs 0.000 description 2
- 229940127573 compound 38 Drugs 0.000 description 2
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 description 2
- 229940126545 compound 53 Drugs 0.000 description 2
- 229940125900 compound 59 Drugs 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N ombitasvir Chemical compound COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NC1=CC=C([C@H]2N([C@@H](CC2)C=2C=CC(NC(=O)[C@H]3N(CCC3)C(=O)[C@@H](NC(=O)OC)C(C)C)=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)C(C)(C)C)C=C1 PIDFDZJZLOTZTM-KHVQSSSXSA-N 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- FDBYIYFVSAHJLY-UHFFFAOYSA-N resmetirom Chemical compound N1C(=O)C(C(C)C)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2Cl)N2C(NC(=O)C(C#N)=N2)=O)Cl)=N1 FDBYIYFVSAHJLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 small molecule compound Chemical class 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 2
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- BENKAPCDIOILGV-RQJHMYQMSA-N (2s,4r)-4-hydroxy-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1C[C@H](O)C[C@H]1C(O)=O BENKAPCDIOILGV-RQJHMYQMSA-N 0.000 description 1
- WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 1-[(3s,4s)-4-[8-(2-chloro-4-pyrimidin-2-yloxyphenyl)-7-fluoro-2-methylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]-3-fluoropiperidin-1-yl]-2-hydroxyethanone Chemical compound CC1=NC2=CN=C3C=C(F)C(C=4C(=CC(OC=5N=CC=CN=5)=CC=4)Cl)=CC3=C2N1[C@H]1CCN(C(=O)CO)C[C@@H]1F WZZBNLYBHUDSHF-DHLKQENFSA-N 0.000 description 1
- ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 1-[2-[(2s,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-4,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)propan-1-one Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=CC(O)=C1C(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 ONBQEOIKXPHGMB-VBSBHUPXSA-N 0.000 description 1
- FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 2-(1-adamantyl)-n-[2-[2-(2-hydroxyethylamino)ethylamino]quinolin-5-yl]acetamide Chemical compound C1C(C2)CC(C3)CC2CC13CC(=O)NC1=CC=CC2=NC(NCCNCCO)=CC=C21 FQMZXMVHHKXGTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SUISZCALMBHJQX-UHFFFAOYSA-N 3-bromobenzaldehyde Chemical compound BrC1=CC=CC(C=O)=C1 SUISZCALMBHJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 4,4-difluoro-N-[(1S)-3-[4-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)piperidin-1-yl]-1-pyridin-3-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound FC1(CCC(CC1)C(=O)N[C@@H](CCN1CCC(CC1)N1C(=NN=C1C)C(C)C)C=1C=NC=CC=1)F WDBQJSCPCGTAFG-QHCPKHFHSA-N 0.000 description 1
- BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 4,4-difluoro-N-[3-[3-(3-methyl-5-propan-2-yl-1,2,4-triazol-4-yl)-8-azabicyclo[3.2.1]octan-8-yl]-1-thiophen-2-ylpropyl]cyclohexane-1-carboxamide Chemical compound CC(C)C1=NN=C(C)N1C1CC2CCC(C1)N2CCC(NC(=O)C1CCC(F)(F)CC1)C1=CC=CS1 BWGRDBSNKQABCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYGPGKTNQNXMH-UHFFFAOYSA-N 4-nitroacetophenone Chemical compound CC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 YQYGPGKTNQNXMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MENYRYNFSIBDQN-UHFFFAOYSA-N 5,5-dibromoimidazolidine-2,4-dione Chemical compound BrC1(Br)NC(=O)NC1=O MENYRYNFSIBDQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026882 Alpha-synuclein Human genes 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N Bestatin Chemical compound CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229940126639 Compound 33 Drugs 0.000 description 1
- BUDQDWGNQVEFAC-UHFFFAOYSA-N Dihydropyran Chemical compound C1COC=CC1 BUDQDWGNQVEFAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- VLCDUOXHFNUCKK-UHFFFAOYSA-N N,N'-Dimethylthiourea Chemical compound CNC(=S)NC VLCDUOXHFNUCKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N N-{[3-(2-benzamido-4-methyl-1,3-thiazol-5-yl)-pyrazol-5-yl]carbonyl}-G-dR-G-dD-dD-dD-NH2 Chemical compound S1C(C=2NN=C(C=2)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(N)=O)=C(C)N=C1NC(=O)C1=CC=CC=C1 OPFJDXRVMFKJJO-ZHHKINOHSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 239000012721 SDS lysis buffer Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N Sitafloxacin Chemical compound C([C@H]1N)N(C=2C(=C3C(C(C(C(O)=O)=CN3[C@H]3[C@H](C3)F)=O)=CC=2F)Cl)CC11CC1 PNUZDKCDAWUEGK-CYZMBNFOSA-N 0.000 description 1
- 102000019355 Synuclein Human genes 0.000 description 1
- 108050006783 Synuclein Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 108060008747 Ubiquitin-Conjugating Enzyme Proteins 0.000 description 1
- 102000003431 Ubiquitin-Conjugating Enzyme Human genes 0.000 description 1
- LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N [(2r,3r,4s,5r,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-6-[[(3s,5s,8r,9s,10s,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl]oxy]-4,5-disulfo Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@H]([C@@H]([C@H]1OS(O)(=O)=O)OS(O)(=O)=O)O[C@@H]1C[C@@H]2CC[C@H]3[C@@H]4CC[C@@H]([C@]4(CC[C@@H]3[C@@]2(C)CC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H]1O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]1OS(O)(=O)=O LNUFLCYMSVYYNW-ZPJMAFJPSA-N 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- ZUDYPQRUOYEARG-UHFFFAOYSA-L barium(2+);dihydroxide;octahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.[OH-].[OH-].[Ba+2] ZUDYPQRUOYEARG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 229940126142 compound 16 Drugs 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 229940125810 compound 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940126086 compound 21 Drugs 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N gtpl8555 Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)N[C@H](B1O[C@@]2(C)[C@H]3C[C@H](C3(C)C)C[C@H]2O1)CCC1=CC=C(F)C=C1 JAXFJECJQZDFJS-XHEPKHHKSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036046 immunoreaction Effects 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 210000004558 lewy body Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N methane;palladium Chemical compound C.[Pd] UKVIEHSSVKSQBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000765 microspectrophotometry Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N palladium Substances [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M potassium acetate Chemical compound [K+].CC([O-])=O SCVFZCLFOSHCOH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000003518 presynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- MYOWELLYEZMECA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 4-(2-chloroethyl)piperazine-1-carboxylate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCN(CCCl)CC1 MYOWELLYEZMECA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 229950009811 ubenimex Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Abstract
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一类靶向α‑突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用。本发明靶向α‑突触核蛋白的蛋白水解嵌合体同时具有α‑突触核蛋白配体、连接子和E3连接酶配体的结构片段，可以在细胞中招募E3连接酶对α‑突触核蛋白进行泛素化修饰，然后通过UPS诱导降解α‑突触核蛋白。通过实验研究证明，所述蛋白水解嵌合体在较低浓度条件下可以靶向α‑突触核蛋白，诱导其泛素化并显著降低细胞内α‑突触核蛋白聚集水平，提高细胞活力，降低相关细胞毒性，非常适合用于治疗α‑突触核蛋白相关疾病中。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域。更具体地，涉及一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用。
背景技术
α-突触核蛋白(α-Synuclein)是一种在中枢神经系统突触前及核周表达的可溶性蛋白质，其与帕金森病的发病机制和相关功能障碍密切相关，是路易小体的主要成分。α-突触核蛋白的结构很大程度上依赖于其所处的细胞内环境，并且会表现出不同的结构如单体、寡聚体、原纤维和纤维等，病理状态下的突触核蛋白容易聚集形成不溶性的纤维蛋白沉淀，最终导致神经细胞死亡。人类基因学的研究也证明了α-突触核蛋白基因突变在家族性的帕金森病中的主要致病地位，并且α-突触核蛋白的聚集有类似朊蛋白样的在细胞间传播的特点。
蛋白水解靶向嵌合体(PROteolysis TArgeting Chimera，PROTAC)是一种双功能小分子化合物，结构中含有两种不同配体，一种是泛素连接酶E3配体，另一种是与细胞中目标靶蛋白结合的配体，两个配体之间通过Linker相连，从而形成靶蛋白配体-Linker-E3化合物。PROTAC分子在进入细胞后，其结构中的目标蛋白(Protein of interest,POI)配体可特异性地与相应的靶蛋白结合，而另一端可以募集E3连接酶从而形成POI-Linker-E3ligase三元复合物，其中E3连接酶可介导泛素结合酶E2对POI泛素化。被泛素标记的POI被蛋白酶体识别并降解。并且PROTAC在细胞内可多次循环利用。中国专利申请CN114573570A公开了一类α-突触核蛋白靶向化合物，该化合物可以达到显著降低胞内α-突触核蛋白聚集水平、提高细胞活力的效果。但是此类化合物的成药性、安全性等还需进一步研究，并且可临床应用的种类仍然较为缺乏，因此，迫切需要提供更多的靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体以供选择。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有α-突触核蛋白靶向化合物较少的缺陷和不足，提供一种靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体。
本发明的目的是提供所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体的应用。
本发明的另一目的是提供一种治疗α-突触核蛋白相关疾病的药物。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体，具有式(I)所示结构：
X为—(CH2)x—、—(CH2—CH2—O)y—CH2—CH2—或
其中，x为4～6的整数，y为1～5的整数，z为1～3的整数；
R为
优选地，所述x为5或6，y为2或3，z为1或2。
更优选地，所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体具有以下任一结构：
本发明靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体同时具有α-突触核蛋白配体、连接子和E3连接酶配体的结构片段，可以在细胞中招募E3连接酶对α-突触核蛋白进行泛素化修饰，然后通过UPS诱导降解α-突触核蛋白。通过实验研究证明，所述蛋白水解嵌合体在较低浓度条件下可以靶向α-突触核蛋白，诱导其泛素化并显著降低细胞内α-突触核蛋白聚集水平，提高细胞活力，降低相关细胞毒性，非常适合用于治疗α-突触核蛋白相关疾病中。
因此，本发明还要求保护所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体在制备治疗α-突触核蛋白相关疾病中的应用。
进一步地，α-突触核蛋白相关疾病为帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩。
另外的，本发明还提供了一种治疗α-突触核蛋白相关疾病的药物，所述药物功效成分为所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体。
进一步地，所述药物功效成分还包括所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物。
更进一步地，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
进一步地，所述药学上可接受的辅料包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、成膜材料、包衣材料和胶囊材料。
更进一步地，所述药物为注射制剂、口服制剂、雾化吸入制剂或透皮制剂本发明具有以下有益效果：
本发明靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体同时具有α-突触核蛋白配体、连接子和E3连接酶配体的结构片段，可以在细胞中招募E3连接酶对α-突触核蛋白进行泛素化修饰，然后通过UPS诱导降解α-突触核蛋白。通过实验研究证明，所述蛋白水解嵌合体在较低浓度条件下可以靶向α-突触核蛋白，诱导其泛素化并显著降低细胞内α-突触核蛋白聚集水平，提高细胞活力，降低相关细胞毒性，非常适合用于治疗α-突触核蛋白相关疾病中。
附图说明
图1为本发明靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体化合物对胞内α-突触核蛋白聚集体降解作用测定的免疫印迹图。
图2为本发明靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体化合物对胞内α-突触核蛋白聚集体总水平降低作用的结果统计图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
实施例1中间体化合物7(目标蛋白配体)的制备
所述中间化合物7的合成路线如下：
具体包括以下步骤：
1、化合物3的合成：
取10mmol对硝基苯乙酮(化合物1，1651.5mg)、10mmol 3-溴苯甲醛(化合物2，1850.2mg)、1mmol氢氧化钠(40mg)和0.5mmol八水合氢氧化钡(158mg)悬于50mL甲醇，于室温下反应24h；反应毕，过滤，弃去滤液，滤出物先后用少量水、冷甲醇洗涤，所得粗品无需进一步纯化，得化合物3，白色固体，收率85％。
2、化合物4的合成
取3mmol化合物3(996mg)溶于40ml二氯甲烷，强力搅拌下先后加入0.6mmol三乙胺(83μL)、0.6mmol N,N'-二甲基硫脲(62.4mg)、6mmol二溴海因(1715.5mg)，于室温下反应5h；反应毕，减压除去溶剂，乙酸乙酯溶解，水洗，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，5:1)纯化，真空干燥，得化合物4，黄色固体，收率90％。
3、化合物5的合成
取1mmol化合物4(491mg)溶于20ml乙醇，然后加入5mmol水合肼(80％水溶液，312μL)，热至50℃反应1h；反应毕，冷至室温，减压移除溶剂，所得粗品经甲醇重结晶纯化，得化合物5，浅黄色针状晶体，收率37％。
4、化合物6的合成
取1mmol化合物5(344mg)和15mg对甲苯磺酸溶于10mL无水四氢呋喃，然后于逐滴加入2mmol 3,4-二氢吡喃(183μL)，室温过夜反应；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，4:1)纯化，真空干燥，得化合物6，黄色固体，收率66％。
5、化合物7的合成
取1mmol化合物6(428mg)和25mg 10％钯碳悬于15mL无水四氢呋喃，然后用足量氢气(1atm)置换体系内气相，于室温、强烈搅拌下反应1-2h；反应毕，用Celite硅藻土滤除不溶物，收集滤液，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，2:1)纯化，真空干燥，得化合物7，黄色油状物，收率52％。
实施例2中间体化合物15(E3连接酶VHL配体)的制备
所述中间化合物15的合成路线如下：
1、化合物10的制备：
取1.1mmol 4-溴苄腈(200mg)，2.1mmol 4-甲基噻唑(207.9g)，2.4mmol KOAc(235.2mg)和0.04mmol Pd(OAc)2(9mg)在0℃下依次加入3mL DMF中，氮气保护，加热至150℃反应24h。反应完全后停止加热降至室温，向反应液中加入40mL水淬灭反应，乙酸乙酯萃取。合并有机层并用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。所得粗品无需进一步纯化，得化合物10，黄色固体，收率58％。
2、化合物11的制备：
取5mmol化合物10(1000mg)溶于50mL MeOH，0℃7.5mmol下加入CoCl2(973.5mg)，分批缓慢加入5mmol NaBH4(189.2mg)，反应剧烈，加完撤去冰浴，室温搅拌1.5h，反应毕加氨水淬灭，过滤除去不溶物，乙酸乙酯萃取，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，真空干燥，得化合物11，黄色油状物，收率87％。
3、化合物12的制备：
取2mmol化合物11(408mg)溶于3mL DMF，先后加入2mmol Boc-L-羟脯氨酸(462.5mg)、8mmol DIPEA(1320μL)、2.5mmol HATU(950mg)，室温反应0.5h，反应毕加水猝灭反应，乙酸乙酯萃取，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，真空干燥，得化合物12，黄色固体，收率95％。
4、化合物13的制备：
取1mmol化合物12(417mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物13(三氟乙酸盐)，淡黄色固体，收率99％。
5、化合物14的制备：
取1mmol化合物13(317mg)溶于3mL DMF，先后加入1mmol N-Boc-L-叔亮氨酸(231.3mg)、4mmol DIPEA(660μL)、1.25mmol HATU(475mg)，室温反应0.5h，反应毕加水猝灭反应，乙酸乙酯萃取，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:3)纯化，真空干燥，得化合物14，淡黄色固体，收率88％。
6、化合物15的制备：
取1mmol化合物14(530mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物15(三氟乙酸盐)，淡黄色固体，收率99％。
实施例3中间体化合物17(E3连接酶cIAP配体)的制备
所述中间化合物17的合成路线如下：
化合物17的制备：
取1mmol乌苯美司(化合物16，308mg)悬于25mL丙酮，冷至0℃，然后于搅拌下逐滴加入2mmol二碳酸二叔丁酯(459μL)和1mL 2N氢氧化钠水溶液，缓慢恢复至室温，过夜反应；反应毕，减压浓缩，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用10％柠檬酸水溶液、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，得化合物17，白色固体，收率80％。
实施例4蛋白水解嵌合体化合物26的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物26的合成路线如下：
1、化合物19的制备：
取1mmol化合物18(149mg)，溶于乙酸乙酯中，然后于搅拌下逐滴加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol二碳酸二叔丁酯(459μL)，加热回流过夜反应；反应毕，冷至室温，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，95:5)纯化，得化合物19，无色油状液体，收率88％。
2、化合物20的制备：
取1mmol化合物19(249mg)，溶于20ml二氯甲烷中，先后加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol对甲苯磺酰氯(381mg)、30mg 4-二甲氨基吡啶，室温反应4h；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，得化合物20，无色油状液体，收率51％。
3、化合物22的制备：
取1mmol化合物21(193mg)，溶于乙酸乙酯中，然后于搅拌下逐滴加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol二碳酸二叔丁酯(459μL)，加热回流过夜反应；反应毕，冷至室温，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，95:5)纯化，得化合物22，无色油状液体，收率82％。
4、化合物23的制备：
取1mmol化合物22(293mg)，溶于20ml二氯甲烷中，先后加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol对甲苯磺酰氯(381mg)、30mg 4-二甲氨基吡啶，室温反应4h；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，得化合物23，无色油状液体，收率50％。
5、化合物24的制备：
取0.25mmol化合物23(101mg)、0.25mmol化合物7(99.5mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)、0.5mmol碘化钾(84mg)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:2)纯化，真空干燥，得化合物24，黄色无定形固体，收率20％。
6、化合物25的制备：
取0.1mmol化合物24(67.3mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物25(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
7、化合物26的制备：
取0.1mmol化合物25(48.9mg)、0.1mmol 2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3-二酮(27.6mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物26，黄绿色固体，收率9％。
化合物26，黄绿色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm:2.65-2.92(m，4H)；3.33(t，2H)；3.48(q，2H)；3.60-3.80(m，12H)；4.96(dd，1H)；5.37(m，1H)；6.50(t，1H)；6.66(s，1H)；6.69(d，2H)；6.92(d，2H)；7.11(d，2H)；7.30(t，1H)；7.47(m，4H)；7.76(d，1H)；7.98(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm:22.82；29.78；43.37；48.95；70.32；70.66；70.78；76.70；77.02；77.34；98.79；111.76；113.23；115.92；116.82；122.85；123.51；124.07；124.17；126.66；128.67；129.90；130.24；130.72；136.06；146.85；168.93；169.42；171.30.
实施例5蛋白水解嵌合体化合物29的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物29的合成路线如下：
1、化合物27的制备：
取0.25mmol化合物23(89.8mg)、0.25mmol化合物7(99.5mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)、0.5mmol碘化钾(84mg)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，真空干燥，得化合物27，黄色无定形固体，收率23％。
2、化合物28的制备：
取0.1mmol化合物27(62.9mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物28(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
3、化合物29的制备：
取0.1mmol化合物28(44.5mg)、0.1mmol 2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3-二酮(27.6mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物29，黄绿色固体，收率10％。
化合物29，黄绿色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝2.58-2.92(m，4H)；3.34(dt，2H)；3.49(m，2H)；3.60-3.80(m，8H)；4.90(dd，1H)；5.38(m，1H)；6.54(t，1H)；6.62(dd，1H)；6.67(s，1H)；6.71(m，1H)；6.96(m，1H)；7.10(m，1H)；7.31(m，1H)；7.47(m，4H)；7.75(d，1H)；7.97(s，1H).13CNMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝22.69；29.48；61.71；68.79；69.49；70.73；72.48；76.70；77.34；98.79；99.03；171.40；110.36；111.82；113.21；116.80；122.84；124.17；126.68；126.75；128.67；129.90；130.23；130.70；132.50；136.11；146.85；148.64；167.62；168.94；169.36.
实施例6蛋白水解嵌合体化合物37的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物37的合成路线如下：
1、化合物31的制备：
取1mmol化合物30(117mg)，溶于20ml甲醇中，然后于搅拌下逐滴加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol二碳酸二叔丁酯(459μL)，加热回流过夜反应；反应毕，冷至室温，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，50：1)纯化，得化合物31，无色油状液体，收率88％。
2、化合物32的制备：
取1mmol化合物31(217mg)，溶于20ml二氯甲烷中，先后加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol对甲苯磺酰氯(381mg)、30mg 4-二甲氨基吡啶，室温反应4h；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，3:1)纯化，得化合物32，无色油状液体，收率55％。
3、化合物34的制备：
取1mmol化合物33(202mg)，溶于20ml二氯甲烷中，先后加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol对甲苯磺酰氯(381mg)、30mg 4-二甲氨基吡啶，室温反应4h；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，5:1)纯化，得化合物34，无色油状液体，收率65％。
4、化合物35的制备：
取0.25mmol化合物32(92.8mg)、0.25mmol化合物7(99.5mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)、0.5mmol碘化钾(84mg)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，3:1)纯化，真空干燥，得化合物35，黄色无定形固体，收率17％。
5、化合物36的制备：
取0.1mmol化合物35(59.7mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物36(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
6、化合物37的制备：
取0.1mmol化合物36(41.3mg)、0.1mmol 2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3-二酮(27.6mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物26，黄绿色固体，收率7％。
化合物37，黄绿色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝1.29(m，4H)；1.58(m，4H)；2.66-2.96(m，4H)；3.19(t，2H)；3.31(q，2H)；4.95(dd，1H)；5.32(s，1H)；6.27(t，1H)；6.66(m，2H)；6.71(s，1H)；6.76(m，1H)；6.91(d，1H)；7.11(m，1H)；7.31(m，1H)；7.47(m，4H)；7.76(t，1H)；7.98(s，1H)；8.65(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝22.70；26.65；26.76；29.72；31.63；31.94；43.52；48.94；53.43；98.92；109.97；111.52；112.86；115.28；116.65；118.60；122.87；124.19；125.65；126.76；126.86；128.70；128.86；130.27；130.83；132.53；136.16；147.00；148.73；167.63；168.65；169.58；171.18.
实施例7蛋白水解嵌合体化合物39的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物39的合成路线如下：
1、化合物38的制备：
取0.1mmol化合物36(41.3mg)、0.1mmol化合物17(40.8mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg),在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物38，黄色固体，收率12％。
2、化合物39的制备：
取0.02mmol化合物38(16mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物39(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
化合物39，浅棕色固体。1H NMR(400MHz，Methanol-d4)δ/ppm＝0.90(m，6H)；1.30-1.90(m，11H)；2.93(m，2H)；3.06-3.25(m，5H)；3.76(m，4H)；4.15(s，1H)；4.34(m，1H)；5.35(t，1H)；6.99(s，1H)；7.09(d，2H)；7.33-7.45(m，5H)；7.51(d，1H)；7.60-7.83(m，5H)；8.01(s，1H).13C NMR(400MHz，Methanol-d4)δ/ppm＝15.87；17.30；20.94；22.33；26.70；29.34；29.42；31.66；35.08；38.91；40.71；42.37；52.20；54.42；54.79；68.46；99.16；116.91；122.48；124.06；126.67；127.17；128.10；128.71；128.96；129.07；129.45；130.29；130.61；133.95；135.31；171.86；172.98.
实施例8蛋白水解嵌合体化合物42的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物42的合成路线如下：
1、化合物40的制备：
取0.25mmol化合物34(89mg)、0.25mmol化合物7(99.5mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)、0.5mmol碘化钾(84mg)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，3:1)纯化，真空干燥，得化合物40，黄色无定形固体，收率19％。
2、化合物41的制备：
取0.1mmol化合物40(58.2mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物41(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
3、化合物42的制备：
取0.1mmol化合物41(44.2mg)、0.1mmol化合物15(43mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg)，在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物42，黄色固体，收率15％。
化合物42，黄色固体。1H NMR(600MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝1.02(s，9H)；1.15-1.25(m，4H)；1.41-1.54(m，4H)；2.10(m，2H)；2.22(m，1H)；2.31-2.51(m，5H)；3.01(t，2H)；3.69(d，1H)；4.16(d，1H)；4.32(dd，1H)；4.56(m，2H)；4.66(d，1H)；4.77(t，1H)；6.55(d，2H)；6.65(s，1H)；6.87(d，1H)；7.24(m，1H)；7.32(m，1H)；7.42(m，1H)；7.50(dd，2H)；7.68(d，1H)；7.76(m，1H)；7.94(s，1H)；8.65(s，1H).13C NMR(600MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝16.02；25.39；26.26；26.47；28.49；28.74；28.77；29.70；35.00；35.18；36.03；36.59；43.21；50.60；57.66；59.15；69.93；98.69；112.69；118.96；122.83；124.16；125.60；126.88；127.91；128.05；128.52；128.73；129.33；129.45；130.28；130.64；130.75；131.65；134.80；138.11；138.13；148.35；148.56；148.68；150.32；171.31；171.99；174.21.
实施例9蛋白水解嵌合体化合物47的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物47的合成路线如下：
1、化合物44的制备：
取1mmol化合物43(230mg)，溶于20ml二氯甲烷中，先后加入2mmol三乙胺(277μL)、2mmol对甲苯磺酰氯(381mg)、30mg 4-二甲氨基吡啶，室温反应4h；反应毕，减压移除溶剂，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，得化合物44，白色固体，收率42％。
2、化合物45的制备：
取0.25mmol化合物44(96mg)、0.25mmol化合物7(99.5mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)、0.5mmol碘化钾(84mg)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:1)纯化，真空干燥，得化合物45，黄色无定形固体，收率30％。
3、化合物46的制备：
取0.1mmol化合物45(61mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物46(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
4、化合物47的制备：
0.1mmol化合物46(42.6mg)、0.1mmol 2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3-二酮(27.6mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，50:1)纯化，真空干燥，得化合物47，黄绿色固体，收率14％。
化合物47，黄绿色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝2.50(t，2H)；2.65-2.92(m，4H)；3.35-3.52(m，10H)；4.93(dd，1H)；6.60(d，2H)；6.70(s，1H)；6.90(d，1H)；7.16(d，1H)；7.50(m，3H)；7.70(m，3H)；7.78(d，1H).13CNMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝21.22；39.28；47.37；51.26；51.55；51.89；52.08；55.65；62.32；99.69；111.76；114.13；114.62；116.90；120.85；121.51；122.06；127.18；127.66；128.37；131.30；132.84；135.32；136.86；146.85；147.20；147.60；147.70；149.20；167.82；168.53；170.80；176.70.
实施例10蛋白水解嵌合体化合物49的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物49的合成路线如下：
1、化合物48的制备：
取0.1mmol化合物46(42.6mg)、0.1mmol化合物17(40.8mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg),在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，50:1)纯化，真空干燥，得化合物48，黄色固体，收率17％。
2、化合物49的制备：
取0.02mmol化合物48(16.3mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物49(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
化合物49，浅棕色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝0.90(m，6H)；1.50-1.83(m，3H)；2.53(m，6H)；2.90(m，2H)；3.35(m，7H)；3.76(m，4H)；4.30(m，1H)；4.39(m，1H)；6.97(s，1H)；7.09(d，2H)；7.26-7.43(m，5H)；7.78(m，5H)；7.99(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝21.94；22.53；24.42；37.56；41.58；47.21；48.71；49.37；53.20；54.38；55.52；56.42；56.79；70.46；99.76；113.88；114.13；121.40；122.25；126.21；126.48；127.06；127.35；127.67；127.87；128.10；128.50；128.71；130.96；131.07；135.25；138.29；147.61；147.75；147.91；171.76；173.98.
实施例11蛋白水解嵌合体化合物52的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物52的合成路线如下：
1、化合物50的制备：
取0.25mmol化合物46(106.5mg)、0.25mmol 1-Boc-4-(2-氯乙基)哌嗪(62mg)，溶于3ml DMF中，加入0.5mmol碳酸钾(69mg)，加热至90℃过夜反应；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(石油醚/乙酸乙酯，1:2)纯化，真空干燥，得化合物50，黄色无定形固体，收率50％。
2、化合物51的制备：
取0.1mmol化合物50(63.8mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物51(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
3、化合物52的制备：
取0.1mmol化合物51(53.8mg)、0.1mmol 2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-4-氟基-异吲哚-1,3-二酮(27.6mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，加热至90℃反应24h；反应毕，冷至室温，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，25:1)纯化，真空干燥，得化合物52，黄绿色固体，收率10％。
化合物52，黄绿色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝2.27-2.45(m，14H)；2.65-2.92(m，4H)；3.45(m，10H)；4.90(dd，1H)；6.51(d，J＝2.88Hz，2H)；6.73(s，1H)；6.92(d，1H)；7.14(d，1H)；7.50(m，3H)；7.68(m，3H)；7.79(d，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝21.32；29.48；47.27；51.10；51.22；51.90；52.03；53.62；53.70；55.56；56.75；56.97；57.38；57.85；62.82；99.72；113.20；114.16；114.73；116.62；120.85；121.51；122.90；126.56；127.98；128.66；128.87；131.30；131.64；132.32；135.66；137.85；147.26；147.58；147.73；149.20；167.61；168.39；168.80；173.70.
实施例12蛋白水解嵌合体化合物54的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物54的合成路线如下：
1、化合物53的制备：
取0.1mmol化合物51(53.8mg)、0.1mmol化合物17(40.8mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg),在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，50:1)纯化，真空干燥，得化合物53，黄色固体，收率12％。
2、化合物54的制备：
取0.02mmol化合物53(18.6mg)溶于2mL二氯甲烷，加入2ml三氟乙酸，室温反应0.5h，反应毕真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物54(三氟乙酸盐)，浅棕色固体，收率99％。
化合物54，浅棕色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝0.90(m，6H)；1.50-1.78(m，3H)；2.30-2.50(m，18H)；2.90(m，2H)；3.30(m，5H)；3.45(d，2H)；4.39(m，1H)；4.44(m，1H)；6.52(d，2H)；6.87(s，1H)；7.26(m，5H)；7.45(m，2H)；7.67(m，3H)；7.78(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝22.47；22.53；24.50；37.50；41.54；47.23；49.62；49.76；52.58；53.21；53.71；54.37；55.50；56.20；56.50；57.18；57.32；57.72；57.79；70.06；99.72；113.98；114.18；121.40；122.25；126.01；126.58；127.56；127.65；127.97；128.27；128.58；128.70；128.81；131.07；131.46；135.25；138.09；147.60；147.72；147.81；171.76；173.08.
实施例13蛋白水解嵌合体化合物57的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物57的合成路线如下：
1、化合物55的制备：
取0.1mmol化合物46(42.6mg)溶于2mL甲醇和10ml二氯甲烷，加入0.2mmol醋酸钠(16.4mg)，在常温下搅拌15分钟后，加入0.15mmol乙醛酸乙酯(15.3mg)，在常温下搅拌15分钟后，加入0.2mmol氰基硼氢化钠(12.6mg)，室温下再反应1小时；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，10:1)纯化，真空干燥，得化合物55，黄色固体，收率24％。
2、化合物56的制备：
取0.1mmol化合物55(51.2mg)溶于5mL，加入4M NaOH水溶液(10eq)，加热至40°反应1小时；反应毕，真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物56，黄色固体，收率97％。
3、化合物57的制备：
取0.1mmol化合物56(48.4mg)、0.1mmol化合物15(43mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg)，在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，10:1)纯化，真空干燥，得化合物57，黄色固体，收率12％。
化合物57，黄色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝0.98(s，9H)；2.20-2.50(m，15H)；3.25(s，2H)；3.46(m，4H)；4.07(m，1H)；4.24(m，1H)；4.40(m，3H)；6.55(d，2H)；6.75(s，1H)；7.45(m，4H)；7.67(m，3H)；7.80(m，3H)；8.75(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝12.02；25.19；25.26；25.47；35.74；36.77；43.60；47.20；55.03；55.18；55.59；57.21；57.60；57.66；57.95；66.40；68.23；98.70；114.20；114.69；118.96；121.43；122.16；126.50；127.08；127.41；128.25；128.32；128.43；129.43；129.55；131.05；131.45；135.80；137.11；141.13；147.70；148.35；148.56；150.68；152.32；166.31；170.99；172.21.
实施例14蛋白水解嵌合体化合物60的制备
所述蛋白水解嵌合体化合物60的合成路线如下：
1、化合物58的制备：
取0.1mmol化合物51(53.8mg)溶于2mL甲醇和10ml二氯甲烷，加入0.2mmol醋酸钠(16.4mg)，在常温下搅拌15分钟后，加入0.15mmol乙醛酸乙酯(15.3mg)，在常温下搅拌15分钟后，加入0.2mmol氰基硼氢化钠(12.6mg)，室温下再反应1小时；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，10:1)纯化，真空干燥，得化合物58，黄色固体，收率20％。
2、化合物59的制备：
取0.1mmol化合物58(62.4mg)溶于5mL，加入4M NaOH水溶液(10eq)，加热至40°反应1小时；反应毕，真空除去液相，所得粗品无须进一步纯化，得化合物59，黄色固体，收率97％。
4、化合物60的制备：
取0.1mmol化合物59(59.6mg)、0.1mmol化合物15(43mg)溶于3mL DMF，加入0.4mmol DIPEA(66μL)，0.15mmol HATU(57mg)，在常温下反应过夜；反应毕，用水稀释，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用水、食盐水分别洗涤，用无水硫酸钠干燥，所得粗品经快速柱层析(二氯甲烷/甲醇，10:1)纯化，真空干燥，得化合物60，黄色固体，收率10％。
化合物60，黄色固体。1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝0.98(s，9H)；2.20-2.50(m，27H)；3.27(s，2H)；3.43(m，4H)；4.12(m，1H)；4.28(m，1H)；4.45(m，3H)；6.58(d，2H)；6.78(s，1H)；7.45(m，4H)；7.65(m，3H)；7.78(m，3H)；8.85(s，1H).13C NMR(400MHz，Chloroform-d)δ/ppm＝12.22；25.39；25.66；25.87；35.54；36.77；43.60；47.20；53.26；53.78；55.14；55.45；55.88；56.03；56.18；56.59；57.21；57.60；57.66；57.95；59.10；66.40；68.23；99.70；114.20；114.69；114.98；122.26；126.50；127.18；127.43；128.15；128.31；128.46；129.43；129.58；131.02；131.48；135.20；137.91；141.23；147.70；148.35；148.66；150.98；152.72；166.91；170.79；172.61.
应用例1靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体对胞内α-突触核蛋白聚集体降解作用的测定
1、实验材料：
蛋白水解嵌合体化合物溶液：将合成得到的蛋白水解嵌合体化合物26、29、37、39、42、47、49、52、54、57、60(经HPLC检验纯度)以1000倍工作浓度溶于DMSO中，制成相应的储备液，于4℃，避光条件下短期保存，临用时于培养体系中稀释至工作浓度。
细胞培养：人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y接种在DMEM完全培养基中(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素)，于37℃、5％CO2气氛下培养，并按通用方法进行传代。
质粒载体的构建：编码人α-突触核蛋白(含6×His标签)的cDNA被分别克隆至pET28a(用于原核表达)和pcDNA3.1(用于真核表达)质粒载体中。所得载体被转入大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α感受态菌株，并按通用方法进行转化、提取和纯化。
重组α-突触核蛋白的表达和纯化：将pET28a-SNCA-6×His转入E.coli BL21(DE3)感受态菌株中，涂布于含10μg/mL卡那霉素的LB平板上过夜培养。次日，挑取单克隆接种至含10μg/mL卡那霉素的液体LB培养基中，于37℃、200rpm下培养至OD600＝0.6，随即加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为1mg/mL，继续培养6h。培养毕，离心收集细菌沉淀，并按试剂指引裂解、离心，获得蛋白样品。所得蛋白样品按试剂盒指引，使用His亲和凝胶纯化，洗脱的重组α-突触核蛋白经SDS-PAGE检验后，使用超滤法脱盐、浓缩，并用BCA或微量分光光度法测定其浓度。
α-突触核蛋白预制纤维(PFF)的制备：将纯化的重组α-突触核蛋白于微量离心管中以PBS稀释至5mg/mL，于37℃、1000rpm下孵育7d。孵育毕，可见明显淀粉样浑浊产生，将所得浊液(粒径大于5μm)适当分装，即得α-突触核蛋白PFF一级贮备液，可于-80℃长期保存。临用时将一级贮备液以PBS稀释至100μg/mL，并超声破碎60s至澄清(粒径为100～1000nm)，即得α-突触核蛋白PFF二级贮备液。
α-突触核蛋白聚集细胞模型的构建：在SH-SY5Y细胞上，采用PFF播种(PFFseeding)联合SNCA瞬时转染的方法构建模拟病理性α-突触核蛋白聚集的细胞模型。取对数生长期的SH-SY5Y细胞接种于6孔板上，过夜培养使其充分贴壁，然后采用Lipofectamine2000转染试剂，按制造商所提供的标准方法，将pcDNA3.1-SNCA-6×His转入细胞中，并继续培养12h使表达。12h后，采用Lipofectamine2000转染试剂，按制造商所提供的标准方法(以上述PFF二级贮备液代替DNA溶液，使PFF终浓度为1μg/mL)，将PFF导入细胞，并继续培养12h使蛋白聚集体形成。
2、实验方法：
模型构建毕，弃去培养基，用PBS充分漂洗以除去任何残留的PFF，然后换用含相应浓度(8～1000nM)待测化合物的完全培养基，继续培养24h；分别作为模型组(-)和化合物组。
蛋白水平的测定：采用免疫印迹法测定各条件下细胞内α-突触核蛋白的水平。药物处理毕，收集细胞，加入SDS裂解液(含蛋白酶抑制剂混合物)，于冰上裂解20min，并辅以超声破碎。充分裂解后，于4℃、12000RCF下离心10min，取上清，经BCA法测定蛋白浓度后，加入5×上样缓冲液，然后于4℃变性处理10min。所收获的蛋白样品被装载至SDS-PAGE凝胶上，按通用方法电泳分离、转至PVDF膜上进行免疫反应，最后利用化学发光法显影。利用Image J软件量化显影图像，以GAPDH为内参，计算各组中细胞内α-突触核蛋白的水平，并基于此评估相应条件下的蛋白降解作用。
3、实验结果：
本发明评估了11种α-突触核蛋白靶向降解化合物对胞内α-突触核蛋白聚集体的降解作用，以1μM化合物处理24h后细胞内α-突触核蛋白的降解率(D)为指标，评估化合物对α-突触核蛋白聚集体的降解作用。D可按下式计算：
其中DMSO处理组为阴性对照，蛋白本底水平指不经任何处理(包括PFF播种、转染和化合物处理)的SH-SY5Y细胞中α-突触核蛋白的表达水平。
测试所得免疫印迹图参见图1，结果统计图参见图2，计算所得降解率D列于表1。
表1化合物对胞内α-突触核蛋白聚集体的降解作用
| 化合物编号 | 降解率(％，1μM) | 化合物编号 | 降解率(％，1μM) |
| 60 | 63.58±2.57 | 42 | 49.63±5.72 |
| 57 | 35.51±4.77 | 39 | 28.08±0.72 |
| 54 | 43.13±3.70 | 37 | 28.67±0.28 |
| 52 | 56.45±0.76 | 29 | 54.69±2.62 |
| 49 | 22.63±3.62 | 26 | 13.82±2.86 |
| 47 | 18.70±4.41 |
由结果可见，与模型组(-)相比，经1μM的靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体处理后，胞内α-突触核蛋白聚集体水平均显著下降；其中降解效果最优的为化合物60，其在1μM浓度下对α-突触核蛋白聚集体的降解率D＝63.58±2.57％。
综上所述，本发明提供了一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体化合物，并通过免疫印迹法评估了该类化合物对胞内α-突触核蛋白聚集体的降解作用。结果一致表明，该类化合物可在较低的浓度(1μM)下有效地降解胞内的α-突触核蛋白，并降低其相关的细胞毒性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体，其特征在于，所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体具有式(I)所示结构：
X为—(CH2)x—、—(CH2—CH2—O)y—CH2—CH2—或
其中，x为4～6的整数，y为1～5的整数，z为1～3的整数；
R为
2.根据权利要求1所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体，其特征在于，所述x为5或6，y为2或3，z为1或2。
3.根据权利要求2所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体，其特征在于，所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体具有以下任一结构：
4.权利要求1～3任一所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体在制备治疗α-突触核蛋白相关疾病中的应用。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，α-突触核蛋白相关疾病为帕金森病、路易体痴呆、多系统萎缩。
6.一种治疗α-突触核蛋白相关疾病的药物，其特征在于，所述药物功效成分为权利要求1～3任一所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体。
7.根据权利要求6所述药物，其特征在于，所述药物功效成分还包括所述靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物。
8.根据权利要求6或7所述药物，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述药物，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、成膜材料、包衣材料和胶囊材料。
10.根据权利要求6所述药物，其特征在于，所述药物为注射制剂、口服制剂、雾化吸入制剂或透皮制剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211130925.9A CN115650957B (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211130925.9A CN115650957B (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115650957A true CN115650957A (zh) | 2023-01-31 |
| CN115650957B CN115650957B (zh) | 2023-12-15 |
Family
ID=84983779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211130925.9A Active CN115650957B (zh) | 2022-09-16 | 2022-09-16 | 一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115650957B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102056903A (zh) * | 2008-06-09 | 2011-05-11 | 路德维希马克西米利安慕尼黑大学 | 抑制与蛋白聚集有关的疾病和/或神经变性疾病中涉及的蛋白聚集的新药 |
| CN102170787A (zh) * | 2008-10-03 | 2011-08-31 | 普罗蒂奥科技有限公司 | 用于治疗β-淀粉样蛋白病和突触核蛋白病的化合物、组合物和方法 |
| CN112672993A (zh) * | 2018-07-24 | 2021-04-16 | 普罗泰克株式会社 | 新autotac嵌合化合物及包含其的通过靶向的蛋白质降解来预防、改善或治疗疾病的组合物 |
| CN112912376A (zh) * | 2018-08-20 | 2021-06-04 | 阿尔维纳斯运营股份有限公司 | 用于治疗神经变性疾病的具有E3泛素连接酶结合活性并靶向α-突触核蛋白的蛋白水解靶向嵌合(PROTAC)化合物 |
| CN114573570A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-06-03 | 中山大学 | 一类α-突触核蛋白靶向化合物及其制备方法和应用 |
-
2022
- 2022-09-16 CN CN202211130925.9A patent/CN115650957B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102056903A (zh) * | 2008-06-09 | 2011-05-11 | 路德维希马克西米利安慕尼黑大学 | 抑制与蛋白聚集有关的疾病和/或神经变性疾病中涉及的蛋白聚集的新药 |
| CN102170787A (zh) * | 2008-10-03 | 2011-08-31 | 普罗蒂奥科技有限公司 | 用于治疗β-淀粉样蛋白病和突触核蛋白病的化合物、组合物和方法 |
| CN112672993A (zh) * | 2018-07-24 | 2021-04-16 | 普罗泰克株式会社 | 新autotac嵌合化合物及包含其的通过靶向的蛋白质降解来预防、改善或治疗疾病的组合物 |
| CN112912376A (zh) * | 2018-08-20 | 2021-06-04 | 阿尔维纳斯运营股份有限公司 | 用于治疗神经变性疾病的具有E3泛素连接酶结合活性并靶向α-突触核蛋白的蛋白水解靶向嵌合(PROTAC)化合物 |
| CN114573570A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-06-03 | 中山大学 | 一类α-突触核蛋白靶向化合物及其制备方法和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115650957B (zh) | 2023-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10501496B2 (en) | Chemical synthesis and screening of bicyclic peptide libraries | |
| AU2014239585B2 (en) | Inhibitors of leukotriene A4 hydrolase | |
| EP1976828B1 (en) | Diamine derivatives as inhibitors of leukotriene a4 hydrolase | |
| US8470836B2 (en) | Dipeptidyl peptidase-IV inhibiting compounds, methods of preparing the same, and pharmaceutical compositions containing the same as active agent | |
| RU2351596C2 (ru) | Производные n-[гетероарил(пиперидин-2-ил)метил]бензамида и их применение в терапии | |
| RU2678196C2 (ru) | Производные 2-фениламино-3-цианопиразоло[1,5-а]пиримидина, полезные в качестве ингибитора лейкотриен-a4-гидролазы | |
| JP6437443B2 (ja) | 大環状広域抗生物質 | |
| AU2019204579A1 (en) | Inhibitors of leukotriene a4 hydrolase | |
| Sarciaux et al. | Total synthesis and structure–activity relationships study of odilorhabdins, a new class of peptides showing potent antibacterial activity | |
| EP2745876A1 (en) | Hydroxy aliphatic substituted phenyl aminoalkyl ether derivatives | |
| TW200524578A (en) | Protease inhibitors | |
| JPH06502164A (ja) | 選択的ロイコトリエンｂ↓４拮抗剤活性を示す二重置換アリール化合物 | |
| CN115650957A (zh) | 一类靶向α-突触核蛋白的蛋白水解嵌合体及其应用 | |
| US7405201B2 (en) | Antibacterial macrocycles | |
| CN108503579B (zh) | 芬太尼类似物及其应用 | |
| CN111943947A (zh) | 1H-吡咯[2,3-b]吡啶衍生物及其合成方法与应用 | |
| WO2017097251A1 (zh) | Nk007的两个光学纯异构体及其合成和应用 | |
| CN115340502B (zh) | Bcl-xl抑制剂及其制备方法和用途 | |
| CN108078982B (zh) | 脯氨酸衍生物在制备β-内酰胺酶抑制剂中的用途 | |
| CN116891454A (zh) | 小分子抑制剂及制备方法与其在制备抗癌药物中的应用 | |
| CN117924335A (zh) | 一种具有内质网靶向的onoo-荧光探针及其制备方法和应用 | |
| AU2008272124B2 (en) | Novel 4-{3-[4-(3-{4-[amino(butoxycarbonylimino)methyl]phenoxy}propyl)-1-piperidinyl]propoxy]-N'-(butoxycarbonyl)benzamidine crystals | |
| CN113214203A (zh) | 基于ezh2蛋白降解的小分子化合物及其应用 | |
| US20130310417A1 (en) | Small Molecules For Endothelial Cell Activation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |