CN115645336A - 一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜及其制备方法,属于面膜领域。一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜的制备方法,包括以下步骤:紫花地丁与金银花混合浸泡,再将所述的紫花地丁与金银花混合物研磨粉碎;将所得产物依次经过粗滤‑‑脱色‑‑精滤,获得提取液;将所述的提取液与1.2戊二醇、薄荷醇混合,获得面膜液。
Description
技术领域
本发明涉及面膜领域,具体涉及一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜及其制备方法。
背景技术
紫花地丁为《中华人民共和国药典》收载的堇菜科堇菜属多年生草本植物,紫花地丁的干燥全草,其味苦、辛、寒,有清热解毒,散结消肿之功效,主治疔疮肿毒,痈疽发背,丹毒,毒蛇咬伤.紫花地丁粗提物在抗炎、抑菌、抗病毒和抗肿瘤等方面活性突出,但其药用机制尚不明确,有必要根据临床应用发现新的药理活性成分。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明提出了一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜及其制备方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现:
一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜的制备方法,包括以下步骤:
紫花地丁与金银花混合浸泡,再将所述的紫花地丁与金银花混合物研磨粉碎;
将所得产物依次经过粗滤--脱色--精滤,获得提取液;
将所述的提取液与1.2戊二醇、薄荷醇混合,获得面膜液。
可选地,获得提取液之后进行浓缩与灭菌。
可选地,所述的紫花地丁、金银花、薄荷醇之间的质量比为5:5:(0.1~0.5)。
可选地,在制得的面膜液中加入泊洛沙姆P407与纤维素纳米晶。
可选地,经过粗滤--脱色--精滤之前,通过水提醇沉法提取出紫花地丁和金银花混合物多糖。
上述任一所述方法制得的面膜液。
本发明的有益效果:
本发明紫花地丁和金银花等多种药物混合功能性成分提取的处方工艺,并进行提取工艺验证,通过优化后的提取工艺功能性成分对其进行体外角质细胞抗炎作用并初步探讨其抗炎机制,通过机制研究,拓展紫花地丁的系统药理研究,为紫花地丁的深入开发提供理论依据。
本发明优化紫花地丁和金银花喷雾面膜配方,初步探索深入开发的可行性;凝胶研究将面膜基底具有较好的力学强度,预计拉伸强度达到0.3Mpa左右,具有更高的储药模量,同时表现出良好的柔韧性能。除此之外还表现出更强的耐热稳定性。
本发明通过泊洛沙姆P407和纤维素纳米晶(CNC)等(用以增加凝胶强度机械稳定性)用量浓度优化面膜基底具有较优异的水管理性能,由于制备材料的亲水性、交联密度的增大及更稳定的网络结构,面膜基底具备较好的锁水性,从而表现出较强的持水性和良好的保湿性能。
本发明通过人永生化角质生成细胞(Hacat)的培养实验面膜基底表面的贴壁效果研究产出面膜良好的生物相容性和角质细胞亲和性。
具体实施方式
下面将本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例,都属于本发明保护的范围。
在本申请的一些示例中,公开了针对紫花地丁和金银花制备水凝胶及面膜进行的分析与试验。
1.1水提醇沉多糖提取
采用水提醇沉法提取紫花地丁和金银花混合物多糖。紫花地丁全草经石油醚浸渍,去除部分脂溶性成分,保留残渣。脱脂后的残渣用热水提取,收集浸提液上清,浓缩后加无水乙醇4℃过夜沉淀多糖,离心后弃上清液,得到多糖沉淀,热水复溶,加三氯乙酸4℃过夜沉淀蛋白质,离心取上清液,得到多糖溶液用硫酸-苯酚法测定多糖浓度。
1.2多糖含量测定方法
标准曲线制作,称取标准葡萄糖10.0mg,置100mL的容量瓶中,蒸馏水定容,浓度为0.1mg/mL。分别精密取溶液0.0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.4mL,置于试管中,分别加蒸馏水使终体积为2.0mL,各加入6%苯酚溶液1.0mL,混匀,迅速加入浓硫酸5.0mL摇匀,静置5min,置沸水浴中加热15min,取出冷却至室温,加入96孔板中,每孔200μL,酶标仪490nm波长处测定吸光度,蒸馏水为空白对照。以吸光度(X)为横坐标、浓度(Y)为纵坐标绘制标准曲线。
1.3计算多糖提取率
多糖提取率=多糖质量浓度(mg/mL)×体积(mL)/原料质量(g)×100%。
1.4多糖提取单因素试验
准确称取3份紫花地丁,每份50g,通过单因素试验考察提取次数、水提时间、水提温度、加水量及乙醇浓度对紫花地丁和金银花混合物多糖提取效率的影响。
1.5提取次数
设定提取次数为1次、2次、3次和4次,提取时间为1.5h,料液比为1∶25(g/mL),乙醇沉淀浓度为85%,提取多糖,测定紫花地丁和金银花混合物多糖浓度。
1.6提取时间设定
提取时间为1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h,提取次数为2次,料液比为1∶25(g/mL),乙醇沉淀浓度为85%,提取多糖,测定紫花地丁和金银花混合物多糖浓度。
1.7料液比设定
料液比为1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35(g/mL),提取次数为2次,提取时间为2.0h,乙醇沉淀浓度为85%,提取多糖,测定紫花地丁和金银花混合物多糖浓度。
1.8乙醇浓度设定
乙醇沉淀浓度为80%、85%、90%、95%,提取次数为2次,料液比为1∶25(g/mL),提取时间为2.0h,提取多糖,测定紫花地丁和金银花混合物多糖浓度。
2多糖提取工艺的验证试验
称取紫花地丁100g,按照优化的工艺条件提取多糖,平行进行3次,计算提取率,验证所选条件是否稳定有效。当测定多糖含量时,将所测定得到的吸光度代入葡萄糖标准曲线回归方程,即能够计算出所测溶液的多糖含量。葡萄糖标准曲线回归方程为:y=0.27365x-0.14619,线性相关系数为R2=0.9993。紫花地丁和金银花混合物多糖溶液在此浓度范围内,与吸光度呈良好的线性关系。当测定多糖含量时,将所测定得到的吸光度代入葡萄糖标准曲线回归方程,即能够计算出所测溶液的多糖含量。
3温敏喷雾凝胶面膜性能检测:
不同的泊洛沙姆P407和CNC等(增加凝胶强度机械稳定性)用量浓度为主制备材料面膜凝胶通过热稳定性测试,流变性能测试,凝胶强度测试,溶胀性能测试,细胞毒性测试,生物降解性测试。
3.1热稳定性测试
使用热重分析仪(TGA1瑞士Mettler公司)对冻干水凝胶样品进行热重测试分析。取冻干样放置在氧化铝坩埚中,以空氧化铝坩埚作为空白。在氮气气氛下,设定升温速度10℃/min,从45℃到800℃进行动态测试[44]。连续记录样品失重随温度的变化。
3.2流变性能测试
采用旋转流变仪(ARES/G2 TA Instruments,US)在动态模式下对温敏喷雾凝胶的流变行为进行了分析与测试。在不同的温度下(30℃,35℃,27℃)对水凝胶进行了动态频率扫描。设定平板夹具直径为20mm,间隙为1mm,恒定应变为0.5%、扫描角频率范围为0.0628-62.8rad/s。记录样品随频率变化的存储模量值(G′),所有实验都在线性粘弹性区域内进行。然后对水凝胶进行表观粘度的测量,设定平板夹具直径为40mm,间隙为1mm,剪切速率从0.1~100l/s。所有实验均在25±0.1℃下进行。取典型数据进行分析。
3.3凝胶强度测试
用配备圆柱形探头(P/0.5)的质构分析仪(TA.XTplus,Stable Micro System,US)测试水凝胶凝胶强度。首先将水凝胶样品裁成直径为1cm高度为0.8mm的圆柱体放置在5℃冰箱中冷藏24小时备用。然后在25℃下,用5kN的测压元件以1.5mm/min的速度进行压缩测试,并记录数据。
3.4扫描电子显微镜观察(SEM)
将水凝胶经过冻干后在液氮中脆断制备水凝胶SEM样品。然后使用扫描电子显微镜(Phenom Pure+,Phenom world,Netherlands)对几组不同水凝胶样品的表面形貌进行观测,设定加速电压为10kv。对比不同水凝胶样品内部结构的变化。
3.5溶胀性能测试
将水凝胶样品裁成直径2.0cm、高度1.0cm的圆柱体,冷冻干燥后称重。将冻干后的水凝胶样品在100mL 0.05M不同pH的磷酸盐缓冲液(PBS)溶胀48h后取出,并用滤纸去除水凝胶表面多余水分后称重。研究溶液pH和CNC含量对明胶/纤维素纳米晶(CNC)复合水凝胶的溶胀行为的影响。每种样品的重复测量三次,取平均值。其中Ws为水凝胶在溶胀状态下的质量,Wd为水凝胶在干燥状态下的质量。使用Zeta电位滴定仪(Malvern Instruments,Westborough,MA UK)进行Zeta电位测量(25℃)。将冻干后的水凝胶样品用全自动冷冻研磨机(Retsch Cryomill,Germany)研磨至直径大约为25μm左右,将粉末悬浮于pH值为3、4、5、7、8、9、10、11的缓冲溶液中。其中pH值为3、4、5、7、8时通过0.05M磷酸盐缓冲液调节,pH值为9、10、11时通过0.05mol/L NaOH调节。全自动冷冻研磨机的研磨罐在研磨前和研磨过程中均采用集成冷却系统中的液氮进行连续冷却。每个样本进行三次测量,并报告平均值。
3.6细胞毒性测试
采用Hela细胞增值实验对明胶基水凝胶进行细胞毒性与生物相容性测试。分别将冻干后水凝胶样品经全自动冷冻研磨机(Cryomill德国莱驰公司)冷冻研磨成粉状颗粒,烘干后放在紫外灯下灭菌2h。然后在5mL的PBS缓冲液中浸泡12h得到渗滤液,同时取30mg的消毒粉悬浮在5mL PBS(pH值7.4)缓冲区12h。将Hela细胞接种到96孔板中,控制初始细胞密度为8×103/mL,再分别加入20μL样品渗滤液(对照组加入20μLpH7.4的PBS缓冲液),5% CO2环境中分别培养12、24和48h(37℃)。然后在每孔中分别加入100uL MTT溶液和100uL二甲基亚砜(DMSO),用酶标仪(Spectra Max M5,Molecular Devices,USA)在490nm波长处检测细胞光密度值(OD值)[45,46]。与此同时,将Hela细胞接种到含10%牛血清(FBS)的DMEM培养基中,控制初始细胞密度为8×103/mL,分别加入20μL样品浸出液,恒温培养箱(37℃)中培养24h后用二乙酸荧光素溶液(FDA,20μg/mL)对活细胞进行染色。并使用荧光显微镜(Olympus U-RFL-T,Japan)观察Hela细胞的增殖及贴壁效果。
3.7细胞培养
体外角质细胞采用的DMEM高糖培养基(含有10%灭活FBS)置于细胞培养箱中培养,设定条件为温度37℃、二氧化碳(CO2)浓度5%.
4.1细胞活力检测
细胞分为空白对照组、紫花地丁和金银花混合水提物(10000、1000、750、500、250、100、50、10μg/mL)组、紫花地丁醇提物(10000、1000、750、500、250、100、50、10μg/mL)组,每组3个复孔.取对数生长期细胞以1×106个/mL的密度每孔100μL接种于96孔板中,培养过夜.次日,经PBS润洗2次后,分别加入100μL相应浓度的含药培养基,空白对照组加入等体积的完全培养基,培养24h后弃培养基,每孔加入10μLMTT溶液(5mg/mL)以及90μL新鲜培养液,继续培养4h后吸去上清液,每孔加入DMSO100μL,置于摇床使底部沉淀充分溶解,采用多功能酶标仪检测其在490nm处的吸光度值,并计算细胞存活率.
4.2紫花地丁和金银花混合水提物对体外角质细胞分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的影响
细胞分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组、紫花地丁水提物(高、中、低)组、紫花地丁醇提物(高、中、低)组,每组3个复孔.取对数生长期细胞以1×106个/mL的密度每孔500μL接种于24孔板中,培养过夜.次日经PBS润洗2次后,分别加入500μL相应浓度的含药培养基,空白对照组加入等体积的完全培养基.置于细胞培养箱中孵育30min后加入LPS(1μg/mL),24h后收集细胞上清液.采用格里斯(Griess)试剂盒并严格按照试剂盒说明书检测细胞上清液中NO浓度.并采用相应的Elisa试剂盒并严格按照试剂盒说明书检测细胞上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度.
2.3.4.3紫花地丁和金银花混合水提物对体外角质细胞中iNOS、COX-2蛋白表达的影响
细胞分为空白对照组、模型对照组、地塞米松组、紫花地丁水提物(高、中、低)组、紫花地丁醇提物(高、中、低)组,每组3个复孔.以1×106个/mL的密度每孔2mL接种于6孔板中,培养过夜.次日经PBS润洗后,分别加入2mL相应浓度的含药培养基或完全培养基,预给药30min后加入LPS(1μg/mL),继续培养24h.采用Westernblot法检测iNOS、COX-2的蛋白表达水平.弃细胞上清液后加入PBS润洗2次,加入RIPA细胞裂解液(含1mMPMSF酶抑制剂),置于冰上使其充分裂解,随后12000r/min离心10min(4℃),收集上清液,按比例加入5×loadingbuffer,沸水浴5min,立即冰浴冷却,分装,-80℃保存待用.BCA试剂盒检测样品蛋白浓度后,按每孔100μg蛋白量上样.制胶,上样,电泳,转膜,封闭,一抗孵育过夜,次日洗膜并于室温孵育二抗,洗膜后取出,加入ECL超敏发光液于暗室曝光采集信号并分析灰度值.
3.8生物降解性测试
本研究采用Ι胶原酶催化水解方式评价明胶基水凝胶样品的生物降解性能。首先用pH7.5的PBS缓冲溶液配制酶活力为1U/mL的胶原酶溶液。然后将水凝胶样品裁成直径1cm,厚度0.8cm圆柱体分别置于100mLΙ胶原酶溶液中水解12和24小时,控制反应温度为37℃。并在12和24小时时取出1mL样品溶液用紫外分光光度计(UV-2600日本岛津公司)在205nm处检测吸收峰强度变化,同时用1mLPBS缓冲溶液补齐。其中在12和24小时时单纯明胶水凝胶(Gel)样品溶液均稀释100倍后测量吸光度,其他样品溶液均在12h时稀释10倍,24h时稀释100倍测量。以单纯PBS缓冲溶液做空白对照实验。
基于上述的分析与试验,本申请的实施例中还提出了一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜的制备方法,包括以下步骤:紫花地丁与金银花混合浸泡,再将所述的紫花地丁与金银花混合物研磨粉碎;将所得产物依次经过粗滤--脱色--精滤,获得提取液;将所述的提取液与1.2戊二醇、薄荷醇混合,获得面膜液。获得提取液之后进行浓缩与灭菌。所述的紫花地丁、金银花、薄荷醇之间的质量比为5:5:(0.1~0.5)。
本申请实施例制备的的凝胶面膜通过泊洛沙姆P407和纤维素纳米晶(CNC)等(用以增加凝胶强度机械稳定性)用量浓度优化面膜基底具有较优异的水管理性能,由于制备材料的亲水性、交联密度的增大及更稳定的网络结构,面膜基底具备较好的锁水性,从而表现出较强的持水性和良好的保湿性能。本申请制备的凝胶面膜借助于紫花地丁的体外角质细胞抗炎作用,从而获得更好的效果。
在本说明书的描述中,参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中,对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且,描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。
Claims (6)
1.一种紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
紫花地丁与金银花混合浸泡,再将所述的紫花地丁与金银花混合物研磨粉碎;将所得产物依次经过粗滤--脱色--精滤,获得提取液;
将所述的提取液与1.2戊二醇、薄荷醇混合,获得面膜液。
2.根据权利要求1所述的紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜,其特征在于,获得提取液之后进行浓缩与灭菌。
3.根据权利要求1所述的紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜,其特征在于,所述的紫花地丁、金银花、薄荷醇之间的质量比为5:5:(0.1~0.5)。
4.根据权利要求1所述的紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜,其特征在于,在制得的面膜液中加入泊洛沙姆P407与纤维素纳米晶。
5.根据权利要求1所述的紫花地丁复方消痈散疖喷雾温敏凝胶面膜,其特征在于,经过粗滤--脱色--精滤之前,通过水提醇沉法提取出紫花地丁和金银花混合物多糖。
6.权利要求1~5任一所述方法制得的面膜液。
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