CN115594767A

CN115594767A - 靶向her2的双特异抗体及其应用

Info

Publication number: CN115594767A
Application number: CN202110772696.XA
Authority: CN
Inventors: 顾玉超; 郭灵华; 柴辉; 钱文正; 闫韵秋
Original assignee: Jingyuan Biomedicine Suzhou Co ltd
Current assignee: Jingyuan Biomedicine Suzhou Co ltd
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2021-07-08
Publication date: 2023-01-13

Abstract

本发明公开了一种靶向HER2的双特异性抗体。所述双特异性抗体包括第一蛋白功能区、第二蛋白功能区和恒定区；所述第一蛋白功能区包括第一轻链可变区和第一重链可变区；所述第二蛋白功能区包括第二轻链可变区和第二重链可变区；所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区。本发明的双特异性抗体具有更高的抗原内吞效率，有利于降低细胞表面的HER2；同时，在重链恒定区引入突变后，增强了抗体的ADCC效应；并且结构对称，具有更好的可成药性。

Description

靶向HER2的双特异抗体及其应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体是一种靶向HER2的双特异抗体及其应用。

背景技术

HER2(Human epidermal growth factor receptor 2，人表皮受体2，或ErbB2)，是受体酪氨酸激酶ErbB家族的一员，发现在25％-30％的人类乳腺癌中过表达，是已知的一种促癌基因。

曲妥珠单抗(Trastuzumab)是第一个被批准用于HER2过表达转移性乳腺癌患者的治疗抗体。许多患者对曲妥珠单抗治疗有新生耐药性或者在治疗的1年内出现获得性耐药性。

之后帕妥珠单抗(Pertuzumab)加曲妥珠单抗加多西他赛(Docetaxel)联用被批准用于HER2阳性转移性乳腺癌患者的一线治疗。目前已经批准的抗HER2抗体主要用于乳腺癌患者，有许多临床试验在其他HER2表达癌症中评价抗肿瘤药物的安全性和有效性。

近年，靶向HER2的单克隆抗体Margetuximab(MGAH22)已申报上市，其与曲妥珠单抗非常相似，皆是由HER2抗体鼠4D5克隆改造而来，靶向相同表位；并且两者的CDR区域非常接近，仅有几个氨基酸的差异。MGAH22通过改造Fc区域的五个位点，提高对CD16A的结合能力，并降低对CD32B的结合能力，以此来提高ADCC(antibody-dependent cytotoxicity，抗体依赖性细胞毒性)效应。

国产双特异性抗体中不对称结构的KN026，已进入临床阶段，但其表达量较低，生产成本昂贵，且不对称结构存在一定的错配风险。

虽然现有靶向HER2的抗体也有串联单链可变片段(scFv)，由于不含Fc体内半衰期更短，且受限理化条件影响大规模生产。另外，其对HER2表达较低的癌症患者疗效不佳，因此，开发肿瘤靶向的HER2抗体药物如双特异性抗体仍然很有必要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺少有效靶向HER2的双特异性抗体的缺陷，提供一种靶向HER2的双特异性抗体及其应用。本发明的双特异性抗体具有更高的内吞效率和更强的ADCC效应，具有更强的可成药性。

发明人发现，采用帕妥珠单抗作为抗体骨架，在帕妥珠单抗的抗原结合区的N端通过连接子串联曲妥珠单抗的抗原结合区，并在重链恒定区引入点突变获得的双特异性抗体：对HER2低表达具有更强的结合；提高ADCC效应，具有更强的肿瘤活性，并更高效地促进HER2抗原内吞活性；以及具有更好成药的理化性质。

本发明通过以下技术方案解决上述问题：

本发明的第一方面提供一种靶向HER2的双特异性抗体，所述双特异性抗体包括串联的第一蛋白功能区、第二蛋白功能区和恒定区；

所述第一蛋白功能区包括第一轻链可变区和第一重链可变区，所述第一轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示，所述第一重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；

所述第二蛋白功能区包括第二轻链可变区和第二重链可变区，所述第二轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示，所述第二重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；

所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区，所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

其中，所述第一蛋白功能区和所述第二蛋白功能区分别结合HER2两个非重叠的表位。

所述第一可变区为曲妥珠单抗(Trastuzumab)的可变区，其序列参考自US005821.337A；所述第二可变区为帕妥珠单抗(Pertuzumab)的可变区，其序列参考自CA2376596。

所述重链恒定区为在帕妥珠单抗的重链恒定区(Fc)上引入5个突变，分别为L235V、F243L、R292P、Y300L和P396L(参见Nordstrom等，Breast Cancer Research 2011,13:R123)。

优选地，所述第一轻链可变区与所述第二轻链可变区通过连接子连接，所述第一重链可变区与所述第二重链可变区通过连接子连接；所述第二轻链可变区和所述轻链恒定区连接，所述第二重链可变区和所述重链恒定区连接。换言之，所述第二蛋白功能区与所述恒定区形成IgG结构；所述第一蛋白功能区的C端通过连接子与IgG结构的N端连接。

所述连接子具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

在本发明一较佳实施方案中，编码所述第一重链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO:7所示，编码所述第一轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。

在本发明一较佳实施方案中，编码所述第二重链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO:9所示，编码所述第二轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示。

在本发明一较佳实施方案中，编码所述重链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

本发明的第二方面提供一种分离的核酸，所述核酸编码如第一方面所述的双特异性抗体。

在本发明一较佳实施方案中，所述核酸的优选限定如第一方面所述。

本发明的第三方面提供一种表达载体，所述表达载体包含如第二方面所述的核酸。

在本发明一较佳实施方案中，所述表达载体选自逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。

本发明的第四方面提供一种基因修饰的细胞，所述细胞包含如第三方面所述的表达载体。

在本发明一较佳实施方案中，所述细胞为真核细胞。

本发明的第五方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含如第一方面所述的双特异性抗体、如第三方面所述的表达载体或者如第四方面所述的细胞；所述药物组合物还包含以及药学上可接受的载体。

本发明的第六方面提供一种试剂盒，所述试剂盒包括如第一方面所述的双特异性抗体、如第三方面所述的表达载体、如第四方面所述的细胞和/或如第五方面所述的药物组合物。

本发明中，所述药学上可接受的载体可为本领域常规的载体，所述的载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，较佳地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。

本发明的第七方面提供一种给药装置，所述的给药装置包含：(1)用于对有需要的受试者施用如第五方面所述的药物组合物的输注模块，以及(2)任选的药效监控模块。

本发明的第八方面提供一种套装药盒，所述套装药盒包括药盒A和药盒B；其中，所述药盒A包括如第一方面所述的双特异性抗体或者如第五方面所述的药物组合物；所述药盒B包括其他治疗剂例如免疫检查点抑制剂。

在本发明一较佳实施方案中，所述药盒A与药盒B的施用时间不分先后或者先施用所述药盒A。

本发明的第九方面提供一种如第一方面所述的双特异性抗体、如第二方面所述的核酸、如第三方面所述的表达载体、如第四方面所述的细胞、如第五方面所述的药物组合物在制备靶向HER2的药物或者制备治疗HER2过表达引发的疾病的药物中的应用。

本发明的第十方面提供一种治疗疾病的方法，所述方法包括：向有需要的受试者施用如第一方面所述的双特异性抗体、如第五方面所述的药物组合物或如第七方面所述的给药装置。

所述疾病为HER2异常表达引发的疾病，较佳地，所述疾病为乳腺癌、肺腺癌、胃癌、胆管癌、尿路上皮癌等。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

本发明的双特异性抗体具有更高的抗原内吞效率，有利于降低细胞表面的HER2；同时，在重链恒定区引入突变后，增强了抗体的ADCC效应；并且结构对称，具有更好的可成药性。

附图说明

图1为本发明双特异性抗体示意图。

图2为实施例1中各抗体的SDS-PAGE结果示意图。

图3为实施例1中各抗体的HPLC结果示意图。

图4为实施例1中各抗体的ELISA结果示意图。

图5为实施例1中各抗体的BLI结果示意图；

图中：A为JY004，B为JY004-WT，C为MGAH22，D为KN026，E为曲妥珠单抗，F为帕妥珠单抗。

图6为实施例1中各抗体在MCF-7细胞中FACS检测结果示意图。

图7为实施例1中各抗体在SK-OV-3细胞中FACS检测结果示意图。

图8为实施例1中各抗体与CD16A-158V结合的结果示意图；

图中：A为JY004，B为JY004-WT，C为MGAH22，D为曲妥珠单抗，E为KN026，F为帕妥珠单抗。

图9为实施例1中各抗体与CD16A-158F结合的结果示意图；

图10为实施例1中各抗体在Jurkat-CD16a-158F-NFAT-Luc报告细胞系中ADCC结果示意图；

图中：A为SK-OV-3细胞，B为HCC827细胞，C为NCI-N87细胞。

图11为实施例1中各抗体在Jurkat-CD16a-158V-NFAT-Luc报告细胞系中ADCC结果示意图；

图中：A为SK-OV-3细胞，B为HCC827细胞，C为NCI-N87细胞。

图12为实施例1中各抗体在SK-OV-3细胞中ADCP结果示意图。

图13为实施例1中各抗体HER2抗原内吞结果示意图；

图中：A为柱状图，B为曲线图。

图14为实施例1中各抗体加EGF对细胞增殖的结果示意图。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例中使用的材料和试剂如下表1所示：

表1生物材料和试剂

实施例中JY004为本发明的抗体，JY004-WT为抗体重链恒定区上不存在突变的抗体。

实施例中的完全培养基可为RPMI-1640培养基+10％(v/v)胎牛血清。

实施例1

1、表达载体构建

1)重链制备：委托金唯智合成重链序列(SEQ ID NO:1)；后以5'Xba I和3'Not I克隆至载体pcDNA3.1(-)上。

2)轻链制备：委托泓迅生物合成轻链序列(SEQ ID NO:2)；后以Hind III和EcoR I克隆至载体pcDNA3.1(+)上。

2、蛋白表达与纯化：

将ExpiCHO-S细胞调整至5-6×10⁶/mL，质粒(即抗体DNA)的浓度为0.8μg/mL(轻重链的比例为1:1)。用预冷的OptiPRO^TM培养基分别稀释DNA和瞬转试剂ExpiFectamine^TM到工作浓度；将稀释的ExpiFectamine^TM加入到稀释的DNA中，立即轻轻地颠倒混匀，室温放置1-5分钟。将DNA和ExpiFectamine^TM混合物加入到细胞中，加的过程中轻轻摇晃摇瓶。摇床培养，条件为：37℃，5％CO₂，110rpm。18-22小时后，补ExpiCHO^TMFeed，并将培养温度调整到32℃，10-12天后离心收获上清。采用AKTA pure Protein A柱纯化，得到最终抗体产物JY004，如图1所示。

3、SDS-PAGE和SEC-HPLC检测结果

1)SDS-PAGE步骤：

取纯化后的蛋白样品，上样量约为1μg，在还原与非还原状态下进行SDS-PAGE(ExpressPlus PAGE Gel,10*8,4-20％)，120V，80min，室温染色40min，双蒸水多次脱色后，拍照如图2所示。

2)SEC步骤：

取纯化后的蛋白，以PBS为流动相，用BioCore SEC-300(Nanochrom)于Agilent1260HPLC，分析得到的蛋白纯度如图3所示。

4、Anti-HER2抗体与HER2结合能力测定

1)ELISA步骤：

①稀释HER2于PBS，使终浓度为1μg/mL，100μL/孔于酶标板4℃包被过夜。

②弃板内液体，加入Washing Buffer 200μL/孔，清洗3遍。

③加入Blocking Buffer200μL/孔，4℃30min。

④弃板内液体，加入Washing Buffer 200μL/孔，清洗3遍。

⑤稀释抗体于Dilution Buffer，以20nM为最高浓度，5倍稀释，共设10个浓度梯度，对应加入稀释好的抗体，100μL/孔，RT 1h。

⑥弃板内液体，加入Washing Buffer 200μL/孔，清洗3遍。

⑦加入HRP-anti-human IgG Fc 2nd Ab(1:30000稀释于Dilution Buffer)，100μL/孔，RT 1h。

⑧弃板内液体，加入Washing Buffer 200μL/孔，清洗3遍。

⑨加入100μL/孔合液，避光室温反应2-10min，具体观察颜色决定实际反应时间。

⑩加入50μL/孔的Stop solution终止反应，轻微摇晃板子以混匀孔内液体，立即于酶标仪测定OD450。

其中，Washing Buffer：0.1％PBST

Blocking Buffer：1％BSA+0.05％Tween-20+1％正常羊血清于PBS

Dilution Buffer：1％BSA+0.01％Tween-20于PBS

Stop solution：1M HCl

如图4所示，JY004、MGAH22、KN026、Trastuzumab、Pertuzumab和JY004-WT的EC50值分别为0.187nM、0.1274nM、0.1495nM、0.3312nM、0.1401nM和0.1171nM，JY004具有与参比抗体相当的结合能力。

2)BLI(bio-layer inferometry，生物膜干涉法)

检测亲和力步骤：

①浸泡anti-hFc的探针于K Buffer预湿。

②稀释anti-HER2抗体于K Buffer至100nM，分别装载抗体。

③以200nM为最高浓度，2倍梯度稀释HER2蛋白样品至25nM，结合120s。

④解离600s。

其中，K Buffer：0.1％BSA+0.02％Tween-20于PBS。

如图5中A～F所示，MGAH22、Trastuzumab和Pertuzumab对于HER2的亲和力分别为1.52E-10M、5.85E-10M和4.37E-10M。

3)FACS步骤：

①收集细胞，计数调整细胞浓度并铺于96孔板中，10000个/50μL/孔.

②稀释抗体于Staining Buffer中，以200nM为最高浓度，5倍稀释，共设8个梯度。

③加入2×抗体稀释液，50μL/孔，轻轻混匀，4℃1h。

④离心弃板内液体，加入Staining Buffer 200μL/孔，清洗2遍。

⑤加入FITC-anti-human IgG Fc 2nd Ab(1：500稀释于Staining Buffer)，100μL/孔，4℃30min。

⑥离心弃板内液体，加入Staining Buffer 200μL/孔，清洗2遍。

⑦加入200μL/孔Staining Buffer重悬细胞，于流式细胞仪检测分析荧光强度。

其中，Staining Buffer：PBS+1％FBS。

结果如图6和图7所示，JY004具有与参比抗体相当的亲和力。

5、Anti-HER2抗体与CD16A结合能力

BLI检测亲和力步骤：

①浸泡anti-his的探针于K Buffer预湿。

②稀释CD16A-158V或CD16A-158F于K Buffer至200nM，分别装载受体。

③以1000nM为最高浓度，2倍梯度稀释anti-HER2抗体至250nM，结合180s。

④解离180s。

其中，K Buffer：0.1％BSA+0.02％Tween-20于PBS。

结果如表2和表3、图8中A～F和图9中A～F所示，JY004具有良好的CD16A结合力。

表2 CD16A-158F结合

表3 CD16A-158V结合

抗体	koff(1/s)	kon(1/Ms)	KD(M)
				JY004	0.0277	3.57E+05	7.78E-08
JY004-WT	0.0554	1.56E+05	3.55E-07
				MGAH22	0.0675	4.82E+05	1.40E-07
Trastuzumab	0.00686	8.42E+04	8.15E-08
				KN026	0.0782	1.68E+05	4.64E-07
Pertuzumab	0.0476	1.69E+05	2.83E-07

6、Anti-HER2抗体ADCC实验步骤：

①靶细胞准备：收集靶细胞，400g离心5分钟。1mL assay buffer重悬计数。

②抗体稀释：用Assay Buffer将抗体工作浓度从100nM或20nM起始做5倍梯度稀释。IgG1对照孔浓度为20nM。

③靶细胞-抗体孵育：向96孔白底板中加入25μL靶细胞，20000细胞每孔(0.8M/mL)，再加入50μL稀释好的抗体，混匀后于37℃孵育半小时。

④效应细胞孵育：收集效应细胞，400g离心5min，1mL培液重悬计数。调整浓度至4.8×10⁶/mL，向上述96孔板中加入25μL效应细胞，每孔12万个。混匀后于37℃孵育4.5h。

⑤检测：向96孔板中每孔加入50μL ONE-Glo试剂，室温静置5分钟后用TECANSPARK检测信号值，结果如图10和11所示，其中图10和11的A均为SK-OV-3细胞，B均为HCC827细胞，C均为NCI-N87细胞。由图中信息可知，JY004在158F和158V亚型上具有与JY004-WT、曲妥珠和帕妥珠相比增强的ADCC效应。

7、Anti-HER2抗体ADCP实验(antibody-dependent cellular phagocytosis，抗体依赖性细胞吞噬实验)步骤：

②抗体稀释：用Assay Buffer将抗体工作浓度从100nM起始做5倍梯度稀释。IgG1对照孔浓度为20nM。

⑤检测：向96孔板中每孔加入50μL ONE-Glo试剂，室温静置5分钟后用TECANSPARK检测信号值，实验结果如图12所示，JY004与参比抗体的ADCP效应相当。

8、Anti-HER2抗体介导的HER2抗原内吞步骤：

①收集细胞，400g离心5分钟。使用完全培养基重悬计数。

②向96孔U底板中加入细胞，100000个/50μL/孔。

③抗体稀释：用完全培养基将抗体工作浓度稀释到200nM。

④加入50μL稀释好的抗体，混匀后于37℃孵育6小时。

⑤收集细胞，4℃离心弃板内液体，加入Staining Buffer 200μL/孔，清洗2遍。

⑥加入稀释好的FITC anti human CD340于细胞中，4℃孵育半小时。

⑦离心弃板内液体，加入Staining Buffer 200μL/孔，清洗2遍。

⑧加入200μL/孔Staining Buffer重悬细胞，于流式细胞仪检测分析荧光强度，实验结果如图13所示，其中图13的A为柱状图，B为曲线图，由图可知，JY004具有良好的抗原内吞效应。

其中，Staining Buffer：PBS+1％FBS。

9、Anti-HER2抗体对细胞增殖的影响

步骤：

①收集细胞，400g离心5分钟。完全培养基重悬计数。

②向96孔平底板中加入细胞，20000个/25μL/孔。

③抗体稀释(2×)：用完全培养基分别将抗体稀释至200nM、20nM和2nM

④向96孔平底板加入50μL稀释好的抗体，混匀后于37℃孵育半小时。

⑤EGF稀释(4×)：用完全培养基将EGF稀释至8μg/mL。

⑥向孔板中加入25μL稀释好的EGF，混匀后于37℃孵育48小时。

⑦加入50μL/孔CTG试剂，室温静置5分钟后用TECAN SPARK检测信号值，结果如图14所示，JY004与其他参比抗体对细胞增殖无明显促进或抑制作用，JY004与其他参比抗体之间无明显差异。

SEQUENCE LISTING

<110> 晶源生物医药（苏州）有限公司

<120> 靶向HER2的双特异抗体及其应用

<130> P21014628C

<160> 17

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 579

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> H链

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly

115 120 125

Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

130 135 140

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr

145 150 155 160

Asp Tyr Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

165 170 175

Trp Val Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln

180 185 190

Arg Phe Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

210 215 220

Tyr Cys Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly

225 230 235 240

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser

245 250 255

Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala

260 265 270

Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val

275 280 285

Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala

290 295 300

Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val

305 310 315 320

Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His

325 330 335

Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys

340 345 350

Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Val Gly

355 360 365

Gly Pro Ser Val Phe Leu Leu Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met

370 375 380

Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His

385 390 395 400

Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val

405 410 415

His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Pro Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Leu

420 425 430

Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly

435 440 445

Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile

450 455 460

Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val

465 470 475 480

Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser

485 490 495

Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu

500 505 510

Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Leu

515 520 525

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val

530 535 540

Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met

545 550 555 560

His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser

565 570 575

Pro Gly Lys

<210> 2

<211> 331

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> L链

<400> 2

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser

100 105 110

Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

115 120 125

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln

130 135 140

Asp Val Ser Ile Gly Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

145 150 155 160

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro

165 170 175

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile

180 185 190

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr

195 200 205

Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

210 215 220

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

225 230 235 240

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

245 250 255

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

260 265 270

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

275 280 285

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

290 295 300

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

305 310 315 320

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

325 330

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> linker

<400> 3

Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser

1 5 10

<210> 4

<211> 1737

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> H链

<400> 4

gaggtacagt tagtcgagtc gggcggaggt ctagtccaac ccggtgggtc attacggtta 60

agctgtgctg cctccgggtt caatataaag gacacttata tccactgggt acgacaggcg 120

ccgggcaaag gacttgagtg ggtcgctcgt atatatccta caaacggata tacaagatat 180

gcagattctg tgaagggacg ctttaccata tcagcagata catcaaagaa taccgcgtac 240

ctacaaatga actcattacg tgccgaggac acggccgtat actactgtag ccgctgggga 300

ggcgacggtt tctacgccat ggactactgg ggtcaaggaa cgctagtaac ggtttcctcg 360

ggaggaggag gctccggtgg tggtggttct gaagttcagt tagttgagtc tggtggagga 420

ctcgttcaac ccggcggttc actgcgtttg tcgtgtgctg cctcagggtt cacgttcaca 480

gattatacaa tggactgggt ccgccaggct ccaggaaagg gccttgagtg ggttgccgac 540

gttaacccta actctggagg atctatctat aaccaaagat ttaagggtcg gttcacctta 600

tcagtggata gatccaagaa tacattatac cttcaaatga actctctccg cgctgaggac 660

acggctgttt actactgtgc gcgaaacctt ggaccttctt tctactttga ttattggggg 720

caaggtacgc tcgtgacagt gtcctcggcc tcaacaaagg gaccctccgt cttcccttta 780

gcaccctcgt ctaaatctac atctggagga acagcagcac ttggatgttt agttaaggac 840

tacttccctg aaccggttac tgtttcgtgg aattctggag cacttacatc tggagtgcat 900

acatttcctg cagtgcttca atcttctgga ctttattctc tttcttctgt ggtgacagtg 960

ccttcttctt ctcttggaac acaaacatat atctgcaacg tgaaccataa accttctaac 1020

acaaaggtag acaagaaggt cgagcctaaa tcttgcgata agacccacac atgccctcct 1080

tgccctgcac ctgaacttgt gggaggtccc tcggtcttcc tactgcctcc taaacctaaa 1140

gatacactta tgatctcaag aacacctgaa gtgacatgcg tggtggtgga tgtgtctcat 1200

gaagatcctg aagtgaaatt taactggtat gtggatggag tggaagtgca taacgcaaag 1260

actaagcctc ctgaagaaca atataactct acacttagag tggtgtctgt gcttacagtg 1320

cttcatcaag attggcttaa cggaaaggag tacaaatgca aagtgtctaa caaagcactt 1380

cctgcaccta tcgagaagac tatatctaaa gcaaagggcc agcctagaga acctcaagtg 1440

tatacacttc ctccttcaag agaagaaatg acaaagaatc aggtgtctct tacatgtctg 1500

gttaagggtt tctatccctc tgatatcgca gtggaatggg aatctaacgg acaacctgag 1560

aataattata agactactcc actagtgctt gattctgatg gatctttctt cctgtactct 1620

aaacttacag tggataaatc aagatggcaa caaggaaacg tgttctcgtg ttctgtgatg 1680

catgaagcac ttcataacca ttatacacag aagtccttgt ctctttctcc tggaaag 1737

<210> 5

<211> 993

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> L链

<400> 5

gacatccaga tgacacagtc tccttcctct ctgtctgctt cagtgggaga tagagtgacc 60

atcacttgca gagcttctca ggacgtgaat accgcagtgg cttggtatca gcagaagcca 120

ggaaaagctc ctaagctgct gatctactcc gcttctttcc tgtactccgg agtgccttct 180

agattttccg gctctagatc cggcaccgat tttacactga ccatctcttc tctgcagcca 240

gaagacttcg ctacctacta ttgccagcag cactacacaa cccctcctac atttggacag 300

ggaacaaagg tggagatcaa aggaggagga ggatctggag gaggaggatc agatatccag 360

atgacccagt ctccttcttc tctgtccgct tctgtgggag atagagtgac catcacttgc 420

aaggcttctc aggacgtgtc tattggagtg gcttggtatc agcagaagcc aggaaaagct 480

cctaagctgc tgatctactc cgcttcttac aggtacacag gagtgccttc tagattttcc 540

ggctctggat ccggcacaga ttttacactg accatctctt ctctgcagcc agaagatttc 600

gccacctact attgccagca gtactacatc tacccttata cctttggaca gggaaccaag 660

gtggagatta agagaaccgt ggcagctcct tctgtgttta tcttccctcc ttccgacgaa 720

cagctgaaat caggaacagc ttccgtcgtc tgtctgctga acaacttcta ccctagagag 780

gctaaggtcc agtggaaagt ggataacgct ctgcagtccg gaaattctca ggaatccgtg 840

acagagcagg attctaagga ctctacctac tccctgtctt ctaccctgac actgtctaag 900

gcagactacg agaagcacaa ggtgtacgct tgcgaagtga cacatcaggg actgtcttct 960

ccagtgacca agtctttcaa cagaggcgag tgt 993

<210> 6

<211> 120

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 曲妥珠单抗的VH

<400> 6

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr

20 25 30

Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 7

<211> 359

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 曲妥珠单抗的VH

<400> 7

gaggtacagt tagtcgagtc gggcggaggt ctagtccaac ccggtgggtc attacggtta 60

agctgtgctg cctccgggtt caatataaag gacacttata tccactgggt acgacaggcg 120

ccgggcaaag gacttgagtg ggtcgctcgt atatatccta caaacggata tacaagatat 180

gcagattctg tgaagggacg ctttaccata tcagcagata catcaaagaa taccgcgtac 240

ctacaaatga actcattacg tgccgaggac acggccgtat actactgtag ccgctgggga 300

ggcgacggtt tctacgccat ggactactgg ggtcaaggaa cgctagtaac ggtttcctc 359

<210> 8

<211> 119

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 帕妥珠单抗的VH

<400> 8

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Thr Met Asp Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asp Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Asn Gln Arg Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Val Asp Arg Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 9

<211> 357

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 帕妥珠单抗的VH

<400> 9

gaagttcagt tagttgagtc tggtggagga ctcgttcaac ccggcggttc actgcgtttg 60

tcgtgtgctg cctcagggtt cacgttcaca gattatacaa tggactgggt ccgccaggct 120

ccaggaaagg gccttgagtg ggttgccgac gttaacccta actctggagg atctatctat 180

aaccaaagat ttaagggtcg gttcacctta tcagtggata gatccaagaa tacattatac 240

cttcaaatga actctctccg cgctgaggac acggctgttt actactgtgc gcgaaacctt 300

ggaccttctt tctactttga ttattggggg caaggtacgc tcgtgacagt gtcctcg 357

<210> 10

<211> 330

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> H链恒定区

<400> 10

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Val Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Leu Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Pro Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Leu Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 11

<211> 990

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> H链恒定区

<400> 11

gcctcaacaa agggaccctc cgtcttccct ttagcaccct cgtctaaatc tacatctgga 60

ggaacagcag cacttggatg tttagttaag gactacttcc ctgaaccggt tactgtttcg 120

tggaattctg gagcacttac atctggagtg catacatttc ctgcagtgct tcaatcttct 180

ggactttatt ctctttcttc tgtggtgaca gtgccttctt cttctcttgg aacacaaaca 240

tatatctgca acgtgaacca taaaccttct aacacaaagg tagacaagaa ggtcgagcct 300

aaatcttgcg ataagaccca cacatgccct ccttgccctg cacctgaact tgtgggaggt 360

ccctcggtct tcctactgcc tcctaaacct aaagatacac ttatgatctc aagaacacct 420

gaagtgacat gcgtggtggt ggatgtgtct catgaagatc ctgaagtgaa atttaactgg 480

tatgtggatg gagtggaagt gcataacgca aagactaagc ctcctgaaga acaatataac 540

tctacactta gagtggtgtc tgtgcttaca gtgcttcatc aagattggct taacggaaag 600

gagtacaaat gcaaagtgtc taacaaagca cttcctgcac ctatcgagaa gactatatct 660

aaagcaaagg gccagcctag agaacctcaa gtgtatacac ttcctccttc aagagaagaa 720

atgacaaaga atcaggtgtc tcttacatgt ctggttaagg gtttctatcc ctctgatatc 780

gcagtggaat gggaatctaa cggacaacct gagaataatt ataagactac tccactagtg 840

cttgattctg atggatcttt cttcctgtac tctaaactta cagtggataa atcaagatgg 900

caacaaggaa acgtgttctc gtgttctgtg atgcatgaag cacttcataa ccattataca 960

cagaagtcct tgtctctttc tcctggaaag 990

<210> 12

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 曲妥珠单抗的VL

<400> 12

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 13

<211> 321

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 曲妥珠单抗的VL

<400> 13

gacatccaga tgacacagtc tccttcctct ctgtctgctt cagtgggaga tagagtgacc 60

atcacttgca gagcttctca ggacgtgaat accgcagtgg cttggtatca gcagaagcca 120

ggaaaagctc ctaagctgct gatctactcc gcttctttcc tgtactccgg agtgccttct 180

agattttccg gctctagatc cggcaccgat tttacactga ccatctcttc tctgcagcca 240

gaagacttcg ctacctacta ttgccagcag cactacacaa cccctcctac atttggacag 300

ggaacaaagg tggagatcaa a 321

<210> 14

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 帕妥珠单抗的VL

<400> 14

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Ile Gly

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 15

<211> 321

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> 帕妥珠单抗的VL

<400> 15

gatatccaga tgacccagtc tccttcttct ctgtccgctt ctgtgggaga tagagtgacc 60

atcacttgca aggcttctca ggacgtgtct attggagtgg cttggtatca gcagaagcca 120

ggaaaagctc ctaagctgct gatctactcc gcttcttaca ggtacacagg agtgccttct 180

agattttccg gctctggatc cggcacagat tttacactga ccatctcttc tctgcagcca 240

gaagatttcg ccacctacta ttgccagcag tactacatct acccttatac ctttggacag 300

ggaaccaagg tggagattaa g 321

<210> 16

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> L链恒定区

<400> 16

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 17

<211> 321

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> L链恒定区

<400> 17

agaaccgtgg cagctccttc tgtgtttatc ttccctcctt ccgacgaaca gctgaaatca 60

ggaacagctt ccgtcgtctg tctgctgaac aacttctacc ctagagaggc taaggtccag 120

tggaaagtgg ataacgctct gcagtccgga aattctcagg aatccgtgac agagcaggat 180

tctaaggact ctacctactc cctgtcttct accctgacac tgtctaaggc agactacgag 240

aagcacaagg tgtacgcttg cgaagtgaca catcagggac tgtcttctcc agtgaccaag 300

tctttcaaca gaggcgagtg t 321

Claims

1.一种靶向HER2的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括第一蛋白功能区、第二蛋白功能区和恒定区；

所述恒定区包括重链恒定区和轻链恒定区，所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ IDNO:16所示，所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

2.如权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一轻链可变区与所述第二轻链可变区通过连接子连接，所述第一重链可变区与所述第二重链可变区通过连接子连接；所述第二轻链可变区和所述轻链恒定区连接，所述第二重链可变区和所述重链恒定区连接；和/或，所述连接子具有如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；

较佳地，编码所述第一重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码所述第一轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；和/或，

编码所述第二重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，编码所述第二轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:15所示；和/或，

编码所述重链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

3.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸编码如权利要求1或2所述的双特异性抗体；较佳地，

编码所述第一重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，编码所述第一轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；和/或，

编码所述重链恒定区的核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示。

4.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包含如权利要求3所述的核酸；

较佳地，所述表达载体选自逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。

5.一种基因修饰的细胞，其特征在于，所述细胞包含如权利要求4所述的表达载体；

较佳地，所述细胞为真核细胞。

6.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含如权利要求1或2所述的双特异性抗体、如权利要求4所述的表达载体或者如权利要求5所述的细胞；

所述药物组合物还包含药学上可接受的载体。

7.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1或2所述的双特异性抗体、如权利要求3所述的核酸、如权利要求4所述的表达载体、如权利要求5所述的细胞和/或如权利要求6所述的药物组合物。

8.一种给药装置，其特征在于，所述的给药装置包含：(1)用于对有需要的受试者施用如权利要求6所述的药物组合物的输注模块，以及(2)任选的药效监控模块。

9.一种套装药盒，其特征在于，所述套装药盒包括药盒A和药盒B；

其中，所述药盒A包括如权利要求1或2所述的双特异性抗体或者如权利要求6所述的药物组合物；所述药盒B包括其他治疗剂例如免疫检查点抑制剂；

较佳地，所述药盒A与药盒B的施用时间不分先后或者先施用所述药盒A。

10.一种如权利要求1或2所述的双特异性抗体、如权利要求3所述的核酸、如权利要求4所述的表达载体、如权利要求5所述的细胞、或者如权利要求6所述的药物组合物在制备靶向HER2的药物或者制备治疗HER2异常表达引发的疾病的药物中的应用。