CN115591101A - 一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸的微针贴及制备方法。微针贴主要由基底和在基底上呈阵列排布的微针针体组成，微针针体与基底的成分为聚乙烯吡咯烷酮和负载胰岛素的烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸。本发明的填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸的微针贴制备简单，原料易得，生物相容性好，具有高胰岛素负载能力；烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸，可完全水解，有利于烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸颗粒在体内的排泄；负载胰岛素的烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸具有血糖响应性能；填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε‑聚赖氨酸的微针贴通过透皮给药的方法递送胰岛素，可免去皮下注射胰岛素的痛苦。

Description

一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针 贴及制备方法
技术领域
本发明属于高分子材料技术领域的一种微针贴，具体涉及一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴及制备方法。
背景技术
糖尿病是一种由于胰岛素分泌功能缺失或受损而导致的慢性疾病，以高血糖为主要特征，严重时可进一步诱导心脏、神经、眼、肾等的功能受损。根据国际糖尿病联盟的统计，2021年全球糖尿病患者数量高达5.37亿。随着病情的加重，糖尿病患者对于抗糖尿病药物，特别是外源性胰岛素的依赖逐步提高。目前，皮下注射胰岛素是糖尿病患者补充外源性胰岛素的常用方法。然而，皮下注射所产生的疼痛感较强，因此对患者造成的负担较大。
胰岛素是目前最常用的糖尿病用药之一，目前的胰岛素制剂均采用皮下注射的方式输入人体。皮下注射胰岛素目前存在两方面问题亟待解决。第一，皮下注射产生的疼痛感较强，而患者每日需皮下注射2～3次胰岛素，因此注射疼痛对患者的负担较大。第二，为将血糖控制在正常水平(100-200mg/dL)，患者需较精确地调节胰岛素用量，胰岛素用量不足则血糖仍处于高血糖水平，用量过多则导致低血糖，均对病情控制不利。
近来，含有胰岛素负载苯硼酸基聚合物的微针贴受到研究人员的广泛关注。其原理为，将含有胰岛素负载苯硼酸基聚合物的微针刺入人体皮肤，胰岛素负载苯硼酸基聚合物从微针内部向皮下组织扩散，并根据实际血糖水平自动释放出适宜剂量的胰岛素，从而起到降血糖效果。由于微针的长度不足以达到皮下神经所在位置，因此并不产生疼痛感。
含有胰岛素负载苯硼酸基聚合物的微针贴可以将血糖水平控制在正常水平，同时免去皮下注射的痛苦。目前含有胰岛素负载苯硼酸基聚合物的微针贴的技术难点在于尚未得到一种胰岛素负载量高、苯硼酸基颗粒生物安全性好、制造成本低的含有胰岛素负载苯硼酸基聚合物的微针贴配方。目前报道的含有胰岛素负载苯硼酸基颗粒的微针贴有两类。第一类由Wang等报道，采用的自由基聚合的方法合成苯硼酸基颗粒，该颗粒不可降解，因此长期使用的安全性存在隐患。专利CN109125912A报道了第二类含有胰岛素负载苯硼酸基颗粒的微针贴，基于金纳米簇的改性技术制备了苯硼酸基颗粒，生物相容性较好，但是制备成本高昂。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε- 聚赖氨酸的微针贴。烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸制备简单，原料易得，生物相容性好，具有高胰岛素负载能力；烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸可完全水解，有利于烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸颗粒在体内的排泄；负载胰岛素的烟酸/ 苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸具有血糖响应性能，可根据实际血糖水平自动调节胰岛素的释放速率及释放剂量；填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴通过透皮给药的方法递送胰岛素，可免去皮下注射胰岛素的痛苦。
本发明所采用的技术方案如下：
一、一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴
所述微针贴主要由基底和在基底上呈阵列排布的微针针体组成，所述微针针体与基底为聚乙烯吡咯烷酮和胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
所述微针针体为四棱锥形，微针针体的高度为0.2-1mm，微针针体的底面边长为0.05-0.5mm；基底为圆柱体，基底高度为0.01-2mm，基底直径为0.5-5cm；微针针体在基底上的阵列密度为10-800针/cm2基底。
二、一种烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的制备方法
包括以下步骤：
1)将烟酸、4-羧基-3-氟苯硼酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺投入二甲基亚砜中，在常温下混合搅拌得到第一溶液A；
2)将ε-聚赖氨酸投入水中，在常温下混合搅拌得到第二溶液B；
3)将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下混合搅拌得到第一混合物C；
4)将第一混合物C装入截留分子量为500-3500Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔2-24h换透析水一次，换水次数为6-10次，透析水体积为3-5 升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
所述步骤1)和步骤2)的搅拌速率为200-600rpm，搅拌时间为1-240min；步骤3)的搅拌速率为200-600rpm，搅拌时间为5-3000min。
所述步骤1)和步骤2)中，以质量份数计，烟酸为0.19-0.58份，4-羧基-3- 氟苯硼酸为0.58-1.15份，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为0.90-2.09 份，N-羟基丁二酰亚胺为0.54-1.26份，二甲基亚砜为10-100份，ε-聚赖氨酸为 1份，水为5-10份。
所述烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的结构式如下：
Figure BDA0003866578840000031
烟酸接枝率为y/x，4-羧基-3-氟苯硼酸接枝率为z/x。
三、一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的制备方法
包括以下步骤：
S1：将烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和胰岛素水溶液在常温下混合搅拌获得第二混合物D，然后往第二混合物D中加入聚乙烯吡咯烷酮并在常温下继续混合搅拌，获得前驱体；
S2：将前驱体加入到微针阴模后在常温下2000-4000rpm离心10-20min，然后前驱体在干燥器中常温干燥6-24h，干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。
所述S1中，混合搅拌的搅拌速率均为200-600rpm，搅拌时间均为30-120min。
所述S1中，胰岛素水溶液的浓度以质量分数计为0.1％-5％；聚乙烯吡咯烷酮的平均分子量为20-300kDa；以质量份数计，烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸为1份，胰岛素水溶液为10-100份，聚乙烯吡咯烷酮为5-20份。
本发明中烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸具有优良的胰岛素负载能力，每g 烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸可负载0.9～1.4g胰岛素，并仍具备血糖响应性的胰岛素释放性能。其原因在于修饰的烟酸部分含有芳香环结构，可与胰岛素发生疏水相互作用、π-π相互作用和阳离子-π相互作用；所含有的氮原子可与胰岛素发生氢键作用和静电相互作用。利用上述多种相互作用可将胰岛素负载在烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸上，从而使烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸具备优良的胰岛素负载能力。基于这一能力，将单位胰岛素递送进入患者体内所对应的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸使用量大幅下降，可避免长期治疗过程中在体内产生累积效应，由此可提高生物安全性。
在烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和胰岛素水溶液共搅拌后不弃去含有少量未负载胰岛素的上清液，直接加入聚乙烯吡咯烷酮制取微针贴前驱体。由此所制备的填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴中含有胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和少量未负载的胰岛素，同时制备过程中使用的胰岛素可被完全利用。由此在保证胰岛素可控释放的前提下，可降低微针贴制备过程中的胰岛素使用成本。
将填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴刺入皮肤后，微针中的胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和少量未负载的胰岛素向皮下组织中扩散，并根据实际血糖水平自动释放出适宜剂量的胰岛素，从而起到降血糖效果。具体而言，胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸中，ε-聚赖氨酸被疏水的烟酸和4-羧基-3-氟苯硼酸修饰，从而形成亲疏水自组装体，其内部可通过上述多种作用力进行胰岛素负载。由于疏水的苯硼酸基团可与葡萄糖结合为亲水的葡萄糖/苯硼酸复合物基团，因此葡萄糖可以诱导苯硼酸基聚合物颗粒的溶解，进而释放出负载的胰岛素。将胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸递送进入糖尿病患者体内后，患者血糖浓度越高，胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸释放出的胰岛素越多，降血糖效果越显著；血糖浓度降低后，胰岛素释放量也相应降低，未释放胰岛素可储存在胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸内直至下一次血糖升高时再释放。另外，烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸可在24小时内被完全排泄，安全性高。
本发明的有益效果：
1.本发明的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸具有优良的胰岛素负载能力，可根据实际血糖水平自动释放出适宜剂量的胰岛素，在体内可完全分解并排泄出体外，同时合成工艺简单，原料易得，适合规模化生产；
2.本发明中微针贴制备过程所使用的胰岛素可被完全利用并递送进入人体，因此省却了一个步骤(弃去胰岛素上清液)以降低制备成本，同时减少了所弃去胰岛素的成本，同时不影响微针贴的血糖控制性能；
3.本发明的微针贴上的微针可有效刺穿皮肤，含胰岛素负载苯硼酸基ε-聚赖氨酸的微针贴通过透皮给药的方法递送胰岛素，可免去皮下注射胰岛素的痛苦。
附图说明
图1为烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的核磁氢谱谱图；
图2为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的电镜图；
图3为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴在大鼠皮肤上的刺穿微孔照片；
图4为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的体外胰岛素累积释放图；
图5为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴降血糖图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做更详尽的说明，但本发明不局限于此，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围之内。本说明书中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
本发明实施例如下：
实施例1
将0.5711g烟酸、0.8330g 4-羧基-3-氟苯硼酸、1.7608g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.0623g N-羟基丁二酰亚胺投入50.0012g二甲基亚砜中，在常温下以500rpm的搅拌速率搅拌120min，得到第一溶液A。将1.0001gε-聚赖氨酸投入10.0117g水中，在常温下以300rpm的搅拌速率搅拌15min，得到第二溶液B。将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下以400rpm的搅拌速率搅拌1440min，得到第一混合物C。将第一混合物C装入截留分子量为1000Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔8h换透析水一次，换水次数为9次，透析水体积为4升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
本实施例的结果如图1所示，图1为烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的核磁氢谱谱图。经计算，烟酸的接枝率为0.20，4-羧基-3-氟苯硼酸的接枝率为0.38。
实施例2
将0.5810g烟酸、1.1521g 4-羧基-3-氟苯硼酸、2.0909g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和1.2630g N-羟基丁二酰亚胺投入100.0134g二甲基亚砜中，在常温下以200rpm的搅拌速率搅拌240min，得到第一溶液A。将1.0031gε-聚赖氨酸投入10.0013g水中，在常温下以600rpm的搅拌速率搅拌5min，得到第二溶液B。将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下以200rpm的搅拌速率搅拌2880min，得到第一混合物C。将第一混合物C装入截留分子量为3500Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔24h换透析水一次，换水次数为10次，透析水体积为5升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
实施例3
将0.1959g烟酸、0.5912g 4-羧基-3-氟苯硼酸、0.9295g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.5483g N-羟基丁二酰亚胺投入11.2582g二甲基亚砜中，在常温下以600rpm的搅拌速率搅拌30min，得到第一溶液A。将1.0056gε-聚赖氨酸投入6.0127g水中，在常温下以200rpm的搅拌速率搅拌240min，得到第二溶液B。将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下以400rpm的搅拌速率搅拌 240min，得到第一混合物C。将第一混合物C装入截留分子量为500Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔4h换透析水一次，换水次数为6次，透析水体积为3升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε- 聚赖氨酸。
实施例4
将0.3215g烟酸、0.7781g 4-羧基-3-氟苯硼酸、1.3193g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和0.7910g N-羟基丁二酰亚胺投入80.0244g二甲基亚砜中，在常温下以500rpm的搅拌速率搅拌60min，得到第一溶液A。将1.0012gε-聚赖氨酸投入8.0021g水中，在常温下以200rpm的搅拌速率搅拌30min，得到第二溶液B。将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下以300rpm的搅拌速率搅拌 720min，得到第一混合物C。将第一混合物C装入截留分子量为3500Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔6h换透析水一次，换水次数为8次，透析水体积为5升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε- 聚赖氨酸。
实施例5
使用实施例1中制备的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。将10.1mg烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和1009.3mg 1％胰岛素水溶液在常温下以200rpm的搅拌速率混合搅拌120min，然后加入200.0mg聚乙烯吡咯烷酮(平均分子量为220kDa) 在常温下以200rpm的搅拌速率继续混合搅拌60min，所得混合物称为前驱体。将前驱体加入到微针阴模，于常温下4000rpm离心20min，然后前驱体在干燥器中常温干燥24h。干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。
所制得的填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，每g烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸负载0.9g胰岛素。微针高度为0.55mm，微针底面边长为0.2mm，基底高度为1mm，基底直径为0.8cm，微阵在基底上的阵列密度为350针/(cm2基底)。
本实施例的结果如图2-5所示，图2为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε- 聚赖氨酸的微针贴的电镜图，可观察到微针贴上的微针阵列形貌一致，针尖尖锐。图3为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴在大鼠皮肤上的刺穿微孔照片，采用台盼蓝染色法将所刺穿的微孔染成深色，可明显看到微针成功刺穿皮肤所形成的阵列样点阵。
图4为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的体外胰岛素累积释放图。葡萄糖浓度为设计为0mg/dL(控制组)、100mg/dL(正常血糖模拟组)和400mg/dL(高血糖模拟组)，释放介质设计为生理条件模拟的磷酸缓冲溶液(37℃，pH7.4)。随葡萄糖浓度升高，胰岛素释放量上升，说明填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴具有葡萄糖响应的胰岛素释放能力，有利于在高血糖时快速释放胰岛素以快速降低血糖，并在正常血糖时少释放胰岛素以避免产生低血糖。
图5为填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴降血糖图。对糖尿病大鼠分别进行皮下注射胰岛素(INS组)或施用填充胰岛素负载烟酸/ 苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴(NA-MNP组)。在前日19:00(-13h)禁食至当日8:00(0h)禁食，以模拟糖尿病患者晚餐至早餐间无进食的行为。然后当日8:00(0h)给予一餐食物模拟早餐，当日9:00(1h)分别进行上述两种治疗。皮下注射胰岛素后血糖快速从高血糖(高于200mg/dL)恢复至正常血糖范围(50-200mg/dL)，然后在当日12:00(4h)第二餐，即模拟午餐后血糖升至高血糖，这意味着糖尿病患者需要每日注射胰岛素2-4次才能应对一日三餐的生活模式。相比而言，施用填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴在模拟午餐后血糖仍不上升，至当日17:00(9h)模拟晚餐时血糖先上升后下降，至次日8:00(24h)仍保持在正常血糖。次日8:00(24h)后进行模拟早餐，血糖上升。这表明施用填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴可应对模拟的一日三餐模式下的血糖变化，远优于目前常用的皮下注射胰岛素这一治疗方案。
实施例6
使用实施例1中制备的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。将10.0mg烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和1000.0mg 5％胰岛素水溶液在常温下以200rpm的搅拌速率混合搅拌120min，获得第二混合物D，然后往第二混合物D中加入198.5mg 聚乙烯吡咯烷酮(平均分子量为24kDa)在常温下以200rpm的搅拌速率继续混合搅拌120min，所得混合物称为前驱体。将前驱体加入到微针阴模，于常温下 2000rpm离心20min，然后前驱体在干燥器中常温干燥6h。干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。微针高度为0.2mm，微针底面边长为0.05mm，基底高度为0.02mm，基底直径为0.5cm，微阵在基底上的阵列密度为625针/(cm2基底)。
实施例7
使用实施例2中制备的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。将10.5mg烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和150.2mg 0.1％胰岛素水溶液在常温下以600rpm的搅拌速率混合搅拌30min，获得第二混合物D，然后往第二混合物D中加入60.2mg 聚乙烯吡咯烷酮(平均分子量为220kDa)在常温下以600rpm的搅拌速率继续混合搅拌30min，所得混合物称为前驱体。将前驱体加入到微针阴模，于常温下 3500rpm离心15min，然后前驱体在干燥器中常温干燥24h。干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。微针高度为1mm，微针底面边长为0.5mm，基底高度为5mm，基底直径为5cm，微阵在基底上的阵列密度为16针/(cm2基底)。
实施例8
使用实施例3中制备的烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。将10.2mg烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和501.2mg 2％胰岛素水溶液在常温下以300rpm的搅拌速率混合搅拌100min，获得第二混合物D，然后往第二混合物D中加入100.0mg 聚乙烯吡咯烷酮(平均分子量为58kDa)在常温下以300rpm的搅拌速率继续混合搅拌120min，所得混合物称为前驱体。将前驱体加入到微针阴模，于常温下 3500rpm离心15min，然后前驱体在干燥器中常温干燥12h。干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。微针高度为0.78mm，微针底面边长为0.35mm，基底高度为0.8mm，基底直径为1cm，微阵在基底上的阵列密度为49针/(cm2基底)。

Claims (8)

1.一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，其特征在于：所述微针贴主要由基底和在基底上呈阵列排布的微针针体组成，所述微针针体与基底为聚乙烯吡咯烷酮和胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，其特征在于：所述微针针体为四棱锥形，微针针体的高度为0.2-1mm，微针针体的底面边长为0.05-0.5mm；基底为圆柱体，基底高度为0.01-2mm，基底直径为0.5-5cm；微针针体在基底上的阵列密度为10-800针/cm2基底。
3.根据权利要求1所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，其特征在于，所述烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的制备方法包括以下步骤：
1)将烟酸、4-羧基-3-氟苯硼酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺投入二甲基亚砜中，在常温下混合搅拌得到第一溶液A；
2)将ε-聚赖氨酸投入水中，在常温下混合搅拌得到第二溶液B；
3)将第一溶液A和第二溶液B混合，在常温下混合搅拌得到第一混合物C；
4)将第一混合物C装入截留分子量为500-3500Da透析袋中，并置于水中进行透析，每隔2-24h换透析水一次，换水次数为6-10次，透析水体积为3-5升，透析完毕后，将透析袋中的混合物冻干，得到烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸。
4.根据权利要求3所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，其特征在于，所述步骤1)和步骤2)的搅拌速率为200-600rpm，搅拌时间为1-240min；步骤3)的搅拌速率为200-600rpm，搅拌时间为5-3000min。
5.根据权利要求3所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴，其特征在于：所述步骤1)和步骤2)中，以质量份数计，烟酸为0.19-0.58份，4-羧基-3-氟苯硼酸为0.58-1.15份，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐为0.90-2.09份，N-羟基丁二酰亚胺为0.54-1.26份，二甲基亚砜为10-100份，ε-聚赖氨酸为1份，水为5-10份。
6.根据权利要求1所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸和胰岛素水溶液在常温下混合搅拌获得第二混合物D，然后往第二混合物D中加入聚乙烯吡咯烷酮并在常温下继续混合搅拌，获得前驱体；
S2：将前驱体加入到微针阴模后在常温下2000-4000rpm离心10-20min，然后前驱体在干燥器中常温干燥6-24h，干燥后得到填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴。
7.根据权利要求6所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的制备方法，其特征在于，所述S1中，混合搅拌的搅拌速率均为200-600rpm，搅拌时间均为30-120min。
8.根据权利要求6所述的一种填充胰岛素负载烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸的微针贴的制备方法，其特征在于：所述S1中，胰岛素水溶液的浓度以质量分数计为0.1％-5％；聚乙烯吡咯烷酮的平均分子量为20-300kDa；以质量份数计，烟酸/苯硼酸双修饰ε-聚赖氨酸为1份，胰岛素水溶液为10-100份，聚乙烯吡咯烷酮为5-20份。
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