CN115581228A - 枯草芽胞杆菌gb519可湿性粉剂、水剂及其制备方法与应用 - Google Patents

枯草芽胞杆菌gb519可湿性粉剂、水剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种枯草芽胞杆菌GB519杀菌可湿性粉剂和水剂，将含枯草芽胞杆菌GB519扩大培养后干燥得到原粉，将原粉与载体、润湿剂、分散剂、紫外保护剂和干燥保护剂，混合即得粉剂，将含枯草芽胞杆菌GB519芽胞的发酵液与表面活性剂、助悬剂、增稠剂、防冻剂和防腐剂，搅拌均匀即得水剂。获得的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂，芽胞含量为1000亿芽胞/克，枯草芽胞杆菌GB519水剂的芽胞含量为100亿芽胞/mL，粉剂和水剂均对水稻稻瘟病和纹枯病的防效均非常显著；本发明所提供的枯草芽胞杆菌GB519杀菌可湿性粉剂和水剂，具有明显的增效作用，延缓要害抗药性的产生，通过灌根或喷雾可以防治植物病害；助剂含量少，不易堵喷头，适合无人机喷施。

Description

枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂、水剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于微生物加工技术领域，具体涉及一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂、水剂及其制备方法与应用。
背景技术
稻瘟病在全球超过85个国家发生危害，在我国南、北方稻区都有不同程度发生，吉林省水稻种植面积约1200万亩，一般稻瘟病发病面积约10％左右，严重的发病面积50％左右，个别地块发病面积达到90％以上，甚至颗粒无收。因此，稻瘟病防控是吉林省水稻生产中一个十分重要、需高度重视的问题。
由于长期、过量使用农药对稻谷质量与安全、人类健康以及生态环境造成一定的危害，而且易使病原菌产生抗药性及耐药性，降低防治效果。随着人们对环境与食品安全的日益重视，绿色、安全与可持续控制病虫害成为研究发展的需要，生物防治越来越受到各国政府与科研人员的重视并开始在生产应用中发挥着重要作用。
生防枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)是防治植物病害的重要微生物资源，可在控制病害发生、发展的同时促进植物健康生长，具有种类多、繁殖力高、产物丰富、生活周期短、易于培养等特点，因此，目前被大量应用于植物病害生物防治研究。同时，芽胞杆菌生长快、营养需求简单，能产生抗逆性极强的芽孢，这使得芽胞杆菌生防制剂批量生产工艺简单，发酵生产成本较低，制剂施用方便且产品储存期长，非常有利于生防菌剂的生产、各种需求的剂型加工及菌体本身在环境中的存活与定殖，是一种理想的生防微生物。
由于市场上含胞量达到1000亿芽胞/克的枯草芽胞杆菌可湿性粉剂产品较少，且适用于无人机喷施的粉剂较少，并且枯草芽胞杆菌水剂产品也较少。
鉴于此，申请此专利。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂、水剂及其制备方法与应用，枯草芽胞杆菌可湿性粉剂和水剂的芽胞量含量高、活性高、稳定性高、防效高、助剂含量少。
本发明的目的是提供一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂。
本发明的另一目的是提供上述枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法。
本发明的再一目的是提供一种枯草芽胞杆菌GB519水剂。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)发酵液的制备
S1：种子发酵：用接种环将斜面接种后培养好的枯草芽胞杆菌GB519，接种到LB液体培养基中，进行活化培养，得到种子发酵液，备用；
S2：一级发酵罐发酵：将一级发酵罐培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％～10％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液，进行一级发酵培养，得到一级培养液；
S3：发酵罐扩大培养：将扩大培养的培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述扩大培养的培养基中按体积5％～20％的接种量接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养，得到扩大培养液，备用；
(2)芽胞提取与回收工艺
将步骤(1)得到的所述扩大培养液进行离心，得到上清液和浓缩液；将所述上清液采用旋转蒸发仪浓缩后，重新加入到浓缩液中，再将混合后的浓缩液经喷雾干燥，得到枯草芽胞杆菌GB519原粉；
(3)枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下重量份的原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40～80份，载体5～50份，润湿剂5～20份，分散剂5～20份，紫外保护剂0.5～5份和干燥保护剂0.5～5份。将上述原料混匀即可。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤S1中，所述活化培养具体为：在30℃、150rpm条件下，在250mL的LB液体培养基中振荡培养12～16h。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤S2中，所述一级发酵培养的温度为30℃，转速为300rpm，通气量1:1.5，发酵周期为16h。20L发酵罐中投料(一级发酵罐培养基)12L。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤S2中，一级发酵罐培养基包括以下重量百分比的原料：可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜1％、NaCl 0.5％和MgSO40.5％，调整pH为6.8～7.2；所述灭菌具体为在121℃下灭菌30min。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤S3中，所述扩大培养所用的培养基包括以下重量百分比的原料：大豆粉1％、玉米浆1％、可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜3％、NaCl1％、MgSO41％和亮氨酸1％，调整pH为6.8～7.2；121℃灭菌30min。100L发酵罐中投料(扩大培养所用的培养基)75L；冷却至30℃时，接种所述一级培养液。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤S3中，所述扩大培养的发酵温度为30℃，转速为300rpm，通气量1:1.5，发酵周期为48h。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤(2)中，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量大于5000亿芽胞/g；步骤(3)中，所述枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂剂型的芽胞含量大于1000亿芽胞/克。
根据本发明的具体实施方式的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其中，步骤(3)中，所述载体选自轻质碳酸钙、白炭黑、高岭土、滑石粉、硅藻土、膨润土中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述润湿剂选自十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、拉开粉BX、净洗剂LS、DCM-82、GreenWetBP中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述分散剂选自羧甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、扩散剂MF、三聚磷酸钠、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、聚乙二醇中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述紫外保护剂选自黄腐殖酸、糊精、抗坏血酸、羧甲基纤维素、黄原胶中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述干燥保护剂选自蔗糖、麦芽糖、谷氨酸钠、甘露糖中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
一种根据上述的制备方法得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂，枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下重量份的原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40～80份，载体5～50份，润湿剂5～20份，分散剂5～20份，紫外保护剂0.5～5份和干燥保护剂0.5～5份；将上述原料混合均匀即得。
一种根据上述的制备方法得到的枯草芽胞杆菌GB519水剂，所述水剂包括以下重量百分比的原料：步骤(1)得到的所述扩大培养液40％～82％；增稠剂0.01％～1％；防冻剂0.01％～5％；防腐剂0.01％～1％；表面活性剂0.01％～10％和助悬剂0.01％～1％，将上述原料混合均匀后调整pH为3～5，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂。
进一步的，枯草芽胞杆菌GB519水剂的制备方法为：将含枯草芽胞杆菌GB519芽胞的发酵液(步骤(1)得到的所述扩大培养液)与表面活性剂、水混合后充分搅拌，再加入助悬剂、增稠剂、防冻剂和防腐剂，搅拌均匀即得。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，芽胞含量为100亿芽胞/mL。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述增稠剂选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、淀粉、黄原胶、SC33中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述防冻剂选自乙二醇、正辛醇、聚乙二醇、丙三醇中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述防腐剂选自苯甲酸钠、尼泊金甲酯、山梨酸钾、黄腐酸中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述表面活性剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚IW、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸盐、亚甲基双甲基萘磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、次甲基双萘磺酸钠中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述助悬剂选自硅酸镁铝、白炭黑中的一种或两种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
本发明还提供一种所述枯草芽胞杆菌GB519杀菌可湿性粉剂和水剂在防治植物病害中的应用，采用无人机喷雾施药，其中枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂用量为60g/亩，枯草芽胞杆菌GB519水剂为100mL/亩。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明获得的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂，芽胞含量为1000亿芽胞/克以上，枯草芽胞杆菌GB519水剂的芽胞含量为100亿芽胞/mL左右，本发明的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂对水稻稻瘟病和纹枯病的防效均非常显著；
(2)本发明的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂助剂含量少，不易堵喷头，适合无人机喷施。
(3)本发明所提供的枯草芽胞杆菌GB519杀菌可湿性粉剂和水剂，以一株枯草芽胞杆菌GB519为有效成分，具有明显的增效作用，延缓要害抗药性的产生，可单独或与其它药剂复配，通过灌根或喷雾可以防治植物病害。
(4)本发明的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂能够促进水稻的生长发育，提高抗病性。
(5)本发明的枯草芽胞杆菌GB519产生的挥发性物质对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌具有显著的抑制活性。
(6)菌株GB519能够迅速的定殖于叶部，并通过维管束系统，定殖于茎部和根部。菌株GB519在根茎叶的存活时间可达80天，与其他枯草芽胞杆菌菌株相比，具有更长的定殖时长和更强的定殖能力。
附图说明
图1为枯草芽胞杆菌菌株GB519-GFP叶面喷雾处理在水稻上定殖的荧光显微观察；
A：第80d根；B：第30d茎；C：第1d叶；D：第60d叶；
图2为枯草芽胞杆菌菌株GB519-GFP叶面喷雾处理在水稻植株定殖动态；
图3为枯草芽胞杆菌GB519对稻瘟病菌和纹枯病菌的抑制活性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
在一些较为具体的实施例中，所述枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)发酵液的制备
S1：种子发酵：用接种环将斜面接种后培养好的枯草芽胞杆菌GB519，接种到LB液体培养基中，进行活化培养，得到种子发酵液，备用；
S2：一级发酵罐发酵：将一级发酵罐培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％～10％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液，进行一级发酵培养，得到一级培养液；
S3：发酵罐扩大培养：将扩大培养的培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述扩大培养的培养基中按体积5％～20％的接种量接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养，得到扩大培养液，备用；
(2)芽胞提取与回收工艺
将步骤(1)得到的所述扩大培养液进行离心，得到上清液和浓缩液；将所述上清液采用旋转蒸发仪浓缩后，重新加入到浓缩液中，再将混合后的浓缩液经喷雾干燥，得到枯草芽胞杆菌GB519原粉；
(3)枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下重量份的原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40～80份，载体5～50份，润湿剂5～20份，分散剂5～20份，紫外保护剂0.5～5份和干燥保护剂0.5～5份。
进一步的，步骤(3)中，所述载体选自轻质碳酸钙、白炭黑、高岭土、滑石粉、硅藻土、膨润土中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述润湿剂选自十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、拉开粉BX、净洗剂LS、DCM-82、GreenWet BP中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述分散剂选自羧甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、扩散剂MF、三聚磷酸钠、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、聚乙二醇中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述紫外保护剂选自黄腐殖酸、糊精、抗坏血酸、羧甲基纤维素、黄原胶中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述干燥保护剂选自蔗糖、麦芽糖、谷氨酸钠、甘露糖中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂中，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下重量份的原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40～80份，载体5～50份，润湿剂5～20份，分散剂5～20份，紫外保护剂0.5～5份和干燥保护剂0.5～5份；将上述原料混合均匀即得。
一种枯草芽胞杆菌GB519水剂包括以下重量百分比的原料：步骤(1)得到的所述扩大培养液40％～82％；增稠剂0.01％～1％；防冻剂0.01％～5％；防腐剂0.01％～1％；表面活性剂0.01％～10％和助悬剂0.01％～1％，将上述原料混合均匀后调整pH为3～5，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述增稠剂选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、淀粉、黄原胶、SC33中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述防冻剂选自乙二醇、正辛醇、聚乙二醇、丙三醇中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述防腐剂选自苯甲酸钠、尼泊金甲酯、山梨酸钾、黄腐酸中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述表面活性剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚IW、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸盐、亚甲基双甲基萘磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、次甲基双萘磺酸钠中的一种或多种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，所述助悬剂选自硅酸镁铝、白炭黑中的一种或两种。
进一步地，在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
实施例1
本实施例提供了一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)发酵液的制备
S1：种子发酵：用接种环将斜面接种后培养好的枯草芽胞杆菌GB519接种到LB液体培养基中，进行活化培养，得到种子发酵液，所述活化培养具体为：在30℃、150rpm条件下，在多瓶250mL的LB液体培养基中分别振荡培养12～16h，备用；
S2：一级发酵罐发酵：将一级发酵罐培养基灭菌后分别冷却至28℃～30℃，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液，进行一级发酵培养，得到一级培养液，所述一级发酵培养的温度为30℃，转速为300rpm，通气量1:1.5，发酵周期为16h；20L发酵罐中投料(一级发酵罐培养基)12L；一级发酵罐培养基包括以下重量百分比的原料：可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜1％、NaCl 0.5％和MgSO40.5％，调整pH为6.8～7.2；所述灭菌具体为在121℃下灭菌30min；
S3：发酵罐扩大培养：将扩大培养的培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述扩大培养的培养基中接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养，得到扩大培养液，所述扩大培养所用的培养基包括以下重量百分比的原料：大豆粉1％、玉米浆1％、可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜3％、NaCl 1％、MgSO41％和亮氨酸1％，调整pH为6.8～7.2；121℃灭菌30min；100L发酵罐中投料(扩大培养所用的培养基)75L；冷却至30℃时，若接种到20L发酵罐中投料12L，接种一级培养液12L，所述扩大培养的发酵温度为30℃，转速为300rpm，通气量1:1.5，发酵周期为48h，备用；
(2)芽胞提取与回收工艺：将步骤(1)得到的所述扩大培养液进行离心，得到上清液和浓缩液；将所述上清液采用旋转蒸发仪浓缩后，重新加入到浓缩液中，再将混合后的浓缩液经喷雾干燥，得到枯草芽胞杆菌GB519原粉，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量为5000亿芽胞/g；
(3)枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备：枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉80g，载体5g，润湿剂20g，分散剂20g，紫外保护剂0.5g，芽胞萌发剂5g和干燥保护剂5g，得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂剂型的芽胞含量为1000亿芽胞/克；所述载体为轻质碳酸钙，所述润湿剂为十二烷基苯磺酸钠，所述分散剂为羧甲基纤维素钠，所述紫外保护剂为黄腐殖酸，所述干燥保护剂为蔗糖，所述芽胞萌发剂为葡萄糖。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于：
步骤S2中，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液；
步骤S3中，在所述扩大培养的培养基中按体积20％的接种量接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养；所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量为5000亿芽胞/g；
步骤(3)中，枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备：枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40g，载体5g，润湿剂20g，分散剂5g，紫外保护剂5g，芽胞萌发剂0.5g和干燥保护剂0.5g，得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂剂型的芽胞含量为1000亿芽胞/克；所述载体为白炭黑，所述润湿剂为十二烷基硫酸钠，所述分散剂为木质素磺酸钠，所述紫外保护剂为糊精和抗坏血酸，所述干燥保护剂为麦芽糖，所述芽胞萌发剂为丙氨酸。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于：
步骤S2中，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液；
步骤S3中，在所述扩大培养的培养基中按体积20％的接种量接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养；所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量为5000亿芽胞/g；
步骤(3)中，枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备：枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉60g，载体40g，润湿剂10g，分散剂10g，紫外保护剂3g，芽胞萌发剂和干燥保护剂3g，得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂剂型的芽胞含量为1000亿芽胞/克；所述载体为高岭土，所述润湿剂为脂肪醇聚氧乙烯醚，所述分散剂为扩散剂MF，所述紫外保护剂为羧甲基纤维素，所述干燥保护剂为谷氨酸钠，所述芽胞萌发剂为肌苷。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于：
步骤S2中，在所述一级发酵罐培养基中按体积2.0％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液；
步骤S3中，在所述扩大培养的培养基中接种步骤S2得到的所述一级培养液，20L发酵罐中投料15L，接种一级培养液20L，进行扩大培养；所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量为5000亿芽胞/g；
步骤(3)中，枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备：枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下原料制备：步骤(1)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉60g，载体30g，润湿剂20g，分散剂15g，紫外保护剂2g，芽胞萌发剂和干燥保护剂2g，得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂剂型的芽胞含量为1000亿芽胞/克；所述载体为滑石粉、硅藻土和膨润土，所述润湿剂为拉开粉BX、净洗剂LS、DCM-82和GreenWet BP，所述分散剂为三聚磷酸钠、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯和聚乙二醇的混合，所述紫外保护剂为黄原胶，所述干燥保护剂为甘露糖，所述芽胞萌发剂为丙氨酸。
实施例5
本实施例提供了一种枯草芽胞杆菌GB519水剂，所述水剂包括以下重量百分比的原料：实施例1的步骤(1)得到的所述扩大培养液82％；增稠剂0.01％；防冻剂0.01％；防腐剂1％；表面活性剂0.01％，芽胞萌发剂和助悬剂0.01％，将上述原料混合均匀后调整pH为3，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂，芽胞含量为100亿芽胞/mL；增稠剂为羧甲基纤维素钠，防冻剂为乙二醇，防腐剂为苯甲酸钠，表面活性剂为脂肪醇聚氧乙烯醚IW，助悬剂为硅酸镁铝，芽胞萌发剂为葡萄糖。
实施例6
本实施例提供了一种枯草芽胞杆菌GB519水剂，包括以下重量百分比的原料：实施例2的步骤(1)得到的所述扩大培养液82％；增稠剂1％；防冻剂5％；防腐剂0.01％；表面活性剂0.01％，芽胞萌发剂和助悬剂0.01％，将上述原料混合均匀后调整pH为5，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂，芽胞含量为100亿芽胞/mL；增稠剂为海藻酸钠，防冻剂为正辛醇，防腐剂为尼泊金甲酯，表面活性剂为十二烷基硫酸钠，助悬剂为白炭黑，芽胞萌发剂为丙氨酸。
实施例7
本实施例提供了一种枯草芽胞杆菌GB519水剂，包括以下重量百分比的原料：实施例3的60％；增稠剂0.5％；防冻剂0.5％；防腐剂0.5％；表面活性剂5％，芽胞萌发剂和助悬剂0.5％，将原粉与载体、润湿剂、分散剂、紫外保护剂和干燥保护剂，混合均匀后调整pH为4，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂，芽胞含量为110亿芽胞/mL；增稠剂为淀粉，防冻剂为聚乙二醇，防腐剂为山梨酸钾，表面活性剂为木质素磺酸盐，助悬剂为白炭黑，芽胞萌发剂为肌苷。
实施例8
本实施例提供了一种枯草芽胞杆菌GB519水剂，包括以下重量百分比的原料：实施例4的步骤(1)得到的所述扩大培养液62％；增稠剂0.6％；防冻剂3％；防腐剂0.5％；表面活性剂5％，芽胞萌发剂和助悬剂0.5％，将扩大培养液与表面活性剂、水混合后充分搅拌，再加入助悬剂、增稠剂、防冻剂和防腐剂，混合均匀后调整pH为4，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂，芽胞含量为120亿芽胞/mL；增稠剂为黄原胶，防冻剂为丙三醇，防腐剂为黄腐酸，表面活性剂为次甲基双萘磺酸钠，助悬剂为硅酸镁铝，芽胞萌发剂为葡萄糖。
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂在水稻植株的定殖能力
菌株GB519-GFP叶面喷雾处理后，能够迅速的定殖于叶部(图1C和图2)，并能够在叶部增殖(图1D和图2)。菌株GB519也能够通过维管束系统，定殖于茎部(图1B)和根部(图1A)，均能在茎和根部增殖(图2)。菌株GB519在根茎叶的存活时间可达80天，与其他枯草芽胞杆菌菌株相比，具有更长的定殖时长和更强的定殖能力。
处理1d后，在叶片上回收到的菌株数量为42.2×104CFU/g。处理3d后，茎中检测到菌株，数量为2.2×104CFU/g。处理5d后，根中检测到菌株，数量为6.7×104CFU/g。处理14d后，根中的菌株数量达到最高峰，为61.1×104CFU/g。处理20d后，叶中的菌株数量达到最高峰，为44.1×104CFU/g。处理80d后，根茎叶中均能检测到菌株，与茎叶相比，根中数量最多，为30.9×104CFU/g。
以上试验说明，本发明的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂或水剂能够迅速的定殖于叶部，并通过维管束系统，定殖于茎部和根部。菌株GB519在根茎叶的存活时间可达80天，与其他枯草芽胞杆菌菌株相比，具有更长的定殖时长和更强的定殖能力。
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂可产生挥发性物质对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌的抑菌活性
检测枯草芽胞杆菌GB519产生的挥发性物质对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌的抑制效果，结果如表1和图3。
表1枯草芽胞杆菌GB519产生的挥发性物质对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌的抑菌活性
菌落直径mm 抑菌活性％
水稻稻瘟病菌 13.9±1.0 83.9
水稻纹枯病菌 26.7±2.5 69.0
由表1和图3可知，枯草芽胞杆菌GB519产生的挥发性物质对水稻稻瘟病菌和纹枯病菌具有显著的抑制效果，抑制活性分别为83.9％和69.0％。
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂对水稻植株的促生能力
1.试验方法
在水稻齐穗期，采用无人机喷雾施药，其中实施例4的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂用量为60g/亩，实施例8的枯草芽胞杆菌GB519水剂为100mL/亩，清水作为对照处理。
2.试验结果
等收割时调查水稻植株的株高、分蘖数、千粒重，结果见表2和表3。
表2枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂对水稻植株的促生能力
处理 株高/cm 提高率/％ 分蘖数 提高率/％ 千粒重/g 提高率/％
GB519可湿性粉剂 104.0aA 2.5 20.0aA 0.5 21.9aA 5.5
CK 101.4bB — 19.9aA — 20.7bB —
表3枯草芽胞杆菌GB519水剂对水稻植株的促生能力
处理 株高/cm 提高率/％ 分蘖数 提高率/％ 千粒重/g 提高率/％
GB519可湿性粉剂 103.6aA 1.9 20.0aA 0.5 21.7aA 4.2
CK 101.7bB — 19.9aA — 20.8bB —
从表2和表3可以看出，与对照相比，喷施枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂或水剂后，水稻植株的株高千粒重均显著地大于对照处理。
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂防治水稻稻瘟病的田间试验
1.试验方法
分别在吉林省梅河口市、松原市、辉南县和永吉县进行田间效果试验。在水稻齐穗期，采用无人机喷雾施药，其中实施例4的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂用量为60g/亩，实施例8的枯草芽胞杆菌GB519水剂为100mL/亩，清水作为对照处理。等到水稻成熟时，调查穗颈瘟发病情况及防效。
2.试验结果
试验结果如下表4和表5：
表4枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂防治水稻稻瘟病的大田试验结果
Figure BDA0003906997780000181
表5枯草芽胞杆菌GB519水剂防治水稻稻瘟病的大田试验结果
Figure BDA0003906997780000182
从表4和表5可以看出，喷施枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂后，水稻稻瘟病的病情指数显著低于未处理组，在4个不同地区处理的稻瘟病田间防效均大于80.0％，最高防效达到82.3％，防治效果显著。
喷施枯草芽胞杆菌GB519水剂后，水稻稻瘟病的病情指数显著低于未处理组，在4个不同地区处理的稻瘟病田间防效均大于80.0％，最高防效达到81.4％，防治效果显著。
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂和水剂防治水稻纹枯病的田间试验
1.试验方法
分别在吉林省梅河口市、松原市、辉南县和永吉县进行田间效果试验。在水稻分蘖末期，采用无人机喷雾施药，其中实施例4的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂用量为60g/亩，实施例8的枯草芽胞杆菌GB519水剂为100mL/亩，清水作为对照处理。等到水稻成熟时，调查纹枯病发病情况及防效。
2.试验结果
试验结果如下表6和表7：
表6枯草芽胞杆菌GB519粉剂防治水稻纹枯病的大田试验结果
Figure BDA0003906997780000191
表7枯草芽胞杆菌GB519水剂防治水稻纹枯病的大田试验结果
Figure BDA0003906997780000192
从表6和表7可以看出，喷施枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂后，水稻纹枯病的病情指数显著低于未处理组，在4个不同地区处理的纹枯病田间防效46.8％～61.0％，防治效果显著。
喷施枯草芽胞杆菌GB519水剂后，水稻纹枯病的病情指数显著低于未处理组，在4个不同地区处理的纹枯病田间防效43.3％～58.5％，防治效果显著。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (10)

1.一种枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)发酵液的制备
S1：种子发酵：用接种环将斜面接种后培养好的枯草芽胞杆菌GB519，接种到LB液体培养基中，进行活化培养，得到种子发酵液，备用；
S2：一级发酵罐发酵：将一级发酵罐培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述一级发酵罐培养基中按体积5％～10％的接种量接种步骤S1得到的所述种子发酵液，进行一级发酵培养，得到一级培养液；
S3：发酵罐扩大培养：将扩大培养的培养基灭菌后冷却至28℃～30℃，在所述扩大培养的培养基中按体积5％～20％的接种量接种步骤S2得到的所述一级培养液，进行扩大培养，得到扩大培养液，备用；
(2)芽胞提取与回收工艺
将步骤(1)得到的所述扩大培养液进行离心，得到上清液和浓缩液；将所述上清液采用旋转蒸发仪浓缩后，重新加入到浓缩液中，再将混合后的浓缩液经喷雾干燥，得到枯草芽胞杆菌GB519原粉；
(3)枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的制备
枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂由包括如下重量份的原料制备：步骤(2)得到的所述枯草芽胞杆菌GB519原粉40～80份，载体5～50份，润湿剂5～20份，分散剂5～20份，紫外保护剂0.5～5份和干燥保护剂0.5～5份。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述活化培养具体为：在30℃、150rpm条件下，在250mL的LB液体培养基中振荡培养12～16h。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述一级发酵培养的温度为30℃，转速为300rpm，通气量为1:1.5，发酵周期为16h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中，一级发酵罐培养基包括以下重量百分比的原料：可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜1％、NaCl 0.5％和MgSO40.5％，调整pH为6.8～7.2；所述灭菌具体为在121℃下灭菌30min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述扩大培养所用的培养基包括以下重量百分比的原料：大豆粉1％、玉米浆1％、可溶性淀粉1％、大豆蛋白胨1％、糖蜜3％、NaCl 1％、MgSO41％和亮氨酸1％，调整pH为6.8～7.2；121℃灭菌30min；冷却至30℃时，进行接种；步骤S3中，所述扩大培养的发酵温度为30℃，转速为300rpm，通气量为1:1.5，发酵周期为48h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉的活芽胞含量大于5000亿芽胞/g；步骤(3)中，所述枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的芽胞含量大于1000亿芽胞/克。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述载体选自轻质碳酸钙、白炭黑、高岭土、滑石粉、硅藻土、膨润土中的一种或多种；所述润湿剂选自十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、拉开粉BX、净洗剂LS、DCM-82、GreenWet BP中的一种或多种；所述分散剂选自羧甲基纤维素钠、木质素磺酸钠、扩散剂MF、三聚磷酸钠、烷基酚聚氧乙烯醚磷酸酯、聚乙二醇中的一种或多种；所述紫外保护剂选自黄腐殖酸、糊精、抗坏血酸、羧甲基纤维素、黄原胶中的一种或多种；所述干燥保护剂选自蔗糖、麦芽糖、谷氨酸钠、甘露糖中的一种或多种；优选的，所述枯草芽胞杆菌GB519原粉中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
8.一种根据权利要求1-7所述的制备方法得到的枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂。
9.一种根据权利要求1-7所述的制备方法得到的枯草芽胞杆菌GB519水剂，其特征在于，所述枯草芽胞杆菌GB519水剂包括以下重量百分比的原料：步骤(1)得到的所述扩大培养液40％～82％；增稠剂0.01％～1％；防冻剂0.01％～5％；防腐剂0.01％～1％；表面活性剂0.01％～10％和助悬剂0.01％～1％，将上述原料混合均匀后调整pH为3～5，即得所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂；在所述的枯草芽胞杆菌GB519水剂中，芽胞含量为100亿芽胞/mL；所述增稠剂选自羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、淀粉、黄原胶、SC33中的一种或多种；所述防冻剂选自乙二醇、正辛醇、聚乙二醇、丙三醇中的一种或多种；所述防腐剂选自苯甲酸钠、尼泊金甲酯、山梨酸钾、黄腐酸中的一种或多种；所述表面活性剂选自脂肪醇聚氧乙烯醚IW、十二烷基硫酸钠、木质素磺酸盐、亚甲基双甲基萘磺酸钠、十二烷基苯磺酸钙、次甲基双萘磺酸钠中的一种或多种；所述助悬剂选自硅酸镁铝、白炭黑中的一种或两种；优选的，所述枯草芽胞杆菌GB519水剂中还包括芽胞萌发剂，所述芽胞萌发剂选自葡萄糖、丙氨酸、肌苷中的一种或多种。
10.一种权利要求8的枯草芽胞杆菌GB519杀菌可湿性粉剂或权利要求9的枯草芽胞杆菌GB519水剂在防治植物病害中的应用，其特征在于，采用无人机喷雾施药，其中，采用枯草芽胞杆菌GB519可湿性粉剂的用量为60g/亩，或者，采用枯草芽胞杆菌GB519水剂为100mL/亩。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105432667A (zh) * 2015-12-19 2016-03-30 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
CN105586298A (zh) * 2016-03-11 2016-05-18 山东京青农业科技有限公司 一种枯草芽孢杆菌、菌剂、菌剂的制备方法和菌剂的应用
CN108034615A (zh) * 2018-01-19 2018-05-15 中国农业大学 一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法
CN108192852A (zh) * 2018-03-20 2018-06-22 吉林省农业科学院 一株促水稻生长并拮抗稻瘟病菌的枯草芽胞杆菌gb519及应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105432667A (zh) * 2015-12-19 2016-03-30 佛山市艳晖生物科技有限公司 一种枯草芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法
CN105586298A (zh) * 2016-03-11 2016-05-18 山东京青农业科技有限公司 一种枯草芽孢杆菌、菌剂、菌剂的制备方法和菌剂的应用
CN108034615A (zh) * 2018-01-19 2018-05-15 中国农业大学 一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法
CN108192852A (zh) * 2018-03-20 2018-06-22 吉林省农业科学院 一株促水稻生长并拮抗稻瘟病菌的枯草芽胞杆菌gb519及应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FENG ZHU等: "Bacillus subtilis GB519 Promotes Rice Growth and Reduces the Damages Caused by Rice Blast Fungus Magnaporthe oryzae", 《PHYTOFRONTIERS》, vol. 1, no. 4, pages 337 *
常晓川;韩业东;陈晨;薛德林;: "枯草芽孢杆菌发酵新工艺的优化研究", 饲料研究, no. 02, pages 48 - 50 *

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