CN115569141A - 脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用,属于口腔健康技术领域。本发明首次证明脱氧胆酸具有良好的抑制口腔链球菌活性,提供了脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用,为治疗口腔链球菌引起的口腔疾病提供了新思路。
Description
技术领域
本发明属于口腔健康技术领域,具体涉及脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用。
背景技术
口腔有着庞大数目和种类的细菌菌群,其中链球菌在口腔正常菌群中所占的比例最大,是口腔中最常见的细菌。在牙菌斑和龈沟的细菌中,链球菌约占30%。而龋齿大部分是由这些口腔链球菌引起的。由于长期以来抗生素的大量使用,口腔菌群的耐药性在不断提高,而相应的抗生素的开发则进展缓慢,形式非常严峻,因此迫切需要一种新的抗菌药物或抗菌产品来抑制口腔链球菌。
胆汁酸是胆汁里的一个有效成分,是参与胆汁消化功能的重要成分之一。其含量变化在肝脏病诊断中具有重要的参考价值,此外还具有抑制肿瘤的效果。脱氧胆酸(Streptococcus_oralis)是肠道中最重要的次级胆汁酸之一,是一种C-7上缺羟基的胆汁酸,是胆酸失去一个氧原子衍生而得的一种游离胆汁酸,在胆汁中主要以牛磺酸、甘氨酸结合形式存在。脱氧胆酸常作为脂酶加速剂和阴离子去除剂使用,用于蛋白质的溶解或制备细菌培养基(肠道细菌培养与分离)。目前未见脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中应用的报道。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用,所述脱氧胆酸对口腔链球菌具有较高的抗菌活性,为制备口腔保健产品提供了新思路。
本发明提供了脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用。
优选的,所述产品包括口腔链球菌的抑菌剂或口腔保健产品。
优选的,所述口腔保健产品包括以下至少一种:牙膏、漱口水和牙粉。
本发明提供了脱氧胆酸在制备预防和/或治疗口腔链球菌引起的口腔疾病的药物中的应用。
优选的,所述口腔链球菌引起的口腔疾病包括以下至少一种疾病:牙周炎、龋齿病和牙菌斑。
优选的,所述脱氧胆酸的结构式如式I所示;
优选的,所述脱氧胆酸对口腔链球菌的MIC50为296.30μg/ml。
本发明提供了脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用。本发明首次实验表明,脱氧胆酸具有良好的抑制口腔链球菌的活性,通过测定抑制50%受试菌所需最低抑菌浓度,结果表明,空白对照孔(即不含药物)内细菌明显生长,而脱氧胆酸对口腔链球菌MIC50为296.30μg/ml。由此可见,本发明提供的应用为临床防治口腔链球菌引起的口腔疾病提供新思路。
附图说明
图1为脱氧胆酸浓度与口腔链球菌生长抑制率关系图。
具体实施方式
本发明提供了脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用。
在本发明中,所述脱氧胆酸的CAS为83-44-3,分子式:C24H40O4,分子量:392.57,英文名称:deoxycholic acid,熔点:172-178℃。所述脱氧胆酸的结构式优选如式I所示;在本发明实施例中,所述脱氧胆酸购自Sigma公司,产品编号为30960。
在本发明中,所述产品优选包括口腔链球菌的抑菌剂或口腔保健产品。所述口腔保健产品优选包括以下至少一种:牙膏、漱口水和牙粉。所述口腔链球菌的抑菌剂优选包括脱氧胆酸和乙醇溶剂。本发明对口腔链球菌的抑菌剂或口腔保健产品均没有特殊限制,采用本领域所熟知的口腔链球菌的抑菌剂或口腔保健产品的制备方法即可。
在本发明实施例中,体外抑菌实验表明,所述脱氧胆酸对口腔链球菌的MIC50为296.30μg/ml,表明具有良好的抑菌活性。
本发明提供了脱氧胆酸在制备预防和/或治疗口腔链球菌引起的口腔疾病的药物中的应用。
在本发明中,所述口腔链球菌引起的口腔疾病优选包括以下至少一种疾病:牙周炎、龋齿病和牙菌斑。本发明对所述药物的剂型没有特殊限制,采用本领域所熟知的药物的剂型即可,例如注射剂、粉剂等。本发明对所述药物的制备方法没有特殊限制,采用本领域所熟知的药物的制备方法即可。
下面结合实施例对本发明提供的脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
药物来源说明
1.1供试品
名称:脱氧胆酸,市售品。
供试品临用前用乙醇配制成最大浓度20mg/mL,依次对倍稀释。
1.2对照品
名称:氯霉素,市售品。
产品编号:56757品牌:MACKLIN。
实施例1
受试菌口腔链球菌的培养方法
1.菌株:口腔链球菌ATCC 35037,购于北京百欧博伟生物技术有限公司。
2.培养条件:Brain-Heart Infusion(BHI),37℃孵育24h~48h。
3.菌种开启接种并培养
用75%酒精棉擦拭甘油管外部,不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板,37℃培养24小时后,挑取单个菌落于THB液体培养基中在相同的培养条件下培养增菌。
4.菌液工作液的准备
当OD600值达到0.5左右(约108CFU/ml),经THB肉汤梯度稀释(0、10、100、1000、10000、100000、10000倍)后,取100μL菌悬液接种于固体培养基上,培养24h后计数活菌数,计算菌悬液浓度,再将此混悬菌液进行稀释,使菌悬液最终浓度约为2×16CFU/ml。菌种操作均在无菌条件下进行,实验完毕,所有耗材经灭菌再做丢弃处理。
实施例2
抑制50%受试菌所需最低抑菌浓度的测定(MIC50)
1测试方法:采取微量肉汤稀释法,进行MIC50的测定。
实验分为阳性对照组(即不含药物的菌悬液)、阴性对照组(含溶媒乙醇的培养基)和实验组(含不同浓度的脱氧胆酸菌悬液)。以上各组均设置3个平行组。将浓度为400μg/ml的脱氧胆酸实验液按对倍稀释溶于液体培养基中,使其终浓度为400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、0μg/ml。浓度为2×106CFU·mL-1菌悬液与各组药液按比例1∶1各100μL,分别接种于无菌96孔板中,使菌悬液的终浓度为1×106CFU/ml(含105CFU/孔),置于适当的培养条件下培养20h。同时设置对照品氯霉素,使其终浓度分别为32μg/ml、16μg/ml、8μg/ml、4μg/ml、2μg/ml、1μg/ml、0μg/ml。培养结束后,在黑色背景下进行肉眼观察,平皿内未见细菌生长的最低药物浓度即为脱氧胆酸的最低抑菌浓度(MIC)。所有菌种的IC测定实验重复3次。悬浮菌体测OD600值,按照公式I计算不同浓度的供试品及对照抑菌率。通过曲线拟合得函数计算而得MIC50。
抑菌率(%)=1-(供试品OD值—阴性对照OD值)/(阳性对照OD值—阴性对照OD值)×100% 公式I
2结果判断
试验结果见表1,抑制率图见图1。当阳性对照孔(即不含药物)内细菌明显生长,试验才有意义。结果显示,阳性对照孔(即不含药物)内细菌正常生长,溶媒对照培养基孔无菌生长。对照品氯霉素对缓症链球菌的MIC值为4μg/ml,符合美国临床实验室标准化委员会(National committee for clinical library standardization,NCCLS)2001年的《抗微生物药物敏感试验的执行标准:第十一版信息增刊》M100-S11中氯霉素对缓症链球菌≤4μg/ml的标准,说明本实验方法是可靠的。
表1:不同浓度脱氧胆酸对口腔链球菌生长影响的吸光值测定
统计结果表明:脱氧胆酸对受试的口腔链球菌的MIC50为296.30μg/ml,说明脱氧胆酸有良好的抑制口腔链球菌的活性。上述研究结果以期为临床医生防控口腔链球菌病提供参考。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.脱氧胆酸在制备抗口腔链球菌产品中的应用。
2.根据权利要求1所述应用,其特征在于,所述产品包括口腔链球菌的抑菌剂或口腔保健产品。
3.根据权利要求2所述应用,其特征在于,所述口腔保健产品包括以下至少一种:牙膏、漱口水和牙粉。
4.脱氧胆酸在制备预防和/或治疗口腔链球菌引起的口腔疾病的药物中的应用。
5.根据权利要求4所述应用,其特征在于,所述口腔链球菌引起的口腔疾病包括以下至少一种疾病:牙周炎、龋齿病和牙菌斑。
7.根据权利要求1~5任意一项所述应用,其特征在于,所述脱氧胆酸对口腔链球菌的MIC50为296.30μg/ml。
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石川康子等: "口腔連鎖球菌の生育ならびにグルカン生成に及ぼす胆汁酸の影響", 《口腔衛生学会雑誌》, vol. 34, no. 2, pages 97 - 103 * |
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