CN115568416A

CN115568416A - 一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法

Info

Publication number: CN115568416A
Application number: CN202210157127.9A
Authority: CN
Inventors: 张孝廉; 张吉顺; 张莉莉; 王丰; 贾蒙骜; 曹领改; 余婧
Original assignee: Guizhou Institute of Tobacco Science
Current assignee: Guizhou Institute of Tobacco Science
Priority date: 2022-02-21
Filing date: 2022-02-21
Publication date: 2023-01-06
Anticipated expiration: 2042-02-21
Also published as: CN115568416B

Abstract

本发明公开了一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法，包括：1）以携带烟草单倍体诱导基因的植株A作为父本，以携带烟草白粉病抗性基因的植株B作为母本，杂交收获F1代种子；2）在F1代种子播种后进行白粉病接种鉴定，感白粉病的植株即为四倍体烟草，抗白粉病的植株即为单倍体烟草；3）分别统计感白粉病和抗白粉病的植株数量，抗白粉病的植株数量占感白粉病和抗白粉病的植株总数的百分比，即为单倍体诱导系的诱导率。本发明方法中白粉病抗性由双隐性基因控制，相比于植株形态和种子形态鉴定方法，准确性更高；相比于染色体数目鉴定、解剖学鉴定和放射性鉴定方法，操作简单，成本低，可用于大规模单倍体筛选和诱导率评估。

Description

一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法

技术领域

本发明涉及一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法，属于育种技术领域。

背景技术

烟草单倍体是具有配子数目染色体，仅由原染色体组一半的染色体组数所构成的烟草个体。单倍体植株经人工染色体数目加倍后，可重新恢复到正常的染色体数目。这种方法得到的植株，不仅能够正常生殖，而且每对染色体上的成对基因都是纯合的，自交产生后代不会发生性状分离，因此可大大加快植物品种选育进程。单倍体及其衍生的双单倍体可广泛应用于品种选育、突变体筛选、基因功能研究、遗传机理解析等诸多方面。

利用单倍体诱导系诱导产生单倍体是获得单倍体的重要手段,玉米自交系Stock6能诱导母本植株产生单倍体种子，通对Stock6进行改良获得了一批优良的玉米单倍体诱导系，诱导率在2％-16％之间。通过对拟南芥等的着丝粒组蛋白CENH3进行改造也可诱导产生单倍体。

然而，不同来源诱导系的单倍体诱导率存在很大差异，评估并获得具有高频诱导率的诱导系是烟草单倍体育种应用的关键。然而，目前筛选烟草单倍体并评估起诱导率的主要方法是流式细胞仪、染色计数等方法，但这些方法存在样品质量要求高，技术难度高、操作复杂、工作量大、成本高等等缺点，并且需要特定的仪器设备支撑。因此，迫切需要创建一种快速、简易、无损的筛选烟草单倍体并评估其诱导率方法。

发明内容

基于上述，本发明提供一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法，以解决现有技术存在的样品质量要求高，技术难度高、操作复杂、工作量大的问题。

本发明的技术方案是：一种利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，包括以下步骤：

1)以携带烟草单倍体诱导基因的四倍体植株A作为父本，以携带烟草白粉病隐性抗病基因的四倍体植株B作为母本，杂交收获F1代种子；

2)在F1代种子播种后进行白粉病接种鉴定，感白粉病的植株即为四倍体烟草，抗白粉病的植株即为单倍体烟草。

可选的，所述四倍体植株A不抗白粉病，所述四倍体植株B不携带烟草单倍体诱导基因。

可选的，所述四倍体植株A的获取方法为，在栽培烟草中对单倍体诱导基因NtDMP1、NtDMP2和NtDMP3进行基因编辑，获得NtDMP1基因、NtDMP2基因和NtDMP3基因同时编辑失活的纯合株系即为栽培烟草单倍体诱导系。

可选的，所述四倍体植株B为NtMLO1和NtMLO2基因同时突变的纯合烟草株系。

可选的，所述四倍体植株B的获取方法为，在栽培烟草中对NtMLO1和NtMLO2进行编辑，获得NtMLO1和NtMLO2基因同时编辑失活的纯合株系即为携带烟草白粉病隐性抗病基因的烟草株系。

可选的，所述白粉病接种鉴定为在播种后30天，接种方法为抖落法。

本发明还提供一种利用烟草白粉病抗性评估烟草单倍体诱导率的方法，统计上述方法中感白粉病和抗白粉病的植株数量，抗白粉病的植株数量占感白粉病和抗白粉病的植株总数的百分比，即为单倍体诱导系的诱导率。

本发明的鉴定机理是：通过杂交方法诱导产生的烟草单倍体植株可表现为由隐性基因控制的抗白粉病表型，而非单倍体植株则是A和B的杂交F1，由于显性基因的存在表现为感白粉病。

本发明的有益效果是：本发明通过以携带烟草单倍体诱导基因的植株A作为父本，以携带烟草白粉病抗性基因的植株B作为母本进行杂交，并在杂交种子播种后进行白粉病接种鉴定，可以准确的鉴别出烟草单倍体诱导率。本发明方法所用的白粉病抗性由双隐性基因控制，相比于植株形态和种子形态鉴定方法，准确性更高；相比于染色体数目鉴定、解剖学鉴定和放射性鉴定方法，操作简单，成本低，可用于大规模诱导率评估和单倍体筛选。

附图说明

图1为白粉病接种鉴定结果；

图2为染色体数目鉴定结果。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。

实施例1：栽培烟草单倍体诱导系的获得

1、靶标基因序列信息

栽培烟草单倍体候选基因NtDMP1，NtDMP2和NtDMP3的靶标序列信息分别如SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示：

SEQ ID NO.1：

GAATTGCCTCAACCAGCAATTGGTGGCAAGAAAAGACGAGCAATGGCAAATGGGGTTCAAAAAACACTCTCAAAAACTTCATTGCTTGTCAATTTCTTGCCAACAGGCACACTTTTAACTTTTGAAATGGTCCTTCCATCAGTCTATGGCAAAGGCGATTGTTCCCCTGTCACTACACTAATGATTTTAACACTACTTGGCCTTTGTACTTTGTCTTGCTTCTTCTTCCATTTTACCGATAGTTTTCGGGGACCCGACGGGAAAGTTTACTATGGATTTGTGACACCAAGAG

SEQ ID NO.2：

GAATTGCCTCAACCAGCAATTGGTGGCAAAAAAAGAAGAGCAATGGCTAATGGGGTTCAAAAAACTCTCTCAAAAACTTCATTGCTTGTCAATTTTCTACCAACAGGCACACTTCTAACTTTTGAAATGGTCCTTCCATCAGTCTATGGCAAAGGCGATTGTTCACCGGTCACTACATTAATGATTTTAACACTACTTGGCCTTTGTACTTTGTCTTGCTTCTTCTTCCATTTTACCGATAGTTTTCGTGGACCCGATGGGAAAGTTTACTATGGATTTGTGACACCAAGAGG

SEQ ID NO.3：

GAATTGCCTCAACCAGCAATTGGTGGCAAAAAAAGAAGAGCAATGGCAAATGGGATTCAAAAAACTCTCTCAAAAACTTCATTGCTTGTCAATTTTCTACCAACAGGCACACTTCTAACTTTTGAAATGGTCCTTCCATCAGTCTATGGCAAAGGCGATTGTTCACCCGTCACTACATTAATGATTTTAACACTACTTGGCCTTTGTACTTTGTCTTGCTTCTTCTTCCATTTTACCGATAGTTTTCGTGGACCCGATGGGAAAGTTTACTATGGATTTGTGACACCAAGAGG

2、设计sgRNA

根据靶位点设计sgRNA序列，如SEQ ID NO.4所示：

SEQ ID NO.4：CCTTCCATCAGTCTATGGCAAAG

3、重组CRISPR/Cas9载体构建

将sgRNA通过gateway的方法连接到载体上得到重组载体CRISPR/Cas9。

取5-10μL连接产物转化大肠杆菌感受态，涂卡那霉素抗性平皿，37℃培养12小时，进行菌斑PCR鉴定。

挑取10个菌斑同时进行1.5mL EP管接菌和PCR鉴定，引物分别如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。目标条带为1667bp左右的片段。选1-3个阳性条带对应的菌液，取100μL送样测序，其余400μL菌液接种到含有5-10mL卡那霉素抗性LB中，对应测序正确的菌液提取质粒。

SEQ ID NO.5：CCAGAAATTGAACGCCGAAG

SEQ ID NO.6：GTAAAACGACGGCCAGT

4、转基因植株的获得

将步骤3获得的重组CRISPR/Cas9载体通过热激转至农杆菌感受态GV3101，通过烟草遗传转化实验将重组载体转入栽培烟草K326中。

5、NtDMP1/NtDMP2/NtDMP3基因突变的转基因植株鉴定

采集步骤4阳性苗的叶片，提取基因组DNA作为PCR反映模板采用DMP1-F(如SEQ IDNO.7所示)、DMP1-R(如SEQ ID NO.8所示)、DMP2-F(如SEQ ID NO.9所示)、DMP2-R(如SEQ IDNO.10所示)、DMP3-F(如SEQ ID NO.11所示)和DMP3-R(如SEQ ID NO.12所示)引物进行扩增，测序鉴定突变情况。

SEQ ID NO.7:TCAAAACGTGCCGATACATCAATG

SEQ ID NO.8:CGATCTGTCTGTCATATATGTTTGA

SEQ ID NO.9:TCAAAACGTGCAGATACAACAATA

SEQ ID NO.10:ACCCACATGGATGAATTCTGC

SEQ ID NO.11:CTACAGTGCATCAAAACGTGCA

SEQ ID NO.12:CGATCTGTCTATCATATCTATTCCG

6、分析测序结果，选择NtDMP1，NtDMP2和NtDMP3基因均突变的纯合株系，即为单倍体诱导系A。

实施例2：抗白粉病烟草植株的获得

1、靶标基因序列信息

白粉病候选基因NtMLO1和NtMLO2的靶标序列信息分为如SEQ ID NO.13、SEQ IDNO.14所示：

SEQ ID NO.13：

GTAATTTTAGTATTATATAAAGAATAAAGTATGACCATTATTGAAATTAACCCATAAAATGCTTGTAGCCGAAGAGTGCATTAGAATTATTTAAAGAAACCATATCCAATTGAAACTAAATGGAATCTCTTCCTCTTTGTGGACAGGATTGTACTCGTACCTTTGGGTGCCATTTATCCCGTTAGTAGTAAGTAATTCGTTCATTTAGTTATTATTCATTTATTATGGACGAAAGTATATATAATTGTTACTAAGAATATATTTTCTAACATATAATTGGGCAGATAATATTGCTGGTTGGCACAAAACTTGAAATGATAATAGCAGAAATGGGAGTAAGGATTTCAAAGAGGGGAG

SEQ ID NO.14：

AACTAAAACATAACTTAGTAACTTAACTGTTACAAAAACTAGTTTAGTGACTTTACCGTTATAAAAAATAATTTTGTAACTTTAGTATTGTACAAAAAGTAAAGTTAGTGACCAACGTTGAAATTAACCCATAAATGCTTGTAACTCAAAGAGTGCATTAGAATTATTTAAAGAAACCATATCCAATTGAAACTAAATGGAATCTCTTCCTCTTTGTGGACAGGATTGTACTCGTACCTTTGGGTGCCATTTATCCCGTTAGTAGTAAGTAATTCGTTCATTTAGTTATTATTCATTTATTATGGACGAAAGTATATATAATTGTTACTAAGAATATATTTTCTAACATATAATTGGGCAGATAATATTGCTAGTTGGCACAAAACTTGAAATGATAATAGCAGAAATG

2、设计sgRNA

根据靶位点设计sgRNA序列，如SEQ ID NO.18所示：

SEQ ID NO.15：CCTTTGGGTGCCATTTATCCCGT

3、重组CRISPR/Cas9载体构建和转基因植株的获得同实施案例1。

4、NtMLO1/NtMLO2基因突变的转基因植株鉴定

采集步骤3阳性苗的叶片，提取基因组DNA作为PCR反映模板采用MLO1-F(如SEQ IDNO.16所示)、MLO1-R(如SEQ ID NO.17所示)、MLO2-F(如SEQ ID NO.18所示)、MLO2-R(如SEQID NO.19所示)引物进行扩增，测序鉴定突变情况。

SEQ ID NO.16:GTAATTTTAGTATTATATAAAG

SEQ ID NO.17:CTCCCCTCTTTGAAATCCTTAC

SEQ ID NO.18:CTAGTTTAGTGACTTTACCGT

SEQ ID NO.19:TTATCATTTCAAGTTTTGTGCC

5、分析测序结果，选择NtMLO1，NtMLO2基因均突变的纯合株系，即为抗白粉病烟草植株B。

应当注意的是，四倍体植株B的获取，除了上述基因编辑方法外，还可通过物理诱变、化学诱变、T-DNA插入等手段获得NtMLO1和NtMLO2基因同时突变的纯合株系，此外还可使用NtMLO1和NtMLO2基因同时突变的栽培烟草种质资源。

实施例3：利用白粉病抗性筛选单倍体并评估诱导率

1、以携带烟草单倍体诱导基因的植株A作为父本，以携带烟草白粉病抗性基因的植株B作为母本，杂交收获F1代种子。具体而言，以实施例中携带烟草单倍体诱导基因，但感白粉病的四倍体烟草植株作为植株A；以实施例中不携带烟草单倍体诱导基因，但携带隐性抗病基因的抗白粉病正常四倍体烟草植株作为植株B，以植株A给植株B进行授粉杂交。

2、在F1代种子播种后进行白粉病接种鉴定，感白粉病的植株即为四倍体烟草，抗白粉病的植株即为单倍体烟草。具体而言，F1代种子播种后得到F1代幼苗，其应包含一定比例的单倍体植株。白粉病接种鉴定为在播种后30天，接种方法为抖落法。在鉴定时不统计烟苗的形态学特征，只统计对白粉病的抗性，筛选到的抗白粉病单株即为单倍体，感病单株即为四倍体植株。

3、分别统计感白粉病和抗白粉病的植株数量，抗白粉病的植株数量占感白粉病和抗白粉病的植株总数的百分比，即为单倍体诱导系的诱导率。具体而言，单倍体诱导系A的单倍体诱导率为抗病植株数量/播种植株总数量。

验证案例：

1、试验方法

以实施例1获得的烟草单倍体诱导系植株A1、A2、A3、A4(表1)为父本，以实施例2获得的携带隐性抗白粉病位点的植株B(表1)作为母本，试验目的为筛选并评价A1、A2、A3、A4的单倍体诱导率。分别用植株A1、A2、A3、A4给植株B进行授粉，套袋，收获F1代种子；F1播种后30天，对幼苗进行白粉病接种，接种后15天进行白粉病抗性调查。分别统计各F1群体中感病和抗病植株数量，抗白粉病的植株即为单倍体烟草，抗病(单倍体)植株数量占感病(四倍体)和抗病植株总数的百分比即为单倍体诱导系A的诱导率。

表1单倍体诱导系A和抗白粉病株系B的突变形式鉴定

2、染色体数目检测方法

配置2mM的8-羟基喹啉溶液、68mM Na₂HPO₄·12H₂O、53mM KH₂PO₄·2H₂0备用。配置卡诺氏固定液备用，其中甲醇与冰醋酸的体积比例为3：1。配置酶液备用，其中纤维素酶占比3％，离析酶占比1％。

取烟草生长点附近幼嫩叶片，放入1mL预处理液，将材料放入4℃冰箱中，预处理24h。预处理完成后，将预处理液吸出，加入1mL卡诺氏固定液在室温下固定16～24h。固定完成后，将固定液吸出，并用加入适量双蒸水冲洗2～3次，将固定液冲洗干净，再加入双蒸水浸泡10～20min。浸泡材料的双蒸水吸取赶紧后，加入30～50μL的酶液后至于37℃金属浴中酶解0.5～1h。酶解完成后，将酶液吸出，加入500μL双蒸水浸泡10min，吸掉清水，加入500μL固定液。

用镊尖轻轻夹取材料均匀涂于载玻片中央，用酒精灯稍微预热后放置于室温晾干。取2体积的磷酸氢二钠和1个体积的磷酸二氢钾混匀后配置成磷酸缓冲液。取1mL吉姆萨原液稀释至20mL磷酸缓冲液中，配成吉姆萨工作液，染色时间为1～3min。在显微镜下观察，确定材料的染色体数目。

3、结果分析

对筛选到的抗白粉病单株共计12株和感病单株(随机选择，作为对照)4株进行染色体染色和流失细胞仪分析，结果如表1所示，发现抗白粉病的12个单株均为单倍体，感白粉病的单株均为四倍体，可见白粉病抗性方法鉴定的结果与染色体压片分析的结果完全一致，说明采用本发明方法来筛选烟草单倍体并评估诱导率是正确可行的。

表1.白粉病抗性表型鉴定不同单倍体诱导系的诱导率

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

SEQUENCE LISTING

序列表

<110> 贵州省烟草科学研究院

<120> 一种利用烟草白粉病抗性筛选烟草单倍体及评估诱导率的方法

<160> 19

<210> 1

<211> 292

<212> DNA

<213> NtDMP1基因靶标序列

<400> 1

GAATTGCCTC AACCAGCAAT TGGTGGCAAG AAAAGACGAG CAATGGCAAA TGGGGTTCAA 60

AAAACACTCT CAAAAACTTC ATTGCTTGTC AATTTCTTGC CAACAGGCAC ACTTTTAACT 120

TTTGAAATGG TCCTTCCATC AGTCTATGGC AAAGGCGATT GTTCCCCTGT CACTACACTA 180

ATGATTTTAA CACTACTTGG CCTTTGTACT TTGTCTTGCT TCTTCTTCCA TTTTACCGAT 240

AGTTTTCGGG GACCCGACGG GAAAGTTTAC TATGGATTTG TGACACCAAG AG 292

<210> 2

<211> 293

<212> DNA

<213> NtDMP2基因靶标序列

<400> 2

GAATTGCCTC AACCAGCAAT TGGTGGCAAA AAAAGAAGAG CAATGGCTAA TGGGGTTCAA 60

AAAACTCTCT CAAAAACTTC ATTGCTTGTC AATTTTCTAC CAACAGGCAC ACTTCTAACT 120

TTTGAAATGG TCCTTCCATC AGTCTATGGC AAAGGCGATT GTTCACCGGT CACTACATTA 180

ATGATTTTAA CACTACTTGG CCTTTGTACT TTGTCTTGCT TCTTCTTCCA TTTTACCGAT 240

AGTTTTCGTG GACCCGATGG GAAAGTTTAC TATGGATTTG TGACACCAAG AGG 293

<210> 3

<211> 293

<212> DNA

<213> NtDMP3基因靶标序列

<400> 3

GAATTGCCTC AACCAGCAAT TGGTGGCAAA AAAAGAAGAG CAATGGCAAA TGGGATTCAA 60

AAAACTCTCT CAAAAACTTC ATTGCTTGTC AATTTTCTAC CAACAGGCAC ACTTCTAACT 120

TTTGAAATGG TCCTTCCATC AGTCTATGGC AAAGGCGATT GTTCACCCGT CACTACATTA 180

ATGATTTTAA CACTACTTGG CCTTTGTACT TTGTCTTGCT TCTTCTTCCA TTTTACCGAT 240

AGTTTTCGTG GACCCGATGG GAAAGTTTAC TATGGATTTG TGACACCAAG AGG 293

<210> 4

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

CCTTCCATCA GTCTATGGCA AAG 23

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

CCAGAAATTG AACGCCGAAG 20

<210> 6

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

GTAAAACGAC GGCCAGT 17

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

TCAAAACGTG CCGATACATC AATG 24

<210> 8

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

CGATCTGTCT GTCATATATG TTTGA 25

<210> 9

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

TCAAAACGTG CAGATACAAC AATA 24

<210> 10

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

ACCCACATGG ATGAATTCTG C 21

<210> 11

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

CTACAGTGCA TCAAAACGTG CA 22

<210> 12

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

CGATCTGTCT ATCATATCTA TTCCG 25

<210> 13

<211> 357

<212> DNA

<213> NtMLO1靶标序列

<400> 13

GTAATTTTAG TATTATATAA AGAATAAAGT ATGACCATTA TTGAAATTAA CCCATAAAAT 60

GCTTGTAGCC GAAGAGTGCA TTAGAATTAT TTAAAGAAAC CATATCCAAT TGAAACTAAA 120

TGGAATCTCT TCCTCTTTGT GGACAGGATT GTACTCGTAC CTTTGGGTGC CATTTATCCC 180

GTTAGTAGTA AGTAATTCGT TCATTTAGTT ATTATTCATT TATTATGGAC GAAAGTATAT 240

ATAATTGTTA CTAAGAATAT ATTTTCTAAC ATATAATTGG GCAGATAATA TTGCTGGTTG 300

GCACAAAACT TGAAATGATA ATAGCAGAAA TGGGAGTAAG GATTTCAAAG AGGGGAG 357

<210> 14

<211> 409

<212> DNA

<213> NtMLO2靶标序列

<400> 14

AACTAAAACA TAACTTAGTA ACTTAACTGT TACAAAAACT AGTTTAGTGA CTTTACCGTT 60

ATAAAAAATA ATTTTGTAAC TTTAGTATTG TACAAAAAGT AAAGTTAGTG ACCAACGTTG 120

AAATTAACCC ATAAATGCTT GTAACTCAAA GAGTGCATTA GAATTATTTA AAGAAACCAT 180

ATCCAATTGA AACTAAATGG AATCTCTTCC TCTTTGTGGA CAGGATTGTA CTCGTACCTT 240

TGGGTGCCAT TTATCCCGTT AGTAGTAAGT AATTCGTTCA TTTAGTTATT ATTCATTTAT 300

TATGGACGAA AGTATATATA ATTGTTACTA AGAATATATT TTCTAACATA TAATTGGGCA 360

GATAATATTG CTAGTTGGCA CAAAACTTGA AATGATAATA GCAGAAATG 409

<210> 15

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

CCTTTGGGTG CCATTTATCC CGT 23

<210> 16

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

GTAATTTTAG TATTATATAA AG 22

<210> 17

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

CTCCCCTCTT TGAAATCCTT AC 22

<210> 18

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

CTAGTTTAGT GACTTTACCG T 21

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

TTATCATTTC AAGTTTTGTG CC 22

Claims

1.一种利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，所述四倍体植株A感白粉病，四倍体植株B不携带烟草单倍体诱导基因。

3.根据权利要求1所述的利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，所述四倍体植株A的获取方法为，在栽培烟草中对单倍体诱导基因NtDMP1、NtDMP2和NtDMP3进行基因编辑，获得NtDMP1基因、NtDMP2基因和NtDMP3基因同时编辑失活的纯合株系即为栽培烟草单倍体诱导系。

4.根据权利要求1所述的利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，所述四倍体植株B为NtMLO1和NtMLO2基因同时突变的纯合烟草株系。

5.根据权利要求4所述的利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，所述四倍体植株B的获取方法为，在栽培烟草中对NtMLO1和NtMLO2进行编辑，获得NtMLO1和NtMLO2基因同时编辑失活的纯合株系即为携带烟草白粉病隐性抗病基因的烟草株系。

6.根据权利要求1所述的利用烟草白粉病抗性筛选单倍体烟草的方法，其特征在于，所述白粉病接种鉴定为在播种后30天，接种方法为抖落法。

7.一种利用烟草白粉病抗性评估烟草单倍体诱导率的方法，其特征在于，统计权利要求1至6任一项所述方法中感白粉病和抗白粉病的植株数量，抗白粉病的植株数量占感白粉病和抗白粉病的植株总数的百分比，即为单倍体诱导系的诱导率。